Xây dựng phương pháp định lượng neomycin trong một số chế phẩm bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector huỳnh quang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KIM THANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NEOMYCIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR HUỲNH QUANG LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KIM THANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NEOMYCIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR HUỲNH QUANG LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC-ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 607315 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh TS Phạm Thị Thanh Hà HÀ NỘI - 2012 LỜI CÁM ƠN Với lòng biết ơn chân thành sâu sắc em xin gửi lời cám ơn đến PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh TS Phạm Thị Thanh Hà Các ln tận tình giúp đỡ, hưỡng dẫn, động viên em suốt trình thực đề tài để em hồn thành luận văn Em xin chân thành cám ơn thầy cô, cán kỹ thuật viên Phòng thí nghiệm trung tâm – trường Đại Học Dược Hà Nội hỗ trợ em nhiều suốt trình thực nghiệm vừa qua Xin gửi lời cám ơn Dược Sỹ Nguyễn Thị Thúy khóa 62 trường Đại Học Dược Hà Nội tồn thể đồng nghiệp ln giúp đỡ tơi q trình học tập cơng tác, ln động viên chia sẻ kinh nghiệm quý suốt thời gian qua Cuối xin gửi lời cám ơn đến gia đình, bạn bè, người thân yêu bên cạnh giúp đỡ động viên giúp hoàn thành luận văn Hà Nội, tháng 11/2012 Nguyễn Thị Kim Thanh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1.TỔNG QUAN VỀ NEOMYCIN 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Cấu trúc hóa học, tính chất Neomycin sulfat 1.1.3 Các nghiên cứu định lượng neomycin 1.2.VÀI NÉT VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 1.2.1 Khái niệm phân loại 1.2.2 Các thông số đặc trưng 1.2.3 Các phương pháp định lượng 10 1.3 CƠ SỞ LÝ THUYẾT VỀ HUỲNH QUANG 11 1.3.1 Khái niệm tượng phát quang 12 1.3.2 Sự tạo thành quang phổ huỳnh quang 12 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả huỳnh quang 13 1.3.4 Đo cường độ huỳnh quang phổ huỳnh quang 15 1.3.5 Ứng dụng phép đo huỳnh quang 16 1.3.6 Phương pháp HPLC với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất trước cột .16 1.3.7 Phản ứng tạo dẫn xuất huỳnh quang Neomycin sulphat 19 Chương ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.2 THIẾT BỊ, HÓA CHẤT 21 2.2.1 Dung môi, hóa chất, chất chuẩn 21 2.2.2 Thiết bị 21 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 22 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu 22 3.2.3 Xử lý số liệu 25 Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Xây dựng phương pháp xử lý mẫu 26 3.1.1 Khảo sát lựa chọn nồng độ dung dịch Neomycin Sulfat 26 3.1.2 Khảo sát lựa chọn nồng độ dung dịch thuốc thử FMOC- Cl 27 3.1.3 Khảo sát lựa chọn nồng độ dung dịch glycin 27 3.1.4 Khảo sát lựa chọn thời gian phản ứng thích hợp 27 3.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký 28 3.2.1 Cột sắc ký pha tĩnh 28 3.2.2 Khảo sát chọn pha động 28 3.2.3 Chọn cặp bước sóng kích thích phát xạ 31 3.2.4 Khảo sát tốc độ dòng pha động 31 3.3 Từ kết khảo sát thu trên, xác định điều kiện phân tích Neomycin Sulfat sau 31 3.3.1 Chuẩn bị dung dịch 31 3.3.2 Xử lý mẫu 32 3.3.3 Điều kiện sắc ký 33 3.3 Mẫu placebo 33 3.4 Thẩm định phương pháp 33 3.4.1 Tính chọn lọc 33 3.4.2.Khoảng nồng độ tuyến tính 35 3.4.3 Độ xác 37 3.4.4 Khảo sát độ 38 3.4.5 Tính thích hợp hệ thống 39 3.5 Nhận xét chung 41 3.6 Ứng dụng 41 3.6.1 Chế phẩm dạng dung dịch 