NUÔI CẤY MÔ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT THÔ TỪ CÂY TRÂM ỔI (Lantana camara Linn) VÀ CÂY HOA MÓNG TAY (Impatiens balsamina Linn)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NUÔI CẤY MÔ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT THÔ TỪ CÂY TRÂM ỔI Lantana camar

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

NUÔI CẤY MÔ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN

CỦA DỊCH CHIẾT THÔ TỪ CÂY TRÂM ỔI (Lantana camara Linn) VÀ CÂY HOA MÓNG TAY (Impatiens balsamina Linn)

Họ và tên sinh viên: TRẦN NGUYỄN MỸ CHÂU

Ngành: NÔNG HỌC

Niên khóa: 2003- 2007

Tháng 8/ 2007

NUÔI CẤY MÔ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA

DỊCH CHIẾT THÔ TỪ CÂY TRÂM ỔI (Lantana camara Linn)

VÀ CÂY HOA MÓNG TAY (Impatiens balsamina Linn)

LỜI CẢM ƠN

Thành kính khắc ghi công ơn cha mẹ sinh thành, đã nuôi dưỡng và giáo dục con nên người

Em xin gửi lòng biết ơn đến :

- Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

- Ban giám đốc Trung tâm Công Nghệ Sinh Học- Trường Đại Học Nông Lâm TP

Hồ Chí Minh

- Ban chủ nhiệm, quý thầy cô Khoa Nông học

- Ban chủ nhiệm, quý thầy cô Bộ môn Công Nghệ Sinh Học

Đã hỗ trợ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong suốt quá trình thực tập hoàn thành đề tài

Em trân trọng biết ơn:

- TS Trần Thị Dung

- ThS Từ Thị Mỹ Thuận

- KS Lê Hồng Thủy Tiên

Đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều thời gian và công sức để truyền đạt những kinh nghiệm, kiến thức quý báu, tạo mọi điều kiện để em hoàn thành đề tài này

Em xin gửi lời cảm ơn đến:

- Các thầy cô, anh chị tại Trung tâm Công Nghệ Sinh Học đã tận tình giúp đỡ em trong suốt thời gian làm luận văn

- Các bạn lớp Nông học 29, các bạn trong Trung Tâm Công Nghệ Sinh Học đã động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian làm đề tài

TÓM TẮT

Trần Nguyễn Mỹ Châu, Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Tháng 8/2007,

với tên đề tài "Nuôi cấy mô và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết thô

từ cây trâm ổi (Lantana camara Linn) và cây hoa móng tay (Impatiens balsamina

Linn)", được sự hướng dẫn của TS Trần Thị Dung, ThS Từ Thị Mỹ Thuận Đề tài

được thực hiện tại Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học- Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Thời gian nghiên cứu từ tháng 3/2007 đến tháng 8/2007

Mục đích đề tài:

- Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho sự tạo mô sẹo

- Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho sự tạo chồi

- Xác định hoạt tính kháng khuẩn của cây trâm ổi, cây móng tay ngoài tự

nhiên và cây in vitro

Phương pháp nghiên cứu:

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, thí nghiệm đơn yếu tố: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng lên sự hình thành mô sẹo và tạo chồi gồm 5 nghiệm thức (5 nồng độ chất điều hòa sinh trưởng) với 3 lần lặp lại (cho 1 loại cây) Thí nghiệm khảo sát khả năng kháng khuẩn của cây ngoài tự nhiên

và cây in vitro gồm 4 nghiệm thức (3 loại dịch chiết thô và 1 mẫu đối chứng ethanol)

với 3 lần lặp lại Tổng số nghiệm thức cho 2 loại cây, 3 loại thí nghiệm là: 28 nghiệm thức

Qua thực nghiệm, chúng tôi đạt được một số kết quả và kết luận sau:

- Môi trường thích hợp nhất cho sự tạo mô sẹo từ lá cây trâm ổi là: môi trường

MS có bổ sung 2,4-D 1 mg/l kết hợp với BA 3 mg/l, sự tạo mô sẹo từ lá cây hoa móng tay là: môi trường MS có bổ sung 2,4-D nồng độ 1 mg/l kết hợp BA 3 mg/l

- Môi trường thích hợp nhất cho sự phát triển chồi ở cây trâm ổi là: môi trường

MS có bổ sung BA 3mg/l, ở cây móng tay là môi trường MS có bổ sung BA 3mg/l

- Dịch chiết thô của cây trâm ổi ngoài tự nhiên, cây in vitro, mô sẹo cây in vitro

có khả năng kháng các loại vi khuẩn: Escherichia coli, Staphylococcus aureus,

Pseudomonas aeruginosa, không kháng nấm Candida albicans

- Dịch chiết thô cây hoa móng tay ngoài tự nhiên, cây in vitro, mô sẹo cây in

vitro có khả năng kháng các chủng vi khuẩn: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, không kháng nấm Candida albicans

