Tổng quan về ứng dụng sinh học phân tử trong nhận diện thảo dược

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẢI YẾN TỔNG QUAN VỀ ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG NHẬN DIỆN THẢO DƯỢC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẢI YẾN TỔNG QUAN VỀ ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG NHẬN DIỆN THẢO DƯỢC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Phùng Thanh Hương Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa sinh HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Trong q trình học tập hồn thành khóa luận này, tơi nhận giúp đỡ hướng dẫn quý báu thầy cô, gia đình bạn bè Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc nhất, xin gửi lời cảm ơn tới: - Ban giám hiệu, thầy, cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội tận tình dạy dỗ tạo điều kiện giúp tơi hồn thành khóa học - Các thầy, mơn Hóa sinh tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Tiến sĩ Phùng Thanh Hương – người thầy kính mến hết lòng giúp đỡ, dạy bảo, động viên tạo điều kiện cho suốt trình học tập nghiên cứu đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình ln bên cạnh động viên ủng hộ tơi suốt khóa học Cuối cùng, tơi xin cảm ơn bạn bè giúp đỡ động viên thời gian qua Tôi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả Nguyễn Thị Hải Yến Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG VÀ HÌNH ẢNH ĐẶT VẤN ĐỀ….………………………………………………………………… Chương Tổng quan trạng nghiên cứu thực hành nhận diện thảo dược…………………………………………………………… … 1.1 Sự cần thiết việc nhận diện thảo dược……………………………… ……3 1.2 Các phương pháp thường sử dụng nhận diện thảo dược…… …….4 1.2.1 Phương pháp hình thái…………………………………………………… 1.2.2 Phương pháp vi học………………………………………………… ……5 1.2.3 Phương pháp phân tích hóa học…………………………………………….6 Chương Các kĩ thuật sinh học phân tử ứng dụng nhận diện thảo dược……………………………… ……………………………… 2.1 Các marker dựa phản ứng khuếch đại chuỗi (PCR)……………….….……9 2.1.1 Kĩ thuật PCR sử dụng mồi ngẫu nhiên (RP-PCR)……… ……… ….10 2.1.2 Kĩ thuật đa hình chiều dài đoạn ADN khuếch đại trực tiếp (DALP)… ………………………………… 13 2.1.3 Kĩ thuật đa hình chiều dài đoạn khuếch đại (AFLP)…… …14 2.1.4 Kĩ thuật đa hình trình tự khuếch đại phân cắt (CAPS)………18 2.1.5 Kĩ thuật phân tích trình tự lặp đơn giản (SSR)…………………… …20 2.1.6 Kĩ thuật đa hình trình tự vùng lặp (ISSR)…………………….22 2.1.7 Kĩ thuật khuếch đại trực tiếp vùng ADN tiểu vệ tinh (DAMD)………… 25 2.1.8 Kĩ thuật khuếch đại vùng đặc trưng (SCAR)………………………… …27 2.1.9 Kĩ thuật đa hình hình dạng sợi đơn (SSCP)………………………… 31 2.1.10.Kĩ thuật khuếch đại hệ thống đột biến bền vững (ARMS) multiplex-ARMS (MARMS)………………………………………………….33 2.2 Các marker thu phương pháp giải trình tự ADN………………… 38 2.2.1 Vùng phiên mã nội (ITS)………………………………………….………40 2.2.2 Vùng trnH – psbA…………………………………………………………42 2.2.3 Maturase K (matK)………………………………… ……………………43 2.2.4 Tiểu đơn vị lớn ribulose-biphosphat carboxylase (vùng rbcL)……….44 2.2.5 Các trình tự ADN khác dùng nhận diện thảo dược…………………45 2.3 Phương pháp ADN microarray………………………………… ……… … 47 2.3.1 Kĩ thuật microarray sử dụng mẫu dò oligonucleotid………… …47 2.3.2 Kĩ thuật microarray sử dụng mẫu dò gen…………… …………… …49 Chương Bàn luận………………………………………………………… ……51 3.1 Đánh giá phương pháp nhận diện thảo dược sử dụng công cụ sinh học phân tử………………………………………………… ….51 3.2 Đánh giá thực tế việc nhận diện thảo dược Việt Nam……………………….56 KẾT LUẬN………………………………………………………………… ……59 ĐỀ XUẤT…………………………………………… ………………………… 59 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC BẢNG VÀ HÌNH ẢNH Bảng Tên Trang Trình tự mồi SCAR dùng cho phản ứng khuếch đại PCR 29 So sánh số kĩ thuật khác sử dụng công cụ sinh học 55 phân tử để nhận diện thảo dược Hình Nguyên tắc kĩ thuật đa hình đoạn