XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRÊN SỮA, THỨC ĂN GIA SÚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (Gas Chromatography Mass Spectrometry)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRÊN SỮA, THỨC ĂN GIA SÚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (Gas Chromatography - Mass Spectrometry) Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: PHẠM THỊ THANH VÂN Niên khóa: Tháng 08/2009 2005 – 2009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRÊN SỮA, THỨC ĂN GIA SÚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (Gas Chromatography - Mass Spectrometry) Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS PHÙNG VÕ CẨM HỒNG PHẠM THỊ THANH VÂN KS HUỲNH VĨNH KHANG Tháng 08/2009 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho tơi suốt thời gian học tập Các Thầy Cô Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Thầy Cô trực tiếp giảng dạy suốt bốn năm qua ThS Phùng Võ Cẩm Hồng KS Huỳnh Vĩnh Khang tận tình hướng dẫn, dìu dắt động viên em thời gian thực đề tài tốt nghiệp KS Trịnh Thị Phi Ly dành cho em nhiều hỗ trợ cần thiết, tận tình giúp đỡ em vượt qua khó khăn cung cấp nhiều kiến thức qúy báu Các Thầy cô, anh chị Viện Công Nghệ Sinh Học Công Nghê Môi Trường – Trường Đại học Nơng Lâm Tp HCM ln tận tình hướng dẫn, giảng dạy giúp đỡ tơi Cùng tồn thể lớp CNSH 31 hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian làm đề tài Con thành kính ghi ơn ba mẹ người thân gia đình ln tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trường Tháng 08 năm 2009 Phạm Thị Thanh Vân iii TÓM TẮT Melamine xuất thực phẩm sữa bột cho trẻ em thức ăn cho thú cưng gây nguy tử vong sạn thận cao vấn đề đáng lo ngại, tạo tâm trạng hoang mang, lo lắng cho người dân, doanh nghiệp làm ăn chân bị thiệt hại khơng Xuất phát từ tình hình trên, cho phép Bộ môn Công Nghệ Sinh Học – Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM, tiến hành đề tài: “Xây dựng quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa, thức ăn gia súc phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (Gas Chromatography – Mass Spectrometry)” Melamine hợp chất hữu có hàm lượng đạm cao thêm vào thực phẩm hành vi gian lận nhằm làm tăng độ đạm tổng số Khi melamine hấp thụ lâu ngày thể với nồng độ cao gây nên bệnh sỏi thận sỏi bàng quang Việc cố tình thêm melamine vào thức ăn cho vật nuôi nguyên nhân chết hàng loạt chó mèo Chúng tơi đưa quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa, thức ăn gia súc thiết bị GC-MS sử dụng hệ thống Aligent 6890 GC, 5973 MS, bơm mẫu tự động 7689 với cột mao quản Aligent ZB-5ms 30 m × 0,25 mm × 0,25 µm Dựa quy trình cơng bố quan quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ (U.S.FDA), 2008, áp dụng loại vật liệu khô (sữa bột, thức ăn gia súc…) Mẫu chiết với hỗn hợp Diethyamine/H2O/Acetonitrile (DEA/H2O/ACN) tạo dẫn xuất Trimethysilyl (dẫn xuất TMS) trước đưa vào phân tích hệ thống GC-MS Khoảng tuyến tính xây dựng nồng độ từ 50 ppb đến 1000 ppb Giới hạn phát (LOD) melamine đạt 15 ppb iv SUMMARY The illicit additives melamine in milk power and pet food caused people to worry, the damage of the truth businesses Prom that situation, had been permitted of Faculty of Biotechnology – Nong Lam University, we had been made the topic: “Procedured development for the detecting and quantifing melamine content in milk powder, pet – food by Gas Chromatography – Mass Spectrometry” Melamine is a nitrogen rich organic compound which has been added to food and feed