Xác định hàm lượng một số hormone sinh sản bằng phương pháp miễn dịch enzym (elisa=enzym linked immuno sorbent assay) để chuẩn đoán điều trị hiện tượng rối loạn

Những năm gần ñây chăn nuôi chiếm một vị trí quan trọng trong ngành nông nghiệp nước ta, ñặc biệt là chăn nuôi bò sữa ñang trên ñà phát triển. ðời sống xã hội ngày một nâng cao, nhu cầu về thực phẩm tăng mạnh cả về số lượng và chất lượng, trong ñó chăn nuôi ñại gia súc có một vị trí rất quan trọng do phải ñảm bảo ñáp ứng nhu cầu ngày càng cao của con ngươi về thịt và sữa. Mô hình chăn nuôi phân tán ở các nông hộ và trang trại nhỏ, ñiều kiện chăm sóc nuôi dưỡng khác nhau nên dẫn ñến các chỉ tiêu sản xuất của ñàn bò cũng khác nhau. Chăn nuôi bò sữa còn mang tính chất nhỏ lẻ, không tập trung, trình ñộ am hiểu về kỹ thuật chăn nuôi còn hạn chế, nhất là các chỉ tiêu về sinh sản thường không ổn ñịnh, một số nguyên nhân trong sinh sản ñã biểu hiện như: Tuổi ñộng dục lần ñầu cao (18-36 tháng), khoảng cách giữa hai lứa ñẻ dài (15-18 tháng). Có rất nhiều loại bệnh khác nhau ở bò sữa trong ñó phải kể ñến các bệnh về rối loạn sinh sản do nguyên nhân bệnh lý buồng trứng như vô sinh, chậm thành thục về tính, chậm ñộng dục lại sau ñẻ, các chỉ tiêu sinh sản thường không ổn ñịnh ñặc biệt hiện tượng rối loạn sinh sản xảy ra trên ñàn bò cái do di truyền, chế ñộ chăm sóc nuôi dưỡng, khai thác và quản lý ñàn, dị tật và các quá trình bệnh lý ở cơ quan sinh dục và ñặc biệt do rối loạn nội tiết, ñã làm cho tỷ lệ ñẻ toàn ñàn thấp, tỷ lệ thụ thai thấp, hệ số phối giống cao và khoảng cách giữa các lứa ñẻ kéo dài. ðây là những yếu tố hạn chế làm ảnh hưởng lớn ñến hiệu quả kinh tế và ngành chăn nuôi bò sữa Việt Nam.

Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiƯp hµ néi -
- ủđào thị thuý hồng XC NH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ HORMONE SINH SẢN BẰNG PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH ENZIM (ELISA; ENZYM LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY) ðỂ CHẨN ðỐN, ðIỀU TRỊ HIỆN TƯỢNG RỐI LOẠN Q TRÌNH THỤ TINH Ở BÒ SỮA DO NGUYÊN NHÂN BỆNH LÝ BUNG TRNG Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Thó y M· sè: 60.62.50 Ng−êi h−íng dÉn khoa häc : PGS.TS trần tiến dũng Hà nội 2009 LI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan rằng: Các kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Mọi giúp ñỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 10 năm 2009 Tác giả luận văn ðào Thị Thúy Hồng i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cám ơn Ban Giám hiệu Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, ban chủ nhiệm khoa Sau ðại học, ban chủ nhiệm khoa Thú y ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện thuận lợi ñể học tập va hồn thành luận văn ðặc biệt tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn