Nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ thu trứng đến kết quả nuôi thành thục trứng một số loài vật nuôi

Nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ thu trứng đến kết quả nuôi thành thục trứng một số loài vật nuôi

Bộ giáo dục và đào tạo Trờng đại học nông nghiệp I ------ ------ Nguyễn thị phơng hiền Nghiên cứu ảnh hởng của mùa vụ thu trứng đến kết quả nuôi thành thục trứng một số loài vật nuôi Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : Thú y M số : 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: TS. Bùi Xuân Nguyên Hà Nội - 2007 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 1 LờI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và cha từng đợc sử dụng và công bố trong bất cứ công trình nào khác. Mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đ đợc cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều đ đợc chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Phơng Hiền Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 2 LờI CảM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới Tiến sĩ Bùi Xuân Nguyên, chủ nhiệm đề tài nhà nớc về công nghệ phôi đ tận tình hớng dẫn, giúp đỡ các điều kiện để luận văn này có thể hoàn thành. Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến các cô, chú, anh, chị em thuộc phòng Công nghệ phôi, Viện Công nghệ sinh học, Viện khoa học và Công nghệ Việt Nam và các bạn bè đồng nghiệp, đặc biệt là tới Tiến sĩ Nguyễn Thị Ư ớc, Tiến sĩ Nguyễn Hữu Đức, Thạc sĩ Nguyễn Văn Hạnh, Thạc sĩ Nguyễn Việt Linh, Đặng Nguyễn Quang Thành, Nguyễn Thị Thuỳ Anh đ nhiệt tình giúp đỡ, góp ý cho tôi trong quá trình thực hiện những thí nghiệm liên quan đến luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn đề tài hợp tác Việt - Pháp BIODIVA - VAST (hợp phần GT 5) và đề tài nghiên cứu cơ bản m số 6.120.06 đ tạo điều kiện hỗ trợ để tôi hoàn thành luận văn. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn TS . Nguyễn Bá Mùi, giảng viên chính bộ môn sinh lý - sinh hóa động vật và tập thể cán bộ, giáo viên khoa thú y trờng Đ ại học Nông nghiệp I đ tận tình chỉ bảo và giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn tới gia đình, anh em, bạn bè đ động viên, ủng hộ và khích lệ tôi trong suốt quá trình hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Xin trân th ành cảm ơn! Hà Nội, ngày 19 tháng 8 năm 2007 Học viên Nguyễn Thị Phơng Hiền Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 3 MụC LụC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt v Danh mục các bảng vi Danh mục các biểu đồ vii 1. ĐặT VấN Đề 0 1.1 Tính cấp thiết của đề tài 8 1.2 Mục tiêu của đề tài 9 1.3 ý nghĩa của đề tài 10 2. TổNG QUAN CáC VấN Đề NGHIÊN CứU 11 2.1 Tình hình nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh sản trong và ngoài nớc 11 2.1.1 Tình hình nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh sản trên thế giới 11 2.1.2 Tình hình nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh sản ở Việt Nam 13 2.2 Những nét chung về quá trình sinh sản và thành thục trứng gia súc 14 2.2.1 Cấu tạo của buồng trứng 14 2.2.2 Quá trình sinh tế bào trứng 17 2.2.3 Cấu tạo tế bào trứng (tế bào non) 18 2.2.4 Sự thành