to fraudulently increase the apparent protein content Dietary long term exposure to high levels of melamine may lead to kidney and bladder diseases The illicit additives melamine in pet-food have caused the death of cats and dogs in the United States in 2007 To apply a GC-MS method publishing by the U.S Food and Drug Administration (U.S.FDA), we have achieved the improved procedure for detecting and quanlifing melamine content in milk-powder, pet-food using Aligent 6890 GC, 5973 MS, 7683 series injector with a 30 m ì 0,25 mm ì 0,25 àm Aligent ZB-5ms capillary column The procedure was developed to screen various kinds of matrice for the presence of melamine Samples are extracted using a mixture of Diethylamine/Water/Acetonitrile (DEA/H2O/ACN) and the analytes are subsequently converted to Trimethylsilyl derivatives (TMS derivatives) before injection The linear range is from 50 ppb to 1000 ppb for melamine and the limit of detection is 15 ppb v MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN iii TÓM TẮT iv SUMMARY v MỤC LỤC .vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix DANH SÁCH CÁC BẢNG x DANH SÁCH CÁC HÌNH xi Chương MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu melamine 2.1.1 Melamine 2.1.2 Sự đời phương pháp tổng hợp melamine 2.1.3 Mục tiêu sử dụng melamine 2.1.4 Vì melamine lại vào chuỗi thực phẩm .4 2.1.5 Melamine gây độc 2.1.6 Có quy định sử dụng melamine hay khơng .6 2.1.7 Có cách để nhận diện melamine hay không 2.2 Giới thiệu chung phương pháp sắc ký 2.2.1 Lịch sử phương pháp sắc ký .9 2.2.2 Nguyên tắc phương pháp sắc ký .9 2.2.3 Phân loại phương pháp sắc ký 10 2.3 Một số phương pháp sắc ký sử dụng phân tích melamine 12 2.3.1 Sắc ký lỏng cao áp 12 2.3.2 Sắc ký lỏng ghép khối phổ 13 2.3.3 Sắc ký khí ghép khối phổ 13 2.3.3.1 Ứng dụng GC-MS 14 vi 2.3.3.2 Cấu tạo hoạt động GC-MS 15 2.3.3.3 Ưu nhược điểm việc kết hợp GC MS 18 2.3.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến việc tách mẫu 19 2.3.3.5 GC-MS phân tích melamine 19 2.4 Tình hình phân tích melamine Việt Nam 20 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 3.2 Vật liệu 22 3.2.1 Đối tượng thí nghiệm 22 3.2.2 Hóa chất sử dụng 22 3.2.3 Dụng cụ thiết bị .23 3.3 Phương pháp nghiên cứu .24 3.3.1 Xác định hàm lượng đạm tổng số mẫu đem phân tích 24 3.3.2 Chuẩn bị mẫu 25 3.3.2.1 Quy trình công bố U.S.FDA 25 3.3.2.2 Quy trình cải tiến từ quy trình cơng bố U.S.FDA 26 3.3.3 Điều kiện chạy máy 26 3.3.3.1 Điều kiện GC 26 3.3.3.2 Điều kiện MS 26 3.3.4 Đánh giá quy trình 25 3.3.4.1 Chuẩn bị chuẩn 27 3.3.4.2 Xác định hiệu suất thu hồi .28 3.3.4.3 Xác định giới hạn phát (LOD) melamine 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Kết đo hàm lượng đạm tổng số phương pháp Kjeldahl .30 4.2 Nhận diện tín hiệu từ sắc ký đồ .30 4.3 Quy trình chuẩn bị mẫu phân tích theo cơng bố U.S.FDA 33 4.4 Quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa 34 4.5 Quy trình phân tích hàm lượng melamine thức ăn gia súc 38 4.6 Giới hạn phát (LOD) melamine phương pháp 41 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 vii 5.