MỤC LỤC

Nội dung Trang

Trang tựa i

Cảm tạ ii

Tóm tắt iii

Mục lục v

Danh sách các chữ viết tắt viii

Danh sách các hình ix

Danh sách các bảng x

Chương 1 MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích và yêu cầu 2

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Vài nét về cây trâm ổi 3

2.1.1 Vị trí phân loại thực vật 3

2.1.2 Nguồn gốc, phân bố 3

2.1.3 Đặc điểm thực vật học cây trâm ổi 4

2.1.4 Điều kiện sinh thái 5

2.1.5 Các hợp chất hóa học có trong cây trâm ổi 5

2.1.6 Công dụng cây trâm ổi 6

2.1.7 Một số hạn chế của cây trâm ổi 7

2.2 Vài nét về cây hoa móng tay 8

2.2.1 Vị trí phân loại thực vật 8

2.2.2 Nguồn gốc, phân bố 9

2.2.3 Đặc điểm thực vật học 9

2.2.4 Điều kiện sinh thái 10

2.2.5 Các hợp chất hóa học có trong cây hoa móng tay 10

2.2.6 Công dụng của cây hoa móng tay 11

2.3 Một số đặc điểm của các vi khuẩn được dùng trong thí nghiệm 12

2.3.1.Trực khuẩn Escherichia coli 13

2.3.1.1 Đặc điểm sinh vật học 13

2.3.1.2 Khả năng gây bệnh 14

2.3.1.3 Phòng bệnh và trị bệnh 14

2.3.2 Trực khuẩn mủ xanh (Pseudomonas aeruginosa) 14

2.3.2.1 Đặc điểm sinh vật học 14

2.3.2.2 Khả năng gây bệnh 15

2.3.2.3 Phòng bệnh và trị bệnh 16

2.3.3 Tụ cầu khuẩn ( Staphylococcus aureus ) 16

2.7.3.1 Đặc điểm sinh vật học 16

2.7.3.2 Khả năng gây bệnh 17

2.7.3.3 Phòng bệnh và trị bệnh 17

2.3.4 Nấm Candida albicans 18

2.3.4.1 Đặc điểm sinh vật học 18

2.3.4.2 Khả năng gây bệnh 18

2.3.4.3 Phòng và trị bệnh 19

Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20

3.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 20

3.1.1 Địa điểm 20

3.1.2 Thời gian nghiên cứu 20

3.2 Trang thiết bị và dụng cụ dùng trong nghiên cứu 20

3.3 Vật liệu 20

3.3.1 Vật liệu dùng trong nuôi cấy cây trâm ổi, cây hoa móng tay 20

3.3.2 Vật liệu thử tính kháng khuẩn 20

3.4 Thành phần môi trường sử dụng trong nghiên cứu 21

3.4.1 Thành phần môi truờng sử dụng trong nuôi cấy mô 21

3.4.2 Hóa chất cho thử nghiệm vi sinh 22

3.5 Phương pháp nghiên cứu 22

3.5.1 Thí nghiệm 1 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ 2,4-D và BA lên sự hình thành mô sẹo cây trâm ổi và cây hoa móng tay 22

3.5.2 Thí nghiệm 2 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA lên sự phát triển chồi

trên cây trâm ổi và cây hoa móng tay 25

3.5.3 Thí nghiệm 3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của cây trâm ổi ngoài tự nhiên, cây in vitro và mô sẹo cây in vitro 26

3.5.4 Thí nghiệm 4 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cây hoa móng ngoài tự nhiên, cây in vitro, mô sẹo cây in vitro 28

3.6 Phương pháp xử lý số liệu 28

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41

5.1 Kết luận 41

5.2 Đề nghị 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 43

PHỤ LỤC 43

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT

BA : Benzyladenine

2,4- D : 2,4- Dichlorophenoxy- acetic acid

MS : Môi trường Murashige và Skoog (1962)

MS- BA0 (BA0) : Môi trường MS không có bổ sung BA (BA=0)

MS- BA1 (BA1) : Môi trường MS có bổ sung BA= 1 mg/l

MS- BA2 (BA2) : Môi trường MS có bổ sung BA= 2 mg/l

MS- BA3 (BA3) : Môi trường MS có bổ sung BA= 3 mg/l

MS- BA4 (BA4) : Môi trường MS có bổ sung BA= 4 mg/l

MS- BD (BD) : Môi trường hỗn hợp với 2,4-D và BA

MS- BD0 (BD0) : Môi trường MS không có bổ sung 2,4-D và BA

MS- BD1 (BD1) : Môi trường MS có bổ sung 2,4-D 1 mg/l và BA= 1 mg/l MS- BD2 (BD2) : Môi trường MS có bổ sung 2,4-D 1 mg/l và BA= 2 mg/l MS- BD3 (BD3) : Môi truờng MS có bổ sung 2,4-D 1 mg/l và BA= 3 mg/l MS- BD4 (BD4) : Môi trường MS có bổ sung 2,4-D 1 mg/l và BA= 4 mg/l

E coli : Escherichia coli

P aeruginosa : Pseudomonas aeruginosa

S aureus : Staphylococcus aureus

C albicans : Candida albicans

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 2.1 Thân, lá, hoa, phát hoa cây trâm ổi 4

Hình 2.2 Một số thứ hoa trâm ổi 4

Hình 2.3 Quả xanh, quả chín và hạt cây trâm ổi 5

Hình 2.4 Một số loài hoa trâm ổi 8

Hình 2.5 Thân, lá, hoa và hạt cây hoa móng tay 9

Hình 2.7 Một số loài hoa móng tay 12

Hình 2.8 Các loại vi khuẩn và nấm sử dụng trong thí nghiệm 12

Hình 4.1 Mô sẹo từ lá cây trâm ổi trên môi trường MS có bổ sung 2,4-D và BA sau 30 ngày nuôi cấy 30

Hình 4.2 Mô sẹo từ lá cây hoa móng tay trên môi trường MS có bổ sung 2,4-D và BA sau 30 ngày nuôi cấy 32

Hình 4.3 Chồi cây trâm ổi trêm môi trường MS có bổ sung BA sau 20 ngày nuôi cấy 33

Hình 4.4 Chồi cây hoa móng tay trên môi trường MS có bổ sung BA sau 20 ngày nuôi cấy 35

Hình 4.5 Kết quả hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết cây trâm ổi: cây ngoài tự nhiên, cây in vitro, mô sẹo cây invitro với các chủng vi khuẩn và nấm 37

Hình 4.6 Kết quả hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết cây hoa móng tay: cây ngoài tự nhiên, cây in vitro, mô sẹo cây in vitro với các chủng vi khuẩn và nấm 40

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng 3.1 Thành phần môi trường MS của Murashige và Skoog (1962) 21 Bảng 4.1 Tỉ lệ mẫu cấy tạo sẹo và kích thước mô sẹo cây trâm ổi dưới tác dụng của

2,4-D và BA sau 30 ngày nuôi cấy 29

Bảng 4.2 Thời gian xuất hiện mô sẹo và màu sắc mô sẹo trâm ổi 29 Bảng 4.3 Tỉ lệ mẫu cấy tạo sẹo và kích thước mô sẹo cây hoa móng tay dưới tác dụng

của 2,4-D sau 30 ngày nuôi cấy 31

Bảng 4.4 Thời gian xuất hiện mô sẹo và màu sắc mô sẹo cây hoa móng tay 31 Bảng 4.5 Kết quả tạo chồi của cây trâm ổi trên môi trường MS có bổ sung BA sau 20

ngày nuôi cấy 32

Bảng 4.6 Kết quả tạo chồi của cây hoa móng tay trên môi trường MS có bổ sung BA

sau 20 ngày nuôi cấy 34

Bảng 4.7 Đường kính vòng kháng khuẩn của cây trâm ổi ngoài tự nhiên, cây trâm ổi

in vitro, mô sẹo cây trâm ổi in vitro 35

Bảng 4.8 Đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết thô từ cây hoa móng tay ngoài

tự nhiên, cây móng tay in vitro, mô sẹo cây móng tay in vitro 36

 Cây trâm ổi, tên khoa học Lantana camara Linn, thuộc họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) Trâm ổi được trồng rộng rãi ở vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới và ôn đới, thích nghi và phát triển như một loài cỏ dại trên các đồng cỏ, ruộng vườn, nương rẫy

