ủũi hỏi phải cú ủộ chớnh xỏc cao.
Hormone sinh dục do tuyến sinh dục tiết ra tham gia vào quỏ trỡnh ủiều tiết ủảm bảo chức năng sinh sản. Chỳng ủiều tiết cỏc phản ứng sinh hoỏ học ảnh hưởng tới sự thành thục trứng, sự phỏt triển của tế bào trứng, tế bào tinh trựng, sự thụ tinh ... hormone sinh dục gồm cú bốn nhúm: nhúm hormone protein, nhúm hormone steroid, nhúm hormone chứa amin, nhúm hormone Eicosanoid (Lờ đức Trỡnh, 2003 [32]).
2.6.3.1. Phương phỏp ủịnh lượng sinh học (bioassay)
định lượng hormone theo phương phỏp sinh học (bioassay) ủược ỏp
dụng sớm nhất. đõy là phương phỏp rất nhạy tuy nhiờn ủộ chớnh xỏc khụng cao so với cỏc phương phỏp hoỏ học hay vật lý.
2.6.3.2 Nguyờn lý phương phỏp ELISA
ELISA là phương phỏp ủịnh lượng miễn dịch enzyme dựa trờn nguyờn lý của sự kết hợp ủặc hiệu giữa khỏng thể - khỏng nguyờn. Khi cho tiếp xỳc giữa khỏng thể và khỏng nguyờn ủó kớch thớch sinh ra chỳng thỡ phản ứng giữa khỏng thể Ờ khỏng nguyờn sẽ xảy ra một cỏch ủặc hiệu. Về bản chất, sự kết hợp giữa khỏng thể Ờ khỏng nguyờn chớnh là sự liờn kết giữa cỏc nhúm chức khỏc nhau của khỏng nguyờn với trung tõm hoạt ủộng của khỏng thể nhờ cỏc lực liờn kết ủặc trưng là lực Wander Ờ Wals, lực liờn kết Hydro và lực liờn kết tĩnh ủiện (Vũ Triệu An, Homber, 1998 [1]).
Trong mỗi phõn tử khỏng thể (IgG) cú hai trung tõm hoạt ủộng nờn cựng lỳc nú cú thể liờn kết với hai phõn tử khỏng nguyờn cựng loại, cũn mỗi phõn tử khỏng nguyờn lại cú nhiều nhúm chức (epitop) quyết ủịnh tớnh chất khỏng nguyờn nờn nú cú thể kết hợp cựng lỳc với nhiều phõn tử khỏng thể.
ELISA là một phương phỏp ủịnh lượng miễn dịch enzyme khụng gõy tổn thương ủến tớnh miễn dịch của khỏng nguyờn, khỏng thể, khỏng khỏng thể khi sử dụng enzyme ủể gắn trong quỏ trỡnh tạo phản ứng miễn dịch. Phương
phỏp này cú ưu ủiểm là làm tăng ủộ nhạy của phản ứng miễn dịch cạnh tranh thụng qua việc sử dụng cỏc phản ứng miễn dịch ủặc biệt, sử dụng nhiều chất khỏc nhau ủể ủỏnh dấu khỏng nguyờn, khỏng thể.
Cỏc enzyme ủược sử dụng trong phương phỏp ELISA cú hoạt tớnh cao như peroxydase (chế từ củ cải ủen), glucose-oxydase (chế từ nấm mốc) hoặc
βgalacto-oxydase (chế từ vi khuẩn E.coli) ủể gắn hormone giống nhau, trong ủú peroxydase ủược sử dụng một cỏch thụng dụng nhất. Trong quỏ trỡnh ủịnh lượng hormone, người ta sử dụng cơ chất 3.3Ỗ diaminobenzidin ủể phỏt hiện phức hợp khỏng thể - khỏng nguyờn gắn enzyme. Dưới tỏc dụng của peroxydase cơ chất núi trờn sẽ tạo thành sản phẩm cú màu nõu thẫm cú thể nhỡn thấy bằng mắt thường.
