Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với detector PDA được nghiên cứu thẩm định để định lượng lycopen trong một số dược liệu. Phương pháp phân tích sử dụng cột Phenomenex Develosil C30 (10 mm x 250 mm), 5 µm với pha động, bao gồm methyl-tert butyl ether (MtBE), ethyl acetate, methanol (45:45:10, % v/v), tốc độ dòng 1,0 ml/phút.
ng dịch chuẩn tương ứng với LLOQ Hình 4: Sắc ký đồ dịch chiết cà chua sấy khô TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2013 Độ phương pháp xác định cách thêm chuẩn vào mẫu thử cho nồng độ lycopen nằm khoảng tuyến tính khảo sát Sau đó, xử lý mẫu thử theo quy trình xây dựng Tiến hành sắc ký tính tốn kết Bảng 3: Kiểm tra độ phương pháp định lượng lycopen màng gấc 471.4 0.035 503.0 0.030 0.025 444.8 AU 0.020 0.015 0.010 0.005 359.8 MẪU KHỐI LƯỢNG DƯỢC LIỆU (g) 0,1984 0,2 93,23 0,2092 0,2 96,48 0,2075 0,2 96,71 0,2112 0,2 94,02 0,2018 0,2 93,98 0,2105 0,2 93,67 0.000 340.00 360.00 380.00 400.00 420.00 440.00 460.00 480.00 500.00 520.00 LƯỢNG TỶ LỆ CHUẨN THÊM TÌM LẠI (%) (mg) 540.00 nm Hình 5: Phổ hấp thụ lycopen xác định detector PDA * Độ lặp lại: Xác định độ lặp lại mẫu thử chuẩn bị theo quy trình xử lý mẫu Tiến hành sắc ký theo điều kiện chọn, sau tính hàm lượng lycopen có dược liệu Bảng 2: Khảo sát độ lặp lại định lượng lycopen màng gấc khô MẪU KHỐI LƯỢNG MÀNG GẤC (g) LƯỢNG LYCOPENE TÌM THẤY (mg) HÀM LƯỢNG (%) 1,0022 2,71 0,270 0,9982 2,73 0,273 0,9989 2,77 0,277 0,9946 2,68 0,269 1,0061 2,73 0,271 1,0007 2,66 0,266 94,68 Kết cho thấy phương pháp có độ tương đối tốt khoảng khảo sát với khả tìm lại trung bình đạt 94,68% (93,23 - 96,71%) Định lƣợng lycopen màng gấc cà chua sấy khô Bảng 4: Kết định lượng lycopen cà chua sấy khô MẪU KHỐI LƯỢNG DƯỢC LIỆU LƯỢNG LYCOPENE TÌM THẤY (mg) HÀM LƯỢNG (%) 10,0122 7,61 0,076 10,1021 7,17 0,071 Hàm lượng trung bình (%) 0,271 10,0823 7,26 0,072 RSD (%) 1,4 10,0642 7,04 0,070 10,0072 6,90 0,069 10,0724 7,76 0,077 Kết thử độ lặp lại phương pháp cho thấy điều kiện sắc ký chọn, độ lệch chuẩn tương đối thu 1,4% Như vậy, phương pháp đạt yêu cầu độ lặp lại quy trình phân tích mẫu * Độ đúng: 10 Trung bình Hàm lượng trung bình (%) 0,072 RSD (%) 4,5 Chuẩn bị dung dịch thử cho mẫu thử theo quy trình xử lý mẫu Tiến hành sắc TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2013 ký điều kiện chọn ghi kết diện tích píc tương ứng với mẫu thử Tính kết suy nồng độ lycopen mẫu thử đem định lượng TÀI LIỆU THAM KHẢO Betty K Ishida et al A simple, rapid method for HPLC analysis of lycopene isomers Phytochemical Analysis 2001, pp.194-198 Kết định lượng cho thấy lycopen có màng gấc khơ với hàm lượng khoảng 0,271%, cà chua sấy khơ, hàm lượng 0,072% Betty K Ishida et al Fatty acid and carotenoid composition of Gac (Momordica cochinchinensis Spreng) fruit Journal of Agricultural and Food Chemistry 2004, pp.274-279 KẾT LUẬN Hiromitsu AOKI et al Carotenoid pigments in GAC fruit (Momordica cochinchinensis SPRENG) Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 2002, pp.2479-2482 Phương pháp HPLC xây dựng áp dụng để định lượng lycopen số dược liệu với cách xử lý mẫu thích hợp Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng lycopen màng gấc khô cà chua sấy khô khảo sát tương ứng 0,271% 0,072% Le Thuy Vuong et al Momordica cochinchinensis Spreng (Gac) fruit carotenoids reevaluated Journal of Food Composition and Analysis 2006, pp.664-668 Lan Cao-Hoang et al Stability of carotenoid extracts of Gac (Momordica cochinchinensis) towards cooxidation - Protective effect of lycopene on β-carotene Food Research International 2011, pp.2252-2257 Ngày nhận bài: 3/4/2013 Ngày phản biện đánh giá báo: 15/5/2013 Ngày báo đăng: 23/5/2013 11 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2013 12 ... kiện chọn, sau tính hàm lượng lycopen có dược liệu Bảng 2: Khảo sát độ lặp lại định lượng lycopen màng gấc khô MẪU KHỐI LƯỢNG MÀNG GẤC (g) LƯỢNG LYCOPENE TÌM THẤY (mg) HÀM LƯỢNG (%) 1,0022 2,71... 94,68% (93,23 - 96,71%) Định lƣợng lycopen màng gấc cà chua sấy khô Bảng 4: Kết định lượng lycopen cà chua sấy khô MẪU KHỐI LƯỢNG DƯỢC LIỆU LƯỢNG LYCOPENE TÌM THẤY (mg) HÀM LƯỢNG (%) 10,0122 7,61... pp.2479-2482 Phương pháp HPLC xây dựng áp dụng để định lượng lycopen số dược liệu với cách xử lý mẫu thích hợp Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng lycopen màng gấc khô cà chua sấy khô khảo sát