Lá và cành cây trâm ổi được dùng làm thuốc, hái về phơi và sấy khô, lá trâm ổi có tính sát trùng trên da, được dùng cầm máu, chữa cảm mạo, sốt Dịch chiết từ lá và các

bộ phận khác của cây trâm ổi có hoạt tính kháng vi khuẩn, được sử dụng như một chất kháng viêm (theo Oyedapo và cộng sự, 1999) Theo Lal (1987), bảo quản khoai tây

cùng với lá trâm ổi sẽ loại trừ được sự gây hại của sâu hại củ khoai tây Phthorimaea

là acid p- hydroxybenzoic có tác dụng kháng khuẩn mạnh Ở Indonesia, lá được dùng

để chữa thương tích, sưng loét, có tính kháng trực khuẩn, dịch chiết từ hoa móng tay

có tác dụng kháng nấm mạnh Hạt trị vô kinh, chứng hốc xương

Các loại thuốc hoá học tổng hợp như thuốc kháng sinh, từng được xem là có công hiệu chống lại các bệnh nhiễm trùng nghiêm trọng, đang dần suy giảm công hiệu chữa

bệnh do hiện tượng các vi khuẩn gây bệnh đã tăng khả năng đề kháng đối với các loại thuốc này Vì vậy, ngày nay các loài dược thảo đang được quan tâm trở lại, xu hướng

sử dụng các hoạt chất chiết xuất từ cây cỏ trong tự nhiên ngày càng trở nên phổ biến Cùng với xu thế đó và từ những đặc điểm dược lý của cây trâm ổi và cây hoa móng

tay, chúng tôi thực hiện đề tài: "Nuôi cấy mô và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn

của dịch chiết thô từ cây trâm ổi (Lantana camara Linn) và cây hoa móng tay (Impatiens balsamina Linn)"

1.2 Mục đích, yêu cầu

1.2.1 Mục đích

 Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng 2,4-D và BA thích hợp cho sự tạo

mô sẹo của cây trâm ổi và cây hoa móng tay

 Xác định nồng độ chất điều hoà sinh trưởng BA thích hợp cho sự tạo chồi của cây trâm ổi và cây hoa móng tay

 Xác định hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết thô từ cây trâm ổi, cây hoa móng

tay tự nhiên, cây in vitro và mô sẹo cây in vitro

1.2.2 Yêu cầu

 Thực hiện giai đoạn vô mẫu, cấy chuyền, tạo nguồn cây trâm ổi, cây hoa móng

tay in vitro chuẩn bị mẫu cho các thí nghiệm tạo sẹo, tạo chồi, khảo sát hoạt tính kháng

khuẩn Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ 2,4-D và BA lên sự hình thành mô sẹo cây trâm ổi, cây hoa móng tay

 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA lên sự tạo chồi của cây trâm ổi, cây hoa móng tay

 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của cây trâm ổi, cây hoa móng tay ngoài tự

nhiên, cây in vitro và mô sẹo cây in vitro trên các loại vi khuẩn: Escherichia coli,

Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, nấm Candida albicans

Chương 2

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Vài nét về cây trâm ổi Lantana camara L

Bộ : Lamiales (Hoa môi)

Họ : Verbenaceae (Cỏ roi ngựa, Ngũ trảo)

Tên khoa học : Lantana camara Linn

Tên thông thường : Cây trâm ổi, thơm ổi, ngũ sắc, hoa cứt lợn, ổi nho, mã anh đơn, ngũ sắc mai, thiên lan thảo, thổ hồng hoa, tứ thời, tứ quý, yellow sage, red sage, wild sage, prickly sage, lakana

2.1.2 Nguồn gốc, phân bố

Cây trâm ổi có nguồn gốc từ các nước Trung Mỹ, phân bố tự nhiên tại các vùng

bờ biển của Hoa Kỳ: kéo dài từ Bermuda, Bahamas, qua Trinidad và Aruba, Texas Từ Bắc Mexico đến Nam Mỹ gồm các nước: Brazil, Peru, Bolivia, Paraguay, Bắc Argentina Sau đó được phổ biến đi khắp các nước Châu Á, Châu Phi, Australia cùng một số đảo nhỏ: Hawaii, Guam, Madagasca

Người Pháp nhập cây trâm ổi vào nước ta vào đầu thế kỷ XX Hiện nay, cây đưọc trồng làm cảnh và mọc hoang dại tại nhiều địa phương trên toàn quốc, đặc biệt là Đồng Bằng sông Cửu Long và Tây Nguyên Toàn thân cây tỏa ra một mùi đặc biệt nên có tên hoa cứt lợn Lá có mùi thơm của ổi chín nên gọi là bông ổi, thơm ổi Hoa có nhiều màu sắc nên được đặt tên là hoa ngũ sắc, nở suốt bốn mùa nên còn gọi là tứ quý, tứ thời (Quảng Bình)

2.1.3 Đặc điểm thực vật học của cây trâm ổi

 Thân: Cây trâm ổi là cây dạng bụi, cây cao 1 - 1,5 m, có thể đạt đến chiều cao

3 m sau 3 - 4 năm, mang nhiều cành ngang Thân vuông cạnh, có lông và gai nên chịu đựng tốt với các điều kiện khắc nghiệt của môi trường

Cây sinh sản bằng hai hình thức vô tính và hữu tính Sinh sản vô tính bằng gốc hoặc cành Sinh sản hữu tính bằng hạt

 Lá: Lá mọc đối, hình bầu dục, đầu nhọn, mặt xù xì, mép có răng cưa, mặt trên lá

có lông ngắn, cứng, mặt dưới lá có lông mềm hơn, phiến lá dài 3 - 9 cm, rộng 3 - 6 cm, cuống lá ngắn, phía trên cuống lá có thìa, lá có mùi thơm ổi chín

Cây trâm ổi Lá Thân, hoa, phát hoa

Hình 2.1 Thân, lá, hoa, phát hoa cây trâm ổi

 Hoa: Cây trâm ổi có hoa quanh năm Hoa có lá bắc hình mũi giáo Đài hình chuông, có hai môi Tràng hoa hình ống, có bốn thuỳ không đều Cụm hoa là những bông co lại thành hình đầu giả, mọc ở nách lá và các lá ngọn Hoa lưỡng tính, hoa nhiều màu và biến màu, màu vàng lợt rồi vàng kim, vàng tươi, sau cùng là đỏ chói, đôi khi toàn hoa có màu trắng, tím, vàng, cam, đỏ hay phớt hồng (Howard 1989, Liogier 1995) Các nhánh trên cùng một cây của hoa trâm ổi có nhiều màu sắc khác nhau nên

gọi là hoa ngũ sắc Trâm ổi gồm nhiều thứ: var mista Bail: ngoài vàng đỏ, trong vàng rồi gạch tôm; var crocea Bail: hoa màu vàng tươi; var sanguinea Bail: hoa vàng rồi

đỏ

var mista Bail var crocea Bail var sanguinea Bail

Hình 2.2 Một số thứ hoa trâm ổi

 Quả: Quả hình cầu, màu xanh đen (xanh sậm), nằm trong lá đài, nhân mang 2 hạch cứng, xù xì Khi chín, quả chuyển sang màu tím đen, ngọt, ăn được Chim thường

