Ứng dụng sinh học phân tử trong định danh vi tảo thuộc họ scenedesmaceae tại một số thủy vực nước ngọt thành phố đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG ĐỊNH DANH VI TẢO THUỘC HỌ SCENEDESMACEAE TẠI MỘT SỐ THỦY VỰC NƯỚC NGỌT THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG CHU NHẬT HÀ Đà Nẵng, năm 2020 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG ĐỊNH DANH VI TẢO THUỘC HỌ SCENEDESMACEAE TẠI MỘT SỐ THỦY VỰC NƯỚC NGỌT THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG Ngành: Cơng nghệ sinh học Khóa: 2016-2020 Sinh viên: Chu Nhật Hà Người hướng dẫn: TS Nguyễn Minh Lý Đà Nẵng, năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đề tài “Ứng dụng sinh học phân tử định danh vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae thủy vực nước thành phố Đà Nẵng” kết cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, hình ảnh, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Các số liệu liên quan trích dẫn có ghi nguồn gốc rõ ràng Tên sinh viên Chu Nhật Hà i LỜI CÁM ƠN Trong thời gian học tập Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng, trang bị nhiều kiến thức từ đến chuyên ngành công nghệ sinh học Từ việc tiếp thu kiến thức lớp đến việc thực hành, áp dụng kiến thức vào thực tế để khắc sâu kiến thức cho thân có thêm nhiều kinh nghiệm thực tiễn Những chuyến thực tập đem lại cho nhận thức đam mê với ngành nghề sau Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Minh Lý TS Trịnh Đăng Mậu, giảng viên Khoa Sinh – Môi trường, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng, thầy trực tiếp hướng dẫn cách tận tình, bảo suốt thời gian thực nghiên cứu hồn thiện báo cáo khóa luận Tơi vô cảm ơn sâu sắc tới tất thầy giáo, cô giáo, cán Khoa Sinh – Môi trường, trường Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi nghiên cứu Bên cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, người giúp đỡ, ủng hộ động viên suốt thời gian theo học trường nói chung thời gian thực nghiên cứu nói riêng Tơi xin chân thành cảm ơn! ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CÁM ƠN ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii TÓM TẮT viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm hình thái, sinh học vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae 1.1.1 Hình thái cấu tạo, đặc điểm sinh học 1.1.2 Một số ứng dụng vi tảo Scenedesmaceae 1.2 Ứng dụng DNA mã vạch định danh vi tảo CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Phạm vi nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp thu mẫu thực địa 2.3.2 Phương pháp phân lập vi tảo iii 2.3.3 Phương pháp xác định đặc điểm hình thái 2.3.4 Phương pháp tách chiết DNA, khuếch đại PCR 2.3.5 Phương pháp hiệu chỉnh trình tự 2.3.6 Phương pháp xây dựng phát sinh chủng loại CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 10 3.1 Phân lập vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae 10 3.2 Đánh giá hiệu đoạn mồi ITS, rbcL, tufA 12 3.2.1 Kết tách chiết DNA tổng số từ vi tảo họ Scenedesmaceae 12 3.2.2 Khả khuếch đại vùng trình tự gen ITS, rbcL, tufA 12 a Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S1 (Bảng 3.2) 14 b Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S2 (Bảng 3.3) 16 c Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S3 (Bảng 3.4) 17 d Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S4 (Bảng 3.5) 19 e Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S5 (Bảng 3.6) 19 f Kết phân tích trình tự vùng gen mẫu S6 (Bảng 3.7) 20 3.3 Thiết lập phát sinh chủng loại 21 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ADN Acid Deoxyribo Nucleic BLAST Basic Local Alignment Search Tool bp Cặp nucleotit CTAB Cetyltrimethylammonium bromide CS Cộng CSDL Cơ sở liệu dNTP Deoxynucleotide EDTA Ethylendiamin Tetraacetic Acid ESS Estimated sample sizes GenBank Ngân hàng Gen GMYC Generalized mixed Yule-coalescent ITS Internal transcribed spacer PCR Phản ứng khuếch đại gen rbcL Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase RNA Ribonucleic acid Taq Thermus aquaticus TBE Tris/Borate/EDTA TB Tế bào Tm Nhiệt độ nóng chảy v DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Vị trí lấy mẫu Đà Nẵng 2.2 Thông tin đoạn mồi sử dụng cho nghiên cứu 3.1 Bảng tóm tắt danh mục loài phân lập 10 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST vùng gen mẫu S1 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST NCBI mẫu S2 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST NCBI mẫu S3 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST NCBI mẫu S4 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST NCBI mẫu S5 15 17 18 19 20 Kết so sánh trình tự tương đồng BLAST 3.7 21 NCBI mẫu S6 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình vẽ Hình 3.1 3.2 Điện di DNA tổng số từ mẫu vi tảo họ Scenedesmaceae khác Sản phẩm khuếch đại PCR sử dụng cặp mồi khác Trang 12 13 Cây phát sinh chủng loại thể mối quan hệ di truyền 3.3 dòng vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae khuếch đại 23 vùng gen tufA – Cây phát sinh chủng loại thể mối quan hệ di truyền 3.4 dòng vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae khuếch đại 24 vùng gen tufA – Cây phát sinh chủng loại thể mối quan hệ di truyền 3.5 dòng vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae khuếch đại 25 vùng gen rbcL – Cây phát sinh chủng loại thể