khoa học PGS.TS Trần Tiến Dũng tận tình hướng dẫn tơi q trình nghiên cứu xây dựng luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể Phịng cơng nghệ tế bào động vật - Viện công nghệ sinh học Nông trường Phù ðổng Xin chân thành cảm ơn Ban giám ñốc, tập thể cán cơng nhân viên Trung tâm nghiên cứu bị đồng cỏ Ba Vì Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn suốt q trình học tập, nghiên cứu, thực đề tài Hà Nội, tháng 10 năm 2009 Tác giả luận văn ðào Thị Thúy Hồng ii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG SỐ LIỆU v DANH MỤC HÌNH vi PHẦN I MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn ñề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 2.2 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu khả sinh sản 2.2.1 ðặc ñiểm cấu tạo chức quan sinh dục 2.3 ðặc tính sinh lý sinh sản bò 10 2.3.1 Sự thành thục tính tuổi phối giống lần ñầu 10 2.3.2 Dậy (Puberty) 11 2.3.3 Chu kỳ ñộng dục 12 2.3.4 Sự điều hồ nội tiết chu kỳ ñộng dục 16 2.3.5 Sự thụ tinh 16 2.2.6 Quá trình mang thai 20 2.3.7 Khoảng cách hai lứa ñẻ 20 2.3.8 Thời gian hồi phục tử cung sau ñẻ 21 2.4 Sự điều hồ hoạt ñộng sinh dục tuyến nội tiết 22 2.4.1 Vai trị vùng đồi (Hypolathamus) 24 2.4.2 Kích dục tố tuyến yên bệnh buồng trứng 25 2.4.3 Vai trò buồng trứng bệnh buồng trứng 26 2.5 Những nhân tố di truyền ảnh hưởng ñến khả sinh sản 28 2.5.1 Di truyền (nhân tố bên trong) 28 2.5.2 Nhân tố bên 29 iii 2.6 Hiện tượng rối loạn sinh sản, phương pháp khắc phục tượng rối loạn trình thụ tinh bò sữa 30 2.6.1 Nguyên nhân gây tượng rối loạn q trình thụ tinh bị sữa 30 2.6.2 Các phương pháp khắc phục tượng rối loạn trình thụ tinh 31 2.6.3 Hormon phương pháp ñịnh lượng hormon 36 PHẦN III ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 3.1.ðối tượng nghiên cứu 40 3.2 Nội dung nghiên cứu 40 3.3 Phương pháp nghiên cứu 41 3.3.1 Phương pháp ñánh giá tiêu sinh sản 41 3.3.2 Phương pháp ELISA ñịnh lượng hormone 42 3.3.3 Phương pháp ñịnh lượng hormone FSH, LH 42 3.3.4 Sử dụng hormone sinh dục chế phẩm hormone ñể ñiều trị tượng rối loạn trình thụ tinh bệnh lý buồng trứng 45 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 47 3.5 Thời gian ñịa ñiểm nghiên cứu 47 PHẦN IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 48 4.1 Kết ñiều tra khả sinh sản ñàn lai hướng sữa Ba Vì Nơng trường Phù ðổng 48 4.1.1 Khối lượng thể tuổi phối giống lần ñầu ñàn bò lai hướng sữa50 4.1.2 Khối lượng thể tuổi đẻ lứa đầu đàn bị lai hướng sữa 53 4.1.3 Thời gian ñộng dục lại sau đẻ bị lai hướng sữa 55 4.1.4 Khoảng cách hai lứa ñẻ 56 4.1.5 Hệ số phối giống 58 4.1.6 Tỷ lệ thụ thai 59 4.1.7 Hiện tượng rối loạn trình thụ tinh bị sữa Ba Vì 60 4.2 Kết ñịnh lượng FSH, LH 63 4.2.1 ðộng thái FSH, LH chu kỳ động dục bình thường bị 63 4.2.2 Kết ñịnh lượng FSH, LH trường hợp bị bị rối loạn q trình thụ tinh