ăn các quả chín và phát tán hạt đi xa

Quả xanh Quả chín Hạt

Hình 2.3 Quả xanh, quả chín và hạt của cây trâm ổi

2.1.4 Điều kiện sinh thái

Cây trâm ổi chịu được nước mặn và phát triển nhanh ở nơi khô hạn trên cao nguyên hoặc mọc hoang dại ở lề đường, đặc biệt ở vùng đất cát ven biển

Cây trâm ổi mọc ở nơi đất thoát nước tốt, cây mọc tốt ở những nơi có lượng mưa hàng năm từ 2500 mm - 2900 mm

Phần phía ngoài của cây có thể chết ở nhiệt độ nhỏ hơn -20C, nhưng mọc lại nhanh chóng sau đó khi thời tiết ấm trở lại bằng việc tái sinh từ rễ (Theo Anonymous, 2000)

2.1.5 Các hợp chất hóa học có trong cây trâm ổi

Lá trâm ổi chứa các hợp chất triterpenes và lantadenes A và B (lantaden A 0,31 - 0,68 %), trong đó lantaden A C35H52O5 (552,8 g/ mol), lantaden B C35H52O5 (552,8 g/ mol), acid lantanolic, acid lantic, glycosid triterpens, flavonoid aglycones có tác dụng chống oxy hoá rõ rệt (Theo Morton, 1994)

Hợp chất lantanins (C33H52O5) có trong hạt trâm ổi còn xanh, là một chất gây độc cho người và các vật chăn thả, chất này tồn tại trong hạt còn xanh (Munyua và cộng

sự, 1999)

Toàn cây trâm ổi có chứa acid triterpennoid, acid lantanilic, lantabetulic, alkaloid, lantadens, lantoic, hederagonic, interogennin, camarosid, triterpens và acid 22B- acetoxilantic (Phạm Hoàng Hộ, 2006) Một số nghiên cứu đã được thực hiện trên cây trâm ổi: Phenylpropanoid glycosides từ cây trâm ổi (Tauobi- K, Fauvel- MT, 1997), triterpenenoid, tinh dầu và sự lacton hóa quang oxy hóa của acid oleanolic từ cây ngũ sắc (Misra- L, Laatsch- H, 2000)

Ngoài ra, cây trâm ổi có chứa tinh dầu: 0,16 - 0,2%, trong đó chủ yếu là - humulen, - caryophyllen (12,7%), - terpinen, - pinen, p- cymen (Theo Nguyễn Văn Đàn, 1995), sabinene (19,6%), germacrene B (4,7%), germacrene D (10,9%), davanone (7,3%), - curcumen (6,3%), - elemene (2,7%), - cadinene (2,3%), 1,8 - cineole (Theo M.Khan, S.K Srivastva, M Singh, A.A Naquvi, K.V Syamissunder, 2002)

Lantaden A,B - humulen p- cymen

2.1.6 Công dụng cây trâm ổi

 Làm cảnh

Cây trâm ổi có hoa đẹp nên được trồng làm hàng rào, làm cảnh ở các công viên,

khu vui chơi giải trí, cơ quan, dọc theo các xa lộ, trên khắp các tỉnh thành của Việt Nam

 Chống ô nhiễm

Cây trâm ổi chống ô nhiễm chì trong đất nhờ khả năng hấp thụ tức khắc chì vào

rễ Mức độ chịu đựng chì của cây cao, có thể sống trong điều kiện đất bị ô nhiễm chì ở mức 104- 2.104 ppm, chúng có thể tích lũy chì trong rễ đến 7000 ppm (Diệp Thị Mỹ Hạnh và các cộng sự trường ĐH Khoa học Tự Nhiên TP Hồ Chí Minh, 2006)

 Dược liệu

Lá trâm ổi có tính mát, có tác dụng tiêu viêm sưng, chữa ngứa ngáy, rắn cắn Lá trị sốt, cảm, giải nhiệt (do có chất lantadien), trị tê thấp,bệnh da, phong lỡ (chàm) Acid lantanolic, acid 22B- acetotoxilantic chống vi khuẩn, chống đột biến (Liogier, 1990) Dịch chiết từ lá ngũ sắc chứa flavonoid aglycones có tác dụng chống viêm sưng, chống oxy hóa rõ rệt Flavonoid là những hợp chất polyphenolic hoạt động như những sắc tố, đem lại màu sắc cho hoa quả, thường là màu vàng, màu trắng, chúng có

nhiều công dụng làm thuốc, là chất chống oxy hóa và hữu ích trong sự lưu thông máu tốt

Rễ trâm ổi có vị ngọt đắng, tính lạnh, có tác dụng thanh nhiệt Hoa có vị ngọt, tác dụng cầm máu Cành, lá, hoa cây trâm ổi phơi khô, sắc uống thay chè, có tác dụng chữa tiểu đường

Chất triterpenoid của cây khống chế siêu khuẩn Epstein Barr (Fedd., 1984), lantadens A, B chống bướu ở da và ở gang, như thử ở chuột cho thấy (Rep., 1997) Cây trâm ổi còn được sử dụng để nghiên cứu các hoạt chất chống nấm, chất kháng khuẩn và một số thuốc trừ sâu nguồn gốc thảo mộc do chất độc triterpenes trong lá, chất lantanin trong hạt xanh (Bouda- H, Tapondjou- LA, 2001)

2.1.7 Một số hạn chế của cây trâm ổi

Hiện nay, ở nhiều nơi trên thế giới, trâm ổi thích nghi và phát triển rất nhanh như một loài cây dại, mọc thành đám rậm rạp, dày đặc ở các khu rừng trồng, vườn cây ăn quả, bãi đất trống, đồi núi, ven biển và nhiều sinh cảnh khác Cây dễ cháy và tái sinh mạnh sau khi cháy Trâm ổi làm tăng nguy cơ cháy rừng, dễ bùng phát và lấn át các loài cây khác của thảm thực vật, là một trong những loài cây xâm lấn tự nhiên, gây thiệt hại lớn cho sản xuất nông nghiệp của hơn 50 quốc gia trên thế giới, làm giảm sự

đa dạng sinh học và đã trở thành một vấn đề đáng lo ngại ở Texas và Hawaii (Kumar

và Rohatgi, 1999)

Chất độc triterpenes và lantadenes A, B gây chết của các động vật chăn thả như: ngựa, cừu, gia súc, dê và thỏ bởi sự tổn hại về gan và các cơ quan khác (Mynyua và cộng sự, 1990) Ở Úc, nhiều trẻ em ăn trái còn xanh (chưa chín) bị ngộ độc và tử vong,

do chất lantanin trong quả xanh (Morton, 1994) Vì lá và các bộ phận khác của trâm ổi

có độc nên cần thận trọng khi sử dụng cây này làm thuốc

Hình 2.4 Một số loài hoa trâm ổi

2.2 Vài nét về cây hoa móng tay

Họ : Balsaminaceae (Bóng nước hay Móc tai)