42 3.6.2 Chế phẩm dạng nén 42 3.7 Bàn luận 46 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT BDS : Base deactivated silica HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao High performance liquid chromatography MeCN: Acetonitril RSD : Độ lệch chuẩn tương đối-Relative standard deviation TB: Trung bình UV-VIS : Tử ngoại- khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách chế phẩm nghiên cứu 17 Bảng 3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính 32 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ xác Neo - Dexa 34 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ phương pháp 36 Bảng 3.5 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống 36 Bảng 3.6 Kết định lượng Neomycin sulfat chế phẩm nghiên cứu 40 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc neomycin Hình 1.2 Sơ đồ hệ thống HPLC 10 Hình 1.3 Sơ đồ biểu diễn xuất phát quang 13 Hình 3.1 Sắc ký đồ Neomycin sulfat với pha động MeCN : H2 O… 3(92,5 : 7,5) 29 Hình 3.2 Sắc ký đồ Neomycin sulfat với pha động MeCN : H2 O ( 90: 10) 30 Hình 3.3 Sắc ký đồ Neomycin sulfat với pha động MeCN : H2 O (80: 20) 30 Hình 3.5 Quy trình xử lý mẫu 33 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu chuẩn (thẩm định tính chọn lọc) 34 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu placebo (thẩm định tính chọn lọc) 34 nồng độ Neomycin Sulfat 36 Hình 3.9 Sắc ký đồ dung dịch khảo sát khoảng tuyến tính 37 Hình 3.10 Sắc ký đồ lần tiêm liên tiếp mẫu chuẩn………………………… 37 Hình 3.11 Sắc ký đồ định lượng thuốc xịt mũi Alaka…………………….…42 Hình 3.12 Sắc ký đồ định lượng viên nén Neo – Gynoternan………….… 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện lĩnh vực dược phẩm, việc ứng dụng phương pháp phân tích đại kiểm nghiệm thuốc ngày trở lên phổ biến Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp sử dụng nhiều lĩnh vực phân tích, đặc biệt kiểm nghiệm thuốc Sắc ký lỏng hiệu cao với nhiều loại detector khác cho phép phân tích nhiều loại chất có cấu trúc tính chất đa dạng Mặt khác, phương pháp cho phép vừa tách, vừa định tính, vừa định lượng đồng thời chất phân tích phép thử với độ chọn lọc xác Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang phương pháp có độ nhạy độ chọn lọc cao Trong kiểm nghiệm thuốc, phương pháp huỳnh quang đưa vào nhiều dược điển: Mỹ, Anh, Châu Âu, Nhật Bản,…Trong cơng thức neomycin có nhóm amin bậc nên dễ tạo dẫn xuất tạo thành sản phẩm có khả hấp thụ quang phát huỳnh quang bước sóng dài Neomycin kháng sinh thuộc nhóm aminosid, có phổ rộng vi khuẩn Gram (-) Gram (+) Cũng kháng sinh khác nhóm, neomycin khơng hấp thụ quang vùng tử ngoại – khả kiến Vì vậy, phương pháp định lượng phổ biến phương pháp vi sinh vật Phương pháp nhiều thời gian làm chậm q trình sản xuất (theo GMP phải kiểm tra chất lượng trình sản xuất) Chính vậy, xuất phát từ u cầu thực tế cần xây dựng phương pháp định lượng neomycin nhanh, có độ xác cao đáp ứng kịp thời nhu cầu đánh giá chất lượng thuốc phục vụ sản xuất, tiến hành thực đề tài:“Xây dựng phương pháp định lượng Neomycin sulfat sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang” với mục tiêu sau: 3253,18 101,08% 3479,67 101,11% 3367,76 104,64% 3424,26 99,50% 3386,43 105,22% 3515,46 102,15% TB= 103,83% 102,11% RSD% 1,91% 1,87% TB ngày 102,97% RSD% ngày 1,99% Nhận xét: Kết cho thấy giá trị RSD ngày nhỏ 2%, RSD hai ngày nhỏ 3% Chứng tỏ phương pháp có độ xác cao 3.4.4 Khảo sát độ Độ phương pháp xác định phương pháp thêm chuẩn Thêm lượng xác chất chuẩn vào thể tích mẫu thử biết