thục tế bào trứng 20 2.3 Khai thác và nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn trong ống nghiệm 24 2.3.1 Hiện trạng khai thác trứng trâu, bò, lợn 24 2.3.2 Phân loại chất lợng trứng 27 2.3.3 Nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn trong ống nghiệm - In vitro 21 maturation (IVM) 2.3.4 Các yếu tố ảnh hởng đến kết quả khai thác và nuôi thành thục 26 trứng trâu, bò, lợn trong ống nghiệm 3. ĐốI TƯợNG - NộI DUNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 37 3.1 Đối tợng nghiên cứu 37 3.2 Nội dung nghiên cứu 37 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 38 3.3.1 Phơng pháp thu, bảo quản và vận chuyển buồng trứng 38 3.3.2 Phân loại nang bề mặt buồng trứng 39 3.3.3 Phân loại trứng theo chất lợng 39 3.3.4 Phơng pháp nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn trong ống nghiệm 39 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 4 3.3.5 Đ ánh giá các giai đoạn phát triển nhân của tế bào trứng 40 3.3.6 Phơng pháp xử lý số liệu 40 4. KếT QUả Và THảO LUậN 42 4.1 Kết quả khảo sát về khối lợng của buồng trứng thu đợc trên trâu, bò, lợn 35 trong hai mùa xuân, hè 4.1.1 Đối với buồng trứng trâu 42 4.1.2 Đối với buồng trứng bò 43 4.1.3 Đối với buồng trứng lợn 45 4.2 Kết quả khảo sát kích thớc của buồng trứng thu đợc trên trâu, bò, lợn 39 trong hai mùa xuân, hè 4.2.1 Đối với buồng trứng trâu 46 4.2.2 Đối với buồng trứng bò 48 4.2.3 Đối với lợn 49 4.3 Kết quả khảo sát số nang trứng trên bề mặt buồng trứng trâu, bò, lợn 43 theo hai mùa xuân, hè 4.3.1. Đối với trâu 50 4.3.2 Đối với bò 51 4.3.3 Đối với lợn 52 4.4 Kết quả thu trứng từ buồng trứng trâu bò, lợn theo mùa 55 4.4.1 Đối với trâu 56 4.4.2 Đối với bò 57 4.4.3 Đối với lợn 58 4.5 Phân loại chất lợng trứng thu đợc từ buồng trứng trâu, bò, lợn 52 theo hai mùa xuân, hè 4.5.1 Đối với trâu 59 4.5.2 Đối với bò 61 4.6 Kết quả nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn trong hai mùa xuân, hè 57 4.6.1 Đối với trâu 65 4.6.2 Đối với bò 66 4.6.3 Đối với lợn 68 5. KếT LUậN Và Đề NGHị 72 5.1. Kết luận 72 5.2 Đề nghị 73 TàI LIệU THAM KHảO 74 Phụ lục 72 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ----------------------- 5 DANH MôC C¸C CH÷ VIÕT T¾T CNSS C«ng nghÖ sinh s¶n E E stradiol - 17 eCG Equine Chorionic Gonadotropin FSH F ollicle Stimulating Hormone GnRH Gonadotropin Releasing Hormone h CG H uman Chorionic Gonadotropin LH Luteinising Stimulating Hormone MPF M aturation Promoting factor (yÕu tè thóc trøng thµnh thôc) OMI Oocyte Maturation Inhibitor (yÕu tè øc chÕ trøng thµnh thôc) P P rogesteron PG, PGF Prostaglandin vcs Vµ céng sù Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 6 DANH MụC CáC BảNG Số BảNG TÊN BảNG TRANG Bảng 2.1 Đờng kính trứng của trâu, bò, lợn 20 Bảng 2.2 Phân loại chất lợng trứng 27 Bảng 4.1 Kết quả khảo sát khối lợng của buồng trứng trâu theo mùa xuân, hè 42 Bảng 4.2 Kết quả khảo sát khối lợng của buồng trứng Bò theo mùa xuân, hè 44 Bảng 4.3 Kết quả khảo sát khối lợng của buồng trứng lợn theo mùa xuân, hè 45 Bảng 4.4 Kết quả khảo sát kích thớc của buồng trứng Trâu theo mùa 47 Bảng 4.5 Kết quả khảo sát kích thớc của buồng trứng Bò theo mùa 48 Bảng 4.6 Kết quả khảo sát