bò sữa 67 iv 4.2.3 Kết chẩn đốn ngun nhân gây rối loạn q trình thụ tinh ñịnh lượng FSH, LH kết hợp khám buồng trứng qua trực tràng 71 4.3 Sử dụng hormone sinh dục chế phẩm hormone ñể ñiều trị vài tượng rối loạn trình thụ tinh 73 4.3.1 Kết sử dụng chế phẩm prostaglandin (PGF2α) bị vàng tồn lưu bệnh lý 73 4.3.2 Kết sử dụng HCG (Human Chorionic Gonadotropin) bị đa nang buồng trứng 76 4.3.3 Kết gây ñộng dục prgesteron kết hợp với huyết ngựa chửa (PMSG) bò bị thiểu buồng trứng bò lai hướng sữa 77 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 79 5.1 Kết luận 79 5.1.1 ðặc điểm sinh sản đàn bị 79 5.1.2 Kết ứng dụng kỹ thuật ELISA 79 5.2 ðề nghị 80 5.2.1 Công tác quản lý 80 5.2.2 Về kỹ thuật 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 I TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 81 II TÀI LIỆU TIẾNG ANH 85 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cs: Cộng ðVC: ðơn vị chuột LH: Luteinizing hormone LRH: Lutein Releasing hormone LTH: Luteo Tropic hormone FSH: Follicle Stimulating hormone GnRH: Gonadotropin Releasing hormone ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay FBS: Fetal Bovine Serum FRH: Folliculin Releasing hormone HCG: Human Chorionic Gonadotropin HF : Holstein Friesian KN: Kháng nguyên KT: Kháng thể RIA: Radio Immuno Assay TMB: Tetrametyl benzidin PGF2α: Prostaglandin F2 alpha PMSG: Pregnant Mare Serum Gonadotropin PRH: Prolactin Releasing hormone OD: Optical Density P-RH: Prolactin realeasing hormon Tr: Trang vi DANH M C B NG S LI U B ng 2.1 Các giai o n c a pha ng d c .15 B ng 4.1a C c u àn bò s a c a Trung tâm nghiên c u bò ng c Ba Vì .49 B ng 4.1b C c u àn bị s a c a Nơng tr ng Phù ng 49 Bảng 4.2 Khối lượng thể tuổi phối giống lần đầu bị lai hướng sữa ni Ba Vì Nơng trường Phù ðổng 52 Bảng 4.3 Khối lượng thể tuổi đẻ lứa đầu bị lai hướng sữa ni Ba Vì Nơng trường Phù ðổng Hà nội 54 Bảng 4.4 Thời gian ñộng dục lại sau đẻ bị lai hướng sữa (ngày) 55 Bảng 4.5 Khoảng cách hai lứa đẻ bị lai hướng sữa (ngày) .57 Bảng 4.6: Hệ số phối giống tỷ lệ thụ thai đàn bị lai hướng sữa 60 Bảng 4.7 Phân loại nguyên nhân tượng rối loạn q trình thụ tinh bị sữa 61 Bảng 4.8 Hàm lượng FSH chu kỳ động dục bình thường bị sữa (mlU/ml) 64 Bảng 4.9 Hàm lượng LH chu kỳ động dục bình thường bị sữa (mlU/ml) 65 Bảng 4.10 Hàm lượng FSH trường hợp chậm sinh buồng trứng bò sữa 68 Bảng 4.11 Hàm lượng LH trường hợp chậm sinh buồng trứng bò sữa 69 Bảng 4.12 Kết chẩn đốn ngun nhân gây rối loạn q trình thụ tinh bị sữa định lượng FSH kết hợp khám buồng trứng qua trực tràng 70 Bảng 4.13 Kết chẩn đốn ngun nhân gây rối loạn q trình thụ tinh bị sữa ñịnh lượng LH kết hợp khám buồng trứng qua trực tràng 72 Bảng 4.14 Hiệu sử dụng PGF2α gây động dục bị lai hướng sữa 74 Bảng 4.15 Hiệu sử dụng HCG gây động dục bị lai hướng sữa 77 Bảng 4.16 Kết gây