2.6.3.3. Nghiờn cứu ứng dụng kỹ thuật EIA trong chăn nuụi
Hiện nay cỏc nghiờn cứu và ứng dụng của kỹ thuật EIA ủối với bũ sinh sản chưa nhiều và mới bắt ủầu tiến hành nghiờn cứu bởi cỏc tỏc giả Phan Văn Kiểm, Nguyễn Mạnh Hà, Nguyễn Hữu Trà Ầ năm 2004-2005 ủó ủưa ra một số kết quả nhất ủịnh bằng kỹ thuật EIA và ủó ủược ỏp dụng ủể:
Xỏc ủịnh ủộng thỏi hormone LH trong chu kỳ ủộng dục ủể xỏc ủịnh
thời gian ủộng dục, thời ủiểm rụng trứng nhằm xõy dựng quy trỡnh phối giống ủạt tỷ lệ thụ thai cao gúp phần nõng cao năng suất sinh sản của bũ.
2.6.3.4. Những nghiờn cứu về biện phỏp kỹ thuật nõng cao khả năng sinh sản
Từ những năm 1930 trở lại ủõy ủặc biệt là sau những năm 1970, khi ủó hiểu rừ vai trũ, bản chất và cơ chế tỏc ủộng của hormon hướng sinh dục, cơ chế ủiều hoà hoạt ủộng sinh dục ủược nghiờn cứu một cỏch ủầy ủủ trờn cơ sở hoạt ủộng qua lại (cơ chế xuụi và ngược), giữa hypothalamus - tuyến yờn - tuyến sinh dục. Cỏc nhà khoa học ủó nghiờn cứu và ứng dụng hiểu biết ủú ủể nõng cao khả năng sinh sản của gia sỳc cỏi.
để cú nguồn hormon sử dụng trong thực tiễn sản xuất, cỏc nhà khoa học một mặt chiết suất và làm tinh khiết cỏc hormon lấy từ tuyến nội tiết. Mặt khỏc nghiờn cứu chế ra cỏc chất cú hoạt tớnh tương tự hormon tự nhiờn. đú là cỏc chế phẩm hormon ủược chế tạo từ con ủường tổng hợp hoỏ học.
a. Kớch tố tổng hợp hoỏ học:
Cỏc oestrogen hoỏ học: Việc chiết xuất cỏc oestrogen tự nhiờn là một khú khăn lớn. Gần ủõy bằng con ủường tổng hợp, người ta ủó ủiều chế ủược những chất cú tỏc dụng ủối với cơ thể gia sỳc cỏi giống như oestrogen của buồng trứng gồm những chất: ostron, stinbestron, Hexutron, Dietinstinbestron và Dieneston, trong ủú chất Dietinstinbestron ủược sử dụng nhiều nhất trong chăn nuụi.
- Cỏc prosgtaglandin:
Prosgtaglandin ủó ủược sản xuất trong cỏc xớ nghiệp bào chế thuốc từ năm 1966. ở Nhật sản xuất panxelian F2α, một chế phẩm của Cụng ty ICI (Anh) là Estrumate cú tỏc dụng tương tự prostaglandin ủể ủiều hoà chức năng sinh sản của bũ, hiệu lực của nú mạnh gấp 100 lần plostaglaudin tự nhiờn. ở Hunggari ủó tổng hợp PGF2α mang tờn Enoprost. Mỹ sản xuất chế phẩm Lutalyse hoàn toàn giống prostaglandin tự nhiờn.
b. Kớch dục tố nguồn gốc sinh vật: Huyết thanh ngựa chửa (H.T.N.C):
Từ năm 1930 H.Cole và G.Harf ủó phỏt hiện trong huyết thanh ngựa chửa cú một chất cú hoạt tớnh hướng sinh dục rất cao. HTNC vừa cú hoạt tớnh giống FSH vừa giống LH, ủược tiết ra bởi tế bào chớn của nội mạc tử cung ngựa cỏi.
HTNC cú hoạt tớnh cao trong khoảng 90 - 120 ngày cú chửa rồi giảm dần và mất hẳn hoạt tớnh khi ủạt 150 ngày cú chửa.
PHẦN III. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.1.đối tượng nghiờn cứu
đề tài ủược tiến hành nghiờn cứu ở bũ nuụi hướng sữa HF (Holstein
Friesian x Lai sind) lai F1, F2 ở cỏc ủộ tuổi khỏc nhau, lứa ủẻ khỏc nhau ở Trung tõm bũ và ủồng cỏ Ba Vỡ và Nụng trường Phự đổng Ờ Hà Nội. Bũ ủược nuụi ở cỏc hộ gia ủỡnh với quy mụ trang trại vừa và nhỏ.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});