ứng dụng sinh học phân tử trong bệnh lý huyết học

[...]... TỔ HỢP GEN E2A/PBX1 E2A (19p13) M BN1 BN2 Neg Pos PBX1 (1q23) 400 bp 373 bp M: Thang chuẩn BN1, BN2: Bệnh nhân Neg: Chứng âm (nước) Pos: Chứng dương TIÊN LƯỢNG XẤU E2A PBX1 QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM DTPT TRONG ALL Chẩn đoán ALL - Lấy 1-2 mL BM / 10 mL PB (blast ≥ 10%) trong heparin/ACD - Chuyển đến phòng XN trong vòng 1-2 tiếng đồng hồ - Nhiễm sắc thể đồ - FISH và RT-PCR Cấy NST không mọc BCR-ABL, MLL-AF4,... bào đi vào quá nhiên (apoptosis) trình biệt hóa Phác đồ phối hợp ATRA hoặc ATO với hóa trị liệu chuẩn  Giảm tỉ lệ tử vong do DIC  Tăng tỉ lệ lui bệnh (75% được chữa lành bệnh) Định Lượng PML/RARA Bằng RQ-PCR Để Theo Dõi Tồn Lưu Tế Bào Ác Tính Trong AML Hematology 2006;2006:505-516 14 BẢNG PHÂN NHÓM NGUY CƠ THEO ĐỘT BIẾN GEN 40 – 50% trường hợp có NST đồ bình thường: Nhóm nguy cơ 46-62% Nữ, blast tủy...46,XY,t(15;17)(q22;q12) TRONG AML-M3 t(15;17)(q22;q12) TẠO RA TỔ HỢP GEN PML/RARA PML (15q22) Pos Neg BN M RARA (17q21) 688 bp (type bcr1) type bcr2 289 bp (type bcr3) bcr1 3 4 5 1264 1335 bcr2 3 bcr3 3 4 1479 5 3 6 1737 405 6 3 ~5% 3 ~40% 1263 PML ~55% RARA M: Thang chuẩn BN: Bệnh nhân Neg: Chứng âm (nước) Pos: Chứng dương (NB4) TIẾN BỘ TRONG ĐIỀU TRỊ AML-M3 PML là promyelocytic... phát ĐA BỘI TRONG ALL 53,XX,+3,+4,+7,+9,+11,+18,+21 ĐA BỘI TRONG ALL 72,XXY,+1,+2,+3,+3,+4,+5,+6,+6,+7,+8,+9,+10,+11,+11, +12,+13,+14,+15,+16,+18,+19,+20,+21,+21,+22 Các rối loạn gen trong đa bội NST/ALL  Giảm biểu hiện gen mã hóa asparagine synthetase (men tổng hợp L-asparagine) Tăng biểu hiện gen SLC19A1 (mã hóa chất vận chuyển MTX vào tb) trên NST 21 tăng tích tụ của MTX polyglutamates trong tế bào... (-) FLT3-ITD(+)/NPM1(+) FLT3-ITD(+)/NPM1(-) Gale RE, 2008;111:2776-278416 ĐỘT BIẾN FLT3-ITD TRONG AML Bệnh nhân nam, 10 tuổi Tủy đồ: tế bào non 35% Chẩn đoán AML-M1 Khảo sát đột biến FLT3 từ exon 14-exon 20 Đột biến p.E611_F612ins13 trên exon 14 của gen FLT3 Tiên lượng xấu ĐỘT BIẾN c-KIT TRONG AML CÓ t(8;21) Bệnh nhân nữ, 37 tuổi Chẩn đoán AML-M2 Có t(8;21) và đột biến c-KIT Hoàn tất điều trị tấn công... 19 TẦN SUẤT CỦA NHỮNG NHÓM TIÊN LƯỢNG Xấu: 34% Tốt: 45% Trung bình: 21% Grimwade, D et al Hematology 2009;2009:385-395 20 QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM DTPT TRONG AML Chẩn đoán AML - Mẫu: 1-2 mL BM / 10 mL PB (blast ≥ 10%) trong heparin/ACD - Chuyển đến phòng XN trong vòng 1-2 tiếng đồng hồ - Nhiễm sắc thể đồ - FISH và RT-PCR PML/RARA, AML1/ETO, CBFB/MYH11 NST đồ bình thường Giải trình tự chuỗi DNA Bất thường... thường - Bất thường số lượng RQ PCR Lặp lại RQ-PCR để theo dõi điều trị PCR tìm IG-TCR RQ-PCR: IG-TCR và Flow cytometry để theo dõi điều trị 30 BẤT THƯỜNG NST VÀ GEN TRONG NHỮNG RỐI LOẠN TĂNG SINH TỦY (MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASMS: MPN) Phân Loại MPN Điển Hình Theo Đột Biến Gen BCR/ABL(+) Bạch cầu mạn dòng tủy (CML) MPN BCR/ABL(-) Đa hồng cầu (95 ~ 97% JAK2V617F) Tăng tiểu cầu nguyên phát (~ 60% JAK2V617F)... t(9;22)(q32;q11) (BCR/ABL) Tiên lượng xấu Bệnh cảnh lâm sàng Hyperdiploidy (>50) Tiên lượng tốt Bất thường Số lượng BC cao, lớn tuổi, thường là nam, và ALL-L2 t(4;11)(q21;q23) (MLL/AF4) Số lượng BC cao và thường < 1 tuổi t(1;19)(q23;p13) (E2A/PBX1) Pre-B (cIg+) Chuyển vị liên quan đến c-myc tại 8q24 với một Ig tại 14q32, 2p12 hoặc 22q11 B-cell ALL hoặc Burkitt leukemia Sử dụng hóa trị liệu tấn công liều cao... theo dõi điều trị Đột biến gien: Không có đột biến gien FLT3, NPM1, c-KIT CEBPA và WT1 RQ-PCR hoặc Flow cytometry 21 để theo dõi điều trị BẤT THƯỜNG NST VÀ GEN TRONG BẠCH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO (ACUTE LYMPHOBLASTIC LEUKEMIA: ALL) Bất Thường NST Trong ALL Nhóm nguy cơ Trisomy NST 4, 10 và/hoặc 17: Tiên lượng rất tốt Bất thường 12p như t(12;21)(p13;q22) (TEL/AML1) 10% của childhood ALL 25% của B-precusor... 50% trường hợp có NST đồ bình thường: Nhóm nguy cơ 46-62% Nữ, blast tủy cao, CD33+ cao nhưng CD34- Đột biến CEBPA 15- 20% AML với NST đồ bình thường và del(9q) FLT3-TKD 10-14% FLT3-ITD Tiên lượng xấu Bệnh cảnh lâm sàng Đột biến NPM1 Tiên lượng tốt Bất thường 28-34% (Exon 14, 15) MLL-PTD 5-10% (Exon 5-11) Tự ghép có thể cải thiện tiên lượng Đột biến WT1 ~ 10% Thường kết hợp với thất bại ở giai đoạn