mối quan hệ di truyền 3.6 dòng vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae khuếch đại 26 vùng gen ITS Cây phát sinh chủng loại thể mối quan hệ di truyền 3.7 dòng vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae khuếch đại vùng gen rbcL – vii 27 TÓM TẮT Một số chi họ Scenedesmaceae loài vi tảo nước phổ biến tìm thấy khắp giới, nguồn vật liệu lý tưởng cho sản xuất nhiên liệu sinh học nhờ lượng lipid đáng kể tế bào Tuy nhiên, đa dạng hình thái thực tế gây nhiều tranh cãi tính dẻo hình thái chi Trên giới có nhiều nghiên cứu sinh học phân tử cho vi tảo họ Scenedesmaceae, nhiên lĩnh vực Việt Nam Do vậy, tiến hành nghiên cứu phân lập đánh giá hiệu đoạn mồi phổ quát tufA – 1, tufA – 2, rbcL – 1, ITS, rbcL – vi tảo họ Scenedesmaceae xác định mối quan hệ di truyền loài Kết định danh cách sử dụng kết hợp đặc tính hình thái sinh học phân tử ghi nhận loài, thuộc chi họ Scenedesmaceae, gồm có: Desmodesmus subspicatus, Acutodesmus reginae, Tetradesmus bernardii, Desmodesmus sp., Pectinodesmus pectinatus, Tetradesmus obliquus Kết cho thấy cặp mồi khuếch đại thành công loài thuộc họ Scenedesmaceae, đồng thời vùng gen ITS chứng minh DNA mã vạch lí tưởng loài A reginae, P pectinatus vùng gen tufA – loài A reginae với mức độ tin cậy 99% Kết khác, cho thấy vùng gen tufA – 1, tufA – khuếch đại vùng trình tự chưa cơng bố lồi T bernardii tufA – cho loài P.pectinatus GenBank Tìm mối quan hệ lồi Scenedesmus obliquus chuyển thành Tetradesmus obliquus nhờ sinh học phân tử viii Các đoạn gen tufA – 1, tufA – 2, rbcL – 1, ITS, rbcL – khuếch đại thành cơng vùng gen lồi vi tảo họ Scenedesmaceae, phân tách thành chi riêng biệt Tuy nhiên, mức độ phân tách chi không chênh lệch ý nghĩa, khó để đánh giá mã vạch DNA hiệu đa dạng vi tảo họ Scenedesmaceae Theo (Zou, Fei, Wang, cs, 2016) cho liên kết mã vạch DNA gồm có rbcL + tufA + ITS + 16S, rbcL + tufA ITS + 16S phân tích GMYC, P ID, PTP, ABGD mã vạch dựa đặc điểm, cho thấy ba liệu gen kết hợp cho tỷ lệ thành công phân giải cao so với gen đơn 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Chúng tơi định danh kết hợp đặc tính hình thái sinh học phân tử ghi nhận lồi, thuộc chi họ Scenedesmaceae, gồm có: Desmodesmus subspicatus, Acutodesmus reginae, Tetradesmus bernardii, Desmodesmus sp., Pectinodesmus pectinatus, Tetradesmus obliquus thủy vực nước thành phố Đà Nẵng Tìm DNA mã vạch lí tưởng loài A reginae, P pectinatus vùng ITS tufA – cho loài A reginae với mức độ tin cậy 99% Những vùng trình tự tufA – 1, tufA – chưa cơng bố lồi T bernadii tufA -2 cho loài P pectinatus Genbank Xác định mối quan hệ loài Scenedesmus obliquus chuyển thành Tetradesmus obliquus nhờ sinh học phân tử KIẾN NGHỊ Đề tài dừng lại việc nghiên cứu vùng gen đơn lẻ cho vi tảo họ Scenedesmaceae Cần có nghiên cứu thêm kết hợp vùng gen nhằm đánh giá mức độ di truyền có độ xác tốt Nghiên cứu thêm phương pháp cải tiến để khám phá ranh giới lồi, bổ sung phân tích cho việc xác định phát sinh chủng loại mã vạch DNA 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Nguyễn Văn Tuyên (2003) Đa dạng sinh học Tảo thủy vực nội địa Việt Nam—Triển vọng thử thách TP HCM: Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp http://113.160.249.209:8080/xmlui/handle/123456789/3689 Tài liệu tiếng anh Algaebase (2000) Desmodesmus abundans (Kirchner) E.H.Hegewald 2000: https://www.algaebase.org/search/species/detail/?species_id=42384&sk=0&from=results Alagaebase (2016) Tetradesmus bernardii (G.M.Smith) M.J.Wynne 2016 https://www.algaebase.org/search/species/detail/?species_id=158055&session=abv4:AC1F22F0115d00A114wx551E337A Algaebase (2000) Desmodesmus subspicatus (Chodat) E.Hegewald & A.W.F.Schmidt in E.Hegewald 2000: 17 https://www.algaebase.org/search/species/detail/?species_id=42443&sk=0&from=results Algaebase (2016) Tetradesmus dimorphus (Turpin) M.J.Wynne 2016: 84 https://www.algaebase.org/search/species/detail/?species_id=158056 Amengual-Morro, C., Moyà Niell, G., & Martínez-Taberner, A (2012) Phytoplankton as bioindicator for waste stabilization ponds Journal of Environmental Management, 95, S71–S76 https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2011.07.008 An, S S., Friedl, T., & Hegewald, E (1999) Phylogenetic Relationships of Scenedesmus and Scenedesmus-like Coccoid Green Algae as Inferred from ITS-2 rDNA Sequence Comparisons Plant Biology, 1(4), 418–428 https://doi.org/10.1111/j.14388677.1999.tb00724.x Bellinger, E G., & Sigee, D C (2015) Freshwater Algae: Identification, Enumeration and Use as Bioindicators John Wiley & Sons Bock, C., Krienitz, L., & Proschold, T (2011) Taxonomic reassessment of the genus Chlorella (Trebouxiophyceae) using molecular signatures (barcodes), including description of seven new species Fottea, 11(2), 293–312 https://doi.org/10.5507/fot.2011.028 30 Campiche, R., Sandau, P., Kurth, E., Massironi, M., Imfeld, D., & Schuetz, R (2018) Protective effects of an extract of the freshwater microalga Scenedesmus rubescens on UV-irradiated skin cells International Journal of Cosmetic Science, 40(2), 187–192 https://doi.org/10.1111/ics.12450 Chodat, R (1926) Scenedesmus: Etude de génétique, de systématique expérimentale et d’hydrobiologie Zeitschrift für Hydrologie, 3(3–4), 71–258 https://doi.org/10.1007/BF02485756 De Clerck, O., Guiry, M D., Leliaert, F., Samyn, Y., & Verbruggen, H (2013) Algal taxonomy: A road to nowhere? Journal of Phycology, 49(2), 215–225 https://doi.org/10.1111/jpy.12020 Elias, M., Nemcova, Y., Skaloud, P., Neustupa, J., Kaufnerova, V., & Sejnohova, L (2010) Hylodesmus singaporensis gen Et sp Nov., a new autosporic subaerial green alga (Scenedesmaceae, Chlorophyta) from Singapore INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY, 60(5), 1224–1235 https://doi.org/10.1099/ijs.0.012963-0 Fama, P., Wysor, B., Kooistra, W H C F., & Zuccarello, G C (2002) MOLECULAR PHYLOGENY OF THE GENUS CAULERPA (CAULERPALES, CHLOROPHYTA) INFERRED FROM CHLOROPLAST tufA GENE1 Journal of Phycology, 38(5), 1040–1050 https://doi.org/10.1046/j.1529-8817.2002.t01-1-01237.x Hadi, S I I A., Santana, H., Brunale, P P M., Gomes, T G., Oliveira, M D., Matthiensen, A., Oliveira, M E C., Silva, F C P., & Brasil, B S A F (2016) DNA Barcoding Green Microalgae Isolated from Neotropical Inland Waters PLoS ONE, 11(2) https://doi.org/10.1371/journal.pone.0149284 Hall, B G (2013) Building Phylogenetic Trees from Molecular Data with MEGA Molecular Biology and Evolution, 30(5), 1229–1235 https://doi.org/10.1093/molbev/mst012 Hall, J D., Fu, K., Lo, C., Lewis, L A., & Karol, K G (2010) An assessment of proposed DNA barcodes in freshwater green algae 29 Hebert, P D N., Cywinska, A., Ball, S L., & deWaard, J R (2003) Biological identifications through DNA barcodes Proceedings of the Royal Society of London 31 Series B: Biological Sciences, 270(1512), 313–321 https://doi.org/10.1098/rspb.2002.2218 Hegewald, E., & Hangata, N (2000) Phylogenetic studies on Scenedesmaceae (Chlorophyta) Algological Studies/Archiv für Hydrobiologie, Supplement Volumes, 100, 29–49 https://doi.org/10.1127/algol_stud/100/2000/29 Hegewald, E., Wolf, M., Keller, A., Friedl, T., & Krienitz, L (2010) ITS2 sequence-structure phylogeny in the Scenedesmaceae with special reference to Coelastrum (Chlorophyta, Chlorophyceae), including the new genera Comasiella and Pectinodesmus Phycologia, 49(4), 325–335 https://doi.org/10.2216/09-61.1 Henrion, B., Tacon, F L., & Martin, F (1992) Rapid identification of genetic variation of ectomycorrhizal fungi by amplification of ribosomal RNA genes New Phytologist, 122(2), 289–298 https://doi.org/10.1111/j.1469-8137.1992.tb04233.x Ji, F., Liu, Y., Hao, R., Li, G., Zhou, Y., & Dong, R (2014) Biomass production and nutrients removal by a new microalgae strain Desmodesmus sp In anaerobic digestion wastewater Bioresource Technology, 161, 200–207 https://doi.org/10.1016/j.biortech.2014.03.034 Johnson, J L., Fawley, M W., & Fawley, K P (2007) The diversity of Scenedesmus and Desmodesmus (Chlorophyceae) in Itasca State Park, Minnesota, USA Phycologia, 46(2), 214–229 https://doi.org/10.2216/05-69.1 Kelly, L J., Ameka, G K., & Chase, M W (2010) DNA barcoding of African Podostemaceae (river-weeds): A test of proposed barcode regions TAXON, 59(1), 251– 260 https://doi.org/10.1002/tax.591023 Krawczyk, K., Szczecińska, M., & Sawicki, J (2014) Evaluation of 11 single-locus and seven multilocus DNA barcodes in Lamium L (Lamiaceae) Molecular Ecology Resources, 14(2), 272–285 https://doi.org/10.1111/1755-0998.12175 Landrum, J T (2009) Carotenoids: Physical, Chemical, and Biological Functions and Properties CRC Press https://doi.org/10.1201/9781420052312 Mandal, S., & Mallick, N (2009) Microalga Scenedesmus obliquus as a potential source for biodiesel production Applied Microbiology and Biotechnology, 84(2), 281– 291 https://doi.org/10.1007/s00253-009-1935-6 32 Nascimento, I A., Marques, S S I., Cabanelas, I T D., Pereira, S A., Druzian, J I., de Souza, C O., Vich, D V., de Carvalho, G C., & Nascimento, M A (2013) Screening Microalgae Strains for Biodiesel Production: Lipid Productivity and Estimation of Fuel Quality Based on Fatty Acids Profiles as Selective Criteria BioEnergy Research, 6(1), 1–13 https://doi.org/10.1007/s12155-012-9222-2 Nguyễn Văn Tuyên (2003) Đa dạng sinh học Tảo thủy vực nội địa Việt Nam—Triển vọng thử thách TP HCM: Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp http://113.160.249.209:8080/xmlui/handle/123456789/3689 Paschma, R., & Hegewald, E (1986) DNA base composition within the genusScenedesmus (Chlorophyta) Plant Systematics and Evolution, 153(3–4), 171–180 https://doi.org/10.1007/BF00983685 Phillips, N., Smith, C M., & Morden, C W (2001) An effective DNA extraction protocol for brown algae Phycological Research, 49(2), 97–102 https://doi.org/10.1111/j.1440-1835.2001.tb00239.x Qin, S., Liu, G.-X., & Hu, Z.-Y (2008) The accumulation and metabolism of astaxanthin in Scenedesmus obliquus (Chlorophyceae) Process Biochemistry, 43(8), 795–802 https://doi.org/10.1016/j.procbio.2008.03.010 Singh, P., Gupta, S K., Guldhe, A., Rawat, I., & Bux, F (2015) Microalgae Isolation and Basic Culturing Techniques Trong Handbook of Marine Microalgae (tr 43–54) Elsevier https://doi.org/10.1016/B978-0-12-800776-1.00004-2 Subhadra, B., & Grinson-George (2011) Algal biorefinery-based industry: An approach to address fuel and food insecurity for a carbon-smart world Journal of the Science of Food and Agriculture, 91(1), 2–13 https://doi.org/10.1002/jsfa.4207 Terry, P A., & Stone, W (2002) Biosorption of cadmium and copper contaminated water by Scenedesmus abundans Chemosphere, 47(3), 249–255 https://doi.org/10.1016/S0045-6535(01)00303-4 Torres, M A., Barros, M P., Campos, S C G., Pinto, E., Rajamani, S., Sayre, R T., & Colepicolo, P (2008) Biochemical biomarkers in algae and marine pollution: A review Ecotoxicology and Environmental Safety, 71(1), 1–15 https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2008.05.009 33 Tsarenko, P M., Hegewald, E., & Braband, A (2005) Scenedesmus-like algae of Ukraine Diversity of taxa from water bodies in Volyn Polissia Algological Studies/Archiv Für Hydrobiologie, Supplement Volumes, 118, 1–45 https://doi.org/10.1127/1864-1318/2006/0118-0001 Wang, H., D.