trước hàm lượng, lượng chất thêm vào tương ứng với khoảng 10%, 20% lượng hoạt chất có mẫu thử Xác định lượng chất chuẩn thêm vào với chương trình sắc ký Ở nồng độ thêm vào tiến hành với lần thử nghiệm riêng biệt Cách chuẩn bị dung dịch sau: - Dung dịch chuẩn Neomycin Sulfat có nồng độ xác khoảng 500 µg/mL - Lấy bình định mức 50 mL, hút xác 1,0 mL chế phẩm vào bình, thêm mL, mL, mL dung dịch chuẩn chuẩn bị vào bình, làm đầy dung dịch đệm borat, lắc kỹ Sau hút xác mL dung dịch vào bình định mức 20 mL, làm đầy làm dung dịch đệm borat, lắc kỹ ta cách dung dịch thử thêm 0%, 10%, 20% lượng hoạt chất Neomycin sulfat Sau xử lý mẫu hình 3.5 38 Tiến hành tiêm sắc ký mẫu song song với mẫu chuẩn Dựa vào diện tích pic đáp ứng mẫu nồng độ biết dung dịch chuẩn, tính lượng chất chuẩn thêm vào tìm thấy thực nghiệm so với lý thuyết (% tìm thấy) Kết trình bày Bảng 3.4: Bảng 3.4 Kết khảo sát độ phương pháp Lượng thêm vào 10% TT Lượng thêm Lượng tìm Lượng thêm vào 20% % tìm Lượng thêm Lượng tìm % tìm vào (µg) lại (µg) lại vào (µg) lại (µg) lại 0,51 0,513 100,59 1,02 1,019 99,91 0,51 0,501 98,24 1,02 1,050 102,94 0,51 0,513 100,59 1,02 1,033 101,27 0,51 0,509 99,80 1,02 1,048 102,75 0,51 0,501 98,24 1,02 1,029 100,88 % tìm lại 99,49% 101,55% TB Nhận xét: Kết cho thấy lượng tìm thấy mức cao Kết thu chứng tỏ phương pháp có độ cao, đảm bảo tốt cho phép phân tích xác định hàm lượng Neomycin Sulfat chế phẩm thuốc 3.4.5 Tính thích hợp hệ thống 39 Chuẩn bị dung dịch Neomycin Sulfat chuẩn nồng độ µg/mL mục 3.3.1, tiến hành xử lý mẫu hình 3.5 Tiến hành sắc ký lần liên điều kiện lựa chọn mục 3.3.3 Các số liệu diện tích pic thời gian lưu tương ứng dẫn chất Neomycin sulfat– FMOC Cl trình bày bảng 3.5 Bảng 3.5 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống STT Píc I tR( phút) Píc II S(LU.s) tR( phút) S(LU.s) 11,249 3167,4 4,362 110,5 11,249 3115,7 4,371 109 11,243 3098,3 4,364 108,3 11,243 3077,7 4,359 107,7 11,242 3052,6 4,377 107,6 11,224 3050,7 4.399 107,5 TB 11,241 3093,7 4,372 108,38 RSD% 0,07% 1,3% 0,337% 1,08% 40 Hình 3.10 Sắc ký đồ lần tiêm liên tiếp mẫu chuẩn Nhận xét: Kết bảng 3.5 cho thấy RSD% thời gian lưu diện tích pic nhỏ 2%, chứng tỏ hệ thống có tính thích hợp tốt, bảo đảm cho việc định tính định lượng 3.5 Nhận xét chung Phương pháp xây dựng có tính chọn lọc tốt, tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ hoạt chất, độ xác độ cao, thích hợp để định lượng Neomycin Sulfat chế phẩm thuốc, đặc biệt kiểm nghiệm trình sản xuất (in - process) 3.6 Ứng dụng 41 Áp dụng quy trình để định lượng hàm lượng Neomycin sulfat số chế phẩm thuốc nhỏ mắt Tiến hành chuẩn bị mẫu sau: - Mẫu chuẩn: tiến hành mục 3.3.1 - Mẫu thử : chuẩn bị mẫu thử sau: 3.6.1 Chế phẩm dạng dung dịch Lấy xác thể tích chế phẩm thử (tương đương với 5,00 mg neomycin) vào bình định mức 50 mL, thêm dung dịch đệm borat vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác 1mL dung dịch trên, cho vào bình định mức 20mL, thêm dung dịch đệm borat đến vạch, lắc Sau tiến hành xử lý mẫu hình 3.5 3.6.2 Chế phẩm dạng nén Cân 20 viên, tính khối lượng viên trung bình Sau nghiền thành bột mịn Cân lượng bột viên tương đương với 5,00 mg Neomycin sulfat Chuyển bột cân vào bình định mức 50 mL, thêm khoảng 35ml dung dịch đệm Borat, siêu âm khoảng 15 phút.Làm đầy dung dịch đệm borat, lắc Lọc giấy lọc, bỏ 20ml dung dịch đầu Lấy xác mL dung dịch cho vào bình định mức 20 mL, làm đầy dung dịch đệm borrat, lắc Sau tiến hành xử lý mẫu hình 3.5 Tiến hành sắc ký mẫu chuẩn mẫu thử song song