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN : Acetonitrile BSTFA : Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide C : Nồng độ (ppb) DACP : 2,6-Diamino-4-chloropyrimidine (chất nội chuẩn) DEA : Diethylamine EFSA : Tiêu chuẩn thực phẩm Châu Âu EIA : Enzyme Immunoassay ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay GC-MS : Gas Chromatography Mass Spectrometry (Sắc ký khí ghép khối phổ) H2SO4dd : Acid sunfuric đậm đặc HPLC : High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng cao áp) LC-MS-MS: Sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần LOD : Limit of Detection (Giới hạn phát hiện) S/N : Signal-to-Noise ratio (Tỉ số tương đối tín hiệu so với nhiễu nền) S : Diện tích peak SIM : Selected ion monitoring (Chế độ quét chọn lọc) SPE : Solid phase extraction (Cột chiết pha rắn) Sylon BFT : 99 % BSTFA + 1% TMCS TB : Trung bình TCMS : Trimethylchlorosilane TDI : Tolerable daily intake (Ngưỡng hấp thu ngày chịu được) TMS : Trimethylsilyl UV : Ultra Violet WHO : Tổ chức Y tế giới ix DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Các phương pháp sắc ký 11 Bảng 2.2 12 sở y tế kiểm nghiệm melamine .21 Bảng 3.1 Điều kiện MS (SIM) .26 Bảng 3.2 Melamine melamine tri-TMS trước sau tạo dẫn xuất 27 Bảng 3.3 Thêm chuẩn melamine vào mẫu 27 Bảng 3.4 Quy trình U.S.FDA quy trình cải tiến 28 Bảng 4.1 Kết đo hàm lượng đạm tổng số mẫu đem phân tích 30 Bảng 4.2 Kết xây dựng đường chuẩn điểm melamine tri-TMS .34 Bảng 4.3 Kết phân tích melamine sữa 37 Bảng 4.4 Tương quan tỉ lệ trung bình C, V Melamine tri-TMS, Nội chuẩn sữa 37 Bảng 4.5 Kết xây dựng đường chuẩn dựa nồng độ melamine tri-TMS .38 Bảng 4.6 Kết phân tích melamine thức ăn gia súc 40 Bảng 4.7 Tương quan tỉ lệ trung bình C,V Melamine tri-TMS, Nội chuẩn 40 Bảng 4.8 Thời gian lưu diện tích nhiễu .41 x cậy cao, áp dụng vào thực tế kiểm tra xác định melamine thực phẩm 4.6 Giới hạn phát (LOD) melamine phương pháp Từ sắc ký đồ melamine tri-TMS 50 ppb ta tính độ nhiễu đường N dựa nhiễu trước sau peak melamine tri-TMS Bảng 4.8 Thời gian lưu diện tích nhiễu Thời gian lưu (phút) 9,334 9,640 9,983 10,220 10,643 Trước 11,9 phút 10,695 11,013 11,174 11,331 11,662 12,640 13,163 13,357 13,788 13,896 Sau 11,9 phút 14,158 14,367 14,492 14,838 15,096 N Diện tích 10.354 23.830 27.794 9.702 23.824 15.109 19.398 23.463 10.007 13.893 7.422 7.671 7.777 8.099 7.704 14.154 18.036 8.972 12.163 10.188 13.978 LOD có S/N = → S = × N = 41.934 Thay giá trị S vào phương trình tuyến tính y = 10.173x – 113.340 ta ước lượng giá trị x = LOD = 15 ppb Đưa vào quy trình kiểm chứng ta nhận sắc ký đồ giá trị LOD = 15 ppb 41 DACP Melamine tri-TMS Hình 4.20 Melamine tri-TMS LOD = 15 ppb Quy trình phân tích melamine xây dựng hồn thiện Viện Cơng Nghệ Sinh Học Công Nghệ Môi Trường – Trường Đại học Nơng Lâm Tp.HCM, khoảng tuyến tính xây dựng nồng độ từ 50 ppb đến 1000 ppb, giới hạn phát phương pháp với melamine 15 ppb, thấp nhiều so với ngưỡng chấp nhận melamine thực phẩm mà y tế đưa ra, áp dụng vào thực tế để phân tích định lượng melamine thực phẩm với độ tin cậy cao, đảm bảo an toàn cho sức khỏe người tiêu dùng 42 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Áp dụng quy trình phân tích melamine hệ thống GC-MS thơng qua việc tạo dẫn xuất melamine trimethylsilyl (TMS) U.S.FDA, thực tế thí nghiệm Viện Công Nghệ Sinh Học Công Nghệ Môi Trường - Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM Chúng tơi đưa quy trình tối ưu, rút ngắn thời gian chuẩn bị mẫu, tiết kiệm dung môi chất tạo dẫn xuất với độ xác độ tin cậy cao Quy trình áp dụng nhiều loại mẫu khác nhau, đặc biệt loại vật liệu khô (sữa bột, thức ăn gia súc….) Quy trình nêu rõ sơ đồ 3.1: Từ 0,5 (± 0,005) g mẫu → đưa chuẩn với nồng độ khác vào mẫu → chiết mẫu hỗn hợp DEA/H2O/ACN : 10/40/50 → vortex→ đánh sóng siêu âm → li tâm 10 phút → lọc qua đĩa lọc Whatman 0,45 µm PVDF → chuyển 100 µl vào lọ thủy tinh nhỏ → thổi thật khơ khí