-Z Li, China Plant BOL Group, L.-M Gao, Li, H.-T., Ge, X.-J., Liu, J.-Q., Chen, Z.-D., Zhou, S.-L., Chen, S.-L., Yang, J.-B., Fu, C.-X., Zeng, C.-X., Yan, H.-F., Zhu, Y.-J., Sun, Y.-S., Chen, S.-Y., Zhao, L., Wang, K., … Duan, G.-W (2011) Comparative analysis of a large dataset indicates that internal transcribed spacer (ITS) should be incorporated into the core barcode for seed plants Proceedings of the National Academy of Sciences, 108(49), 19641–19646 https://doi.org/10.1073/pnas.1104551108 Wehr, J D., Sheath, R G., & Kociolek, J P (2015) Freshwater Algae of North America: Ecology and Classification Elsevier Wynne, M J., & Hallan, J K (2015) Reinstatement of Tetradesmus G M Smith (Sphaeropleales, Chlorophyta): Reinstatement of Tetradesmus G M Smith (Sphaeropleales, Chlorophyta) Feddes Repertorium, 126(3–4), 83–86 https://doi.org/10.1002/fedr.201500021 Zou, S., Fei, C., Song, J., Bao, Y., He, M., & Wang, C (2016) Combining and Comparing Coalescent, Distance and Character-Based Approaches for Barcoding Microalgaes: A Test with Chlorella-Like Species (Chlorophyta) PLOS ONE, 11(4), e0153833 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0153833 Zou, S., Fei, C., Wang, C., Gao, Z., Bao, Y., He, M., & Wang, C (2016) How DNA barcoding can be more effective in microalgae identification: A case of cryptic diversity revelation in Scenedesmus (Chlorophyceae) Scientific Reports, 6(1), 36822 https://doi.org/10.1038/srep36822 34 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường BG11 STT Thành phần Dung dịch Stock Hàm lượng Nồng độ cuối (g/200ml) (ml/l) (mM) NaNO3 30 10 17.6 K2HPO4 0.8 10 0.23 MgSO4 7H2O 1.5 10 0.3 CaCl2 2H2O 0.72 10 0.24 C6H8O7 H2O 0.12 10 0.031 C6H8FeNO7 0.12 10 0.021 Na2EDTA 2H2O 0.02 10 0.0027 Na2CO3 0.4 10 0.19 H10Na2O8S2 49,8 1 10 Dung dịch vi lượng Phụ lục Dung dịch vi lượng BG11 STT Thành phần Dung dịch stock (g/l) Nồng độ cuối (mM) H3BO3 2.86 46 MnCl.4H2O 1.81 ZnSO4.7H2O 0.22 0.77 Na2MoO4.2H2O 0.39 1.6 CuSO4.5H2O 0.079 0.3 Co(NO3)2.6H2O 0.0494 0.17 35 Phụ lục Giải trình tự cặp mồi khuếch đại Cặp mồi Lồi tufA – S1 Giải trình tự GGCCTCAAACAAAAGAAGCCATTCTATTAGCAAAACAAGTTGGTGTTCCAAACATGGTTGTTTTTTTAAACAA AGAAGACCAAGTTGATGATCCTGAATTATTAGAATTAGTTGAATTAGAAATTCGTGAAACATTAGATAAATAT GAATTCCCAGGGGATGACATTCCTATTGTAAGCGGTTCACCTTTATTAGCTCTAGAAGCTCTTGTTGAAAACCC TTCACTAAAACGTGGTGAAAACAAATGGGTTGACAAAATTTATGATTTAATGGATCGTGTGGATGAATATATT CCAACACCTGATCGTGAACCAGACAAACCTTTCTTATTAGCTTTCAAGAAGTTTTACTCAATCCCCGGACGGGG AACATTGCCTACGGGTCGGGTTAAACGTGAAACTTAAAAATTGGGGAAAACCTTTAATTTCTGGGATTAAAAA AATCCAAATTCAACTGTTTTACCGGTTCTTGAATGGTTCAAAAAACCTTAAAAAAAACCTTTGGCGGGTGAAAC CTTAGGTTTTTTTTACCTTGGAGTCCAAAAAAAAAATTTTAACCTGGGAAGGTTTTAACCAAACCCGGTTCCAT TACCCCCCCCTACAAATTTTAACCCTAAATTTAAGTTTTACCAAACAAAAAGGGTGGCGGCCCCCCTCCTTTCT TATTAGGTAACCACCACCAATTTTTTATCCTACACACCAAACTTTCCGGGAAAATTGAAAGCTTTTGCCCATAT CCAATTAAAAAAATCCTTCTTCTTTTGCTAAAAAACCTTCCAA S2 GGCCACAAACAAAAGGAAGCACATCTTATTAGCAAAACAAGTAGGTGTACCAAACATGGTTGTTTTCTTAAAC AAAGAAGATCAAGTTGATGATGCTGAATTATTAGAATTAGTAGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGACAAAT ATGAATTCCCAGGAGATGAAATTCCAATTGTAAGTGGTTCAGCTTTATTAGCTTTAGAAGCTTTAGTTGAAAAT CCTAAAATTCAACGTGGTGATAACCCATGGGTAGATAAAATTTTTGATTTAATGGATAAAGTTGATGAATACAT TCCAACACCAGATCGTGAAACTGATAAACCTTTCTTATTAGCTGTTGAAGATGTTTTATCAATTACAGGTCGTG GAACAGTAGCAACAGGACGTGTTGAAAGAGGAACTTTAAAAGTAGGTGAAAACGTTGAATTAGTTGGATTAA AAGATACAAAAGCAACAGTTGTTACAGGTCTAGAAATGTTCAAAAAAACATTAGATGAAACAATGGCTGGTG ACAATGTTGGTGTACTTTTACGTGGTATTCAAAAAAAAGATGTAGAACGTGAAATGGTTTTAGCAAAACCAGG TTCAATTACTCCTCACACAAAATTTGAAGCACAAGTTTATGTTTTAACAAAAGAAGAAGGTGGACGTCATTCAC CATTCTTAGTTGGTTACCAACCACAATTCTTTATCCGTACTACAGATGTTACTGGAAAAATCGTAAGCTTTACTC ACATTCAAATGAAAAACCCTTCATCAGTTGCTGAAGAACATTCAA S3 GGCCGAAAACCCGTAAGCATTCCAGCTGTCCCGTCGGGTTGGCGTTCCGTACGTCGTTGTCTTCATGAACAAGG CTGACATGTTTGACTACTCCAATCTGCTGGAGCTGGTCGAGATGGATTTTCGCAACCTGCTGAGAACCTACAAT TTCCGGGGAGACGACTCTCCTATCATCAGCTGCTCCTCGCTGATGGTTCTAAACTGTGAATATGCCTACGAGCT GGGAACTAGCGCTGTCAAAAAGCTGGTATAAACTCTGGATAGTCTACAGTTCCCGAGCCGGTTCGTGCCATCA ATCGTCCCGATTCCCTGAATGCCCGAATAAAAAGACGTGTTCTCGATCTCCCAGGCATGCGTTTACTGTGGTTA CCGGTCTGTAGATACAAGCGGCGGATATCGTCAAGATCAAGGAAGAAATCTAAATCTTTGGTAAGCGTCCGAC CACCATGACTACCTGCACCGGCAATTGAAGATGTTCTTAAAGCTGTTGAAATGAATGGTACAAAGCTGTTGAA AAATGCAGCGTGTGGCTGCACGGTACCAAGCCTGATAAAGGCAATCGTGAAAAGGTTCTGGCAAAGCGGGGC GCTTTCAACCCGCCCACCATGTTCTACTCTGAATTGAACTTTCTAGTCCAAGGAAATAAGGTGGTCGTCACACC CCATTCTTCAGGGGCTACCGTCTTTATTTCGACTTCCGAACCACTGACCTGACTGGTTCGTGCAAATGGTACTG AAGGCATTTGATATGGTAATGTCCGGGTCGATAATCATCAAACATGTTCTGT S4 GGCCTCAAACAACAGGAACATCTTCTATTAGCAAAGCAAGGCGGACTTCCCAATATGGTGGTTTTTTTAAACA AAGAAGATCAATGTTGATGACCCACAATTATGATAATTATTTGAACTTGAAATTCGCGAAACATGATATCGAC