ñộng dục progesterone kết hợp với HTNC bò sữa 78 vii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ðỒ, BIỂU ðỒ, ðỒ THỊ ðồ thị 2.1 ðồ thị sóng nang chu kỳ 13 ðồ thị 2.2: Diễn biến ñộng thái hormone máu giai ñoạn chu kỳ ñộng dục bò 17 Sơ ñồ 2.1 Hypothalamus ñiều khiển hoạt ñộng hệ nội tiết 24 Hình 2.1: Cơ chế thần kinh thể dịch điều hịa chu kỳ ñộng dục bò 28 ðồ thị 2.3 Mối tương quan mật ñộ quang học (OD) nồng ñộ LH (mIU/ml) 44 ðồ thị 2.4 Mối tương quan mật ñộ quang học (OD) nồng ñộ FSH (mIU/ml) 45 Biểu ñồ 4.1 Nguyên nhân tượng rối loạn trình thụ tinh bò sữa 62 ðồ thị 4.1 ðộng thái LH chu kỳ ñộng dục bình thường bị sữa .66 ðồ thị 4.2 ðộng thái FSH chu kỳ ñộng dục bình thường bị sữa 66 ðồ thị 4.2 Hàm lượng FSH trường hợp chậm sinh buồng trứng bò sữa 69 ðồ thị 4.3 Hàm lượng LH trường hợp chậm sinh buồng trứng bò sữa 69 viii PHẦN I MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn đề Những năm gần chăn ni chiếm vị trí quan trọng ngành nơng nghiệp nước ta, đặc biệt chăn ni bị sữa ñà phát triển ðời sống xã hội ngày nâng cao, nhu cầu thực phẩm tăng mạnh số lượng chất lượng, chăn ni đại gia súc có vị trí quan trọng phải ñảm bảo ñáp ứng nhu cầu ngày cao thịt sữa Mơ hình chăn nuôi phân tán nông hộ trang trại nhỏ, điều kiện chăm sóc ni dưỡng khác nên dẫn ñến tiêu sản xuất ñàn bị khác Chăn ni bị sữa cịn mang tính chất nhỏ lẻ, khơng tập trung, trình độ am hiểu kỹ thuật chăn ni cịn hạn chế, tiêu sinh sản thường không ổn ñịnh, số nguyên nhân sinh sản ñã biểu như: Tuổi ñộng dục lần ñầu cao (18-36 tháng), khoảng cách hai lứa đẻ dài (15-18 tháng) Có nhiều loại bệnh khác bò sữa ñó phải kể ñến bệnh rối loạn sinh sản nguyên nhân bệnh lý buồng trứng vô sinh, chậm thành thục tính, chậm động dục lại sau đẻ, tiêu sinh sản thường khơng ổn ñịnh ñặc biệt tượng rối loạn sinh sản xảy đàn bị di truyền, chế độ chăm sóc ni dưỡng, khai thác quản lý đàn, dị tật trình bệnh lý quan sinh dục ñặc biệt rối loạn nội tiết, làm cho tỷ lệ đẻ tồn đàn thấp, tỷ lệ thụ thai thấp, hệ số phối giống cao khoảng cách lứa ñẻ kéo dài ðây yếu tố hạn chế làm ảnh hưởng lớn đến hiệu kinh tế ngành chăn ni bị sữa Việt Nam Q trình thành thục tính rụng trứng chủ yếu ñiều khiển hormone sinh sản FSH, LH, Oestrogen, progesteron,… ñặc biệt ... diễn biến hormone, ứng dụng chẩn đốn, phịng trị số tượng rối loạn sinh sản bò sữa nuôi Việt nam tiến hành nghiên cứu ñề tài: ? ?Xác ñịnh hàm lượng số hormone sinh sản phương pháp miễn dịch enzim... trình bệnh lý gia súc Một số phịng thí nghiệm Việt Nam dùng phương pháp chẩn đốn miễn dịch enzym ELISA (Enzyme linked immuno sorbent assay) có độ xác cao, nhanh chóng xác định nồng độ FSH, LH... 41 3.3.2 Phương pháp ELISA ñịnh lượng hormone 42 3.3.3 Phương pháp ñịnh lượng hormone FSH, LH 42 3.3.4 Sử dụng hormone sinh dục chế phẩm hormone ñể ñiều trị tượng rối loạn trình