TÌNH HÌNH NHIỄM ĐỘC TỐ AFLATOXIN VÀ SỬ DỤNG AGONIST, DIETHYLSTILBETROLTRONG THỨC ĂN HEO T HỊT TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ CHĂN NUÔI HEO TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TÌNH HÌNH NHIỄM ĐỘC TỐ AFLATOXIN VÀ SỬ DỤNG -AGONIST, DIETHYLSTILBETROLTRONG THỨC ĂN HEO THỊT TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ CHĂN NI HEO TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Họ tên sinh viên : TRẦN THỤY PHƯƠNG TRÚC Ngành : Thú Y Lớp : Thú Y 29 Niên khóa : 2003 – 2008 Tháng 09/2008 TÌNH HÌNH NHIỄM ĐỘC TỐ AFLATOXIN VÀ SỬ DỤNG -AGONIST, DIETHYLSTILBETROL TRONG THỨC ĂN HEO THỊT TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ CHĂN NI HEO TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Tác giả TRẦN THỤY PHƯƠNG TRÚC Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sĩ ngành Thú Y Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS LÂM THỊ THU HƯƠNG ThS NGUYỄN LÊ KIỀU THƯ Tháng 09/2008 i LỜI CẢM TẠ Chân thành cảm tạ  Ban giám hiệu Trường Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh  Ban Chủ nhiệm khoa Chăn Nuôi - Thú Y  Quý thầy cô Khoa Chăn nuôi - Thú Y Đã tạo điều kiện học tập truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian học trường Chân thành ghi ơn  PGS-TS Lâm Thị Thu Hương tận tình hướng dẫn, bảo truyền đạt kiến thức q báu để tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp  ThS-BSTY Nguyễn Lê Kiều Thư nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ cung cấp thông tin cho suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Chân thành cảm ơn  Ban lãnh đạo Chi Cục Thú Y Thành phố Hồ Chí Minh  Các chú, anh chị tồn thể cán cơng nhân viên chức Trạm Chẩn Đốn- Xét Nghiệm Điều Trị, Chi Cục Thú Y TP.HCM Đã tận tình giúp đỡ, truyền đạt nhiều kinh nghiệm, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Trần Thụy Phương Trúc ii TĨM TẮT LUẬN VĂN Đề tài: “TÌNH HÌNH NHIỄM ĐỘC TỐ AFLATOXIN VÀ SỬ DỤNG AGONIST, DIETHYLSTILBETROL TRONG THỨC ĂN HEO THỊT TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ CHĂN NI HEO TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH”, thực Trạm Chẩn Đoán-Xét Nghiệm Điều Trị thuộc Chi Cục Thú Y Tp Hồ Chí Minh từ ngày 22/01/2008 đến 15/06/2008 Chúng tơi tiến hành phân tích 95 mẫu thức ăn gia súc 266 mẫu nước tiểu số CSCN heo địa bàn thành phố phương pháp ELISA LC/MS cho chất diethylstilbetrol β-agonist, phương pháp TLC HPLC cho aflatoxin Kết ghi nhận sau: - Tất mẫu thức ăn nước tiểu thu thập âm tính với diethylstilbetrol - Các mẫu thức ăn lấy kho khơng phát có chứa β-agonist Có 43 mẫu thức ăn máng phát thấy có β-agonist chiếm tỉ lệ 2,33% với hàm lượng 1184,8 ppb Tỉ lệ mẫu nước tiểu tồn dư β-agonist 2,26%; hàm lượng dao động từ 2,12 đến 206,40 ppb (trung bình 65,83 ppb) Các mẫu thức ăn nước tiểu tồn dư βagonist thuộc CSCN quận 12 quận Củ Chi Tỉ lệ CSCN khơng nằm mơ hình kiểm soát vi phạm sử dụng β-agonist 22,22%; tỉ lệ CSCN mơ hình kiểm sốt vi phạm sử dụng β-agonist 0% Kích thích tố thuộc nhóm βagonist phát salbutamol - Tỉ lệ nhiễm aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp cho heo thịt 26,92% Trong đó, tỉ lệ nhiễm mẫu thức ăn tự trộn 39,29%; mẫu thức ăn hỗn hợp bán sẵn thị trường 12,50% Tỉ lệ nhiễm aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp vượt mức quy định hàm lượng tối đa AFB1 cho phép 7,69% Các mẫu thức ăn nhiễm aflatoxin tập trung mức hàm lượng từ ≥50-100 ppb