CTGAGTTTCCAGGGGAGGACATTCCACTTGTAAGTGGATCTGCTTTATTAGCTTTAGAAGCTCTTGTTGAAAAT TCATCATGCAAACGTGTTCATAATAAATGGGTTGACAAAATTGATGATTTAATGCATCAAGTTGATAAATATAT TCCAACTCCAGATCGTGAAGCTGACAAACCATTTTTATTAGCTCTCGAGCAGGTATTATCAATTACCGGACGTG GAACAGTGGCTACTGGTCGGGAACAAGGAGGAACTCTAAAAGTTGGGGAAACCTTTGACTTCCTTGGATTAAA ACACACAAATTCAACTGTTGTTACTGGTCTTGAAATGTTGAAAAGAACATTAGAACAAACGATTGCTGGTGAT AATGTCCGTGTTCTTTTACGTGGAATTCAAAAAAAATATGTTCCAACCTGGAATGGTTTTAGCAAAACCCGGGT CAATTACCCCACACGCAAATTTTGACCCACAAGTTTAGGTTTCAACAAACCAAGAAGGTGGACGTCATCCACC TTTCTTACTTGGACACCACCCCCAATTTTTCATTCTTACTACTAGATGTCACTGGAAAATTTGTAGGTTTTACAC 36 ATATCCCAAATGACAAAACCCTTTGTTCTGTTGCATCAAGAGCATTCAC S5 GGCCACAAACAAAAGAACACATTCTATTAGGCAAAACAAGTTGGTGTACCAAATATGGTTGTTTTCTTAAACA AAGAAGATCAAGTTGATGATGCTGAATTATTAGAATTAGTTGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGATAAATA TGAATTCCCAGGTGACGAAATTCCAGTTGTAAGTGGGTCAGCATTATTAGCTTTAGAAGCTCTTGTTGAAAACC CTACTCTAAAACGCGGTGAAAACAAGTGGGTTGATAAAATCCACGCCTTAATGGAAAATGTTGATAGCTATAT TCCAACACCAAGCCGTGAAACAGATAAGCCTTTCTTATTAGCTGTTGAAGATGTTTTATCAATTACAGGTCGTG GTACAGTAGCAACAGGACGTGTTGAAAGAGGAACATTAAAAGTAGGTGAAAACGTGGAATTAGTTGGTTTAA AAGATACAAAATCAACAGTTGTTACAGGTCTTGAAATGTTTAAGAAAACATTAGAAGAAACACTTGCTGGTGA TAATGTTGGTGTACTTTTACGTGGGATTCAAAAAAAAGATGTTGAACGTGGAATGGTTTTAGCAAAACCAGGT TCTATTACTCCACACACAAAATTTGAAGCACAAGTTTATGTTTTAACAAAAGAAGAAGGTGGTCGTCACTCACC ATTTTTAGTAGGTTATCAACCGCAATTCTTTATTCGTACAACAGATGTTACTGGAAAAATTGAAAGCTTTAGTC ATATTCAAATGAAAAATCCTTCTTCAGTAGCTGAAGAACATTCAA S6 GGCCACAAACAAAAGAAGCACATTCTTATTAGGCAAAACAAGTTGGCGTTCCAAACATGGTTGTTTTCTTAAA CAAAGAAGATCAAGTCGATGATGCTGAATTATTAGAATTAGTTGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGATAAA TACGAATTCCCAGGGGATGAAATTCCAGTTGTAAGCGGTTCACCCTTATTAGCCCTTGAAGCTCTTGTTGAAAA CCCTTCTCTAAAACGTGGTGAAAACAAATGGGTTGACAAAATTCACGCGTTAATGGAAAATGTTGATAGCTAT ATTCCAACACCAAGTCGTGAAACAGATAAACCTTTCCTACTAGCAGTTGAAGATGTTTTATCGATTACAGGTCG TGGTACAGTTGCGACAGGACGTGTTGAAAGAGGAACTTTAAAAGTTGGTGAAAACGTTGAATTAGTGGGATTA AAAGACACGAAATCAACAGTTGTTACAGGTCTTGAAATGTTTAAAAAAACATTAGAAGAAACTCTTGCTGGTG ATAACGTTGGTGTTCTTTTACGTGGTATTCAAAAAAAAGATGTTGAACGTGGGATGGTATTAGCAAAACCAGG TTCAATTACTCCACACACAAAATTTGAACCACAAGTTTATGTTTTAACAAAAAAAAAAGGTGGGCGACACTCA CCATTTTTAGTTGGGTATCAACCACAATTCTTTATTCGTACAACATATGTTACTGGAAAAATTGAAAGCTTTAG TCACATTCAAATGAAAAACCCGTCTTCAGTTGCTGAAGAACATTCAA tufA – S1 CAAAACAAGTTGGTGTTCCAAACATGGTTGTTTTCTTTAAACAAAGAAGACCAAGTTGATGATGCCTGAATTAT TAGAATTAGTTGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGATAAATATGAATTCCCAGGAGATGACATTCCTATTGTT AGCGGATCAGCCTTATTAGCCCTAGAAGCTCTTGTTGAAAATTCTTCTCTCAAACGTGGTGATAACAAATGGGT TGACAAAATTTATGATTTAATGGATAATGGTGGATGAATATATTCCCACCCCCTGACCTGGAAACAAACAACC CTTTCTACTAACCTGTGGAAAAGGTTTAACCATTCCCAGGCCTGGTACCATTACCACCAGGTCTGGTGGAACAT GATCCATTAAAATTGGTGAAAACCTTTAAATTATGGGAATTAAAAAATCCAAATCCACCATTGGTTCCTGTCCT GGAAAGGTTAAAAAAACCATAAAATAAACCCATGATGGGGGATACCCTAGGGGTCCTTTTCCTGGTATTCCAA AAAAAAAATATTGACCGTGGAAGGGATTTACCAAACCCTGGTTCATTTCCTCCTCATACAAAATTTGAACCTCA GTTTTAGGTTTTAACAAAAAAAAAAGGGGCGACTCTCTCTCCTTTCTTATTGGGATCTCACCCCACTTTTCTATA TTCTACACTACATACTTTACTGGAAAAATTGAACTTTTACACATTCCATGTGAA S2 CAAAACAAGTAGGTGTACCAAACATGGTTGTTTTCTTAAACAAAGAAGATCAAGTTGATGATGCTGAATTATT AGAATTAGTAGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGACAAATATGAATTCCCAGGAGATGAAATTCCAATTGTA AGTGGTTCAGCTTTATTAGCTTTAGAAGCTTTAGTTGAAAATCCTACAATTCAACGTGGTGATAACCCATGGGT AGATAAAATTTTTGATTTAATGGATAATGTTGATGAATACATTCCAACACCAGATCGTGAAACTGATAAACCTT TCTTATTAGCTGTTGAAGATGTTTTATCAATTACAGGTCGTGGAACAGTAGCAACAGGACGTGTTGAAAGAGG AACTTTAAAAGTAGGTGAAAACGTTGAATTAGTTGGATTAAAAGATACAAAATCAACAGTTGTTACAGGTCTA GAAATGTTCAAAAAAACATTAGATGAAACAATGGCTGGTGACAATGTTGGTGTACTTTTACGTGGTATTCAAA AAAAAGATGTAGAACGTGGAATGGTTTTAGCAAAACCAGGTTCAATTACTCCTCACACAAAATTTGAAGCACA AGTTTATGTTTTAACAAAAGAAGAAGGTGGACGTCATTCACCATTCTTAGTTGGTTACCAACCACAATTCTTTA TCCGTACTACAGATGTTACTGGAAAAATCGTAAGCTTTACTCACATTCAAATGAA S3 GGCCCTGTTGGCCGAAACCCGTAGAGCATTCCGCAGCTGTCCCGTACGGGTTGGCGTTCCGTACGTCGTTGTCT 37 TCATAAACAAGGCGGACATGTTTGACTACTCCAATCTGCTGGAGCTGGTCGAGATGGATTTTCGCAACCTTCTG AGAACCTACAATTTCCGGGAGACGAGCTCTCCTAGCATCAGCTTGCTCCTCGCTGATGGTTCTAAACTGTGAAT ATGCCTACGAGCTGGGAACTAGCGCTTTCAAAAAGCTGGTATAAACTCTGGATAGTCTACAGTTCCCGAGCCG GTTCGTGCCATCAATCGTCCCGATTCCCTGAATGCCCGAATAATAAGACGTGGTCTCGATCTCGCAGGCATGCG TTTACTGTGGTTACCGGTCTGTAGATACAAGCGGCGGATATCGTCAAGATCAAGGAAGAAATCTAAATCTTTG GTAAGCGTCCGACCACCATGACTACCTGCACCGGCAATTGAAGATGTTCTTAAAGCTGTTGAAATGAATGCTA CAAAGCTGTTGAATAATGCAGCGAGTGGCTGCACGGTACCAAGNCTGATAAAGGCAATCGTGAAAAGGTTCTG GCAAAGCGGGGCGCTTTCAACCCGCCCACCATGTTCTACTCTGAATTGAACTTTCTNGGTCCAAGGNAGATAA GGTGGTCGTCACACCCCATTCTTCAGGAGCTACCGTCTTTATGTCGACTTCCGAAGCACTGACCTGACTGGTTC GTGCAAATGGTACTGAAGGCATTTGATATAGGTAATGTCCGGGTCGATAATCATCAAACATGTTNTGTTACCTG TGATCACCAACCATATCGCATATGAAAGGACGGACTGCGGTTACGCTATTTCGAAGAAGGTGGGTCCCAATTA ATTTACTACAGGTACCTGGTTGAAAAAAGGAATGCATTTTCGCTATTTCGAGAAAGGAA S4 CAAAACAAGTCGGAGTTCCAAATATGGTGGTTTTTTTAAACAAAGAAGATCAAGTTGATGACCCAGAATTATT AGAATTAGTTGAACTTGAAGTTCGTGAAACATTAGATCGATATGAGTTTCCAGGTGATGACATTCCAATTGTAA GTGGATCTGCTTTATTAGCTTTAGAAGCTCTTGTTGAAAATTCATCAATCAAACGTGGTGATAATAAATGGGTT GACAAAATTTATGATTTAATGGATCAAGTTGATAAATATATTCCAACTCCAGATCGTGAAACTGACAAACCATT TTTATTAGCAGTTGAAGATGTATTATCAATTACTGGACGTGGAACTGTTGCTACAGGTCGTGTAGAAAGAGGA ACTCTAAAAGTTGGTGAAAACGTTGAATTAGTTGGATTAAAAGACACAAAATCAACTGTTGTTACTGGTCTTG AAATGTTTAAAAAAACATTAGAAGAAACGATTGCAGGTGATAATGTAGGTGTTCTTTTACGTGGTATTCAAAA