Tên khoa học : Impatiens balsamina Linn

Tên thông thường : Hoa móng tay, bóng nước, nắc nẻ, móng tay lồi, phượng tiên hoa, cấp tính tử, Garden balsam, Touch me not, Rose balsam, Spotted snapweed, Polosomo

2.2.2 Nguồn gốc, phân bố

Cây hoa móng tay có nguồn gốc Đông Nam Á, Ấn Độ, được trồng làm cảnh và làm thuốc ở Malaixia, Indonexia, Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản

2.2.3 Đặc điểm thực vật học cây hoa móng tay

 Thân: Cây cỏ mập (cây thân thảo), sống hàng năm Thân mọc thẳng đứng, cao

10 - 15 cm, có thể cao đến 40 cm

 Lá: Lá mọc so le (mọc cách), có cuống, hình mác (ngọn giáo), đầu nhọn, mép

có răng cưa rất rõ Lá dài 7 - 8 cm, rộng 2 - 2,5 cm

 Hoa: Hoa mọc ở nách lá, có từ 1 - 4 hoa trên một chỗ Hoa lưỡng tính, không đều, hoa to, có màu đỏ, trắng, tím, hồng Năm lá đài cùng màu với tràng, không đều

Lá đài dưới (môi) hình cựa (có móng dài), 2 lá đài cạnh nhỏ Hoa có 5 cánh hoa: cánh hoa cạnh to, dính nhau, cánh hoa giữa đứng (cờ), 5 nhị với chỉ nhị ngắn, bao phấn dính sát nhau, chung quanh nhụy (tiểu nhụy 5), 5 lá noãn hợp thành bầu thượng 5 ô (noãn sào xanh, nuốm không vòi), mỗi ô đựng nhiều noãn Cuống hoa dài từ 1 - 3 cm, cánh hoa mảnh dẻ, có lông mịn

Cây thường ra hoa vào mùa hè (tháng 6 - 8) và kết quả vào tháng 9 - 10

 Quả: Quả nang, có lông tơ, nứt thành 5 mảnh, xoắn lại tung hạt đi xa

 Hạt: Hạt có gân, màu nâu, hạt hình trứng gần như tròn, đường kính 2 - 3,5 mm

Cây móng tay Thân Lá

Hoa Quả Hạt

Hình 2.5 Thân, lá, hoa và hạt cây hoa móng tay

2.2.4 Điều kiện sinh thái

Cây thường mọc hoang theo dòng suối, bờ ruộng, vùng đầm lầy

Hoa móng tay được trồng trong chậu hay trong vườn thành luống

Trồng chủ yếu và mùa hè, hoa móng tay ưa sáng, không kén đất và thuộc loại dễ tính Dễ trồng, song đặc biệt lại sợ đất trũng hoặc quá ẩm ướt

Tuổi cây con 20 - 25 ngày, từ trồng tới ra hoa 70 - 80 ngày Thời vụ hoa kéo dài, thu giống khi quả còn hanh vàng, phơi hạ trong nắng nhẹ hay bóng râm đến khi khô kiệt để bảo quản

2.2.5 Các hợp chất hóa học có trong hoa móng tay

Toàn cây hoa móng tay có acid p- hydroxybenzoic có tác dụng kháng sinh, acid

gentisic C7H6O4, acid ferulic C10H10O4,acid coumaric C9H8O3, acid sinapic C11H12O5, acid caferic C9H8O4, ngoài ra còn có scopolein C10H8O4 (Theo Hegnauer R Chemotaxonomi der Planzen, 1964)

Lá chứa acid xianmic (nhục quế toan), juglanin (kaemferol 3 - arabinozit) và kaemferol, chứa 2 - metoxinaptoquinon (C.A., 1971)

Thân chứa kaemferol 3 - glucozit, quexetin, pelargonidin, cyanidin và delphinidin (C.A., 1966)

Hạt chứa 17,9 % chất béo Trong chất béo có thành phần chủ yếu là acid parinaric hay acid  9, 10, 13, 15 octadecatetraenoic C18H28O7 ( khoảng 27 %), Balsaminasterol

C27H40O Ngoài ra còn có - spinasterol C29H48O (khoảng 0,015 %), saponin, - ergsterol, các đa đường, khi thủy phân cho glucoza va fructoza (C.A , 1971)

Hoa chứa lawsone C10H6O3, lawsonemethylete C11H8O3, miricetin, anthocyanin Tùy theo màu sắc của hoa mà thành phần thay đổi: hoa trắng có chứa leucocyanidin, leucodelphynidin, hoa tím chứa malvidin glucozit, hoa đỏ chứa perlagonidin, paeonidin và delphinidin dưới dạng glucozit

Công thức hóa học của:

Acid p- hydroxybenzoic Lawsone Acid coumaric

Anthocyanidin Perlagonidin Delphinidin

2.2.6 Công dụng của cây hoa móng tay

 Làm cảnh

Hoa móng tay được trồng làm cảnh khắp nơi ở nước ta, các nước Trung Quốc, Ấn

Độ Hoa thường được trồng trên bồn hoa ven nhà, với nhiều màu sắc: đỏ trắng tím hồng, có loại cánh đơn, có loại nhiều lớp cánh, hoa móng tay rất dễ trồng

Vì hoa chủ yếu vào mùa hè, khi hiếm hoa, ngày thường hoa móng tay được gói giả làm hoa hồng để bán Hoa được trồng với nhiều chủng loại: hoa lớn có cựa ngắn, hoa nhỏ có cựa dài với nhiều màu sắc, hoa có cánh kép màu hồng

 Dược liệu

Toàn cây hoa móng tay có tác dụng kháng sinh mạnh, có tính ôn, hơi độc, chữa phong thấp, rắn rết cắn Lá dùng chữa thương tích, sưng loét, dùng gội đầu cho mọc tóc, lợi tiểu Methyl este của lawsone tốt để trị nấm, chống vi khuẩn

Cả cây móng tay được dùng trong y học cổ truyền với tên phượng tiên hoa Dịch

ép của hoa bóng nước có tác dụng kháng nấm rất mạnh

Hạt móng tay với tên cấp tính tử, thu hái quả già vào mùa hạ, lấy hạt và phơi khô Hạt chữa vô kinh, hốc xương

Rễ móng tay với tên phượng tiên căn, trị phong thấp, chấn thương

Hình 2.7 Một số giống hoa móng tay

2.3 Một số đặc điểm của các vi khuẩn và nấm thường gặp

Staphylococcus aureus Candida albicans

Hình 2.8 Các loại vi khuẩn, nấm sử dụng trong thí nghiệm

2.3.1 Trực khuẩn Escherichia coli

2.3.1.1 Đặc điểm sinh vật học

Escherichia coli (thường được viết tắt là E coli), là một trong những loài vi khuẩn

ký sinh trong đường ruột của động vật máu nóng (bao gồm chim và động vật có vú)

