Nghiên cứu bào chế dung dịch thuốc tiêm chứa 3 vitamin b1, b6, b12

Vì vậy để pha chế, sản xuất các chế phẩm thuốc tiêm đạt yêu cầu về chất lượng cần nghiên cứu xây dựng được công thức tối ưu đảm bảo độ ổn định, hiệu lực và an toàn, trước hết cần phải có

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THỊ LOAN

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ DUNG DỊCH THUỐC

LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC

HÀ NỘI - 2011

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THỊ LOAN

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ DUNG DỊCH

LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC

CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ

MÃ SỐ: 607301

Người hướng dẫn: TS Nguyễn Trần Linh

Nơi thực hiện đề tài:

- Bộ môn bào chế

- Công ty cổ phần dược phẩm Vĩnh Phúc Thời gian thực hiện: từ tháng 9/2010 đến tháng 9/2011

HÀ NỘI – 2011

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới TS

Nguyễn Trần Linh, người thầy trực tiếp hướng dẫn và tận tình chỉ bảo giúp đỡ

tôi hoàn thành khóa luận này

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô và các kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình làm thực nghiệm tại bộ môn

Tôi cũng xin cảm ơn tới Ban giám hiệu, Phòng đào tạo sau đại học và các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên trường đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập tại đây

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám đốc, các anh chị em phòng Nghiên cứu phát triển Công ty cổ phần Dược phẩm Vĩnh Phúc đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình công tác và hoàn thành khóa cao học này

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè đã luôn ở bên, chia sẻ, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và làm khóa luận

Hà Nội, ngày 25 tháng 02 năm 2012

Học viên

Lê Thị Loan

trong chế phẩm chứa polyvitamin

11

1.2.5.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng đồng thời

thiamin hydroclorid và pyridoxin hydroclorid trong chế phẩm

chế phẩm chứa hỗn hợp 3 vitamin B 1 , B 6 , B 12

1.4.1 Một số nghiên cứu nước ngoài

1.4.2 Một số nghiên cứu trong nước

19

20

Phần 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

2.2.2 Phương pháp bào chế thuốc tiêm 3B (B1, B6, B12) 23

2.2.3.1 Phương pháp định lượng cyanocobalamin trong dung dịch thuốc

2.2.4 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc khi xây dựng công

3.1 Thẩm định phương pháp định lượng 32 3.1.1 Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký 32

3.2 Sơ bộ đánh giá một số yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của

thuốc tiêm có chứa 3 vitamin B 1, B 6 , B 12 36 3.2.1 Ảnh hưởng của chất chống oxy hóa, chất bảo quản 36

3.3 Tối ưu hóa công thức thuốc tiêm 41

3.3.1 Thiết kế thí nghiệm 41

3.3.3 Ảnh hưởng của các biến đầu vào đến các biến đầu ra 43

3.4 Theo dõi độ ổn định của thuốc tiêm pha theo công thức tối ưu 51

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

BHA Butyl hydroxy anisol

BHT Butyl hydroxy toluen

BP British Pharmacopoeia (dược điển Anh)

HPLC High performance liquid chromatography (sắc ký lỏng hiệu

năng cao) RSD Relative standard deviation (độ lệch chuẩn tương đối)

SD Stardard deviation (độ lệch chuẩn)

USP The United States Pharmacopeia (dược điển Mỹ)

phenol, alcol benzylic tới độ ổn định của cyanocobalamin

37

3.9 Ảnh hưởng của các chất ổn định tới độ ổn định hàm lượng và pH

của thuốc tiêm

3.18 Kết quả thực nghiệm giá trị các biến đầu ra 42

3.20 Ảnh hưởng của biến độc lập đến biến phụ thuộc 44 3.21 Bảng công thức tối ưu theo phần mềm tối ưu 48

3.22 Bảng thiết kế thí nghiệm theo công thức tối ưu 49

3.23 Bảng kết quả thực nghiệm của các công thức tối ưu 49

3.24 Bảng kết quả khảo sát ành hưởng của ánh sáng đèn và ánh sáng

mặt trời tới độ ổn định của thuốc tiêm pha theo công thức tối ưu

50

3.25 Bảng kết quả theo dõi độ ổn định của cyanocobalamin trong dung

dịch thuốc tiêm

51

3.26 Bảng kết quả theo dõi độ ổn định của thiamin hydroclorid trong

dung dịch thuốc tiêm

51

3.27 Bảng kết quả theo dõi độ ổn định của pyridoxin hydroclorid trong

52

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

3.2: Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và Spic 28 3.3: Mặt đáp của ∆ pH theo nồng độ đệm, pH (n-butanol 3%) 38 3.4: Mặt đáp của ∆ pH theo nồng độ đệm và n-butanol (ở pH = 4) 39 3.5: Mặt đáp của hàm lượng còn lại sau bảo quản 3 tuần ở nhiệt độ

phòng theo n-butanol và nồng độ đệm (pH = 4)

3.6: Mặt đáp của hàm lượng còn lại sau bảo quản ở nhiệt độ phòng 3

tuần theo n-butanol và pH (ở nồng độ đệm 0,03)

3.7: Mặt đáp của hàm lượng còn lại sau bảo quản 3 tuần ở điều kiện

lão hóa cấp tốc theo nồng độ đệm và pH (n-butanol 5%)

3.8: Mặt đáp của hàm lượng còn lại sau bảo quản 3 tuần ở điều kiện

lão hóa cấp tốc theo nồng độ đệm và n-butanol (pH = 4)

ĐẶT VẤN ĐỀ

Hiện nay, nhu cầu bổ sung và sử dụng các vitamin là rất lớn , không chỉ với mục đích bổ sung hàng ngày mà còn để điều trị một số bệnh Trong đó các chế phẩm chứa vitamin B1, B6, B12 hàm lượng cao được sử dụng trong các chứng đau thần kinh không rõ nguyên nhân, viêm dây thần kinh, đau dây thần kinh toạ, đau lưng, rối loạn do nghiện rượu lâu ngày Trên thị trường hiện nay, các chế phẩm trong nước chứa 3 vitamin này thường ở dạng viên nén, viên nang, còn dạng thuốc tiêm chủ yếu là nhập ngoại với nhiều tên biệt dược khác nhau Nắm bắt nhu cầu của thị trường, các công ty Dược trong nước đã tiến hành nghiên cứu để sản xuất các chế phẩm thuốc tiêm này Nhưng vấn đề lớn gặp phải với các chế phẩm này là độ ổn định của vitamin B12 Đây chính là nguyên nhân của một loạt các chế phẩm chứa hỗn hợp 3 vitamin này bị rút số đăng ký do không đạt hàm lượng ghi trên nhãn Vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu cải thiện độ ổn định của thuốc tiêm chứa 3 vitamin B1, B6, B12 với đề tài:

―Nghiên cứu bào chế dung dịch thuốc tiêm chứa 3 vitamin B 1 , B 6 , B 12‖ với các mục tiêu sau:

1 Xây dựng được phương pháp thẩm định cyanocobalamin trong chế phẩm thuốc tiêm chứa 3 vitamin B1, B6, B12

2 Khảo sát ảnh hưởng của các chất chống oxy hóa, chất ổn định, hệ đệm,

pH đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm

3 Tối ưu hóa công thức thuốc tiêm và theo dõi độ ổn định của dung dịch pha theo công thức tối ưu

Phần 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ THUỐC TIÊM VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC TIÊM

Thuốc tiêm là những chế phẩm vô khuẩn, có thể là dung dịch, hỗn dịch, nhũ tương hoặc bột khô khi tiêm mới pha lại thành dung dịch hay hỗn dịch để tiêm vào cơ thể theo những đường tiêm khác nhau

Thuốc tiêm được tiêm trực tiếp vào các mô, bỏ qua các hàng rào bảo vệ tự nhiên của cơ thể như da và niêm mạc, do đó thuốc tiêm phải là những chế phẩm

vô khuẩn, tinh khiết để không gây tai biến cho người dùng thuốc Vì vậy để pha chế, sản xuất các chế phẩm thuốc tiêm đạt yêu cầu về chất lượng cần nghiên cứu xây dựng được công thức tối ưu đảm bảo độ ổn định, hiệu lực và an toàn, trước hết cần phải có các thông tin khoa học về dược chất, các phản ứng phân hủy dược chất cũng như các yếu tố ảnh hưởng độ ổn định của thuốc tiêm [1]

1.1.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của dung dịch thuốc tiêm và biện pháp nâng cao độ ổn định

Điều kiện bảo quản:

- Nhiệt độ

- Độ ẩm

- Ánh sáng

Độ ổn định vật lý, hóa học, sinh học của thuốc

tiêm

CT thuốc:

- Bản chất dược chất

1.1.1.1 Yếu tố thuộc về công thức thuốc

a Bản chất của dược chất

Các dược chất khác nhau có tính chất lý hóa học khác nhau, độ bền vững cũng khác nhau Do đó tùy từng dược chất cần phải nghiên cứu xây dựng các công thức và kỹ thuật bào chế đảm bảo độ ổn định, an toàn và hiệu lực điều trị Một

số biện pháp nâng cao độ ổn định của dược chất [2],[9],[35]:

- Cho thêm các chất tạo phức với dược chất có thể làm tăng độ ổn định như thêm cafein vào dung dịch nước của benzocain, procain

- Trong nhiều trường hợp việc dùng các chất diện hoạt làm tăng độ tan của dược chất, hạn chế quá trình thủy phân do một lượng lớn phân tử dược chất phân tán trong lòng các micel tạo bởi chất diện hoạt

- Thay thế nhóm thích hợp trong cấu trúc hóa học của dược chất mà không làm thay đổi hiệu lực điều trị là một biện pháp làm tăng độ ổn định của dược chất

b Ảnh hưởng của dung môi

Các dược chất dễ thủy phân sẽ dễ bị thủy phân trong dung môi nước đồng thời dung môi không tinh khiết làm cho các phản ứng phân hủy xảy ra nhanh hơn Để hạn chế ảnh hưởng này nên sử dụng dung môi có độ tinh khiết cao, loại oxy hòa tan trong nước cất pha tiêm trước và trong khi pha chế

c pH dung dịch

pH của dung dịch có thể làm tăng các phản ứng phân hủy, ảnh hưởng đến

độ tan, độ ổn định của dược chất và sinh khả dụng của thuốc.pH của dung dịch một chất sẽ bị ảnh hưởng bởi sự oxy hóa tùy thuộc vào pKa của chất đó Các dược chất khác nhau sẽ ổn định trong một dung dịch có pH nằm trong khoảng thích hợp, ở đó tốc độ phản ứng oxy hóa dược chất thấp nhất Do đó phải nghiên cứu chọn pH tối ưu cho độ ổn định của dược chất, lựa chọn chất điều chỉnh pH,

hệ đệm thích hợp chống lại sự oxy hóa và thuỷ phân dược chất

d Ảnh hưởng của các tá dược

Tùy thuộc từng dược chất cần nghiên cứu sử dụng các tá dược thích hợp (chất chống oxy hóa, chất hiệp đồng chống oxy hóa, chất bảo quản…) để đảm bảo độ ổn định của chế phẩm

e Ảnh hưởng của bao bì

Bao bì đựng thuốc tiêm luôn tiếp xúc trực tiếp với dược chất, trong quá trình bảo quản, các thành phần từ bề mặt bao bì có thể khuếch tán vào thuốc, tương tác với các thành phần có trong thuốc làm ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc Do đó trong nghiên cứubào chế phải lựa chọn bao bì tiếp xúc trực tiếp với thuốc thích hợp, tránh nhả tạp từ bao bì vào thuốc

1.1.1.2 Yếu tố thuộc kỹ thuật bào chế

Một số yếu tố thuộc kỹ thuật bào chế ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm bao gồm: điều kiện pha chế kín hay hở, nhiệt độ và thời gian pha, trình tự pha, sự sục khí trơ, các thông số của quá trình tiệt khuẩn Để hạn chế phản ứng phân hủy dược chất cần tiến hành pha chế nhanh, hạn chế tiếp xúc với không khí, pha chế kín, hòa tan tá dược trước rồi mới hòa tan dược chất, đóng và hàn ống trong bầu khí trơ Khi tiệt khuẩn, tùy loại dược chất mà lựa chọn phương pháp, nhiệt độ và thời gian thích hợp

