Xây dựng phương pháp định lượng vitamin d2 trong sữa bằng HPLC

BOY TE TRÜÔNG DAI HOC DUOC HÀ NÔI BÙIVIÊT PHlTONG XÂY DUNG PHlTONG PHÂP DINH LÜÛNG • • • VITAMIN D2 TRONG SÜA BÂNG HPLC KHÔ LU A • n TƠT NGHIÊP • DUOC • s i DAI • HOC • KHOÂ 2002-2007 / :A r] i- * ■l ;■ ' ' v/ *7 \ Ngudi hucmg dân: [7 - \ Tin', V h V CN DỒN THIHÜƠNG Th.S TRAN NGUN HÀ Noi thuc hiêri: PHƠNG HÔ DƠC THl/C PHAM TRUNG TÂM KIÉM NGHIÊM- VIÊN DINH DIJON G Thài gian thuc hiên: 01/2007-05/2007 HA NOI THANG NAM 2007 LƠI CÂM ON Triïơc hêt tơi xin bày tơ long biét cm sâu sàc nhât Th.S Tràn Nguyên Hà, Th.S Tràn Quang Th, CN, Dồn Thi Hiïơmg nhüng nguôi dâ truc tiép huorng dân, dâ dành nhiêu gian tâm suc, kinh phi giüp do' suot q trinh nghiên cüru hồn thành khô ln tôt nghiêp Tôi cüng xin trân câm cfn câc thày cô giâo, cân bô kÿ thuât viên bơ mơn Hô Phân Tỵch - Trng dai hoc Duac Hà Nơi dâ nhiêt tỵnh giüp dơ tao moi dieu kiên thn loi cho tơi hồn thành khô ln Tôi xin bày tô long biét on toi câc cân bơ cüa phơng hô dơc thuc phâm, trung tâm kiëm nghiêm- viên Dinh Dng dâ giüp âd vê hô chat cho quâ trinh thuc hiên dé tài Tôi xin chân thành câm on thu viên trucfng Dai hoc Duoc Hà Nôi dâ cung câfp nhüng tài lieu càn thiét cho quâ trinh thuc hiên dè tài Ci tơi xin câm on gia dỵnh, ban bè nhüng nguôi thân dâ dông viên hét long giüp dơ tơi hồn thành khô ln Hà Nơi, thâng nâm 2007 Bùi Viêt Phuong BÂNG CHÜ VIÊT TÂT ACN : Acetonitril HPLC : Sac kÿ long hiêu nâng MeOH : Methanol NXB : Nhà xuât bân PA : Tinh khiét phân tfch PDA : Photo Diod Array PL : Phu lue STT : So thu”tu TB : Trung binh THF : Tetrahydrofuran UV : Tir ngoai MUC LUC DAT VAN D E .1 PHAN 1: TÔNG QUAN 1.1 VitaminD 1.1.1 Công thûc câ'u tao 1.1.2 Ngn gơc 1.1.3 Trnh chât 1.1.4 Tac dung duoc lÿ ca ché tac dung 1.1.5 Chỵ dinh 1.1.6 Câc phirang phâp dinh lirỗrng vitamin D .4 1.1.7 Mot s6 nghiên curu vê vitamin D .5 1.2 Kÿ thuât sâc kÿ long hiêu nàng cao 1.2.1 Khâi niêm cobân 1.2.2 Cõc dai lirỗmg dc tnmg 1.2.3 Hê thô'ng HPLC .11 1.2.4 Phatỵnh 11 1.2.5 Pha dông 12 1.2.6 Phirang phõp dinh liùỗfng v tmh két quâ HPLC 14 1.3 Mot so thông so thong kê de xur lÿ dânh gia két quâ 15 PHAN 2: NGUYÊN LIEU, THIÊT BI, PHÜONG PHÂP VÀ KET QUÂ NGHIÊN CtTU .16 2.1 Nguyên lieu thiét b i 16 2.1.1 Dụ'i tuỗmg nghiờn cỷu 16 2.1.2 Thiét bi dung e u .16 2.1.3 Hô chât, dung mơi th'c thû 16 2.2 Phuong phâp nghiên ciỵu 17 2.2.1 Chuan bi dung dich gôc dung dich làm viêc cüa viatamin D .17 2.2.2 Du dinh mot so diêu kiên chay sâc k ÿ 17 2.2.3 Thdm dinh phuong phâp 18 2.3 Két quâ nghiên crïu 20 2.3.1 Nguyên lÿ xü lÿ mâu .20 2.3.2 Xâc dinh diêu kiên chay sâc kÿ pha dâo 23 2.3.3 Khõo sõt su phự hỗfp cỹa hờ thong 25 2.3.4 Xâc dinh khoâng tuyén trnh 26 2.3.5 Xâc dinh giôi han phât hiên gioi han dinh luỗmg cỷa vitamin D2 29 2.3.6 Dânh giâ dô chrnh xâc cüa phuong phâp 