Vi khuẩn này cần thiết cho quá trình tiêu hóa thức ăn và là thành phần của khuẩn lạc

ruột Sự có mặt của E coli trong nước ngầm là một chỉ thị thường gặp cho ô nhiễm phân E coli thuộc họ vi khuẩn đường ruột (Enterobacteriaceae) và thường được sử dụng làm vi sinh vật mô hình cho các nghiên cứu về vi khuẩn Vi khuẩn E coli được

bác sĩ Theodor Escherich phát hiện từ tả lót của trẻ em năm 1885

Vi khuẩn là trực khuẩn Gram (-), hình que thẳng, kích thước trung bình 2 - 4 m x 0,4 - 0,6 m (rộng) Trực khuẩn di động (có thể có một số chủng không di động), có

vỏ có thể quan sát được dưới kính hiển vi quang học thông thường, có lông phân bố khắp xung quanh tế bào, không sinh nha bào

Vì không có khả năng sinh nha bào nên E coli, dễ bị tiêu diệt ở nhiệt độ sôi

1000C và bởi các hóa chất sát khuẩn thông thường (nước Javel 1/200, phenol 1/200 giết chết vi khuẩn sau 2 - 4 phút)

E coli có khả năng sinh ngoại độc tố loại ETEC (enterotoxigenic E.coli)

Cấu tạo kháng nguyên của E coli có 3 nhóm kháng nguyên cơ bản: kháng nguyên

O, kháng nguyên H và kháng nguyên K

Căn cứ vào các kháng nguyên O, H, K người ta chia E.coli ra thành nhiều nhóm

và nhiều typ khác nhau

* Các nhóm E.coli

Nhóm E coli gây bệnh (Enteropathogenic E coli, viết tắt là EPEC)

Nhóm E coli sinh độc tố ruột (Enterotoxigenic E coli, viết tắt là ETEC)

Nhóm E coli xâm nhập (Enteroinvasive E coli, viết tắt là EIEC)

* Các chất do E coli tổng hợp

E coli có khả năng tiết ra một số chất ức chế sự phát triển của vi khuẩn khác hoặc

tiết ra một số men làm cho vi khuẩn kháng lại kháng sinh

E coli còn tổng hợp một số vitamin như vitamin C, K

2.3.1.2 Khả năng gây bệnh

* Gây bệnh ở người

Trước hết phải đề cập đến nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, ngoài ra còn có thể gây bệnh ở nhiều cơ quan khác như: tiết niệu, hô hấp, gây nhiễm khuẩn huyết Bệnh lý ở các mô, các cơ quan khác có thể là hậu quả của bệnh lý đường tiêu hóa, nhưng cũng có thể chỉ biểu hiện bệnh lý ở một cơ quan nào đó trong khi đường tiêu hóa vẫn hoàn toàn bình thường

* Gây bệnh cơ hội

Khả năng gây bệnh cho súc vật yếu phải đưa một số lượng lớn vi khuẩn vào phúc mạc chuột nhắt hoặc đường tĩnh mạch cho thỏ mới gây chết được súc vật

Khi bị nhiễm bệnh đường ruột do E coli, có thể sử dụng các chất kháng sinh

như: Erythromyxin, cloramphenicol Hiện nay, E coli cũng đã kháng lại nhiều loại

kháng sinh nên việc làm kháng sinh đồ trước khi điều trị là cần thiết

2.3.2 Trực khuẩn mủ xanh (Pseudomonas aeruginosa)

2.3.2.1 Đặc điểm sinh vật học

Trực khuẩn mủ xanh thường sống trong đất, nước hoặc trên cơ thể người và động vật Ngày nay, trực khuẩn mủ xanh là một trong những nguyên nhân gây nhiễm trùng bệnh viện, chúng còn gây ra các nhiễm trùng cơ hội rất khó điều trị vì chúng kháng lại

nhiều kháng sinh

Trực khuẩn mủ xanh Gram âm, thẳng hoặc hơi cong nhưng không xoắn, hai đầu tròn Kích thước từ 0,5 - 1,0 m (rộng) x 1,5 - 5,0 m Có một lông duy nhất ở một cực, di động, không sinh nha bào

Tính chất đặc trưng của trực khuẩn mủ xanh là sinh sắc tố và chất thơm, có hai loại sắc tố chính:

 Pyocyanin: có màu xanh lá cây, tan trong nước và chloroform, khuyếch tán tốt

ra môi trường nuôi cấy, làm cho môi trường và khuẩn lạc có màu xanh Đây cũng là một đặc điểm quan trọng để phân loại vi khuẩn này với các vi khuẩn khác

 Pyoverdins: là loại sắc tố huỳnh quang, phát màu xanh khi chiếu tia tia cực tím Pyoverdin không bền vững, dễ mất trong môi trường nuôi cấy không chuẩn

Trực khuẩn mủ xanh hiếu khí tuyệt đối, trên môi trường lỏng, chúng hình thành váng Tuy nhiên, chúng có khả năng mọc lại được trong điều kiện kỵ khí nếu môi trường có NO3-

* Khả năng đề kháng

Trực khuẩn mủ xanh chết nhanh chóng ở 1000C Trong môi trường ẩm, thoáng và không có ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp, chúng sống được hàng tuần Trong môi trường có dinh dưỡng tối thiểu đặt ở 50C, chúng sống được 6 tháng

* Kháng nguyên

Kháng nguyên O chịu nhiệt, dựa vào kháng nguyên này, người ta chia trực khuẩn

mủ xanh thành 12 nhóm Kháng nguyên H không chịu nhiệt, là kháng nguyên lông

2.3.2.2 Khả năng gây bệnh

Trực khuẩn mủ xanh là loại vi khuẩn gây bệnh có điều kiện Khi cơ thể bị suy giảm miễn dịch (tự nhiên hoặc mắc phải), bị mắc các bệnh ác tính hoặc mãn tính, dùng lâu dài corticoid, kháng sinh hoặc các chất chống ung thư thì dễ mắc bệnh nhiễm trùng nội sinh hoặc ngoại sinh do trực khuẩn mủ xanh gây ra

Trực khuẩn mủ xanh từ môi trường bên ngoài xâm nhập vào cơ thể qua các vết thương hở (nhất là bỏng) Tại chỗ xâm nhập, chúng gây viêm có mủ (điển hình mủ có màu xanh), nếu cơ thể suy giảm sức đề kháng, chúng có thể xâm nhập vào và gây viêm các phủ tạng (xương, đường tiết niệu, tai giữa, phế quản, màng não) hoặc gây bệnh toàn thân (nhiễm khuẩn huyết, viêm nội tâm mạc) Về bệnh sinh dục, có giả thuyết cho rằng, các sản phẩm ngoại tiết như sắc tố, độc tố tan máu, độc tố ruột, ngoại độc tố A (độc tố gây chết) có vai trò chính Ngoài ra, trực khuẩn mủ xanh là nguyên nhân hàng đầu gây loét giác mạc Toàn bộ giác mạc có nguy cơ sinh mủ, dần tới viêm toàn nhãn