nitơ → hịa tan 100 µl dung môi pyridine → tạo dẫn xuất với 100 µl Sylon BFT → thêm vào 50 µl chất nội chuẩn → ủ 70oC khoảng 45 phút → để nhiệt độ phòng 45 – 60 phút → đem phân tích hệ thống GC-MS Với quy trình trên, xây dựng đường chuẩn điểm melamine dựa tỉ lệ diện tích peak melamine tri-TMS (với nồng độ mẫu phân tích từ 50 ppb đến 1000 ppb) diện tích peak nội chuẩn (1000 ppb) Với hiệu suất thu hồi cho phép, sữa 50,8 % - 107,4 %, thức ăn 115 % - 140 % Phương pháp có độ nhạy cao, giới hạn phát (LOD) xác định 15 ppb So với ngưỡng cho phép melamine thực phẩm (1 mg/kg thực phẩm cho trẻ em 36 tháng tuổi 2,5 mg/kg cho loại thực phẩm khác) mà y tế đưa ngày 12/12/2008, phương pháp hồn tồn áp dụng vào thực tế để kiểm tra định lượng melamine thực phẩm với độ xác độ tin cậy cao 43 5.2 Đề nghị Dùng cột chiết pha rắn SPE loại béo trình chuẩn bị mẫu phân tích Phân tích melamine GC-MS trang bị thêm hệ thống backflush Phân tích melamine phương pháp khác (HPLC-UV, LC-MS-MS) với chuẩn bị mẫu đơn giản để so sánh với phương pháp phân tích hệ thống GC-MS mà sử dụng Xây dựng quy trình phân tích hàm lượng melamine loại mẫu khác vật liệu khô: sữa tươi, trứng… 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Nguyễn Thanh Hồng 2007 Phổ học khối lượng Trong: Các phương pháp phổ hóa học hữu Nhà xuất khoa học kỹ thuật, trang 123 – 124 Phùng Võ Cẩm Hồng 2008 Bài giảng: Kỹ thuật sắc ký nâng cao Viện Công Nghệ Sinh Học Công Nghệ Môi Trường – Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM Dương Thanh Liêm 2008 Melamine, nguyên liệu công nghiệp vào chuỗi thực phẩm độc tính Trong: Kỷ yếu Hội hóa Thành Phố Hồ Chí Minh, lần thứ 6, 19/12/2008 Nguyễn Kim Phi Phụng 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp.HCM Hồ Viết Quý 2006 Sắc ký Trong: Cơ sở hóa học phân tích đại Tập 3: Các phương pháp phân chia, làm giàu ứng dụng phân tích Nhà xuất Đại học Sư Phạm, trang 381 – 383 Phạm Hùng Việt 2005 Các kỹ thuật phụ trợ Trong: Sắc ký khí – Cơ sở lý thuyết khả ứng dụng Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội, trang 159 – 161 Tài liệu tiếng nước Archer J.P Martin 1952 The development of partition chromatography Nobel lecture, December Lioyd R Snyder Joseph J Kirkland Joseph L Glajch Completing the method: Validation and transfer In: Practical HPLC method development Second edition, pp: 691 – 695 US Food and Drug Administration, Center for Veterinary Medicine GC-MS Screen for the Presence of Melamine, Ammeline, Ammelide and Cyanuric Acid (Version 2.1) 10 WHO/HSE-FOS Melamine: Comments on analytical methods October 08 Tài liệu internet 11 Dương Văn Cường 2006 Giới thiệu Gas Chromatography Mass Spectrometry http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?name=News&file=article&sid=9 77 12 Hà Yên, 2008 12 sở kiểm nghiệm melamine thức ăn chăn nuôi http://www.tin247.com/12_co_so_duoc_kiem_nghiem_melamine_trong_thuc_an_ chan_nuoi-1-21359090.html 13 Hải Yến 2008 Melamine sức khỏe người http://www.medinet.hochiminhcity.gov.vn/tintuc/news_detail.asp?period_id=1&ca t_id=333&news_id=5838 14 Hương Cát 2008 Nhờ melamine sữa trông đặc hơn? http://vietbao.vn/Khoahoc/Nho-melamine-sua-trong-dac-hon/20806941/188/ 15 Nguyễn Bá Tiếp 2008 Melamine: Ứng dụng tác hại 45 http://www.thuvienkhoahoc.com/tusach/Melamine:_%E1%BB%A8ng_d%E1%BB %A5ng_v%C3%A0_t%C3%A1c_h%E1%BA%A1i 16 Sắc ký http://vi.wikipedia.org/wiki/S%E1%BA%AFc_k%C3%AD 17 Thanh Loan 2008 Melamine sữa gây độc http://www.cand.com.vn/vi-VN/khcn/2008/9/100391.cand 18 WHO: Melamine Axit Cyanuric - Độc tính, Đánh giá nguy ban đầu, Hướng dẫn mức melamine thực phẩm http://www.tbtvn.org/Lists/Tin%20nng/DispFormCustomize.aspx?List=d9127cb8 %2Df83c%2D45cc%2D95b2%2Df15365f57808&ID=254 46 PHỤ LỤC Phụ lục Các sắc ký đồ điểm melamine tri-TMS với thời gian lưu 11,2 phút Melamine tri-TMS Hình Chuẩn melamine tri-TMS 50 ppb Melamine tri-TMS Hình Chuẩn melamine tri-TMS 100 ppb Melamine tri-TMS Hình Chuẩn melamine tri-TMS 250 ppb Melamine tri-TMS Hình Chuẩn melamine tri-TMS 500 ppb Melamine tri-TMS Hình Chuẩn melamine tri-TMS 1000 ppb Phụ lục Các sắc ký đồ điểm melamine tri-TMS, DACP 1000 ppb sữa DACP Melamine tri-TMS Hình Melamine tri-TMS 50 ppb, DACP 1000 ppb sữa DACP Melamine tri-TMS Hình Melamine tri-TMS 100 ppb, DACP 1000 ppb sữa DACP Melamine tri-TMS Hình Melamine tri-TMS 250 ppb, DACP 1000 ppb sữa DACP Melamine tri-TMS Hình Melamine tri-TMS 500 ppb, DACP 1000 ppb sữa Phụ lục Bảng Kết phân tích melamine tri-TMS 500 ppb, DACP 1000 ppb sữa với cột phân tích C S Melamine tri- S Melamine tri- (ppb) TMS chuẩn TMS mẫu 500 4.841.828 3.814.979 DACP S DACP 7.016.951 C Mẫu / C S mẫu/S DACP DACP 0,5 0,54 Hiệu suất thu hồi (%) 78,8 Melamine tri-TMS Hình 10 Melamine tri-TMS 500 ppb, DACP 1000 ppb sữa với cột phân tích Phụ lục Các sắc ký đồ điểm melamine tri-TMS với thời gian lưu 11,9 phút Melamine tri-TMS Hình 11Melamine tri-TMS 50 ppb Melamine tri-TMS Hình 12 Melamine tri-TMS 100 ppb Melamine tri-TMS Hình 13 Melamine tri-TMS 250 ppb Melamine tri-TMS Hình 14 Melamine tri-TMS 500 ppb Melamine tri-TMS Hình 15 Melamine tri-TMS 1000 ppb Phụ lục Các sắc ký đồ điểm melamine tri-TMS, DACP 1000 ppb thức ăn DACP Melamine tri-TMS Hình 16 Melamine tri-TMS 50 ppb, DACP 1000 ppb thức ăn DACP Melamine tri-TMS Hình 17 Melamine tri-TMS 100 ppb, DACP 1000 ppb thức ăn DACP Melamine tri-TMS Hình 18 Melamine tri-TMS 250 ppb, DACP 1000 ppb thức ăn Melamine tri-TMS DACP Hình 19 Melamine tri-TMS 500 ppb, DACP 1000 ppb thức ăn Melamine tri-TMS DACP Hình 20 Melamine tri-TMS 1000 ppb, DACP 1000 ppb thức ăn Phụ lục Bảng Kết thí nghiệm thêm melamine vào mẫu sữa C Melamine tri-TMS (ppb) C DACP (ppb) 50 1000 100 250 500 Lặp lại Diện tích peak S Melamine tri-TMS S DACP 147.594 2.900.998 1000 79.260 1.472.534 1000 62.959 1.075.442 1000 125.863 1.175.187 1000 191.326 1.784.217 1000 216.649 1.884.601 1000 524.618 2.127.278 1000 424.604 1.758.260 1000 406.053 1.739.713 1000 873.921 1.665.049 1000 1.251.127 2.483.625 1000 720.366 1.585.862 Phụ lục Bảng Kết thí nghiệm thêm melamine vào thức ăn gia súc C Melamine tri-TMS (ppb) C DACP (ppb) Lặp lại 50 1000 100 250 500 1000 Diện tích peak S Melamine tri-TMS S DACP 782.693 7.110.285 1000 563.838 5.838.923 1000 1.243.373 6.271.078 1000 1.135.883 7.157.482 1000 3.374.896 6.488.396 1000 2.754.710 5.864.272 1000 7.057.297 7.772.898 1000 6.579.501 7.064.408 1000 13.066.309 7.047.585 1000 12.722.713 6.602.838 ... đề tài: ? ?Xây dựng quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa, thức ăn gia súc phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (Gas Chromatography – Mass Spectrometry)? ?? Melamine hợp chất hữu có hàm lượng đạm... HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRÊN SỮA, THỨC ĂN GIA SÚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (Gas Chromatography - Mass Spectrometry) Hướng dẫn... mẫu phân tích theo công bố U.S.FDA 33 4.4 Quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa 34 4.5 Quy trình phân tích hàm lượng melamine thức ăn gia súc 38 4.6 Giới hạn phát (LOD) melamine phương