30 2.3.7 Xâc dinh tmh dung cüa phuong phâp 31 2.4.Bàn luân .34 PHAN 3: KÉT LUÂN VÀ DE XUAT 35 3.1 Ket luân 35 3.2 De xuât 35 » DAT VAN DE Dë tôn tai, phât triën, câi thiên noi giông, co thë chüng ta cân duoc cung cap dày dû câc chat dinh duông nguôn cung câp câc chat chfnh thuc phâm hàng ngày Câc chat dinh duông câc nhôm cung câp nàng luong cho co thë nhu glucid, lipid, protein, nhôm cung câp m'i không, nhơm cung câp câc loai vitamin nc Trong dô vitamin nhôm cô vai tro eue kÿ quan sure khoè cua môi nguèi Vitamin không thë thiéu duoc dôi vôi su ton tai phât triën cüa môi co thë sông Vitamin cô vai trô tao câc coenzim càn thiét câc phân irng chuyën hoâ khâc Tât câ câc quâ trinh sông gân liên vôi su trao doi chat co thë dêu cô su tham gia truc tiép cüa vitamin Nguôn cung câp vitamin chû yéu tir thüc àn vây co thë cô thë thiéu hay thùa vitamin Néu co thë bi thiéu vitamin dô sê sinh mot s6 cân bênh nhât dinh nhu thiéu vitamin A dë dân tơi bênh mù lồ, thiéu vitamin BI dê bi bênh tê phù, thiéu vitamin PP mâc bênh pellagra, thiéu vitamin D bi bênh rickets , nhiên mot sô loai vitamin mà du thùa cüng cô thë gây tâc hai dôi vôi co thë nhu vitamin A, D, K Mot nhüng loai vitamin khâ quan giüp viêc hïnh thành, phât triën câc té chirc xuong cüa co thë không thë không dê câp dén dô vitaminD Rat nhiêu thuc phâm chüa vitamin D nhu sûa, bôt dinh duông, câc sân phâm câ, trirng Do dô, xâc dinh hàm luong vitamin D thuc phâm giüp dânh giâ dung giâ tri dinh duông cüa thuc phâm khuyén câo cho câc bà me nuôi nhô, hay nguôi lôn tuéi sü dung bo sung loai vitamin D Do dô tién hành làm dê tài: “ Xây dung phuong phâp dinh luong vitamin D2 sûa bàng HPLC” Dê tài nham mue tiêu: Xây dung quy trỵnh kÿ tht dinh luong vitamin D2 sûa dë ûng dung kiëm soât chat luong sân phâm chàm soc suc khoê công dông Chüng hi vong ràng két quâ nghiên ciïu së cô giâ tri thuc tiên cao, gôp phàn vào viêc thuc dây ûng dung sàc kÿ long hiêu nâng cao dë dinh luong câc chât thuc phâm PHAN TÔNG QUAN 1.1 Vitamin D.[2],[4],[6] 1.1.1 Công thurc câu tao [6] C27H440 ( M = 384,6) Tên khoa hoc: ergocalciferol 1.1.2 Nguôn goc Vitamin D co nhiêu câ bien, thit, trûng, süa mot so thuc phâm bô sung Môt so nghiên cûu dua hàm luong vitamin D câ thu 15|a,g/100g, gan bô l|ug/100g, trutng gà 2|ig/100g, nam rom 2|ig/100g Trong co thë, vitamin D duoc tông hop câc té bào ducfi da nhô ânh sâng tu ngoai Vai tro lôn nhàt cüa vitaminD tri nông dô calci mâu Do nhiêu bâo cao dua cân bo sung khoâng 400 don vi vitamin D môi ngày uông calci diêu tri bêng lông xuong Vitamin D co ngn gơc tơng hop hô hoc sinh hoc 1.1.3 Tmh chat [4] Tinh thë hỵnh kim, khơng màu, khơng mùi, khơng tan nuôc, dë tan câc dung môi htru co nhu ethanol, ether, cloroform, câc chat béo Vitamin D không bên vôi nhiêt dô, không khi, ânh sâng 1.1.4 Tac dung