ADN khuếch 11 đại ngẫu nhiên – RAPD Nghiên cứu RAPD với loài S angustifolia, S acutifolia, 12 S sophera, S tora Nguyên tắc kĩ thuật AFLP 16 Nguyên tắc kĩ thuật CAPS 18 Nghiên cứu CAPS sản phẩm PCR với cặp mồi ITS1, 19 ITS5 cắt enzym giới hạn EaeI Nguyên tắc kĩ thuật phân tích trình tự lặp lại đơn giản 21 SSR Nguyên tắc kĩ thuật ISSR – PCR 23 Dấu vân tay ISSR R palmatum, R officinale R 24 tanguticum sử dụng mồi UBC-811 Trình tự tiểu vệ tinh Pge2 26 10 Nguyên tắc kĩ thuật SCAR (sử dụng mồi SCAR đặc hiệu 27 từ marker RAPD) 11 Trình tự đoạn ADN đặc trưng cho loài Panax 28 notoginseng 12 Nguyên tắc kĩ thuật SSCP 32 13 Sơ đồ vùng ITS vị trí mồi sử dụng 34 14 Sản phẩm thu sau phản ứng khuếch đại đặc trưng allel 35 năm loài thuộc chi Citrus 15 Mồi đặc hiệu thiết kế dựa vào khác trình tự 36 gen matK năm loài thuộc chi Panax 16 Mồi đặc hiệu thiết kế dựa vào khác trình tự 37 gen 18S rADN năm loài thuộc chi Panax 17 Đơn vị lặp lại 18S – 26S ADN ribosom 41 18 Nguyên tắc kĩ thuật microarray với mẫu dò 48 oligonucleotid gen để nhận diện thảo dược Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt A Adenine ADN 2’- deoxyribonucleic acid AFLP Amplified fragment Axít 2’- deoxyribonucleic length polyphorphism AP-PCR ARMS AS-PCR ATP-P33 Arbitrarily primed- Kĩ thuật đa hình chiều dài đoạn khuếch đại Polymerase Kĩ thuật PCR với mồi tùy chain reaction chọn Amplification refractory mutation Kĩ thuật khuếch đại hệ thống system đột biến bền vững Allele specific - Polymerase chain Kĩ thuật khuếch đại đặc trưng reaction cho allel Adenosine triphosphate phosphorus 33 BSA Bovine serum albumin Albumin huyết bò C Cytosine CAPS Cleaved amplified polymorphism Kĩ thuật đa hình trình sequence tự khuếch đại phân cắt CTAB Cetyltrimethylammonium bromide DAF DNA amplification fingerprinting Kĩ thuật vân tay khuếch đại ADN DALP Direct amplification polymorphisms of length Kĩ thuật đa hình chiều dài đoạn ADN khuếch đại trực tiếp DAMD Directed amplification of minisatellite - region DNA G Guanine IR Infrared ISSR Inter-simple Kĩ thuật khuếch đại trực tiếp vùng ADN tiểu vệ tinh Vùng hồng ngoại sequence repeat Kĩ thuật đa hình trình tự polymorphism vùng lặp ITS Internal trancribed spacer Vùng phiên mã nội MARMS Multiplex amplification refractory mutation system matK Maturase K PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại chuỗi rADN DNA ribosome ADN ribosom RAPD Random amplified polymorphic DNA Kĩ thuật đa hình đoạn ADN khuếch đại ngẫu nhiên rbcL Ribulose-bisphosphat carboxylase RFLP Restriction RP-PCR SCAR fragment length Kĩ thuật đa hình chiều dài polymorphism đoạn giới hạn Random primed - Polymerase chain Kĩ thuật PCR dùng mồi ngẫu reaction nhiên Sequence characterized amplified Kĩ thuật khuếch đại vùng đặc Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi regions trưng SNP Single-nucleotide polymorphism Sự đa hình đơn nucleotid SSCP Single Sự đa hình hình dạng sợi đơn strand conformation polymorphism SSR Simple sequence repeats Các trình tự lặp đơn giản T Thymine UV Ultraviolet Vùng tử ngoại WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới 55 Bảng So sánh số kĩ thuật khác sử dụng công cụ sinh học phân tử để nhận diện thảo dược [78] Các đặc điểm SCAR ARMS Trung Trung bình bình Chi phí vận hành Thấp Thấp Trung bình Số vị trí khuếch đại Một vị trí Một vị trí Một vị trí Yêu cầu tính nguyên vẹn Trung Trung ADN mẫu bình bình Cao Cao Trung bình Có Có Hiệu suất Thấp Thấp Kĩ yêu cầu Thấp Thấp Khả tự động hóa Có Có Độ tin cậy Cao Cao Chi phí phát triển Yêu cầu độ tinh SSR CAPS RP-PCR ISSR AFLP Thấp Thấp Thấp Thấp Thấp Nhiều vị Nhiều vị Nhiều vị trí trí trí Cao Cao Cao Cao Cao Cao Có Khơng Khơng Cao Thấp trình Lai Trung Trung bình bình Trung Trung Trung bình bình bình Một vị trí