1.1.1.3 Các yếu tố thuộc về điều kiện bảo quản

Các yếu tố nhiệt độ, ánh sáng, độ ẩm… trong quá trình bảo quản có thể xúc tác cho phản ứng phân hủy dược chất vì vậy các chế phẩm cần được nghiên cứu điều kiện bảo quản thích hợp để đảm bảo độ ổn định trong suốt thời gian bảo quản thuốc

Khối lượng phân tử: 337,27

Tên khoa học: 4-methyl thiazolium hydroclorid (nitrat, acetiamin hydroclorid, benfotiamin )

Do có tính base nên tạo tủa với một số thuốc thử chung của alkaloid

+ Dẫn xuất thiazol: vòng thiazol có chứa nguyên tử nitrogen bậc bốn kém bền vững trong môi trường kiềm và trung tính vòng bị thủy phân mở vòng và oxy hóa thành sản phẩm không có hoạt tính vitamin

+ Nhóm 2- hydroxyethyl: dễ ether hóa hoặc este hóa tạo thiamin palmitat, thiamin stearat,… đặc biệt là thiamin pyro-phosphat là coenzym của một số enzym quan trọng trong việc chuyển hóa các hydratcarbon [4]

 Độ ổn định

Thiamin hydroclorid dạng khan có thể hút ẩm rất nhanh khoảng 4% khi tiếp xúc với không khí Nguyên liệu nên được bảo quản kín tránh ánh sáng và bảo quản ở nhiệt độ phòng

Dung dịch thiamin hydroclorid ổn định ở pH ≤ 4, hoạt tính giảm rất chậm nhưng trong môi trường trung tính hoặc kiềm thì bị phân hủy rất nhanh đặc biệt khi tiếp xúc với không khí Ổn định nhất trong dung dịch có pH ở 2,6 hay 3,5 [34]

Thiamin chỉ bị phân hủy dưới ánh sáng mặt trời, không ổn định khi có mặt tác nhân khử như natri bisulfit Tỷ lệ thiamin phân hủy tăng lên cùng với sự tăng

pH và nhiệt độ Dung dịch tiêm thiamin hydroclorid nên được bảo quản ở nhiệt

pyridoxal phosphat hoặc pyridoxamin phosphat Dạng dược dụng là pyridoxin hydroclorid [4].

Khối lượng phân tử: 205,64

 Hấp thụ mạnh bức xạ tử ngoại Dung dịch chế phẩm 0,001% trong acid hydrocloric 0,1 mol/l ở vùng sóng từ 250-350 nm có 1 cực đại hấp thụ ở 288 nm đến 296 nm

 Nhóm OH phenol:

 Tính acid: tan trong các dung dịch kiềm, tác dụng với Fe3+

tạo màu đỏ

 Tính khử: Vitamin B6 dễ bị oxy hóa bởi tia tử ngoại

 Dễ tham gia phản ứng thế vào C số 6

 Nhóm methol ở vị trí 5: bị phosphoryl hóa tạo pyridoxal phosphat là dạng hoạt động trong cơ thể

 Chỉ định:

- Phòng và điều trị các trường hợp thiếu vitamin B6

- Phòng và điều trị một số bệnh ở hệ thần kinh do các thuốc khác (như isoniazid) [5], [8]

1.2.3 Vitamin B 12

 Công thức hóa học:

Vitamin B12 gồm 2 phần: phần cobamid gồm 4 nhân pyrol đã hydrogen hóa, giữa nhân là nguyên tử coban hóa trị 3; các nhân này đã bị thế bởi nhóm methyl, acetamid và propionamid Phần nucleotid gồm 5,6-dimethylbenzimidazol đã ester hóa bởi acid phosphoric và 2 phần này nối với nhau qua cầu isopropyl alcol [4]

Công thức phân tử: C63H88CoN14O14P Khối lượng phân tử: 1355,0

 Tính chất lý hóa

 Lý tính:

+ Cyanocobalamin là những tinh thể hay bột kết tinh màu đỏ tối, ít tan trong nước (1 g trong 80 ml), ít tan trong ethanol, không tan trong aceton Dạng khan rất dễ hút ẩm khi để ngoài không khí có thể hút ẩm tới 12% Bảo quản trong lọ kín và tránh ánh sáng [28]

+ Hấp thụ mạnh bức xạ tử ngoại và cả bức xạ vùng khả kiến

 Hóa tính:

+ Do có chứa các nhóm acetamid, propinamid trong phân tử nên rất dễ bị thủy phân trong môi trường acid, base mạnh

+ Do có hệ dây nối đôi luân phiên tương đối dài và có màu nên vitamin

B12 hấp thụ mạnh bức xạ tử ngoại và cả bức xạ vùng trông thấy Có thể áp dụng tính chất này để định tính và định lượng vitamin B12

+ Dung dịch trong nước của cyanocobalamin hấp thụ cực đại ở 278, 361, 547-559 nm

+ Vitamin B12 là yếu tố quan trọng trong sự phát triển của vi khuẩn nên có thể dùng phương pháp vi sinh để định lượng Các loại vi khuẩn được dùng là

Lactobacillus leichmannii, Ochramonas malhamensis, Euglenia gracilis và Escherichia coli M113-3 [4]

 Độ ổn định:

- Cyanocobalamin không bền với các tác nhân ánh sáng, nhiệt độ, tia tử

ngoại Phải bảo quản kín, tránh ánh sáng và ở nhiệt độ có kiểm soát

 Chỉ định

- Thiếu máu ưa sắc hồng cầu to

- Viêm, đau dây thần kinh

- Dự phòng thiếu máu hoặc tổn thương thần kinh ở người cắt dạ dày, viêm ruột mạn

- Ngoài ra còn phối hợp với các vitamin khác khi cơ thể suy nhược, suy dinh dưỡng, trẻ em chậm lớn, phụ nữ mang thai, cho con bú, nhiễm khuẩn, nhiễm độc [3], [6]

1.2.4 Chỉ định, cách dùng thuốc tiêm 3B (B 1 , B 6 , B 12 )

-Viêm thần kinh, viêm đa thần kinh, viêm đa thần kinh do rượu mãn tính, viêm thần kinh thị giác, hậu nhãn cầu do thuốc hay độc chất, đau thần kinh tọa, đau do phong thấp, đau thần kinh cổ cánh tay [7]