dirỗrc l v co chộ tac dung [2],[6] Vitamin D tham gia vào quâ trinh tao xuong: làm tâng hâp thu calci phosphat ruôt, tõng hõp thu calci ụng luỗm gõn, tham gia vào q trinh calci hô sun tâng trng Vi vây vitamin D rat cân cho su phât triën binh thucmg cüa trê em Diêu hồ nơng dơ calci mâu: Néu câc quâ trinh không cung câp du calci, làm nông dô calci mâu giâm thi vitamin D ( két hop vôi hormon tuyén cân giâp) së phât huy calci tuf xuong Ngoài vitamin D tham gia biêt hô té bào biëu mơ Gân dây câc nhà khoa hoc dang nghiên cûu tâc dung ûc ché tâng sinh té bào ung thu Vi thé thiéu vitamin D, ruôt không hâp thu dü calci phospho làm giâm calci huyét Khi dô calci bi huy dông tù xuong gây hâu quâ trè em châm lôn, coi xuong, châm biét di, châm km thôp, nguôi lơn së bi lông xuong, xop xuong 1.1.5 Chï dinh [2],[6] -Phong diêu tri coi xuong thiéu vitamin D -Phong diêu tri loâng xuong, dê gây xuong -Chông co giât suy tuyén cân giâp -Ha calci hut -Mot sơ bênh ngồi da nhu chiỵng xo ciỵng bi 1.1.6 Câc phuong phâp dinh liïomg vitamin D [4] - Phuong phâp hôa hoc + Nguyên tâc: Tién hành làm mâu chuân mâu thür Cho vitamin D tao màu vàng vôi thuôc thü antimon clorid roi dem quang buée sông 500 550 nm + Nhân xét: Quy trinh thuc hiên rat phiïc tap, bao gơm câc giai doan xà phong hô diêu kiên trânh oxy hoâ, chiét tâch tinh ché qua câc côt sâc kÿ bân diêu ché (su dung câc chât nhôi dât tây màu dât silic dùng cho sâc kÿ), sau tao màu quang Do tién hành qua nhiêu giai doan nên dô chmh xâc giâm - Phuong phâp sinh hoc + Nguyên tâc: Hoat lue vitamin D duoc dânh giâ thông qua xâc dinh mue dơ vơi hô xuong thơ hôc cht + Nhân xét: Phuong phâp tién hành khâ phiỵc tap Két quâphu thuôc nhiêu vào câc câ thë doi hôi nguôi thur nghiêm phâi duocdào tao kl luông - Phuong phâp sâc kÿ long hiêu nâng cao + Nguyên tâc: Dua su phân bô khâc cüa vitamin D giüa pha dơng pha tỵnh so vơi câc thành phân hoat chât khâc + Nhân xét: dây phuong phâp hiên dai, ngày duoc âp dung phô bién Tuy nhiên cüng chỵ thë âp dung truc tiép vơi câc ché phâm don hôc da thành phân dô vitamin D cô hàm luong cao (> 500UI/1 don vi phân liêu) côn vôi câc ché phâm cô hàm luong D thâp thi dôi hôi phâi cô bien phâp xü lÿ mâu phù hop dë làm sach làm giàu mâu 1.1.7 Mot so nghiên cuti ve vitamin D [8],[10],[11],[12],[15] Cùng vôi su phât triën cüa nên khoa hoc kÿ thuât tiên tién, su bùng no cüa ngành công nghê thông tin kÿ nên kinh té tri thtrc, hàng loat câc thông mây phân tich hoâ hoc dâ duoc câi tién nâng câp, nhàm xâc dinh duoc nhiêu loai chât hô hoc dơng thefi nâng cao dô nhay cüa phép phân tfch cüng nhu dô làp lai cüa két quâ Câc nhà khoa hoc phân tich hô hoc thé giơi nơi chung, phân tich thuc phâm nôi riêng dâ cô nhiêu công trinh nghiên 2.3.2 Xâc dinh dieu kiên chay sâc kÿ pha dâo * Côt sâc kÿ: Dua vào tmh chât hai^chât