với điều kiện chọn mục 3.2 Trên sắc ký đồ thu được, xác định có mặt Neomycin sulfat mẫu thử cách so sánh thời gian lưu pic mẫu thử với thời gian lưu Neomycin sulfat mẫu chuẩn Dựa vào diện tích pic mẫu thử mẫu chuẩn, từ xác định hàm lượng Neomycin sulfat chế phẩm theo công thức sau: Với chế phẩm dạng dung dịch : 42 Hàm lượng (%) Neomycin sulfat so với lượng ghi nhãn: X (%) = S T xmc xVcpx648,7 x100% S C xHLnhãnxVt Trong đó: ST, SC :Tổng diện tích píc Neomycin sulfat mẫu thử chuẩn (LU.s) mC: Khối lượng Neomycin sulfat chuẩn (mg) Vcp: thể tích lọ dung dịch chế phẩm thử (ml) Vt: thể tích thử (ml) HL nhãn: hàm lượng Neomycin Sulfat nhãn thử (IU) Với chế phẩm dạng viên nén : X (%) = ST xmC x648,7xmviên x100% mTxSC xHLnhãn Trong đó: ST, SC :Tổng diện tích píc Neomycin Sulfat dung dịch mẫu thử chuẩn (LU.s) mC: Khối lượng chuẩn (mg) mT: Khối lượng Neomycin Sulfat mẫu thử (mg) mviên : khối lượng trung bình viên (mg) HLnhãn: hàm lượng Neomycin Sulfat nhãn (IU) Hàm lượng Neomycin sulfat tìm thấy chế phẩm ghi lại bảng 3.6 43 Bảng 3.6 Kết định lượng Neomycin sulfat chế phẩm nghiên cứu mviên (mg) mT (mg) Mẫu Dung dịch xịt mũi Alaka Hàm Chuẩn VCP (ml) 15 VT (ml) mc: 5,26 mg Tổng diện lượng tìm thấy tích píc (LU.s) (% so với nhãn) 3966,26 97,04% Giới hạn cho phép 90-120% SC : 3984,79 LU.s Dung dịch nhỏ mắt Neo – Dexa Dung dịch nhỏ mắt Nemydexan Dung dịch xịt mũi Dophazolin 15 Viên nén đặt Neo – Tergynan 1190,51 Viên nén đặt Neo-gynonan Viên nén đặt Kegynan 3307,58 105,77% 90 – 110% 4085,96 118,19% 90 – 120% 3881,5 109.09% 90-120% 58,26 mc: 5,23 mg SC : 3325,38 99,26% 90 – 120% 1195,41 55,23 3449,07 LU.s 3336,34 105,52% 90 – 120% 1185,65 54,45 3225,0 102,61% 90 – 120% 44 Nhận xét: Với quy trình sắc ký xây dựng, chúng tơi xác định hàm lượng Neomycin sulfat chế phẩm thuốc cách dễ dàng nhanh chóng Hàm lượng Neomycin sulfat chế phẩm đạt quy định theo tiêu chuẩn Hình 3.11 Sắc ký đồ định lượng thuốc xịt mũi Alaka 45 Hình 3.12 Sắc ký đồ định lượng viên nén Neo – Gynoternan 3.7 Bàn luận Trên thị trường có nhiều dạng bào chế chứa Neomycin sulfat như: Viên nén, dung dịch hay hỗn dịch, thuốc mỡ hay kem Hiện nay, có nhiều phương pháp định lượng Neomycin sulfat như: phương pháp vi sinh vật [1], phương pháp HPLC với detector tán xạ bay [16] hay phương pháp HPLC với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất sau cột [10] Tuy nhiên, phương pháp vi sinh vật nhiều thời gian, gây chậm q trình sản xuất; phương pháp HPLC với detector tán xạ bay chưa phổ biến, phương pháp HPLC với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất sau cột yêu cầu máy móc thiết bị phức tạp, đắt tiền, số phòng thí nghiệm khơng đáp ứng Neomycin có cấu trúc khác gentamicin, qua tham khảo tài liệu tiến hành thực nghiệm,chúng tiến hành xây dựng phương pháp định lượng Neomycin sulfat phương pháp HPLC với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất trước cột Phương pháp dễ thực hiện, cho kết nhanh chóng điều kiện máy móc đơn giản so với phương pháp HPLC với detector huỳnh quang tạo dẫn xuất sau cột Phương pháp HPLC định lượng Neomycin sulfat sử dụng nghiên cứu thẩm định theo tiêu về: Tính chọn lọc, đường chuẩn khoảng nồng độ tuyến tính, độ độ xác Kết cho thấy: Phương pháp có tính chọn lọc cao, có mối tương quan tương tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ khoảng khảo sát với r =0,9995, phương pháp có độ cao ( Phần trăm tìm lại nằm khoảng 98% -103%), độ xác đảm bảo (RSD < 2%) , hệ thống có tính thích hợp tốt ( RSD thời gian lưu 46 diện tích