- Cách dùng: Tiêm bắp sâu

Hội chứng đau nhức: 1 ống/ngày hoặc 2 ngày một ống

Nghiện rượu kinh niên: 2 ống/ngày

1.2.5 Phương pháp định lượng các vitamin trong chế phẩm

Dựa trên khả năng tạo phức của Co2+

tạo hợp chất chelat và muối có màu Phương pháp có độ nhạy cao (0,03-28,3 µg của cobalt mỗi ml) và chính xác

c Phương pháp vi sinh vật

Sử dụng Lactobacillus leichmanii ATCC -7830 và Escherichia coli 113-3

Sử dụng E.coli có độ nhạy thấp nhưng đặc hiệu hơn, ít nhạy cảm với yếu tố bên ngoài L.leichmanii nhạy cảm hơn nhưng ít đặc hiệu hơn, nó đáp ứng với nhiều

hợp chất tương tự CNB12

+ Ưu điểm: Độ nhạy cao (giới hạn phát hiện là 10-6

-10-9 g/ml) + Hạn chế: độ chính xác thấp (10-15%), dài dòng và tốn thời gian

d Phương pháp miễn dịch phóng xạ

+ Ưu điểm: có độ nhạy cảm cao (10-7

-10-10) vì đồng vị phóng xạ cho năng lượng bức xạ cao và có thể phát hiện được lượng rất nhỏ với những dụng cụ đơn giản Đặc hiệu và chính xác

+ Nhược điểm: phương pháp này rất tốn kém cần có thuốc thử đặc biệt

f Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao:

Có thể thấy vì lượng CNB12 (trong các chế phẩm chứa nhiều vitamin ) rất nhỏ cỡ µg, khi phân hủy cho các dẫn chất của cobalamin có một số đặc tính tương tự CNB12 vì vậy cần có một phương pháp phân tích có độ nhạy cao, chọn lọc và chính xác Do có ưu điểm là có khả năng tách hoạt chất tốt, độ chính xác,

độ nhạy và chọn lọc cao, có thể xác định nhanh riêng lẻ hoặc đồng thời với các vitamin tan trong nước khác trong chế phẩm hỗn hợp các vitamin vì thế phương pháp HPLC ngày càng được ứng dụng rộng rãi trong việc phân tích CNB12 trong polyvitamin [30]

1.2.5.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng vitamin B 12 trong chế phẩm chứa polyvitamin

Ngày nay, phương pháp HPLC định lượng đồng thời các vitamin trong hỗn hợp nhiều thành phần được sử dụng ngày càng phổ biến do nó cho phép định lượng đồng thời các vitamin một cách nhanh chóng, chính xác và độ lặp lại cao [29]

 Dược điển Việt Nam IV: Định lượng vitamin B12 trong viên nén hỗn hợp 3 vitamin B1, B6, B12

Pha động: Hỗn hợp methanol – nước (35:65)

Pha động: 0,05M natri dihydrophosphate, heptahydrat, 10% methanol

(v/v), 0,018M trimethylamin, chỉnh pH =3,55 bằng dung dịch acid phosphoric 85%

1.2.5.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng đồng thời thiamin hydroclorid và pyridoxin hydroclorid trong chế phẩm:

 USP 32:

- Pha động:

Dung dịch A: Hòa tan natri 1-hexansulfonat trong acid acetic băng (1: 100)

Dung dịch B: Methanol: acetonitril (3:2)

Pha động: Dung dịch A : Dung dịch B (60:40) Điều chỉnh pha động nếu cần

- Điều kiện sắc ký:

Cột packing L1 (30cm x 4,0 mm) được nhồi pha tĩnh C (10µm) Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 254 nm

Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 10 µl

 Dược điển Việt Nam IV:

- Pha động: Hòa tan 1,40g natri 1-hexansulfonat trong 1000 ml hỗn hợp

nước : methanol : acid acetic băng (73 : 27 : 1) Điều chỉnh pha động nếu cần

- Điều kiện sắc ký:

Cột thép không gỉ (25cm x 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh C (10µm) Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 280 nm

Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl

Bảng 1.1 Một số chế phẩm chứa hỗn hợp 3 vitamin B 1 , B 6 , B 12 trên thị trường

Biệt dƣợc Hãng sản xuất Xuất xứ Dạng

Injection

Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk

Việt Nam Đông

Trong các điều kiện bảo quản khác nhau, sự suy giảm hàm lượng vitamin

B1, B6 là không đáng kể Nhưng hàm lượng vitamin B12 lại giảm rõ rệt, do vậy

không đạt được hiệu quả điều trị

Trong nghiên cứu của H H.Hutchins và cộng sự, với sự có mặt của cả vitamin B1 và B6, vitamin B12 bị phân hủy hoàn toàn sau 6 tháng ở nhiệt độ thường và chỉ 1 tuần tại nhiệt độ 450C Tại 1000

C, trong dung dịch hỗn hợp 3

vitamin, vitamin B12 bị phá hủy hoàn toàn chỉ sau 4 giờ trong khi chỉ 23,2% lượng B12 bị phân hủy nếu chỉ có mặt vitamin B6 [22]

Cyanocobalamin không ổn định do đặc tính cấu trúc; dễ dàng bị phân hủy dưới tác dụng của ánh sáng, tác nhân oxy hóa, tác nhân gây phân hủy và kim loại nặng

A.N Shchavlinskii và cộng sự đã nghiên cứu về độ ổn định của CNB12, nguyên nhân và các phương pháp kiểm soát chất lượng của CNB12 trong các chế phẩm nhằm đảm bảo độ ổn định CNB12 [30]

1.3.1 Phản ứng thủy phân

Cyanocobalamin bị thủy phân dễ dàng ngay ở điều kiện bảo quản thông thường Trong môi trường acid mạnh, cyanocobalamin bị mất hoạt tính do trong phân tử có nhóm amid: acetamid và propionamid, có liên kết glycosid và liên kết ether trong nhân nucleotid cũng như liên kết amid bậc 2 Cyanocobalamin ổn định nhất trong dung dịch tại pH 4-6, pH tối ưu là từ 4-5 Trong môi trường acid

và acid mạnh, ở nhiệt độ phòng, nhóm amid bị thủy phân tạo thành nhóm carboxyl, trước tiên là thủy phân nhóm acetamid và propionamid Các nhóm amid bị thủy phân với tốc độ khác nhau, lớn nhất là nhóm propionamid, acetamid