Một vị trí Trung Trung bình bình Cao Cao Cao Khơng Khơng Có Có Cao Cao Cao Thấp Cao Thấp Thấp Thấp Trung Trung Trung bình bình bình Có Khó Có Có Có Có Khó Cao Cao Thấp Cao Cao Cao Thấp Trung Giải bình Trung bình Một vị trí Trung bình ADN mẫu Kiến thức cần biết trước gen Trung bìnhthấp Trung bình Trung bình Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 56 Mỗi phương pháp có ưu điểm nhược điểm riêng nên tùy vào mục đích điều kiện sẵn có để lựa chọn phương pháp thích hợp Từ góc độ mục đích nghiên cứu, muốn thực nghiên cứu số lượng mẫu lớn nên sử dụng phương pháp cho phép nghiên cứu với số lượng mẫu lớn phương pháp giải trình tự ADN phương pháp ADN microarray Phương pháp ADN microarray thích hợp cho nhận diện lồi hỗn hợp loài nghi ngờ Phương pháp giải trình tự ADN thích hợp cho việc xác định mẫu chưa biết rõ loài Với số lượng mẫu nhỏ sử dụng marker thu dựa vào phản ứng khuếch đại PCR Với marker này, vào độ tin cậy mong muốn đạt lựa chọn phương pháp Kĩ thuật nhận diện xác đề xuất kĩ thuật SCAR ARMS Kĩ thuật có độ lặp lại lần thí nghiệm thấp, độ tin cậy thấp kĩ thuật đa hình đoạn ADN khuếch đại ngẫu nhiên (RAPD) thích hợp việc phân nhóm thảo dược để phân biệt mẫu với với mẫu lần thử nghiệm chạy PCR cho mơ hình băng ADN khác 3.2 Đánh giá thực tế việc nhận diện thảo dược Việt Nam Theo nghiên cứu thực trạng sử dụng thảo dược Việt Nam cho thấy thảo dược hoang dại sản xuất nước thảo dược nhập từ nước lưu hành nước khơng kiểm sốt chất lượng độ an toàn [1] Thảo dược nước chủ yếu thu hái từ nguồn mọc hoang, lấy số lượng làm mục tiêu Tình trạng thu hái không mùa vụ, sơ chế, bảo quản không theo quy trình nghiêm ngặt dẫn đến nhầm lẫn thường xuyên xảy Những nguyên nhân dẫn đến nhầm lẫn là: - Do hình dạng thảo dược giống - Do chế biến làm thay đổi hình dạng thảo dược - Do thay tùy tiện thảo dược - Do trùng tên gọi - Do chưa xác định tên khoa học thảo dược 57 - Do cố ý giả mạo Trong lý trên, việc nhầm lẫn giống thảo dược trùng tên gọi nguyên nhân quan trọng gây nguy hiểm đến tính mạng người bệnh có trường hợp tử vong [1] Cùng với đó, cố ý giả mạo có xu hướng ngày gia tăng giao lưu bn bán chưa kiểm sốt chặt chẽ Trên thị trường, thảo dược mua bán theo cảm quan, nhu cầu chưa quản lý chặt chẽ từ phía quan nhà nước Theo thống kê từ năm 1980 phát 70 thuốc vị thuốc có tên gọi với thuốc vị thuốc khác; có khoảng 50 dược liệu dễ bị nhầm lẫn nhiều dược liệu bị giả mạo người sản xuất, buôn bán cố ý Trên thị trường Việt Nam phát có giả mạo tam thất nga truật, hoài sơn củ cọc, địa cốt bì hương gia bì [1] Những bất cập cho thấy việc nhận diện thảo dược Việt Nam nhu cầu cấp thiết để đảm bảo hiệu điều trị nhằm ngăn chặn hậu đáng tiếc cho người sử dụng Cho đến nay, Việt Nam có phương pháp để nhận diện thảo dược chủ yếu mức độ đơn giản Các tiêu chuẩn để nhận diện thảo dược thường dựa vào phương pháp hình thái, phương pháp vi học phương pháp phân tích hóa học lựa chọn sắc kí lớp mỏng Những phương pháp cho thấy độ xác không cao, nhiên đơn giản, dễ thực nên sử dụng phổ biến Trái lại, việc áp dụng kĩ thuật tiên tiến có độ xác cao kĩ thuật sinh học phân tử nhận diện thảo dược mẻ Ở Việt Nam, có nghiên cứu thảo dược áp dụng phương pháp Qua khảo sát thực tế Viện Dược liệu, nhà khoa học áp dụng kĩ thuật RAPD để nghiên cứu phân biệt sâm Việt Nam (Panax vietnamensis) với sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus) tam thất hoang (Panax stipuleanatus) [3], nghiên cứu phân biệt ngũ gia bì hương (Acanthopanax gracilistylus) với ngũ gia bì gai (Acanthopanax trifoliatus) [4] Kết thu từ nghiên cứu cho thấy sử dụng RAPD phân biệt lồi Tuy nhiên RAPD Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 58 kĩ thuật đề xuất cho việc nhận diện thảo dược có độ tin cậy thấp Bộ mơn Thực vật – trường Đại học Dược Hà Nội bắt đầu trình triển khai áp dụng kĩ thuật sinh học phân tử nghiên cứu thảo dược Một báo cáo hoi sử dụng kĩ thuật sinh học phân tử nhận diện thảo dược Nguyễn Thanh Thuận cộng Đại học Y Dược Tp.HCM kĩ thuật RFLPPCR sử dụng mồi trình tự vùng ITS 18S áp dụng để nhận diện lồi sâm khác [5] Trong nơng nghiệp, việc áp dụng công cụ sinh học phân tử nhiều ý Tuy nhiên, công cụ sinh học phân tử, di truyền học áp dụng rộng rãi thời gian dài lĩnh vực nông nghiệp chủ yếu giới hạn nghiên cứu loại lương thực trọng điểm Như vậy, việc sử dụng kĩ thuật sinh học phân tử nghiên cứu thuốc vị thuốc nói chung việc nhận diện thảo dược nói riêng hướng mẻ Việt Nam Cơ sở vật chất nguồn nhân lực nước ta đáp ứng phần đáng kể cho việc triển khai nghiên cứu ứng dụng công cụ sinh học phân tử nhận diện thảo dược Tuy nhiên, điều quan trọng nhà quản lý, nhà khoa học nhà sản xuất cần có nhận thức đầy đủ ý nghĩa việc nhận diện thảo dược lợi công cụ sinh học phân tử để quan tâm đẩy mạnh phát triển lĩnh vực Trước mắt, để phù hợp với điều kiện thực tế Việt Nam, lựa chọn triển khai số kĩ thuật đơn giản, độ tin cậy tương đối cao kĩ thuật giải trình tự ADN số vùng chọn lọc, kĩ thuật ISSR SSR… 59 KẾT LUẬN Đề tài hoàn thành đạt mục tiêu sau: - Đã tìm hiểu nguyên tắc kĩ thuật sinh học phân tử ứng dụng nhận diện thảo dược Có ba phương pháp sử dụng phương pháp marker dựa phản ứng khuếch đại PCR, phương pháp giải trình tự ADN phương pháp ADN microarray Từ phương pháp, có nhiều kĩ thuật khác xây dựng triển khai - Đã đưa đánh giá bước đầu ưu nhược điểm khả áp dụng kĩ thuật Mỗi kĩ thuật có ưu nhược điểm riêng nên cần xem xét đầy đủ yếu tố liên quan để chọn kĩ thuật phù hợp ĐỀ XUẤT Đẩy mạnh triển khai nghiên cứu áp dụng công cụ sinh học phân tử nhận diện thảo dược biện pháp hướng đến tiêu chuẩn hóa dược liệu Việt Nam nhằm đạt mục tiêu sử dụng thuốc an toàn, hợp lý hiệu Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Thị Bằng (2003), “Thực trạng chất lượng an toàn dược liệu lưu hành thị trường”, Tài liệu hội nghị Dược liệu toàn quốc lần thứ “Phát triển dược liệu bền vững kỉ mới”, tr.174-175 Hồ Huỳnh Thùy Dương (2008), Sinh học phân tử, NXB Giáo dục, Hồ Chí Minh Phạm Thanh Huyền, Nguyễn Tập, Lê Thanh Sơn, Ngô Đức Phương, Đinh Đoàn Long (2009), “Sử dụng thị RAPD-PCR nghiên cứu đa hình di truyền góp phần phân biệt bảo tồn ba loài thuốc sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.), sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) tam thất hoang (P stipuleanatus Tsai et Feng) Việt Nam”, Tạp chí Dược liệu, 14(2), tr 74-81 Đinh Đoàn Long, Nguyễn Tập, Phạm Thanh Huyền, Lê Thanh Sơn, Ngô Đức Phương (2009), “Sử dụng thị RAPD-PCR nghiên cứu đa hình di truyền nhằm góp phần giá trị bảo tồn hai lồi thuốc ngũ gia bì hương (Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith) ngũ gia bì gai (Acanthopanax trifoliatus (L.) Merr.)”, Tạp chí Dược liệu, 14(1), tr 10-16 Nguyễn Thanh Thuận, Vũ Thanh Thảo, Nguyễn Văn Thanh, Trần Cát Đông (2010), “Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử để xác định số lồi sâm thuộc chi Panax”, Y Học TP Hồ Chí Minh, 14(1), tr 129-133 Tiếng Anh Agarwal M., Shrivastava N., Padh H (2008), “Advances in molecular marker techniques and their applications in plant sciences”, Plant Cell Rep, 27:617–631 Al-Qurainy F., Khan S., Ali M.A., Al-Hemaid F.M., Tarroum M., Ashraf M (2011), “ Authentication of Ruta graveolens and its adulterant using internal transcribed spacer (ITS) sequences of nuclear ribosomal DNA”, Pak J Bot., 43(3): 1613-1620 Arif I.A., Bakir M.A., Khan H.A., Al Farhan A.H., Al Homaidan A.A., Bahkali A.H., Al Sadoon M., Shobrak M A (2010), “Brief review of molecular techniques to assess plant diversity”, Int J Mol Sci., 11, pp 