AAAAGATGTTGAACGTGGAATGGTTTTAGCAAAACCAGGGTCAATTACTCCTCACACAAAATTTGAAGCACAA GTTTATGTTTTAACAAAAGAAGAAGGTGGACGTCATTCACCTTTCTTAGTTGGATACCAACCACAATTTTTCAT TCGTACTACTGATGTGACTGGAAAAATTGTAAGTTTTACACATATCCAAATGAA S5 CTCTACGGGTTGTAGTCTCTGGCGTCTGAATTGGCATGAAGGCAGAACTTGTTATATTGAGCTTAACATATGAC AGTGTAGACCACTGGGCCTCGGATCTATGCTCATGGTTGGGATAGGGCCGGATCAATTGGCATCCCCCTCTGTT CTGCTTGCTTACAATATCGTCGCATAATACGCTTAACTCCACCCGGTGGACCTGGTGGCAACGATGCTGGTCGG TGTTCAGGCCAACCAGTTTGGGAATGACCTCAACACACCTACGCAGGCTGCCTCACTTGAAGGCGGTGGCGGG CGTGGTCTGCGCTTGCACCCACTAGAATCGATACACCTCTCTCTCTCGCGGGACACTTTGTAAGACCGGTACCT TTCATCTCTACGTACTTCACCTCAATGGGTTAGGTTATGAATCGGCCAAACCAATCAGTCTTCTACCAGATCAA AAAGACTTATCTTAGTTGTGTTGGGTTGTTATAACTTATTCTGCATAGACATTTACGTAAGTGTCTAACGTGGA AGTTCCTTGCCTTTCTTTCATAGCCGAACTTTTAATCTTGCTCAATGGTTCCGGGATTGCAGTT S6 CAAAACAAGTTGGCGTTCCAAACATGGTTGTTTTCTTAAACAAAGAAGATCAAGTCGATGATGCTGAATTATT AGAATTAGTTGAATTAGAAGTTCGTGAAACATTAGATAAATACGAATTCCCAGGGGATGAAATTCCAGTTGTA AGCGGTTCAGCCTTATTAGCCCTTGAAGCTCTTGTTGAAAACCCTTCTCTAAAACGTGGTGAAAACAAATGGGT TGACAAAATTCACGCGTTAATGGAAAATGTTGATAGCTATATTCCAACACCAAGTCGTGAAACAGATAAACCT TTCCTACTAGCAGTTGAAGATGTTTTATCGATTACAGGTCGTGGTACAGTTGCGACAGGACGTGTTGAAAGAG GAACTTTAAAAGTTGGTGAAAACGTTGAATTAGTGGGATTAAAAGACACGAAATCAACAGTTGTTACAGGTCT TGAAATGTTTAAAAAAACATTAGAAGAAACTCTTGCTGGTGATAACGTTGGTGTTCTTTTACGTGGTATTCAAA AAAAAGATGTTGAACGTGGGATGGTATTAGCAAAACCAGGTTCAATTACTCCACACACAAAATTTGAAGCACA AGTTTATGTTTTAACAAAAGAAGAAGGTGGGCGACACTCACCATTTTTAGTTGGGTATCAACCACAATTCTTTA TTCGTACAACAGATGTTACTGGGAAAATTGAAAGCTTTAGTCACATTCAAATGAA rbcL – S1 AATCATCAACTGGTACTTGGACAACTGTATGGACTGACGGTCTTACTACATTAGACCGTTACAAAGGTCGTTGT TACGATATCGAACCGGTTCCAGGTGAAGACAATCAGTACATCGCGTACGTAGCTTACCCAATCGACCTGTTTG AAGAAGGATCAGTTACTAACTTATTCACTTCAATTGTAGGGAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCTTTA CGTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGCTTATGCAAAAACATTCTTAGGACCTCCACATGGTATCCAAGTTGA ACGTGACAAACTAAACAAATACGGTCGTGGCTTATTAGGTTGTACTATTAAACCAAAATTAGGTTTATCAGCG AAAAACTACGGTCGTGCTGTTTACGAGTGTTTACGTGGTGGTTTAGACTTCACAAAAGATGATGAAAACGTAA ACTCACAACCATTCATGCGTTGGAGAGACCGTTTCTTATTCGTAGCTGAAGCTTGTTACAAAGCTCAAGCCGAA 38 ACTGGTGAAATTAAAGGGCACTACTTAAACGCTACTGCTGGGACTTGCGAAGAAATGTTAAAACGTGCTCAAT GTGCTAAAGAATTAGGTGTACCTATTATTATGCACGACTACTTAACAGGTGGTTTCATGCAAACACTTCTTTAG CTTCTTACTGTCGTGACCACGGTTTATTATTACACATTCACCGTGCTATGCACGCTGTAATTGACCGTCAAAGA AACCACGGTATTCACTTCCGTGTTTTAGCAAAAACTTTACGTATGTCTGGTGGTGACCACTTACACTCAGGAAC TGTAGTTGGTAAATTAGAAGGTGAACGTGAAGTAACTTTAGGTTTCGTTGACTTAATGCGTGATGACTACATCG AAAAAGATCGTAGCCGTGGTATTTACT S2 AATCATCAACAGGTACTTGGACAACTGTATGGACTGATGGTCTTACTACATTAGACCGTTACAAAGGTCGTTGT TACGATATCGAACCGGTACCGGGTGAAGACAACCAATACATTGCTTATGTAGCATACCCAATCGATCTTTTTGA AGAAGGATCAGTAACAAACTTATTCACTTCAATCGTAGGAAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCATTAC GTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGCTTACGTTAAAACATTCCAAGGACCTCCACACGGTATCCAAGTTGAA CGTGACAAATTAAACAAATATGGTCGTGGTTTATTAGGTTGTACAATTAAACCTAAATTAGGTTTATCAGCTAA AAACTATGGACGTGCTGTTTATGAATGTTTACGTGGTGGTTTAGACTTTACAAAAGATGATGAAAACGTAAACT CACAACCATTCATGCGTTGGAGAGACCGTTTCTTATTCGTTGCTGAAGCTATTTACAAAGCTCAGTCTGAAACT GGTGAAATTAAAGGTCACTACTTAAACGCTACTGCTGGTACTTGTGAAGAAATGTTAAAACGTGCTCAATGTG CTAAAGAACTAGGTGTACCTATTATTATGCACGACTACTTAACAGGTGGTTTTACAGCTAACACTTCATTAGCT GCTTACTGTCGTGATCACGGTTTATTATTACACATTCACCGTGCTATGCACGCGGTTATTGACCGTCAAAGAAA CCACGGTATTCACTTCCGTGTATTAGCTAAAGCTCTACGTATGTCAGGTGGTGACCACTTACACTCAGGAACTG TAGTTGGTAAATTAGAAGGTGAACGTGAAGTTACTTTAGGTTTCGTAGACTTAATGCGTGACGACTACATCGA AAAAGACCGTAGCCGTGGTATTTACT S3 AATCATCAACCTGGTACTTGTTAAACTGTATGGACTGACGGTCTTACTACATTAGACCGTTACAAAGGTCGTTG TTACGATATCGAACCGGTTCCAGGTGAAGACAATCAGTACATCGCGTACGTAGCTTACCCAATCGACCTGTTTG AAGAAGGATCAGTTACTAACTTATTCACTTCAATTGTAGGGAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCTTTA CGTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGNCTTATGCAAAAACATTCTTAGGACCTCCACATGGTATCCAAGTTG AACGTGACAAACTAAACAAATACCGTCGTGGCTTATTAGGTTGCACATATTAAACCAAAACTAGGTTTATCAC CAAAACACCAAGGCGGTGATGCTTATGACTGTCTACGCGATCCGTGACATTTCCGAGTGCGGGGTGCTCACGG AGACTCACTACCTGGCATGTGCTGCAGACGCCCGTGCCCTACTACGTATCTACAGCGCTGTACACTTTCCTCAC ACTGA S4 AATCAATCAACAGGTACTTGGACAACTGTATGGACTGACGGTCTTACAACTTTAGACCGATACAAAGGGCGTT GTTATGATATTGAACCGGTTCCAGGTGAAGACAACCAATACATTGCATATGTTGCATACCCTATTGACCTATTT GAAGAAGGATCAGTTACAAACTTATTCACTTCAATTGTAGGAAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCATT ACGTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGCATATGTAAAAACGTTCCAAGGGCCTCCTCATGGTATTCAAGTTG AACGTGACAAATTAAACAAATATGGTCGTGGATTACTTGGTTGTACGATCAAACCAAAATTAGGTTTATCTGC AAAAAACTATGGGCGTGCTGTGTATGAGTGTTTACGTGGTGGTCTTGATTTTACAAAAGATGATGAAAACGTA AACTCACAACCATTTATGCGTTGGAGAGACCGTTTCTTATTTGTTGCAGAAGCTTGTTACAAAGCTCAAGCCGA AACAGGTGAAATTAAAGGGCATTATTTAAATGCGACTGCAGGTACATGTGAAGAAATGTTAAAACGTGCTCAA TGTGCAAAAGAATTAGGTGTGCCTATCATTATGCACGACTACCTTACTGGAGGTTTTACAGCAAACACTTCTTT AGCAACTTATTGTCGTGACCATGGTCTATTATTACACATTCACCGTGCTATGCACGCTGTTATTGACCGTCAAA GAAACCATGGTATTCACTTCCGTGTTTTAGCAAAAGCTTTACGTATGTCAGGTGGTGACCACTTACACTCAGGT ACTGTAGTTGGTAAATTAGAAGGTGAACGTGAAGTAACTTTAGGTTTCGTAGACTTAATGCGTGATGATTATAT TGAAAAAGATCGTAGCCGTGGTATTTACT S5 AATCATCAACTGGTACTTGGACAACTGTATGGACTGACGGTCTTACTACATTAGACCGTTACAAAGGTCGTTGT TACGATATCGAACCGGTTCCAGGTGAAGACAATCAGTACATCGCGTACGTAGCTTACCCAATCGACCTGTTTG AAGAAGGATCAGTTACTAACTTATTCACTTCAATTGTAGGGAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCTTTA CGTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGCTTATGCAAAAACATTCTTAGGACCTCCACATGGTATCCAAGTTGA ACGTGACAAACTAAACAAATACGGTCGTGGCTTATTAGGTTGTACTATTAAACCAAAATTAGGTTTATCAGCG AAAAACTACGGTCGTGCTGTTTACGAGTGTTTACGTGGTGGTTTAGACTTCACAAAAGATGATGAAAACGTAA ACTCACAACCATTCATGCGTTGGAGAGACCGTTTCTTATTCGTAGCTGAAGCTTGTTACAAAGCTCAAGCCGAA 39 ACTGGTGAAATTAAAGGGCACTACTTAAACGCTACTGCTGGGACTTGCGAAGAAATGTTAAAACGTGCTCAAT GTGCTAAAGAATTAGGTGTACCTATTATTATGCACGACTACTTAACAGGTGGTTTCACTGCAAACACTTCTTTA GCTTCTTACTGTCGTGACCACGGTTTATTATTACACATTCACCGTGCTATGCACGCTGTAATTGACCGTCAAAG AAACCACGGTATTCACTTCCGTGTTTTAGCAAAAACTTTACGTATGTCTGGTGGTGACCACTTACACTCAGGAA CTGTAGTTGGTAAATTAGAAGGTGAACGTGAAGTAACTTTAGGTTTCGTTGACTTAATGCGTGATGACTACATC GAAAAAGATCGTAGCCGTGGTATTTACT S6 AATCATCAACTGGTACTTGGACAACTGTATGGACTGACGGTCTTACTACATTAGACCGTTACAAAGGTCGTTGT TACGATATCGAACCGGTTCCAGGTGAAGACAATCAGTACATCGCGTACGTAGCTTACCCAATCGACCTGTTTG AAGAAGGATCAGTTACTAACTTATTCACTTCAATTGTAGGGAACGTATTTGGTTTCAAAGCTCTTCGTGCTTTA CGTTTAGAAGATTTACGTATTCCTCCTGCTTATGCAAAAACATTCTTAGGACCTCCACATGGTATCCAAGTTGA ACGTGACAAACTAAACAAATACGGTCGTGGCTTATTAGGTTGTACTATTAAACCAAAATTAGGTTTATCAGCG AAAAACTACGGTCGTGCTGTTTACGAGTGTTTACGTGGTGGTTTAGACTTCACAAAAGATGATGAAAACGTAA ACTCACAACCATTCATGCGTTGGAGAGACCGTTTCTTATTCGTAGCTGAAGCTTGTTACAAAGCTCAAGCCGAA ACTGGTGAAATTAAAGGGCACTACTTAAACGCTACTGCTGGGACTTGCGAAGAAATGTTAAAACGTGCTCAAT GTGCTAAAGAATTAGGTGTACCTATTATTATGCACGACTACTTAACAGGTGGTTTCACTGCAAACACTTCTTTA GCTTCTTACTGTCGTGACCACGGTTTATTATTACACATTCACCGTGCTATGCACGCTGTAATTGACCGTCAAAG AAACCACGGTATTCACTTCCGTGTTTTAGCAAAAACTTTACGTATGTCTGGTGGTGACCACTTACACTCAGGAA CTGTAGTTGGTAAATTAGAAGGTGAACGTGAAGTAACTTTAGGTTTCGTTGACTTAATGCGTGATGACTACATC GAAAAAGATCGTAGCCGTGGTATTTACT ITS S1 ATGCAAGCATGTTTCCTGCTTGGCTCCTAACAAAGTCCACAAGCCACAACTTCGTGTAGTCGGCAGAAGCCGG TGCTACCTATCCAGTTGAAGCCCATATCGGGTCCCTGTTTAAGCCTCTAAACTTCAGCCAACCCAACCCGCCAG AGCGGTTTGGGGAAGCCAGATCCACCCCTGAGGCTGGCTAGCAAGCCAACCGACCCACACAAGGAGGGAGGG GTGAGGGTGTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTGCCCGAGGGCTCGAGCGCAATATGCGTTCAAAGAT TCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCCA AGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTCTTTGGTTAAGACCGCCAGTTAATAGCAGTCAGAACTTCAGATTTTGGTTT TGACAGTGGTTAGCACTGGTGTATGGTCATGCCAAAGCGCCACTGACACCGGCAGCAATGCCGATGCCAGCTG CAAGTAGCAACGAGCGGTTAGCCCGTTGCCCCGCTGGCAGCAGAGGCACGGAACGTTGAGGTTCACATTGTGG TTTTTATAATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCC S2 ATGCAAAGCATGTTTCCTGCTTGGCCTCTAGCAAAGTCCACAAGCTACAACTTCGTGTAGTCGGCAGAAGCCG GTGCTACCTATCCAGTTGAAGCCCATATCGGGTCCTTGCTTAAGCCTCTAAGCTTCAGCCAACCCAATCAGAGT AAACTAATTGGGAAAGCCAGATCCACTCCTAAGGCCAGCAGAGAGCTAACCAGCTCTCCAAAAGGAGAGAGG GGTGAGGGTATAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTGCCCGAGGGCTCGAGCGCAATATGCGTTCAAAGA TTCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCC AAGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTCTTTGGTTAAGATTGCCAATTAATAGCAATCAAAGCTTCAGAGTTTGGTT TTGACAGTGGTTAGCACTGGTGTATAAGCATGCCAGAGCGCCACTGATGCAAGTAATAAAACTCGCACCAGCT TGCAAGTACAATCAGGCTAAGCTGATTGCCTTGCTGGCAGCAAAGGCACGGAACAATAAGGTTCACATTGTGG TTTTAATAATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCT S3 AATGTTAAACTACTCCAATCTGCTGGAGCTGGTCGAGATGGATTTTCGCAACCTTGCTGAGAACCTACAATTTC CGGGGAGACGACTCTCCTATCATCAGCTGCTCCTCGCTGATGGTTCTAAACTGTGAATATGCCTACGGTGAGCT GGGAACTAGCGCTGAAAAAGCTGGTAAAACTCTGGATAGTCTACAGTTCCCGAGCCGGTTCGTGCCATCAATC GTCCCGATTCCCTGTGAATGCCCGAAAAAGACGTGTTCTCGATCTCCCAGGCATGCGTTTACTGTGGTTACCGG TCTGTAGATACAAGCGCGGATATCGTCAAGATTAAGGAAGAGATCTAAATCTTTGTTAAGCGTCCGACCACCA TGACTACCTGCACAGGCAATTGAAGATGTTGTTAAAGCTGTTGAAATGTATGGTACAAGCTGTTTGAAAAATG CAGCGTGTGGCTGCACGGTACCAAGTTCTGATAAAGGCAATCGTGAAAAGGTTCTGGCAAAGCGGGGCGCTTT CAACCCGCCCACCATGTTCTACTCTGAATTGAACTTTCGAGTCCAAGGTTAATAAGGTGGTCGTCACACTCCAT TCTTCAGGGGCTACCGTCTTTATTTCGACTTCCGAACCACTGACCTGACTGGCAAATGGG 40 S4 AAGTAAAACTTGATTCCTGCTTGGCCCCTAACCAGGTCCACTGACACAACTTCGTGTAGGCACTTTGCACAAGG CAAAGCGGAGCTACCTATCCAGTTGAGCCCATATCGGGTCCCAGTTTAAGCCTCTGTGCTTCAACCAACCCAAT TGATGCTAGGCATGTATTGGGGAGGTCAGATCCATCCCAACAATTGGCTTGAGCAAGCCAATCAGACCCATAA AATATATGGGGAGGGATGAGGTTTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTCCCCGAAGGGTCGAGCGCAAT ATGCGTTCAAAGATTCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATC GTTGCGAGAGCCAAGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTTCTCGGTTAAGATTGCCAATTAATAGCAACCATAGCTT CAGAGTTTGGTTTGTCATTGAGTTTATCATGGTGTGTAAAAAGCAGGGCCACTTGCCTTTCGGCATGCAACCCC AGGTCGAACACCAAATAGTTTAAGTGCGTGTTGTGGTTTGCATATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCC S5 ATGCAAAGCATGTTTCCTGCTTGGCCCCTAACAAAGTCCACAAGCCACAACTTCGTGTAGTCGGCAGAAGCCG GTGCTACCTATCCAGTTGAAGCCCATATCGGGTCCTTGTTTCAGCCTCTAAACTTCAGCCAACCCAACCTGCCG GAGCAGTTTGGGGAAGCCAGATCCACCCCTAAGGCTGGCTAGCAAGCCAACCGACCCACACAAGGAGGGAGG GGTGAGGGTGTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTGCCCGAGGGCTCGAGCGCAATATGCGTTCAAAGA TTCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCC AAGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTCTTTGGTTAAGACCGCCAGTTAATAGCAGTCAGAACTTCAGATTTTGGTT TTGACAGTGGTTAGACTGGTGTAAGGTCATGCCAAAGCGCCACTGGCAACGGCAGCAATGCCGATGCCAGCTG CAAGTAACAACGAGCTGAAAGCCCGTTGCCCCGCTGGCAGCAGAGGCACGGAACGTTGAGGTTCACATTGTGG TTTTTATAATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACC S6 ATGCAAGCATGTTTCCTGCTTGGCTCCTAACAAAGTCCACAAGCCACAACTTCGTGTAGTCGGCAGAAGCCGG TGCTACCTATCCAGTTGAAGCCCATATCGGGTCCCTGTTTAAGCCTCTAAACTTCAGCCAACCCAACCCGCCAG