ổn định hơn và bị thủy phân ở điều kiện khắc nghiệt hơn[30]

Theo nghiên cứu của Abraham Taub và cộng sự thì vitamin B12 bị phân hủy 30% ở pH 2,6 và phân hủy tới 90% ở pH 8[32]

Acid monocarboxylic là sản phẩm chính của sự thủy phân CNB12 Các acid có thể được hình thành trong quá trình sản xuất công nghiệp cũng như trong quá trình bảo quản Thực tế, các acid monocarboxylic là các chất chống chuyển hóa và sự có mặt của chúng là bằng chứng của sự phân hủy CNB12 Do đó:

- Phải thiết lập các điều kiện cho sự ỏn định CNB12 để ngăn ngừa sự thủy phân CNB12 của các dạng bào chế trong sản xuất công nghệ dược phẩm

- Khi đã chuẩn hóa được dạng bào chế CNB12 ổn định nhất với phản ứng thủy phân phải kiểm soát được nồng độ acid monocarboxylic trong chế phẩm

1.3.2 Phản ứng phân hủy dưới sự tác động của ánh sáng

CNB12 là một hợp chất rất nhạy cảm với ánh sáng Nhóm cyano bị cắt chậm dưới tác dụng của ánh sáng tạo hydroxycobalamin ở pH 9,3-14,0 hoặc aquacobalamin ở pH 2,0 Hydroxycobalamin có hoạt tính sinh học giống với CNB12 do nó có cấu trúc tương tự với CNB12 [30]

Theo Iqbal Ahmad và cộng sự thì dưới tác dụng của ánh sáng CNB12 bị phân hủy tạo hydroxocobalamin Động học của phản ứng được nghiên cứu tại

pH 1-12, phương pháp quang phổ được sử dụng để xác định 2 hợp chất ở bước sóng 550-525 nm hay 361 và 351 nm Kết quả cho thấy CNB12 phân hủy theo phản ứng động học bậc 0 tại pH nghiên cứu và với sự xúc tác của cả H+

và OH[15]

-Iqbal Ahmad và cộng sự đã nghiên cứu so sánh sự phân hủy của dung dịch CNB12 dưới ánh sáng mặt trời và ánh sáng nhân tạo sử dụng 2 nồng độ 950 µg/ml và 95 µg/ml ở pH 4, 5 và 7 Kết quả cho thấy sau 2 giờ khi tiếp xúc với ánh sáng mặt trời hàm lượng giảm 14,7% - 21% và 56,3-81% còn khi tiếp xúc với ánh sáng nhân tạo thì hàm lượng giảm 2,7%-19,4% và 15-27,7% Dưới ánh sáng mặt trời CNB12 phân hủy nhiều hơn và có sự hình thành của một số sản phẩm oxy hóa [13]

1.3.3 Ảnh hưởng của các vitamin và các nguyên tố vi lượng

Ảnh hưởng của một vài chất đến độ ổn định của CNB12 xảy ra trong dung dịch của chúng Chỉ cần một lượng nhỏ tác nhân cũng làm tăng sự phân hủy của CNB12 lên gấp bội (khử Co3+ thành Co2+) Quá trình này diễn ra mạnh trong dung dịch và đặc biệt là khi có mặ acid ascorbic và thiamin Sản phẩm của sự oxy hóa vitamin C, dehydro vitamin C làm tăng sự phân hủy CNB12 lên rất lớn Tương tác của thiamin với CNB12 khá phức tạp, trong khi nhóm thiazol của thiamin gây phân hủy CNB12 thì nhân pyrimidin lại giúp ổn định CNB12[30]

Sự phân hủy CNB12 tăng lên trong dung dịch khi có sự xuất hiện của acid nicotinic và nicotinamid, riboflavin, acid folic và các yếu tố vi lượng như muối sắt, đồng, kẽm,… [30]

Ngược lại, theo Doerge và cộng sự, nhóm thiazol của Vitamin B1, dẫn xuất 3-benzyl hay 3-(4-nitrobenzyl) của nhóm thiazol hoặc dimethylformamid, một sản phẩm phân hủy có cấu trúc tương tự của nhóm thiazol, không có tác dụng bất lợi nào đến độ ổn định của CNB12 trong dung dịch pH 4,0 Mặt khác, CNB12 lại không ổn định trong sự có mặt của cystein hydroclorid, do đó các tác giả đưa ra giả thiết: các sản phẩm phân hủy có chứa nhóm thiol của thiamin hydroclorid có thể là nguyên nhân gây ra sự phân hủy của CNB12 trong quá trình bảo quản [23] Theo Dahl và cộng sự thì vitamin B12 phân hủy rất nhanh bởi acid ascorbic, thiamin cũng làm tăng phân hủy vitamin B12 Nghiên cứu còn chỉ ra rằng CNB12

ổn định trong hỗn hợp TNP (dung dịch tiêm truyền phối hợp nhiều chất dinh dưỡng ) trong khoảng 96 giờ ở nhiệt độ 2-8o

C và tránh ánh sáng [27]

Hastings H Hutchins và cộng sự đã nghiên cứu độ ổn định của 8 sản phẩm

có chứa vitamin B12 trong dung dịch acid ascorbic 1% với đệm acetat pH 4 và được bảo quản ở nhiệt độ phòng Kết quả thu được cho thấy trong dung dịch ascorbat thì CNB12 ổn định hơn các dẫn xuất khác, dung dịch có chứa cả CNB12

470C, hảm lượng vitamin B12 sẽ giảm khoảng 87,5% nếu tiếp xúc với không khí hay khí oxygen trong 9 ngày Lượng oxy trong ống tiêm có thể làm thay đổi độ

ổn định của B12 Khi để dưới ánh sáng mặt trời trong vòng 7 ngày thì hàm lượng vitamin B12 giảm không đáng kể [31]

H W Loy, O L Kline và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu độ ổn định của CNB12 trong các dung dịch chiết xuất từ gan để điều trị thiếu máu ác tính kết quả cho thấy độ ổn định phụ thuộc rất nhiều bởi pH dung dịch: hiệu lực của thuốc giảm khi pH tăng từ 5-6,5 và từ 6,5-8, đặc biệt lượng vitamin B12 giảm

nhiều hơn khi thêm acid folic vào Nút cao su cũng là một yếu tố làm tăng tỷ lệ

và mức độ phân hủy CNB12 [26]

Các nghiên cứu trên cho thấy CNB12 có thể bị phân hủy theo các con đường: thủy phân (dễ bị thủy phân ở môi trường acid, kiềm mạnh), quang phân (khi tiếp xúc với ánh sáng mặt trời hay hay ánh sáng nhân tạo), oxy hóa Một số chất như thiamin, acid ascorbic và các sản phẩm phân hủy của chúng cũng như các nguyên tố vi lượng là các yếu tố làm tăng phân hủy CNB.