20792096 Balasubramani S.P., Murugan R., Ravikumar K., Venkatasubramanian P (2010), “Development of ITS sequence based molecular marker to distinguish, Tribulus terrestris L (Zygophyllaceae) from its adulterants”, Fitoterapia 81, pp 503–508 10 Baldwin B.G (1992), “Phylogenetic utility of the internal transcribed spacer of nuclear ribosomal DNA in plans: An example from Compositae”, Mol Phylogenet Evol., 1(1): 3-16 11 Carles M., Cheung M.K.L., Moganti S., Dong T.T.X., Tsim K.W., Ip N.Y., Sucher N.J (2005), “A DNA microarray for the authentication of toxic traditional Chinese medicinal plants”, Planta Med, 71(6): 580-584 12 CBOL Plant Working Group (2009), “A DNA barcode for land plants”, PNAS, 106(31), pp 12794 –12797 13 Chen R., Dong J., Cui X., Wang W., Yasmeen A., Deng Y., Zeng X., Tang Z (2012), “DNA based identification of medicinal materials in Chinese patent medicines”, Sci Rep., 2:958 14 Chen S., Yao H., Han J., Liu C., Song J., Shi L., Zhu Y., Ma X., Gao T., Pang X., Luo K., Li Y., Li X., Jia X., Lin Y., Leon C (2010), “Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species”, PLoS ONE 5(1): e8613 15 Cheng KT., Su B., Chen CT., Lin CC (2000), “RAPD analysis oi Astragalus medicines marketed in Taiwan”, Am J Chin Med., 28(2):273-8 16 Choudhary N., Sekhon B.S (2011), “An overview of advances in the standardization of herbal drugs”, J Pharm Educ Res, 2(2), pp 55-70 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 17 Dhanya K., Syamkumar S., Siju S., Sasikumar B (2011), “Sequence characterized amplified region markers: A reliable for adulterant detection in turmeric powder”, Food Research International, 44(9), pp 2889–2895 18 Franca L.T., Carrilho E., Kist T.B (2002), “A review of DNA sequencing techniques”, Quarterly Reviews of Biophysics, 35 (2), pp 169-200 19 Ganie S.H., Srivastava P.S., Narula A., Ali Z., Sharma M.P (2012), “Authentication of shankhpushpi by RAPD markers”, Eurasia J Biosci 6, pp 39-46 20 Gao T., Sun Z., Yao H., Song J., Zhu Y., Ma X., Chen S (2011), “Identification of Fabaceae plants using the DNA barcode matK”, Planta Med., 77(1):92-94 21 Gao T., Yao H., Song J., Liu C., Zhu Y., Ma X., Pang X., Xu H., Chen S (2010), “Identification of medicinal plants in the family Fabaceae using a potential DNA barcode ITS2”, J Ethnopharmacol., 130(1):116-121 22 Ghosh S., Majumder P.B., Sen Mandi S.S (2011), “Species-specific AFLP markers for identification of Zingiber officinale, Z montanum and Z zerumbet (Zingiberaceae)”, Genetics and Molecular Research, 10(1): 218-229 23 Guo JL., Ren Y., Chen L., Pei J., Wan DG (2010), “Authentication of Caulis clematidis armandii (Chuanmutong) and differentiation of its common adulterants using RAPD and SCAR markers”, Journal of Medicinal Plants Research, 4(8), pp 697-701 24 Ha W.Y., Shaw P.C., Liu J., Yau C.F., Wang J (2002), “Authentication of Panax ginseng and Panax quinquefolius using amplified fragment length polymorphism (AFLP) and directed amplification of minisattlite region DNA (DAMD)”, J Agric Food Chem., 50, pp 1871 −1875 25 Ha WY., Yau F.C., But P.P., Wang J, Shaw PC (2001), “Direct amplification of length polymorphism analysis differentiates quinquefolius”, Planta Med 67, pp 587-589 Panax ginseng from P 26 Heubl G (2010), “New aspects of DNA-based authentication of Chinese medicinal plants by molecular biological techniques”, Planta Med, 76: 19631974 27 Hollingsworth P.M., Graham S.W., Little D.P (2011), “Choosing and using a plant DNA barcode”, PLoS ONE 6(5): e19254 28 Hon CC, Chow YC, Zeng FY, Leung FC (2003), “Genetic authentication of ginseng and other traditional Chinese medicine”, Acta Pharmacol Sin., 24(9): 841-6 29 Hussain M.A., Bedi Y.S (2012), “Authentication of Picrorhiza