AGCGGTTTGGGGAAGCCAGATCCACCCCTGAGGCTGGCTAGCAAGCCAACCGACCCACACAAGGAGGGAGGG GTGAGGGTGTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTGCCCGAGGGCTCGAGCGCAATATGCGTTCAAAGAT TCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCCA AGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTCTTTGGTTAAGACCGCCAGTTAATAGCAGTCAGAACTTCAGATTTTGGTTT TGACAGTGGTTAGCACTGGTGTATGGTCATGCCAAAGCGCCACTGACACCGGCAGCAATGCCGATGCCAGCTG CAAGTAGCAACGAGCGGTTAGCCCGTTGCCCCGCTGGCAGCAGAGGCACGGAACGTTGAGGTTCACATTGTGG TTTTTATAATTCAATGATCCTTCCGCAGGTCACCC rbcL – S1 GAATCCACCAGAAGCTACTGGCATAGTCCCTGCTAAAGAACACCAGTCTTGAGTGAAGTAAATACCACGGCTA CGATCTTTTTCGATGTAGTCATCACGCATTAAGTCAACGAAACCTAAAGTTACTTCACGTTCACCTTCTAATTTA CCAACTACAGTTCCTGAGTGTAAGTGGTCACCACCAGACATACGTAAAGTTTTTGCTAAAACACGGAAGTGAA TACCGTGGTTTCTTTGACGGTCAATTACAGCGTGCATAGCACGGTGAATGTGTAATAATAAACCGTGGTCACGA CAGTAAGAAGCTAAAGAAGTGTTTGCAGTGAAACCACCTGTTAAGTAGTCGTGCATAATAATAGGTACACCTA ATTCTTTAGCACATTGAGCACGTTTTAACATTTCTTCGCAAGTCCCAGCAGTAGCGTTTAAGTAGTGCCCTTTAA TTTCACCAGTTTCGGCTTGAGCTTTGTAACAAGCTTCAGCTACGAATAAGAAACGGTCTCTCCAACGCATGAAT GGTTGTGAGTTTACGTTTTCATCATCTTTTGTGAAGTCTAAACCACCACGTAAACACTCGTAAACAGCACGACC GTAGTTTTTCGCTGATAAACCTAATTTTGGTTTAATAGTACAACCTAATAAGCCACGACCATATTTGTTTAGTTT TGGTCACGA S2 TGAATCACCAGAAGCAACTGGCATAGTACCTGACATAGAACACCAGTCTTGAGTGAAGTAAATACCACGGCTA CGGTCTTTTTCGATGTAGTCGTCACGCATTAAGTCTACGAAACCTAAAGTAACTTCACGTTCACCTTCTAATTTA CCAACTACAGTTCCTGAGTGTAAGTGGTCACCACCTGACATACGTAGAGCTTTAGCTAATACACGGAAGTGAA TACCGTGGTTTCTTTGACGGTCAATAACCGCGTGCATAGCACGGTGAATGTGTAATAATAAACCGTGATCACG ACAGTAAGCAGCTAATGAAGTGTTAGCTGTAAACCACCTGTTAAGTAGTCGTGCATAATAATAGGTACACCTA GTTCTTTAGCACATTGAGCACGTTTTAACATTTCTTCACAAGTACCAGCAGTAGCGTTTAAGTAGTGACCTTTA ATTTCACCAGTTTCAGACTGAGCTTTGTAAATAGCTTCAGCAACGAATAAGAAACGGTCTCTCCAACGCATGA ATGGTTGTGAGTTTACGTTTTCATCATCTTTTGTAAAGTCTAAACCACCACGTAAACATTCATAAACAGCACGT CCATAGTTTTTAGCTGATAAACCTAATTTAGGTTTAATTGTACAACCTAATAAACCACGACCATATTTGTTTAGT TTTTGTCACGA 41 S3 GGAACCACCAGAAGCAACTGGCATAGTACCTGACATAGAACACCAATCTTGAGTGAAGTAAATACCACGACT ACGGTCTTTTTCGATGTAGTCGTCACGCATTAAGTCTACGAAACCTAAAGTAACTTCACGTTCACCTTCTAATTT ACCAACTACAGTTCCTGAATGTAAGTGGTCACCACCAGACATACGTAAAGCTTTAGCTAAAACACGGAAGTGA ATACCGTGGTTTCTTTGACGGTCAATAACCGCGTGCATAGCACGGTGAATGTGTAATAATAAACCGTGATCAC GACAGTAAGAAGCTAATGAAGTGTTAGCTGTGAAACCACCAGTTAAGTAGTCATGCATAACAATAGGTACACC TAGTTCTTTAGCACATTGTGCACGTTTTAACATTTCTTCACAAGTACCAGCAGTAGCATTTAAGTAGTGACCTTT AATTTCACCAGTTTCAGCTTGAGCTTTGTAAGTAGCTTCAGCAACGAATAAGAAACGGTCTCTCCAACGCATGA ATGGTTGTGAGTTTACGTTTTCGTCATCTTTTGTAAAGTCTAAACCACCACGTAAACATTCGTAAACAGCACGA CCGTAGTTTTTAGCTGATAAACCTAATTTTGGCTTAATAGTACAACCTAATAAACCACGACCATATTTGTTTAG TTTTGGTCACGA S4 GAATTCACCAGAAGCTACTGGCATTGTTCCTGACATAGAACACCAGTCTTGAGTGAAGTAAATACCACGGCTA CGATCTTTTTCAATATAATCATCACGCATTAAGTCTACGAAACCTAAAGTTACTTCACGTTCACCTTCTAATTTA CCAACTACAGTACCTGAGTGTAAGTGGTCACCACCTGACATACGTAAAGCTTTTGCTAAAACACGGAAGTGAA TACCATGGTTTCTTTGACGGTCAATAACAGCGTGCATAGCACGGTGAATGTGTAATAATAGACCATGGTCACG ACAATAAGTTGCTAAAGAAGTGTTTGCTGTAAAACCTCCAGTAAGGTAGTCGTGCATAATGATAGGCACACCT AATTCTTTTGCACATTGAGCACGTTTTAACATTTCTTCACATGTACCTGCAGTCGCATTTAAATAATGCCCTTTA ATTCACCTGTTTCGGCTTGAGCTTTGTAACAAGCTTCTGCAACAAATAAGAAACGGTCTCTCCAACGCATAAAT GGTTGTGAGTTTACGTTTTCATCATCTTTTGTAAAATCAAGACCACCACGTAAACACTCATACACAGCACGCCC ATAGTTTTTTGCAGATAAACCTAATTTTGGTTTGATCGTACAACCAAGTAATCCACGACCATATTTGTTTAGTTT TTGGTCACGA S5 GGTTCGACCGGAAGCAACTGGCATAGTACCTGCTAAAGAACACCAGTCTTGAGTGAAGTAAATACCACGGCTA CGATCTTTTTCGATGTAGTCATCACGCATTAAGTCAACGAAACCTAAAGTTACTTCACGTTCACCTTCTAATTTA CCAACTACAGTTCCTGAGTGTAAGTGGTCACCACCAGACATACGTAAAGTTTTTGCTAAAACACGGAAGTGAA TACCGTGGTTTCTTTGACGGTCAATTACAGCGTGCATAGCACGGTGAATGTGTAATAATAAACCGTGATCACGA CAGTAAGTAGCTAAAGAAGTGTTTGCTGTGAAACCACCTGTTAAGTAGTCATGCATAATAATAGGTACACCTA ATTCTTTAGCACATTGAGCACGTTTTAACATTTCTTCGCAGTTACCAGCAGTAGCATTTAAGTAGTGACCTTTAA TTTCCAAATATGTTATGACTTTTTTTGAAGATAATTGAAGTATTCAATTAGGAAGAGTTTATTCAACTCTAAAA AAAAAGTAAAAAAGATCCTTTCTTTTTCAAGAAAGTTCAGACTATTTCTTAAAAGTTTTATAAACTTTTTTGGA TACGTTAAAAATTATTTTTAGTCGTTGAACCATATTTTTTCAAAATTTTTTAGCTAAAAAATTTGCAAGATCTGC AGTCTAAGAGTAAGTTGCAA S6 GAAACACCAAGAAGCTACTGGCATAGTCCCTGCTAAAGAACACCAGTCTTGAGTGAAGTAAATACCACGGCTA CGATCTTTTTCGATGTAGTCATCACGCATTAAGTCAACGAAACCTAAAGTTACTTCACGTTCACCTTCTAATTTA CCAACTACAGTTCCTGAGTGTAAGTGGTCACCACCAGACATACGTAAAGTTTTTGCTAAAACACGGAAGTGAA TACCGTGGTTTCTTTGACGGTCAATTACAGCGTGCATAGCACGATCGAATGTGTAATAATAAACCGCGGTCACG ATACTAAGAAGCTAAAGAAGAGCTTGCAGTGACACTATCTGTTACCTGGCGAGATATCGAGACATTGATCCCT CTGATCCACCAGATCTCACAGGCTTCTGCGGCTACTGCTGGCACGGCTATCACCAAGTTCGAGGTGCTCCCAGG TATTCACCTCGCTGCCTTTCCCGACCCTCCCGTACACGTCCCATCGGCACGAGCTCATGGGACGACACCAACGA CATCAACAAACTGATCACCGTCACCACCCCCCATCATCCACCCATCATCCATCCACTATACTCACGTGCCACAT ATCCTCCGGGCATCATATCGGCCAGAAATCGCCCCATCAACAATGCGGGCCATCCTACACTTTCGCCCCGACAC ACGTCTTCGATCATCACACCG 42 ... HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG ĐỊNH DANH VI TẢO THUỘC HỌ SCENEDESMACEAE TẠI MỘT SỐ THỦY VỰC NƯỚC NGỌT THÀNH... sinh học phân tử định danh vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae số thủy vực nước thành phố Đà Nẵng? ?? Mục tiêu đề tài Định danh loài vi tảo kỹ thuật sinh học phân tử đánh giá mối quan hệ di truyền loài thuộc. .. loài vi tảo họ Scenedesmaceae CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm hình thái, sinh học vi tảo thuộc họ Scenedesmaceae 1.1.1 Hình thái cấu tạo, đặc điểm sinh học Về phân loại khoa học, vi tảo thuộc