Trực khuẩn mủ xanh còn gây bệnh thực nghiệm: súc vật cảm nhiễm là chuột lang, tiêm vào màng bụng chuột 0,1 - 0,5 ml canh khuẩn, khoảng 50% chuột chết sau vài giờ, những con chuột sống dần dần hình thành những ổ mủ

2.3.2.3 Phòng bệnh và trị bệnh

* Phòng bệnh

Phòng bệnh không đặc hiệu: Phòng bệnh không đặc hiệu đóng vai trò chính trong

việc ngăn ngừa nhiễm trực khuẩn mủ xanh Giữ gìn vệ sinh chung, triệt để thực hiện các quy trình tiệt trùng, làm đúng các thao tác vô trùng để tránh lây chéo trong bệnh viện Đối với cá nhân: giữ gìn vệ sinh, tránh làm tổn thương da và niêm mạc, tăng cường sức đề kháng chung, tránh lạm dụng kháng sinh và các thuốc gây suy giảm

miễn dịch

* Điều trị

Trực khuẩn mủ xanh kháng lại nhiều kháng sinh thông dụng (penicillin, ampicillin, chloramphenicol và tetracyclin) Người ta thường dùng aminoglycosides (gentamicin, amikacin, tobramycin) hoặc cephalosporin thế hệ 3 (ví dụ, ceftazidime)

để điều trị các nhiễm trùng do trực khuẩn mủ xanh Tuy vậy, ở nước ta hiện nay,

khoảng 40% số chủng trực khuẩn mủ xanh kháng lại gentamicin

2.3.3 Tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus)

2.3.3.1 Đặc điểm sinh vật học

Tụ cầu là những cầu khuẩn, đường kính từ 0,8 - 1 m và đứng tụ lại với nhau thành từng đám hình chùm nho, bắt màu Gram dương, không có lông, không sinh nha bào, thường không có vỏ

Tụ cầu vàng có khả năng đề kháng với nhiệt độ và hóa chất cao hơn các vi khuẩn

không có nha bào khác, bị diệt ở 800C trong 1 giờ (các vi khuẩn khác thường bị diệt ở

690C trong 30 phút), có thể gây bệnh sau một thời gian dài tồn tại ở môi trường

* Sự kháng kháng sinh

Sự kháng lại kháng sinh của tụ cầu vàng là một đặc diểm đáng lưu ý Đa số tụ cầu vàng kháng lại penicillin G do vi khuẩn này sản xuất đưọc men penicilliase nhờ gen của R plasmid Một số còn kháng được methicillin gọi là methicillin resistance

S aureus (viết tắt MRSA) Hiện nay, một số rất ít tụ cầu còn đề kháng được với

Cephalosporin các thế hệ Kháng sinh được dùng trong các trường hợp này là vancomycin

Sự dung nạp kháng sinh (Tolerant): năm 1977, người ta đã ghi nhận rằng một số

chủng S aureus, mặc dù bị ức chế bởi penicillin ở các nồng độ thông thường, nhưng

nó chỉ bị diệt tại các nồng độ cao hơn Hiện tượng này gọi là sự dung nạp kháng sinh

Viêm phổi: viêm phổi do tụ cầu rất ít gặp

Nhiễm độc thức ăn và viêm ruột cấp: triệu chứng nhiễm độc thức ăn do tụ cầu rất cấp tính, bệnh nhân nôn và đi ngoài dữ dội, càng về sau phân và chất nôn chủ yếu là nước, có thể dẫn tới shock mạnh

Nhiễm khuẩn bệnh viện do tụ cầu: rất thường gặp đối với các nhiễm trùng vết mổ, vết bỏng, từ đó dẫn tới nhiễm khuẩn huyết, tỉ lệ tử vong bệnh này rất cao

Hội chứng da phồng rộp: gây viêm da hoại tử, ly giải và phồng rộp

2.3.3.4 Phòng và điều trị

* Phòng bệnh

Phòng bệnh nhiễm khuẩn do tụ cầu chủ yếu là vệ sinh môi trường, quần áo và thân

thể Đặc biệt, vệ sinh môi trường bệnh viện để chống nhiễm khuẩn bệnh viện

* Điều trị

Kháng sinh trị liệu chống nhiễm khuẩn tụ cầu là biện pháp chủ yếu Vấn đề khó khăn là tụ cầu rất kháng thuốc nên cần thiết làm kháng sinh đồ để chọn lọc thuốc thích hợp Dùng vacxin gây miễn dịch chống tụ cầu vàng đối với những bệnh nhân dùng kháng sinh ít hiệu quả

2.3.4 Nấm Candida albicans

2.3.4.1 Đặc điểm sinh vật học

Candida albicans là nấm men, cấu tạo đơn bào, hình tròn, kích thước 4 - 6 m,

đặc biệt khi gặp điều kiện thuận lợi, nó tạo giả khuẩn ty, phát triển tốt ở nhệt độ từ 20 -

380C, pH 2,5 - 7,5, tế bào nhuộm Gram dương

Candida albicans là nấm men sinh sản bằng cách nảy chồi Khả năng tồn tại ở 2

dạng hình thái là đơn bào và nấm sợi giúp loài này nhanh chóng chuyển đổi hình thái trong điều kiện thích hợp nên khó bị tiêu diệt Nấm ký sinh trên cơ quan tiêu hóa, hô hấp và trên da

Candida albicans có thể sinh trưởng tốt trên môi trường Sabouraud ở nhiệt độ

thích hợp là 25 - 370C Nhưng nếu ở môi trường thạch ngô, mạch nha thì men này thường xuất hiện bào tử áo (chlamydospore)

2.3.4.2 Khả năng gây bệnh

Trong điều kiện bình thường nấm Candida albicans hoàn toàn không gây bệnh, nó

chỉ có thể có mặt ở đường tiêu hóa, hô hấp, trên da và cơ quan sinh dục Nhưng có sự thay đổi nào đó trong cơ thể làm cho hệ thống miễn dịch giảm hoặc sử dụng kháng

sinh lâu dài thì nấm Candida albicans có điều kiện trở thành tác nhân gây bệnh

Candida albicans là tác nhân gây bệnh candidadansis (moniliasis)

Các mỹ phẩm tiếp xúc thường xuyên với da, khi mỹ phẩm bị nhiễm, tạo điều kiện cho sự nhiễm và sinh trưởng của loài này trên da