pic nhỏ 2%), hồn tồn thích hợp ứng dụng định lượng Neomycin Sulfat Đặc biệt kiểm nghiệm bán thành phẩm giúp cho q trình sản xuất liên tục, khơng phải chờ đợi lâu Thuốc thử FMOC Cl dễ sử dụng, phổ biến, tạo dẫn chất dễ dàng Hiện việc định lượng Neomycin Sulfat sử dụng phương pháp vi sinh vật [1] , nhiên phương pháp nhiều thời gian (7 ngày) Theo tác giả Trần Thúy Hạnh [10] Nghiên cứu định lượng Tobramycin số thuốc nhỏ mắt sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất sau cột : tạo dẫn chất sau cột cần có dẫn xuất, phức tạp Thuốc thử o-phtaldehyd độc, có mùi khó chịu Theo tác giả I.Clarot cộng [16] phân tích Neomycin Sulfat sử dụng detector tán xạ bay cần nồng độ chất phân tích cao so với detector huỳnh quang, phương pháp không phổ biến nước ta nên việc áp dụng đại trà khó khả thi Tác giả Kiyoshi Tsuji cộng [24] sử dụng sắc ký pha thuận dung môi hữu cloroform độc hại 47 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận: Từ kết thực nghiệm thu được, đạt mục tiêu đề - Đã xây dựng phương pháp định lượng Neomycin sulfat HPLC với detector huỳnh quang theo phương pháp dẫn xuất hóa trước cột với thuốc thử FMOC - Cl Phương pháp xây dựng thực nhanh, dung mơi hóa chất phổ biến, trang thiết bị sẵn có phòng thí nghiệm, tiến hành khơng q phức tạp - Đã thẩm định quy trình xây dựng được, kết : Phương pháp có tính chọn lọc cao, tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ khoảng nồng độ khảo từ 3,5µg/ml đến 6,5 µg/ml với r=0,9995, phương pháp có độ cao (97% - 103%), độ xác đảm bảo (RSD ≤ 1,87%), hệ thống có tính thích hợp tốt ( RSD thời gian lưu diện tích pic nhỏ 2%) hồn tồn thích hợp ứng dụng định lượng Neomycin sulfat - Đã ứng dụng quy trình định lượng Neomycin sulfat bảy chế phẩm, gồm bốn chế phẩm dạng dung dịch, ba chế phẩm dạng viên nén Kết cho thấy hàm lượng Neomycin sulfat chế phẩm đạt yêu cầu (97,04% - 118,19%) Ý kiến đề xuất: Ứng dụng phát triển phương pháp xây dựng để định lượng Neomycin sulfat bán thành phẩm chế phẩm góp phần quản lý chất lượng thuốc chứa Neomycin sulfat lưu hành thị trường 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tài liệu tiếng Việt: Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội.427-429 Bộ Y tế (2007), Dược lý học, Tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội.165-168 Bộ Y tế (2010), Dược thư Quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội 838-840 Bộ Y tế (2007), Hóa dược, Tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội 171 Bộ Y tế (2007), Hóa phân tích, Tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội 238- 263 Bộ Ytế (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, Hà Nội Công ty cổ phần dược phẩm 3/2 (2006), Tiêu chuẩn sở thuốc nhỏ mắt Neo – Dexa Công ty cổ phần dược phẩm Nam Hà (2006), Tiêu chuẩn sở thuốc nhỏ mắt Nemydexan Hoàng Minh Châu, Từ Văn Mặc, Từ Vọng Nghi (2002) sở hóa học phân tích, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội 10 Trần Thúy Hạnh (2006), Nghiên cứu định lượng Tobramycin số thuốc nhỏ mắt sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang – tạo dẫn xuất sau cột, Luận văn Thạc sỹ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 11 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, Phần 2: Các phương pháp phân tích cơng cụ, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội 12 Thái Phan Quỳnh Như (2001), “Phương pháp phân tích quang phổ huỳnh quang”, Tài liệu tập huấn ứng dụng số phương pháp đo quang kiểm nghiệm thuốc , Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương, Bộ y tế, 45-60 13 Đào Hùng Phi (1995), Kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc phương pháp phân tích dụng cụ, Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương, Bộ Y tế * Tài liệu tiếng Anh: 14 British Pharmacopoeia 2010 , Volume III 2934- 2936 15 European Pharmacopoeia IV (2007) volume III 2487- 2488 16 I.Clarot, A.Regazzeti, N.Auzeil , F.Laadani, M.Citton, P.Netter, A.Nicolas (2005), “Analysis of neomycin sulphate and framycetin sulphate by high performance liquid chromatography using evaporative light scattering detection”, Journal of Chromatography A (1088), 236 – 244 17 H Fabre, M Sekkat, M D Blanchin and B Mandrou (1989) “Determination of aminoglycosid in pharmaceutical formulations – High performance liquid chromatography”, Journal of pharmaceutical & Biomedical analysis, 7, (12), 1711 – 1718 18 Maryadele J O’Neil, Patricia E Heckelman, Cherie B Koch, Kristin J Roman, Catherine M Kenny, Maryann R D’Arecca (2006), The Merck Index fourteenth edition, Merck & CO., Inc., USA 19 Sandie Lindsay, High performance liquid chromatography, Analytical chemistry by open learning, 1997, UK 20 Martindale (2007), The complete drug reference Thirty – fifth Edition 21 Maria Ofitserova, Sareeta Nerkar (2008), “Aminoglycosid antibioticsn in feed: Apamycin, Gentamycin, Neomycin”, Pickering Laboratories (205) 22 Andrzej Posyniak, Jan Zmudzki, Jolanta Niedzielska (2001), “Sample preparation for residue determination of gentamicin and neomycin by liquid chromatography”, Journal of Chromatography A, (914), 59 – 66 23 D Stead, R.M.E Richards (1995), “ Sensitive fluorimetric determination of gentamicin sulphate in biological matrices using solid – phase extraction, pre – column derivatization with – fluorenyl ethyl chlorofomate and reversedphase high-performance liquid chromatography”, Journal of Chromatography B: Biomedical application, (675), 295 – 302 24 Kiyoshi Tsuji, John F Goetz, William van Meter and Kathy A Gusciora (1979), “ Normal – phase high-performance liquid chromatography determination of neomycin sulphat derivatized with 1-fluoro-2,4- dinitrobenzen”, Journal of Chromatography,(175), 141 – 152 25 Pharmacopoeia of the people’s republic of China 2010 volume III 835- 837 26 The United States Pharmacopoeia 2009 volume III 3045- 3069 PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm thuôc nhỏ mắt Nemydexan Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm thuốc xịt mũi Dophazolin Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm thuốc xịt mũi Alaka Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm viên nén đặt Neo-Tergynan Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm viên nén đặt Neo-gynoternan Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm viên nén đặt Kegynan Phụ lục Sắc ký đồ định lượng Neomycin sulfat chế phẩm thuôc nhỏ mắt Neo-Dexa ... sulfat sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang với mục tiêu sau: - Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Neomycin sulfat sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang - Ứng dụng phương pháp. .. THANH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NEOMYCIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR HUỲNH QUANG LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC-ĐỘC CHẤT MÃ SỐ:... tiện sắc ký mà người ta phân làm nhiều loại sắc ký khác nhau: Sắc ký phân bố, sắc ký hấp phụ, sắc ký trao đổi ion, sắc ký loại cỡ, sắc ký lực, sắc ký đồng phân quang học Trong đó, sắc ký lỏng