kurrooa Royle ex Benth using DNA fingerprint”, International Journal of AgriScience, 2(6): 511-521 30 Ince A G., Karaca M (2011), “Species-specific touch-down DAMD-PCR markers for Salvia species”, Journal of Medicinal Plants Research, 6(9), pp 1590-1595 31 Jiang Y., David B., Tua P., Barbin Y (2010), “Recent analytical approaches in quality control of traditional Chinese medicines—A review”, Analytica Chimica Acta 657, pp 9–18 32 Jiang Y., Ding C., Zhang L., Yang R., Zhou Y., Tang L (2011), “Identification of the genus Epimedium with DNA barcodes”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(28), pp 6413-6417 33 Joshi M., Deshpande J.D (2010), “Polymerase chain reaction: methods, principles and application”, International Journal of Biomedical Research 1, pp 81-97 34 Kårehed J., Groeninckx I., Dessein S., Motley T.J., Bremer B (2008), “The phylogenetic utility of chloroplast and nuclear DNA markers and the phylogeny of the Rubiaceae tribe Spermacoceae”, Mol Phylogenet Evol., 49(3):843-866 35 Khan S., Mirza K.J., Abdin M.Z (2010), “Development of RAPD markers for authentication of medicinal plant Cuscuta reflexa”, EurAsia J BioSci 4, pp 1-7 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 36 Khan S., Mirza K.J., Abdin M.Z (2010), “DNA fingerprinting for the authentication of Ruta graveolens”, African Journal of Biotechnology, 10(44), pp 8709-8715 37 Khan S., Mirza K.J., Al-Qurainy F., Abdin M.Z (2011), “Authentication of the medicinal plant Senna angustifolia by RAPD profiling”, Saudi Journal of Biological Sciences 18, pp 287–292 38 Khan S., Mirza K.J., Md Tayaab Md, Abdin M.Z (2009), “RAPD profile for authentication of medicinal plant Glycyrrhiza glabra Linn.”, Internet Journal of Food Safety, 11, pp 24-28 39 Khan S., Qureshi M.I., Kamaluddin, Alam T., Abdin M Z (2006), “Protocol for isolation of genomic DNA from dry and fresh roots of medicinal plants suitable for RAPD and restriction digestion”, African Journal of Biotechnology, 6(3), pp 175-178 40 Kim J, Jo BH, Lee KL, Yoon ES, Ryu GH, Chung KW (2007), “Identification of new microsatellite markers in Panax ginseng”, Mol Cells., 24(1): 60-8 41 Ko R.J (2004), “A U.S perspective on the adverse reactions from traditional Chinese medicines”, J Chin Med Assoc, 67:109-116 42 Kreader C.A (1996), “Relief of amplification inhibition in PCR with Bovine Serum Albumin or T4 Gene 32 Protein”, Applied and environmental microbilogy, pp 1102–1106 43 Kress WJ, Wurdack KJ, Zimmer EA, Weigt LA, Janzen DH (2005), “Use of DNA barcodes to identify flowering plants”, PNAS, 102(23), pp 8369 – 8374 44 Kunle, Folashade O., Egharevba, Omoregie H., Ahmadu, Ochogu P (2012), “Standardization of herbal medicines - A review”, International Journal of Biodiversity and Conservation , 4(3), pp 101-112 45 Kwon HK., Ahn Ch., Choi YE (2009), “Molecular authentication of Panax notoginseng by specific AFLP-derived SCAR marker”, Journal of Medicinal Plants Research, 3(11), pp 957-966 46 Leem K., Kim S.C., Yang C.H., Seo J (2005), “Genetic identification of Panax ginseng and Panax quinquefolius by pyrosequencing methods”, Biosci Biotechnol Biochem., 69(9):1771-1773 47 Li M., Cao H., But P.P., Shaw PC (2011), “Identification of herbal medicinal materials using DNA barcodes”, Journal of Systematics and Evolution, 49(3): 271–283 48 Li M., Jiang RW., Hon PM., Cheng L., Li LL., Zhou JR., Shaw PC., But P.P (2010), “Authentication of the anti-tumor herb Baihuasheshecao with bioactive marker compounds and molecular sequences”, Food Chemistry, 119(3), pp 1239–1245 49 Liu T., Ji Y (2011), “Molecular authentication of the medicinal plant Paris polyphylla Smith var yunnanensis (Melanthiaceae) and its related species by polymerase chain