Trong mẫu cám tự trộn nhiễm aflatoxin B1 có 36,35% nhiễm aflatoxin vượt mức quy định hàm lượng tối đa AFB1 cho phép thức ăn hỗn hợp cho heo thịt (≥100 ppb) iii MỤC LỤC Trang Trang tựa khoá luận i Lời cảm tạ ii Tóm tắt luận văn iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH CÁC HÌNH viii DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix Chương 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu - Yêu cầu 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Yêu cầu Chương 2: TỔNG QUAN .3 2.1 KHÁI NIỆM VỀ CHĂN NI HEO AN TỒN 2.1.1 Một số định nghĩa 2.1.2 Điều kiện vệ sinh thú y thức ăn, nước uống cho heo chăn ni heo an tồn 2.2 MỘT SỐ CHẤT TỒN DƯ TRONG THỨC ĂN CHO HEO THỊT 2.2.1 GIỚI THIỆU VỀ NHÓM -AGONIST 2.2.1.1 Giới thiệu chung nhóm -agonist 2.2.1.2 Đặc tính hố học 2.2.1.3 Tính chất 2.2.1.4 Dược lực học .6 2.2.1.5 Ảnh hưởng sư tồn dư -agonist sản phẩm động vật lên người tiêu thụ 2.2.1.6 Những quy định việc sử dụng nhóm -agonist 2.2.2 GIỚI THIỆU VỀ DIETHYLSTILBETROL (DES) 10 2.2.2.1 Giới thiêu chung - lịch sử sử dụng DES 10 iv 2.2.2.2 Đặc tính hố học 11 2.2.2.3 Dược lực học .11 2.2.2.4 Cơ chế tác động DES lên kích thích tăng trọng 13 2.2.2.6 Ảnh hưởng DES đến người tiêu dùng 13 2.2.2.7 Những quy định chung việc sử dụng DES 14 2.2.3 GIỚI THIỆU VỀ AFLATOXIN 15 2.2.3.1 Lịch sử phát aflatoxin .15 2.2.3.2 Các loại nấm mốc sản sinh aflatoxin yếu tố ảnh hưởng tạo thành aflatoxin 15 2.2.3.3 Các đặc điểm aflatoxin .17 2.2.3.3.1 Cấu trúc hoá học 17 2.2.3.3.2 Đặc tính lý hố 17 2.2.3.3.3 Hấp thu - Phân bố - Chuyển hoá - Bài thải 17 2.2.3.4 Tác hại aflatoxin gia súc người 20 2.2.3.5 Đề phòng xử lý thức ăn nhiễm aflatoxin .22 2.2.3.6 Những quy định mức aflatoxin phép thức ăn hỗn hợp cho gia súc 23 2.3 Lược duyệt số cơng trình nghiên cứu có liên quan 24 Chương 3: PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 26 3.1 Thời gian địa điểm 26 3.1.1 Thời gian .26 3.1.2 Địa điểm .26 3.2 Đối tượng khảo sát 26 3.3 Nội dung khảo sát 26 3.4 Hoá chất 27 3.5 Phương pháp tiến hành 28 3.5.1 Phương pháp thu thập mẫu 28 3.5.2 Cách lấy bảo quản mẫu 28 3.5.3 Phương pháp thí nghiệm .29 3.5.3.1 Quy trình xét nghiệm nhóm -agonist diethylstilbetrol (DES) 29 v 3.5.3.2 Quy trình xét nghiệm xác định aflatoxin thức ăn chăn nuôi 34 3.6 Phương pháp xử lý số liệu .37 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 4.1 Tình hình tồn dư diethylstilbetrol (DES) .38 4.2 Tình hình tồn dư nhóm β-agonist 40 4.2.1 Kết khảo sát tồn dư -agonist .40 4.2.2 Tình hình tồn dư -agonist theo nguồn gốc mẫu 42 4.2.3 Tình hình phát chất nhóm β-agonist 47 4.3 Tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn heo thịt .49 4.3.1 Kết khảo sát tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn heo thịt .49 4.3.2 Mức nhiễm AFB1 thức ăn tự trộn TĂHH heo 51 4.3.3 Hàm lượng aflatoxin mẫu vi phạm 53 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 5.1 Kết luận 55 5.2 Đề nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO .57 PHỤ LỤC 60 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT : TIẾNG NƯỚC NGOÀI (TẠM DỊCH) DES : Diethylstilbetrol AF : Aflatoxin AFB1 : Aflatoxin B1 ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (Phản ứng hấp phụ miễn dịch men) TLC : Thin Layer Chromatography (Sắc ký mỏng) LC/MS : Liquid Chromatography with Mass Spectotrom (Sắc ký lỏng ghép khối phổ) HPLC : High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng cao áp) FDA : the US Food and Drug Administration (Cơ quan quản lý thuốc dược phẩm Mỹ) MRL : Maximum Residue Limit (Giới hạn dư lượng tối đa) IARC : International Agency for Research on Cancer (Trung tâm nghiên cứu ung thư giới) FAO : Food and Agriculture Organization (Tổ chức Lương Nông giới) WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) CSCN : sở chăn nuôi TĂHH : thức ăn hỗn hợp vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Cấu trúc chung phenethanolamine Hình 2.2 Cơng thức cấu tạo chất thuộc nhóm -agonist thường sử dụng chăn nuôi Hình 2.3 Cấu trúc khơng gian R-salbutamol Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo DES 11 Hình 2.5 Cơng thức phân tử Aflatoxin B1 17 Hình 2.6 Cấu trúc 3D Aflatoxin B1 17 Hình 3.1 Bộ kit ELISA cho β-agonist Diethylstilbetrol 28 Hình 3.2 Thu thập mẫu thức ăn nước tiểu 29 Hình 3.3 Chấm aflatoxin vào mỏng silicagel 35 Hình 4.1 Kết ELISA tồn dư nhóm β-agonist 41 Hình 4.2 Giai đoạn nhỏ dung dịch ngừng phản ứng test ELISA 44 Hình 4.3 Giai đoạn đọc kết máy ELISA 44 Hình 4.4 AFB1 phát quan mỏng silicagel 54 DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1 Hình thành AFB1-Epoxide CYP 450 18 Sơ đồ 2.2 Chuyển hoá AFB1 cytochrom P450 (CYP 450) tạo aflatoxicol 19 Sơ đồ 3.1 Quy trình phân tích nhóm -agonist 32 (Theo Bioo Scientific – USA, 2008) Sơ đồ 3.2 Quy trình phân tích Diethylstilbetrol 33 (Theo Bioo Scientific – USA, 2008) Sơ đồ 3.3 Quy trình phân tích aflatoxin B1 36 viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Đáp ứng tiêu biểu gia súc, gia cầm bổ sung -agonist phần Bảng 2.2 Đáp ứng tăng trưởng số động vật DES 12 Bảng 2.3 Tồn dư Aflatoxin B1 mô bào heo 19 Bảng 2.4 LD50 aflatoxin B1 số loài động vật 20 Bảng 2.5 Quy định mức độ tối đa độc tố aflatoxin thứa ăn hỗn hợp 23 Bảng 2.6 Mức độ tối đa AF phép số nước giới 23 Bảng 3.1 Điều kiện phân tích aflatoxin HPLC 35 Bảng 4.1 Tỉ lệ mẫu thức ăn nước tiểu tồn dư DES 38 Bảng 4.2 Tỉ lệ mẫu thức ăn nước tiểu tồn dư -agonist 40 Bảng 4.3 Tỉ lệ mẫu thức ăn nước tiểu tồn dư -agonist theo quận 42 Bảng 4.4 Tỉ lệ trại vi phạm sử dụng β-agonist theo mơ hình trại 45 Bảng 4.5 Hàm lượng chất thuộc nhóm β-agonist mẫu dương tính 47 Bảng 4.6 Tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn hỗn hợp cho heo thịt 49 Bảng 4.7 Mức nhiễm AFB1 thức ăn tự trộn TĂHH heo 51 Bảng 4.8 Hàm lượng aflatoxin mẫu vi phạm 53 ix 4.2.3 Tình hình phát chất nhóm β-agonist Các mẫu thức ăn nước tiểu sau phân tích định tính phương pháp ELISA, có mẫu nước tiểu mẫu thức ăn dương tính, mẫu gởi phân tích hàm lượng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC/MS) Trung tâm đào tạo phát triển sắc ký (71 Trương Định, Quận 1) Kết sau phân tích phương pháp LC/MS với chất thuộc nhóm β-agonist clenbuterol salbutamol mẫu dương tính trình bày qua bảng 4.5 Bảng 4.5 Hàm lượng chất thuộc nhóm β-agonist mẫu dương tính Hàm lượng (ppb) Clenbuterol Salbutamol 2,12 44,88 2,88 206,40 46,80 91,90 1184,80 Loại mẫu Nước tiểu Thức ăn Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu mẫu dương tính gởi phân tích để phát clenbuterol phương pháp LC/MS, kết cho thấy hàm lượng clenbuterol mẫu ppb Các mẫu kiểm tra với chất thứ hai thuộc họ β-agonist salbutamol cho kết bảng 4.5 Salbutamol diện mẫu nước tiểu mẫu thức ăn mức nồng độ khác nhau, dao động từ 2,12 ppb đến 206,40 ppb (trung bình 65,83 ppb) mẫu nước tiểu 1184,8 ppb mẫu thức ăn Kết điều tra tồn dư nhóm -agonist đợt khảo sát không phát trường hợp tồn dư clenbuterol năm trước mà thay vào chất khác họ salbutamol Có thể việc kiểm sốt chặt sử dụng clenbuterol năm gần làm nhà chăn nuôi e ngại sử dụng chất Tuy nhiên, số CSCN ý thức hạn chế, mục đích tăng lợi nhuận kinh tế họ chuyển sang sử dụng chất khác họ -agonist với đặc tính tương tự clenbuterol kích thích tăng trọng nhằm tránh kiểm sốt quan chức salbutamol 47 Trên giới có nhiều khảo sát tồn dư kích thích tố thuộc nhóm -agonist mơ, phủ tạng nước tiểu động vật Ở Bồ Đào Nha tháng 1/1991 31/12/1993 nước tiểu bò thu thập để phân tích tồn dư - agonist Trong 1031 mẫu 24 mẫu có chứa clenbuterol mẫu có salbutamol Bridge ctv (2001) khảo sát tình hình tồn dư -agonist thực phẩm có nguồn gốc động vật Anh phát 0,94% (1/107) mẫu thận bò có tồn dư -agonist Theo kết điều tra thức ăn gia súc có nguồn gốc từ Châu Âu, năm 2003 có 12 mẫu phát thấy có -agonist tổng số 806.525 mẫu Năm 2004 45 mẫu tổng 807.000 mẫu bò có mẫu salbutamol, mẫu isosuprine lại clenbuterol Ở heo có 13 mẫu có -agonist năm 2003, 11 mẫu năm 2004 Thêm vào mẫu dương tính với salbutamol tìm thấy gia cầm mẫu cừu Năm 1996 Cộng đồng Châu Âu ban hành thị 96/22/EC cấm việc sử dụng hormone kích thích tăng trưởng thuộc nhóm -agonist chăn ni Chỉ chất thuộc nhóm -agonist đăng ký sử dụng thú y để điều trị cho gia súc, ngựa thú nuôi nhà clenbuterol, việc sử dụng thú sản xuất hoàn toàn bị cấm Ở Việt Nam theo thị số 54/2002/QĐ-BNN Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thơn kích thích tố thuộc nhóm -agonist (trong có salbutamol) bị cấm sản xuất, nhập khẩu, lưu thơng sử dụng Qua đó, hiểu mức tồn dư cho phép salbutamol ppb Việt Nam cộng đồng Châu Âu Kết kiểm tra 266 mẫu nước tiểu heo thịt chúng tơi phát có đến mẫu có tồn dư salbutamol tồn dư mức nồng độ khác (từ 2,12 đến 206,40 ppb) trung bình 65,83 ppb Đây số cần quan tâm tồn dư salbutamol mẫu nước tiểu cao, gây tác hại cho người tiêu thụ ăn phải thịt hay gan nhóm heo Do nhà nước nên tăng cường công tác quản lý thuốc thú y thức ăn chăn ni để tránh tình trạng mua bán sử dụng bất hợp pháp chất cấm 48 4.3 Tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn heo thịt 4.3.1 Kết khảo sát tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn heo thịt Kết phân tích aflatoxin thức ăn cho heo thịt số CSCN địa bàn thành phố Hồ Chí Minh trình bày qua bảng 4.6 Bảng 4.6 Tình hình nhiễm aflatoxin thức ăn tự trộn TĂHH trộn sẵn cho heo thịt Đối tượng CSCN khảo sát Loại thức ăn Mẫu thức ăn Số CSCN Số CSCN có Số CSCN Số mẫu khảo sát mẫu nhiễm khảo sát dương tính vi phạm vi phạm Số mẫu Số mẫu Tự trộn 14 28 11 TĂHH 16 24 Chung 30 52 14 Qua phân tích 52 mẫu thức ăn hỗn hợp phương pháp sắc ký mỏng, chúng tơi ghi nhận có 14 mẫu cho kết dương tính với AFB1 chiếm tỉ lệ 26,92% Kết thấp nhiều so với kết thống kê trước Lê Anh Phụng năm 1998, 1999 (100%), Lê Văn Tố ctv năm 2002 (82%), Trần Minh Đức năm 2002 (100%), Lại Kiều Oanh năm 2003 (96,1%), Đặng Thị Duyên năm 2005 (65%) Hồ Hoa Phương Thảo năm 2006 (73,5%) Nếu tỉ lệ thức ăn hỗn hợp có diện AF nửa kết khảo sát trước kết chúng tơi ghi nhận giảm cách đáng kể, khoảng 1/4 số mẫu có AF Điều cho thấy có cải thiện rõ rệt chất lượng thức ăn hỗn hợp cho gia súc năm năm gần Thức ăn tự trộn có tỉ lệ dương tính với AFB1 39,29%; thức ăn hỗn hợp trộn sẵn tỉ lệ dương tính với AFB1 12,50% Sự khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê với P = 0,03 (