càn phân tich diêu kiên hiên cô chüng dùng sâc kÿ phân bô pha dâo Két quâ khâo sât câc côt sac kÿ 2.2.2, côt inertsil ODS3 cho pic cân xüng nhât sac dô (hinh 3,4) « _r/ ‘DA-265nrp S g^aminDi r _ JsJame Sâc r\f mAU 40 f 15 30 Minutes Hinh Sac chuân D2 0,041ppm chay côt RP18 5(j.m, 4,6 x 150mm pha dông ACN: MeOH= 50:50 D Tiép tue khâo sât vôi câc loai süa khâc dë cô thë dua mot quy trinh chung cho quâ trinh dinh luong vitamin D2 tât câ câc câc loai süa 35 TÀILIÊU THAM KHÂO TIÊNG VIÊT Tràn Tu An, Thâi Nguyên Hùng Thu(2006), Hoâ Phân tich II, Trucfng Dai hoc Duoc Hà Nụi, tr 135-137, 173- 201 Bụ y tộ(2002), Duỗfc thu quô'c gia Viêt Nam, NXB Y hoc, tr 985- 989 Tràn Dire Hâu, Ngun Dỵnh Hiën, Thâi Duy Thợn( 2004), Hoõ Duỗfc, Truụng Dai hoc Duỗfc H Nụi, tâp I, Tr 308-313 Dơ Lan Phucfng( 2005): Khô luân tôt nghiêp dai hoc: “ Xây dung phuang phâp dinh luỗfng amoxicillin v kali clavulanat huyờ't tuang Pham Vân S6, Bùi Thi Nhu Thuân( 1978), Kiêm nghiêm luong thuc thuc phâm, Nhà xuât bân Khoa Hoc Kÿ Thuât Hà Nôi Mai Tât Tô, Vü Thi Trõm, Do Thi Vui( 2004), Duỗfc ly hoc, Trucfng dai hoc Duỗfc H Nụi, tõp 2, tr 292-295 TIấNG ANH AOAC, (1997) Sixteenth édition,3rd révision Bellester, I.; Cortes, E.; Moya, M.; Campello M.J.,( 1987), “ Improved Methodfor Quantifuin Vitamin D in Proprietary Infants’ Formulas and in Breast Milk”; Clin Chem 33/6 p 796-799 Brubacher, G.; Muller-Mulot W.; (1985), Methods for the détermination of vitamins infood, Elsevier applied science publishers London and New york 10 Hill Jerry L.; Travis, Benjamin D.; Mahmoud, Mohamed I.; Brooks, James R.; Schenz, Timothy W.; Bewille, Normanella T.;(1995), “Method for improving Vitamin D stability in liquid nutritional products” 11 Jette jakobsen, Ina Clausen, Torben Leth, lars Ovesen, (2004) Journal offood composition and analysis 17, p.777-787 12 Jette jakobsen, Ina Clausen, Torben Leth, lars Ovesen, (2003) Journal offood composition and analysis 16, p 575-585 13 Léo M.L.Nollet nàm (1992), Food analysis by HPLC, p276-329 14 Pirjo H.Mattila, Vieno I Piironen (1996) New analytical aspects of vitamin D infood Food chemistry, Elesvier Science Ltd., p 95-99 15 Food chemical Vol.57, No.l 95-99, 1996 in Great Britain ... chuân vôi sô hâp thu phân tü s = 18843 vôi vitamin D2 C = Abs xlOOOO/s (|ag/mL) / Trong dô: C nông dô cüa dung dich vitamin D2 Abs dô hâp thu cüa vitamin D2 buôc sông 265 nm - Pha câc dung dich... thür - VitaminD2 chõt chuõn hm ltfỗmg 99,56% ( Supelco) - n- hexan hoâc ete dâu hoâ PA (Merck) - Ete etylic PA (Merck) - Methanol HPLC (Merck) - THF HPLC - Ethanol HPLC (Merck) 16 - ACN (HPLC) ... hành làm dê tài: “ Xây dung phuong phâp dinh luong vitamin D2 sûa bàng HPLC Dê tài nham mue tiêu: Xây dung quy trỵnh kÿ tht dinh luong vitamin D2 sûa dë ûng dung kiëm soât chat luong sân phâm