reaction–restriction fragment length polymorphism (PCRRFLP)”, Journal of Medicinal Plants Research, 6(7), pp 1181-1186 50 Meizi L., Hui Y., Kun L., Pei M., Wenbin Z., Ping L (2012), “Authentication of Illicium verum using a DNA barcode psbA-trnH”, Journal of Medicinal Plants Research, 6(16), pp 3156-3161 51 Misra A., Shasany A.K., Shukla A.K., Darokar M.P., Singh S.C., Sundaresan V., Singh J., Bagchi G.D., Jain S.P., Saikia D., Khanuja S.P.S (2010), “AFLP markers for identification of Swertia species (Gentianaceae)”, Genetics and Molecular Research, (3): 1535-1544 52 Nikam P H., Kareparamban J., Jadhav A., Kadam V (2012), “Future trends in standardization of herbal drugs”, Journal of Applied Pharmaceutical Science 02 (06); pp 38-44 53 Niu L., Mantri N., Li C.G., Xue C., Pang E (2011), “Array-based techniques for fingerprinting medicinal herbs”, Chinese Medicine, 6:18 54 Niu L., Mantri N., Li C.G., Xue C., Wohlmuth H., Pang E.CK (2011), “Detection of Panax quinquefolius in Panax ginseng using ‘subtracted diversity array’”, J Sci Food Agric, 91: 1310 – 1315 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 55 Saini A., Reddy S.K, Jawali N (2004), “Evaluation of long primers for AP-PCR analysis of mungbean [Vigna radiata (L.) Wilczek]: Genetic relationships and fingerprinting of some genotypes”, Indian journal of Biotechnology 3, pp 511518 56 Schlötterer C (2000), “Evolutionary dynamics of microsatellite DNA”, Chromosoma, 109(6): 365-71 57 Scott M.C., Caetano-Anollés G., Trigiano R.N (1996), “DNA amplification fingerprinting identifies closely related Chrysanthemum Cultivars”, J A MER SOC H ORT SCI., 121(6):1043–1048 58 Sehgal D., Bhat V., Raina S.N (2008), “Advent of diverse DNA markers to decipher genome sequence polymorphism”, Handbook of new technologies genetic improvement of legumes, CRC Press Taylor and Francis Group, Boca Raton 59 Selkoe K.A., Toonen R.J (2006), “Microsatellites for ecologists: a practical guide to using and evaluating microsatellite markers”, Ecol Lett., 9(5): 615-29 60 Semagn K., Bjørnstad Å., Ndjiondjop M N (2006), “An overview of molecular marker methods for plants”, African Journal of Biotechnology, 5(25), pp 25402568 61 Shaw PC., Wong KL., Chan A.W., Wong WC., But P.P (2009), “Patent applications for using DNA technologies to authenticate medicinal herbal material”, Chin Med., 4: 21 62 Shi H.M., Wang J., Wang M.Y., Tu P.F., Li X.B (2009), “Identification of Cistanche Species by chemical and inter-simple sequence repeat fingerprinting”, Biol Pharm Bull., 32(1), pp 142-146 63 Smillie TJ and Khan IA (2010), “A comprehensive approach to identifying and authenticating botanical products”, Clinical pharmacology and theurepeutics, 87(2), pp 175-186 64 Sun X., Guo J., Ge Y., Xia B., Hang Y (2012), “Study of specific random amplification of polymorphic DNA- sequence characterized amplified region (RAPD-SCAR) marker for the endangered Chinese endemic herb Atractylodes lancea”, Journal of Medicinal Plants Research, 6(21), pp 3774-3780 65 Sun XQ., Zhu YJ., Guo JL., Peng B., Bai MM., Hang YY (2012), “DNA barcoding the Dioscorea in China, a vital group in the evolution of monocotyledon: Use of matK gene for species discrimination”, PLoS ONE 7(2): e32057 66 Sun Z., Gao T., Yao H., Shi L., Zhu Y., Chen S (2011), “Identification of Lonicera japonica and its related species using the DNA barcoding method”, Planta Med, 77: 301 – 306 67 Sze S.C., Zhang K.Y., Shaw PC., But P.P., Ng TB., Tong Y (2005), “A DNA microarray for differentiation of the Chinese medicinal herb Dendrobium officinale (Fengdou Shihu) by its S ribosomal DNA intergenic spacer region”, Biotechnol Appl Biochem., 49(2):149-154 68 Theerakulpisut P., Kanawapee N., Maensiri D., Bunnag