Bên cạnh CNB12 cũng cần quan tâm đến độ ổn định của VB1 và VB6 Thiamin hydroclorid ổn định ở pH từ 2,0 đến 3,5 Trong dung dịch trung tính hay kiềm nó dễ bị thủy phân, cầu nối methylen bị phá vỡ Pyridoxin tương đối ổn định ở pH từ 2,0 đến 4,5 VB1 và VB6 đều dễ bị phân hủy bởi ánh sáng, oxy, các ion kim loại, đặc biệt với VB1 là khi có mặt nhóm sulfit.Scheiner và cộng sự đã quan sát thấy rằng tỷ lệ VB1 bị phân hủy tăng khi pH và nhiệt độ tăng (ở pH = 6,5 và nhiệt độ phòng, VB1 gần như bị phân hủy hoàn toàn sau 24 giờ) Nghiên cứu của Chen và cộng sự về độ ổn định của VB6 với tác nhân ánh sáng, cho thấy

VB6 bền vững với các loại ánh sáng, trừ ánh sáng mặt trời trực tiếp (VB6 bị giảm đến 86% sau khi tiếp xúc với ánh sáng mặt trời trong 8 giờ)

Vì vậy, trong bào chế, để đảm bảo độ ổn định của VB1, VB6 và CNB12 trong dung dịch, cần loại các ion kim loại, oxy, các muối sulfit khỏi dung môi và sử dụng hệ đệm Đặc biệt, cần phải có quy trình hiệu quả kiểm soát chất lượng các vitamin trong quá trình sản xuất nhằm đạt được hiệu lực và an toàn trong điều trị Trong quá trình bảo quản, cả 3 vitamin đều cần được tránh ánh sáng và tránh ẩm Trên thế giới, các nhà bào chế đã không ngừng tìm nhiều phương pháp để nâng cao độ ổn định của CNB12 trong chế phẩm như sử dụng nguyên iệu bán thành phẩm CNB12: CNB12 phun sấy, với các tá dược khác như manitol, dextran, tinh bột, lactose; vinang CNB12… hay các phương pháp phức tạp hơn như phun đông tụ để tạo micropellet cho từng loại vitamin, phương pháp đông khô

1.4 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU TĂNG ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA CYANOCOBAMIN TRONG CHẾ PHẨM CHỨA HỖN HỢP VITAMIN

B 1 , B 6 , B 12

1.4.1 Một số nghiên cứu của nước ngoài:

Việc sử dụng các acid hữu cơ tan trong nước có liên kết C-C chưa bão hòa

và các muối tan có thể ngăn chặn liên phản ứng (inter-reaction) giữa các vitamin

và các nguyên tố vi lượng, các acid hữu cơ này bao gồm acid maleic, acid fumaric, acid maleamic và acid acrylic Những acid hữu cơ bão hòa như acid citric, acid acetic, acid tautaric, acid succinic, acid lactic… không có tác dụng nâng cao ổn định này Acid cyanoacetic với 1 liên kết C-N không bão hòa cũng không có hiệu quả trong việc tăng ổn định của công thức chứa các vitamin và nguyên tố vi lượng [25]

Iris Heep và cộng sự đã nghiên cứu việc sử dụng butanol để ổn định vitamin B12 Butanol chỉ các đồng phân alcol no gồm một chuỗi alkyl với 4 nguyên tử carbon, chúng có thể là mạch thẳng hay mạch nhánh, cụ thể là n-butanol, sec-butanol, tert-butanol và isobutanol Nhưng trong số các đồng phân trên thì isobutanol và n-butanol hay được sử dụng hơn đặc biệt là n-butanol Butanol thường được sử dụng với nồng độ khoảng 0,1-10 %, nhưng thường dùng hơn là nồng độ từ 0,5-7 % đặc biệt là khoảng từ 1-5 % Nghiên cứu cho thấy công thức không chứa n-butanol nhạy cảm với ánh sáng hơn

Ví dụ 1: so sánh sự nhạy cảm của cyanocobalamin với ánh sáng giữa công thức

sử dụng n-butanol và không sử dụng n-butanol [24]:

Công thức B: 0,005% cyanocobalamin

3% n-Butanol

Điều chỉnh pH bằng natri hydroxyd

Nước pha tiêm vừa đủ 100%

Bảng 1.2 Ảnh hưởng của n-butanol đến độ nhạy cảm của cyanocobalamin với ánh sáng

Công thức Hàm lượng vitamin B12

 Chất chống oxy hóa có thể dùng như các sulfit (natri sulfit, natri metabisulfit), sulfit hữu cơ (acid ascorbic, acid citric, acid lactic) và dạng muối hay este của chúng

 Chất hiệp đồng chống oxy hóa như là muối natri của acid edetic [24]

1.4.2 Một số nghiên cứu trong nước

Phan Thị Thư đã nghiên cứu nâng cao độ ổn định của CNB12 bằng cách bào chế thuốc tiêm chứa 3 vitamin B1, B6, B12 dưới dạng thuốc tiêm đông khô (sử dụng tá dược độn là Manitol hoặc HP--CyD) giúp hạn chế sự thủy phân, oxy hóa dược chất Kết quả thu được là thuốc tiêm đông khô bào chế ổn định trong thời gian nghiên cứu (24 tháng ở nhiệt độ phòng thí nghiệm và 6 tháng ở điều kiện lão hóa cấp tốc) [12]

Một số nghiên cứu nhằm nâng cao độ ổn định của viên nén chứa 3 vitamin

B1, B6, B12:

Nguyễn Minh Thái đã nghiên cứu tạo hạt vitamin B12 dựa trên phương pháp dùng tá dược hấp phụ (hỗn hợp tinh bột-dextrin), hạt vitamin B12 sau đó

được trộn lẫn với các hạt vitamin B1, B6 để dập viên cho viên nén có độ ổn định trên 2 năm [11]

Nguyễn Thị Song Hà đã nghiên cứu bào chế vi nang vitamin B12 bằng phương pháp tách pha đông tụ Kết quả nghiên cứu độ ổn định cho thấy: viên nén bao hạt B12 và viên dập 2 lớp bào chế từ vi nang vitamin B12 và các hạt vitamin B1, B6 có độ ổn định từ 3-4 năm [8]

Đỗ Thị Hòa đã nghiên cứu bào chế viên nén chứa 3 vitamin B1, B6, B12 từ

vi nang vitamin B12 theo phương pháp phun đông tụ và phương pháp tách pha đông tụ Kết quả thu được: viên nén chứa 3 vitamin B1, B6, B12 điều chế từ vi nang vitamin B12 theo phương pháp phun đông tụ có độ ổn định cao hơn so với viên nén điều chế từ vi nang vitamin B12 theo phương pháp tách pha đông tụ [9] Nhìn chung CNB12 là một chất rất không bền trong dung dịch đặc biệt là trong chế phẩm có chứa nhiều vitamin Các sản phẩm thuốc tiêm chứa cả 3 vitamin B1, B6, B12 trong nước hiện nay chủ yếu là dạng đông khô nhằm nâng cao độ ổn định của CNB12, vì vậy nghiên cứu được thực hiện với mong muốn sẽ tìm ra một công thức tối ưu để CNB12 ổn định trong dung dịch thuốc tiêm chứa

3 vitamin trên

Phần 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1.1 Nguyên vật liệu

Bảng 2.3 Các nguyên liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm

STT Tên hóa chất Nguồn gốc Tiêu chuẩn

4 Natri dihydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết hóa học

6 Acid acetic băng Trung Quốc Tinh khiết hóa học

9 Alcol benzylic Trung Quốc Tinh khiết hóa học

11 Dinatri edetat Trung Quốc Tinh khiết hóa học

13 Acid hydrocloric Trung Quốc Tinh khiết hóa học

16 Dinatri hydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết hóa học

17 Ống thủy tinh rỗng 3ml màu

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu

 Máy đóng và hàn thuốc tiêm ROTA

 Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao THERMO-FINNIGAN với

 Hệ thống bơm cao áp 4 kênh P 4000

 Hệ thống tiêm mẫu tự động và ổn định nhiệt độ cột AS 3000

 Hệ điều hành Windows 2000 với phần mềm Chrom Quest version 4.0

 Máy đo pH INOLAB

 Máy lọc nén Sartorius SM 16249, thiết bị lọc nén dùng khí nitrogen (cột lọc + bình khí nitrogen)

 Máy lắc xoáy IKA VORTEX GENIUS 3

 Bể siêu âm Ultrasonics

 Cân phân tích Sartorius BP 121S

 Cân kỹ thuật Sartorius TE 412

 Tủ vi khí hậu CLIMACELL

 Tủ sấy KOTTERMANN

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Nội dung nghiên cứu

 Nghiên cứu phương pháp định lượng cyanocobalamin trong chế phẩm thuốc tiêm chứa 3 vitamin B1, B6, B12.

 Nghiên cứu ảnh hưởng của chất chống oxy hóa, chất bảo quản, hệ đệm,

pH và yếu tố kỹ thuật đến độ ổn định của cyanocobalamin

 Tối ưu hóa công thức thuốc tiêm để cyanocobalamin ổn định nhất trong chế phẩm chứa 3 vitamin B1, B6, B12

 Nghiên cứu độ ổn định của chế phẩm pha theo công thức tối ưu

2.2.2 Phương pháp bào chế thuốc tiêm 3B (B 1 , B 6 , B 12 )

Trên cơ sở tham khảo các tài liệu và qua thực nghiệm, chúng tôi xây dựng công thức cơ bản cho 1 ống thuốc tiêm như sau:

Dung dịch thuốc tiêm được pha chế như sau:

Quy trình pha chế 3 l dung dịch thuốc tiêm:

B1: Đun sôi 110% lượng nước cần dùng trong 10 phút sau đó để nguội đến nhiệt

độ phòng Kiểm tra pH = 5-7

B2: Lấy 2,5 l nước (B1) sục khí nitrogen trong 20 phút

B3: Tiếp tục vừa sục khí nitrogen, vừa lần lượt hòa tan vào nước ở B2: Dinatri edetat, các chất ổn định, hệ đệm, thiamin hydroclorid, pyridoxin hydroclorid, cyanocobalamin

B4: Kiểm tra pH, điều chỉnh bằng dung dịch acid hydrocloric 10% hoặc natri hydroxyd 10% đến pH thích hợp

Thêm nước cất vừa đủ 3 l Sục khí nitrogen thêm trong 10 phút

B5: Lọc nén qua màng lọc 0,2 µm với khí nén là nitrogen

B6: Đóng ống 3 ml, có sục khí nitrogen Không tiệt khuẩn bằng nhiệt

B7: Hoàn chỉnh thành phẩm

Sơ đồ các giai đoạn sản xuất:

Sơ đồ pha chế:

2.2.4 Đánh giá tiêu chuẩn chất lƣợng chế phẩm

Để định từng vitamin trong dung dịch thuốc tiêm có chứa B1, B6, B12 chúng tôi

sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

2.2.3.1 Phương pháp định lượng cyanocobalamin trong dung dịch thuốc tiêm chứa B 1, B 6 , B 12

Điều kiện sắc ký

Qua tham khảo tài liệu [13] kết hợp quá trình khảo sát tách cyanocobalamin bằng phương pháp HPLC với các thiết bị đã nêu ở mục 2.2 chúng tôi lựa chọn:

B 1 , B 6 , B 12 ,

Tá dược

 Cột sắc ký Alltech C8 với kích thước cột 250 mm 4,6 mm, kích thước hạt nhồi 5 µm

 Pha động: đệm citrophosphat: methanol (60: 40), trong đó đệm là dung dịch gồm 1,64 g acid citric monohydrat (tương ứng 1,5 g dạng khan) và 2,042 g dinatri hydrophosphat dodecahydrat (tương ứng 0,81 g dạng khan) trong 100

ml, pha động được lọc qua màng lọc 0,45 µm, siêu âm 15 phút

 Tốc độ dòng: 1 ml/phút

 Thể tích tiêm mẫu 20 µl

 Detector UV, bước sóng 351 nm

 Chuẩn bị mẫu thử, mẫu chuẩn, xác định hàm lượng cyanocobalamin

 Dung dịch pha loãng mẫu: đệm citrophosphat dùng làm pha động

 Mẫu thử:

Lấy chính xác 2 ml dung dịch thuốc tiêm cần định lượng, pha loãng với dung dịch pha loãng trong bình định mức 10 ml Lọc dung dịch này qua màng lọc 0,45 µm

 Xác định hàm lượng cyanocobalamin theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

 Hàm lượng (% khối lượng/thể tích) của cyanocobalamin trong chế phẩm được tính theo công thức:

Trong đó:

 SC, ST: diện tích pic cyanocobalamin trên sắc đồ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử tương ứng (mAU.s)

 mc: khối lượng cân chuẩn cyanocobalamin (g)

 5: hệ số pha loãng dung dịch chế phẩm

 500: hệ số pha loãng chuẩn từ khối lượng chuẩn để được dung dịch cyanocobalamin có nồng độ khoảng 333,2 µg/ml

 % Hàm lượng cyanocobalamin còn lại trong chế phẩm so với lượng pha ban đầu:

X: hàm lượng cyanocobalamin còn lại (%)

Cban đầu: hàm lượng cyanocobalamin khi mới pha chế

sở của Dung dịch thuốc tiêm Vinrovit H5000 của Công ty cổ phần dược phẩm Vĩnh Phúc

 Detector UV, bước sóng 280 nm

Pha động: ACN : MeOH : H2O (50 : 100 : 850), thêm 15 ml acid acetic băng, 2,5ml diethylamin và 1,1 g natri heptan sulfonat, lọc qua màng lọc 0,45 µm, lắc siêu âm 10 phút

 Chuẩn bị mẫu thử, mẫu chuẩn, xác định hàm lượng VB1 và VB6:

 Dung dịch pha loãng mẫu: dung dịch acetic 1%

 Mẫu chuẩn:

Cân chính xác khoảng 50 mg chất chuẩn thiamin hydroclorid, 50 mg chất chuẩn pyridoxin hydroclorid cho vào bình định mức 50ml, hòa tan vừa đủ bằng nước cất Lắc đều

Hút chính xác 5ml dung dịch này vào bình định mức 100ml, thêm nước vừa đủ, trộn đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm

 Xác định hàm lượng VB1 và VB6 theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

 Hàm lượng (% khối lượng/thể tích) của VB1, VB6 trong chế phẩm được tính theo công thức:

Trong đó:

 SC, ST: diện tích pic trên sắc đồ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử tương ứng (mAU.s)

 mc: khối lượng cân của mẫu chuẩn (g)

 a: hàm lượng % của chuẩn

 50: hệ số pha loãng chuẩn

 % Hàm lượng VB1, VB6 còn lại trong chế phẩm so với lượng pha ban đầu được tính theo công thức:

X: hàm lượng hoạt chất còn lại (%)

Cban đầu: hàm lượng hoạt chất khi mới pha chế

2.2.5.Phương pháp nghiên cứu độ ổn định khi xây dựng công thức

 Bao bì: ống thủy tinh trung tính không màu, ống thủy tinh tối màu

 Đánh giá ở những điều kiện sau:

 Thuốc tiêm được lão hóa cưỡng bức bằng cách luộc sôi liên tục trong 2 giờ

 Để trong điều kiện nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng

 Để trong tủ vi khí hậu ở nhiệt độ 40 ± 2 0

C

 Để phơi ngoài ánh sáng mặt trời, để dưới ánh sáng đèn tuýp

 Đánh giá độ ổn định của thuốc tiêm dựa trên các chỉ tiêu:

 Cảm quan: độ trong và màu sắc dung dịch

 pH dung dịch: xác định pH của dung dịch sau pha chế và dung dịch sau thời gian bảo quản bằng máy đo pH

 Hàm lượng dược chất: xác định hàm lượng dược chất trong dung dịch mới pha, hàm lượng dược chất còn lại (%) trong các mẫu sau thời gian bảo quản hay sau khi lão hóa

 % hàm lượng dược chất còn lại sau khi bảo quản 3 tuần ở điều kiện nhiệt

2.2.5 Điều kiện bảo quản chế phẩm

- Lão hóa cấp tốc: Bảo quản chế phẩm trong tủ vi khí hậu (nhiệt độ 400C ± 2) để tăng nhanh tốc độ phân hủy, từ đó rút ngắn được thời gian theo dõi, đánh giá

- Bảo quản ở điều kiện thường: Các mẫu được bảo quản trong nhiệt độ 300C ± 2

→Sau những khoảng thời gian nhất định, tiến hành kiểm tra một số chỉ tiêu chất lượng, đánh giá chất lượng chế phẩm

-Phương pháp phân tích:

Đánh giá độ ổn định của thuốc tiêm nghiên cứu dựa trên các tiêu chí sau:

- Độ trong và màu sắc dung dịch: phương pháp cảm quan

- pH dung dịch: xác định pH của dung dịch sau khi pha chế và dung dịch sau thời gian bảo quản bằng máy đo pH

- Hàm lượng dược chất: xác định hàm lượng từngvitamin trong dung dịch mới pha (coi hàm lượng ban đầu là 100%), hàm lượng từng vitamin còn lại (%) trong các mẫu nghiên cứu sau thời gian bảo quản bằng phương pháp

: hàm lượng khi mới pha chế

: hàm lượng còn lại sau thời gian bảo quản

2.2.6 Phương pháp tối ưu hóa công thức

- Sử dụng phương pháp thiết kế mặt hợp tử tại tâm với sự trợ giúp của phần mềm MODDE 8.0 để đánh giá ảnh hưởng của loại đệm, nồng độ đệm, pH, loại chất chống oxy hóa, nồng độ chất chống oxy hóa, chất bảo quản tới độ ổn định của thuốc tiêm 3B