Nấm Candida albicans gây bệnh ở âm đạo phụ nữ, gây ra khí hư đặc như sữa, bã

đậu và làm ngứa âm hộ Trong thời kỳ kinh nguyệt, nhất là phụ nữ bị tiểu đường đang

sử dụng kháng sinh dài ngày, nấm này có thể gây viêm âm hộ hoặc âm đạo Candi

albicans còn gây bệnh ở nhiều nơi khác trong cơ thể như: da, niêm mạc, đôi khi gây

nhiễm khuẩn huyết Bệnh lây truyền do tiếp xúc với dịch tiết từ âm đạo hay lây nhiễm

từ da của người mang bệnh Khi có thai, do biểu mô âm đạo tăng tiết glycogen, trực khuẩn Doderlein trong âm đạo phân hủy glycogen thành acid lactic, làm pH âm đạo

giảm xuống, tạo điều kiện thuận lợi cho nấm Candida albicans phát triển Đặc biệt,

nếu người bệnh mang thai trong lúc bị bệnh này sẽ làm cho trẻ sinh ra dễ bị tưa lưỡi

Ở những người bị suy giảm miễn dịch, nhiễm Candida albicans ở da và niêm mạc

ở miệng và thực quản 90% người có HIV bị đẹn ở miệng báo hiệu dự báo xấu Viêm thực quản do Candida cho biết bệnh nhân đang ở giai đoạn AISD Từ đây, mầm bệnh

sẽ phát tán đi khắp cơ thể, gây thể bệnh lan tỏa thứ phát Và nguy cơ nhiễm trùng máu

do Candida rất lớn đối với những người bị bệnh mất tế bào hạt hoặc ghép cơ quan, ghép tụy

2.3.4.3 Phòng bệnh và điều trị

* Phòng bệnh

Để phòng ngừa viêm nhiễm âm đạo, cần hạn chế: dùng thuốc kháng sinh kéo dài, mặc quần áo không thích hợp trong môi trường nóng ẩm, rối loạn do mắc bệnh tiểu đường, thiếu máu mãn tính hoặc đang điều trị bằng thuốc ức chế miễn dịch Cẩn thận khi dùng bột thơm sau khi tắm, vì bột thơm là môi trường cho sự sinh sản của nấm Hiện nay, ISO 18416: 2007 là tiêu chuẩn do Ủy ban kỹ thuật ISO/TC 217- Mỹ

phẩm, xây dựng nhằm qui định các nguyên tắc phát hiện và nhận biết Candida

albicans, tiêu chuẩn này đóng vai trò quan trọng trong tạo sản phẩm mỹ phẩm an toàn

* Điều trị

Nhiễm nấm là một chứng bệnh thông thường nhưng rất khó trị, cây cúc vạn thọ rất

có lợi trong điều trị căn bệnh khó chịu này Nhiều trường hợp nhẹ có thể dùng các loại dược thảo có đặc tính kháng sinh và kháng nấm như tỏi

Các chuyên gia khuyên sử dụng viên đặt trị để chữa trị bệnh này, viên đặt âm đạo

có chứa biệt dược Euconazole Depot, Euconazole có phổ kháng nấm rộng, đạt hiệu

quả cao nhất trên nấm Candida albicans và non- albicans

Chương 3

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu

3.1.1 Địa điểm

Đề tài được thực hiện tại Bộ môn Công Nghệ Sinh Học- Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

3.1.2 Thời gian nghiên cứu

Thời gian nghiên cứu từ tháng 3/2007 đến tháng 8/2007, được thực hiện qua hai giai đoạn:

 Giai đoạn 1: Tiến hành vô mẫu từ cây ngoài tự nhiên, cấy chuyền, tạo nguồn cây

in vitro, nuôi cấy tạo mô sẹo và từ mô sẹo tái sinh thành cây con dưới tác dụng của các

chất kích thích sinh trưởng ở những nồng độ khác nhau

 Giai đoạn 2: Tiến hành thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các loại dịch

chiết từ cây trâm ổi, cây hoa móng tay ngoài tự nhiên và cây in vitro

3.2 Trang thiết bị và dụng cụ dùng trong nghiên cứu

Thiết bị: Tủ cấy vô trùng, nồi hấp (autoclave), máy đo pH, cân điện tử, máy lạnh, máy khuấy, máy lắc, nhiệt kế, ẩm kế, bếp điện, tủ ấm,

Dụng cụ: Pince, dao cấy, kéo, đĩa cấy, giấy cấy, ống nghiệm, chai nước biển, bình tam giác, đèn cồn, pipette (loại 1 ml, 5 ml, 10 ml, ), đĩa petri, que cấy trang, que cấy vòng, giấy lọc, đĩa kháng sinh, micropipette (40 - 200 l),

3.3 Vật liệu

3.3.1.Vật liệu nuôi cấy cây trâm ổi, cây hoa móng tay

Lá, thân, hạt cây trâm ổi và cây hoa móng tay thu hái tại Thủ Đức- TP Hồ Chí Minh

3.3.2 Vật liệu thử hoạt tính kháng khuẩn

Các loại vi khuẩn Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus

aureus, nấm Candida albicans được lấy từ viện Pasteur TP Hồ Chí Minh

Dịch chiết cây trâm ổi, cây hoa móng tay ngoài tự nhiên, mô sẹo và cây in vitro

được tách chiết bằng dung môi ethanol 80%

3.4 Thành phần môi trường sử dụng trong nghiên cứu

3.4.1 Thành phần môi trường sử dụng trong nuôi cấy mô

Môi trường nuôi cấy là môi trường MS của Murashige và Skoog (1962)

Bảng 3.1 Thành phần môi trường MS của Murashige và Skoog

Thành phần Dạng sử dụng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 1650

KNO3 1900

Khoáng đa lượng KH2PO4 170

(Macro MS) MgSO4 7H2O 370

CaCl2 2H2O 440

H3BO4 6,20

MnSO4 4H2O 22,30

Khoáng vi lượng CoCl2 6H2O 0,025

(Micro MS) CuSO4 5H2O 0,025

Các chất khác:

Đường: 30 g/l

Agar : 7,5 g/l

pH môi trường trước khi hấp: 5,7- 5,8

Các chất kích thích sinh trưởng: 2,4-D (2,4- Dichlorophenoxy- acetic acid),

BA (benzyl adenin)

3.4.2 Hóa chất cho thử nghiệm vi sinh

 Môi trường nuôi cấy vi khuẩn

Môi trường cao thịt- pepton

 Môi trường nuôi cấy nấm

Môi trường Sabouraud

Ngoài ra còn có các loại hóa chất khác như: cồn 700, cồn 960, ethanol

3.5 Phương pháp nghiên cứu

3.5.1 Thí nghiệm 1 Khảo sát ảnh hưởng của 2,4-D và BA lên sự hình thành mô sẹo ở cây trâm ổi và cây hoa móng tay

3.5.1.1 Thí nghiệm 1a Khảo sát ảnh hưởng của 2,4-D và BA lên sự hình thành

mô sẹo cây trâm ổi