S., Chantaranothai P (2008), “ Development of species- specific SCAR markers for identification of three medicinal species of Phyllanthus”, Journal of Systematics and Evolution, 46 (4): 614-621 69 Wagner H Bauer R., Melchart D., Xiao P., Staudinger A (2011), “Chromatography fingerprint Analysis of Herbal Medicines”, Springer, New York 70 Wang H., Kim MK., Kim YJ., Lee HN., Jin H., Chen J., Yang DC (2012), “Molecular authentication of the Oriental medicines Pericarpium Citri Reticulatae and Citri Unshius Pericarpium using SNP markers”, Gene., 494(1), pp 92-95 71 Wang J., Tanret I., Mangelings D., Fan G., Wu Y., Heyden Y.V (2010), “Fingerprint development for Ginkgo biloba extracts by pressurized capillary electrochromatography: Comparison of Chromatographic Science, 48, pp 428-435 column types”, Journal of Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 72 Wang X (2011), “Inter-simple sequence repeats fingerprinting markers for authenticating the genuine (ISSR) molecular species of rhubarb”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(5), pp 758-764 73 Xu H, Wang Z, Ding X, Zhou K, Xu L (2005), “Differentiation of Dendrobium species used as "Huangcao Shihu" by rDNA ITS sequence analysis, Planta Med., 71: 1-3 74 Yadav A., Ahmad J., Chaudhary A.A., Ahmad A (2012), “Development of sequence characterized amplified region (SCAR) Marker for the authentication of Bacopa monnieri (L.) Wettst)”, European Journal of Medicinal Plants, 2(3): 186-198 75 Yang Y., Zhai Y., Liu T., Zhang F., Ji Y (2011), “Detection of Valeriana jatamansi as an adulterant of medicinal Paris by length variation of chloroplast psbA-trnH region”, Planta Med., 77(1):87-91 76 Yao H., Song JY., Ma XY., Liu C., Li Y., Xu HX., Han JP., Duan LS., Chen SL (2009), “Identification of Dendrobium species by a candidate DNA barcode sequence: The chloroplast psbA-trnH intergenic region”, Planta Med., 75(6):667-669 77 Ye Q, Qiu YX, Quo YQ, Chen JX, Yang SZ, Zhao MS, Fu CX (2006), “Species-specific SCAR markers for authentication of Sinocalycanthus chinensis”, J Zhejiang Univ Sci B., 7(11):868-872 78 Yip P.Y., Chau C.F., Mak C.Y., Kwan H.S (2007), “DNA methods for identification of Chinese medicinal materials”, Chinese Medicine, 2:9 79 Zhang YB., Wang J., Wang ZT., But P.P., Shaw PC (2003), “DNA Microarray for identification of the herb of Dendrobium species from Chinese medicinal formulations”, Planta Med., 69(12):1172-1174 80 Zhao YP., Qiu YX., Gong W., Li JH., Fu CX (2007), “Authentication of Actinidia macrosperma using PCR-RFLP based on trnK sequences”, Botanical Studies, 48: 239-242 81 Zhao Z., Hu Y., Liang Z., Yuen J.P., Jiang Z., Leung K.S (2006), “Authetication is fundamental for standardization of Chinese medicines”, Planta Med, 72: 865-874 82 Zhu S., Fushimi H., Cai S., Komatsu K (2003), “Species identification from Ginseng drugs by multiplex amplification refractory mutation system (MARMS)”, Planta Med, 70: 189-192 83 Zhu S., Fushimi H., Komatsu K (2008), “Development of a DNA microarray for authentication of Ginseng drugs based on 18S rRNA gene sequence”, J Agric Food Chem., 56, pp 3953–3959 ... đoạn sinh trưởng [26] Do đó, cơng cụ sinh học phân tử hữu ích thích hợp cho nhận diện thảo dược 9 Chương Các kĩ thuật sinh học phân tử ứng dụng nhận diện thảo dược Trong sinh học phân tử, việc nhận. .. tiên tiến, xác hiệu nhận diện thảo dược Tại Việt Nam, việc ứng dụng công cụ sinh học phân tử nhận diện thảo dược mẻ có nghiên cứu sử dụng cơng cụ sinh học phân tử nhận diện thảo dược lưu hành nước... thuật sinh học phân tử sử dụng để nhận diện thảo dược - Bước đầu đánh giá ưu nhược điểm khả áp dụng kĩ thuật sinh học phân tử nhận diện thảo dược 3 Chương Tổng quan trạng nghiên cứu thực hành nhận