kích thớc của buồng trứng Lợn theo mùa 49 Bảng 4.7 Kết quả khảo sát số nang trứng trên buồng trứng trâu theo mùa 50 Bảng 4.8 Kết quả khảo sát số nang trứng trên buồng trứng bò theo mùa 51 Bảng 4.9 Kết quả khảo sát số nang trứng trên buồng trứng lợn theo mùa 53 Bảng 4.10 Kết quả thu trứng từ buồng trứng trâu theo mùa 49 Bảng 4.11 Kết quả thu trứng từ buồng trứng bò theo mùa 57 Bảng 4.12 Kết quả thu trứng từ buồng trứng lợn theo mùa 58 Bảng 4.13 Phân loại chất lợng trứng trâu thu đợc theo mùa 60 Bảng 4.14 Phân loại chất lợng trứng bò thu đợc theo mùa 61 Bảng 4.15 Phân loại chất lợng trứng lợn thu đợc theo mùa 55 Bảng 4.16 Kết quả nuôi thành thục trứng trâu theo mùa 65 Bảng 4.17 Kết quả nuôi thành thục trứng bò theo mùa 67 Bảng 4.18 Kết quả nuôi thành thục trứng lợn theo mùa 68 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 7 DANH MụC CáC BIểU Đồ Số BIểU Đồ TÊN BIểU Đồ TRANG Biểu đồ 4.1 Kết quả khảo sát số nang trứng 2mm/buồng trứng theo mùa 54 Biểu đồ 4.2 Kết quả khảo sát số nang trứng < 2mm/buồng trứng theo mùa 55 Biểu đồ 4.3 Kết quả thu trứng từ các nang có kích thớc 2mm theo mùa 59 Biểu đồ 4.4 Kết quả thu trứng loại A trên trâu, bò, lợn theo mùa 63 Biểu đồ 4.5 Kết quả thu trứng loại B trên trâu, bò, lợn theo mùa 64 Biểu đồ 4.6 Kết quả thu trứng loại C trên trâu, bò, lợn theo mùa 64 Biểu đồ 4.7 Tỷ lệ nuôi trứng trâu, bò, lợn thành thục theo mùa 69 Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 8 1. ĐặT VấN Đề 1.1 Tính cấp thiết của đề tài Cùng với sự phát triển của các ngành khoa học công nghệ, công nghệ sinh học sinh sản đ và đang đợc quan tâm và nghiên cứu trên nhiều quốc gia, bao gồm các tổ hợp nghiên cứu nh: công nghệ phôi, công nghệ thụ tinh ống nghiệm, nhân bản vô tính, nhân bản vô tính khác loài, cấy chuyển gen vào trứng, bảo vệ đa dạng sinh học, song để đạt đợc những thành quả trong công nghệ sinh học sinh sản, chúng ta phải bắt đầu đi từ nguyên liệu đầu tiên đó là tế bào trứng. Trong công nghệ sinh sản hiện nay việc sử dụng trứng rất đa dang, trứng trâu, bò có thể dùng để nhân bản vô tính cho loài sao la (Bùi Xuân Nguyên (2006)[32]), trứng lợn có thể dùng để nhân bản vô tính cho loài gấu trúc, cừu, khỉ, lợn, chuột (Dominko T vcs, 1999)[22],Trong điều kiện thực tế của nền chăn nuôi ở nớc ta, đối tợng vật nuôi phục vụ cho đời sống của con ngời, chủ yếu là ba loài trâu, bò, lợn; việc thu trứng từ ba loài trên để phục vụ cho tổ hợp các nghiên cứu trong công nghệ sinh học sinh sản là vấn đề đang đợc quan tâm. Hiện tại các nghiên cứu về sự phát triển của buồng trứng và tổ chức buồng trứng đ đợc thực hiện trên nhiều loài khác nhau nh chuột (Cahill vcs, 1981); lợn, cừu (Drian Court vcs, 1985); bò (Erickson, 1996 a; Mariana và Nguyên, 1973), ngời (Barker và Hunter, 1978). Các kết quả nghiên cứu cho thấy buồng trứng của các loài có tiềm năng khổng lồ về sản sinh tế bào non. Số lợng nang ở giai đoạn thành thục sinh sản là hơn 68000 - 70000 với bò ( E rickson, 1996a); 12000 - 86000 đối với lợn (Driancourt vcs, 1985), (Dẫn theo Bùi Xuân Nguyên (2006)[32]). Trên thực tế trong sinh sản tự nhiên số lợng trứng đợc sử dụng là rất hạn chế so với tiềm năng nang của buồng trứng. Ước tính một bò cái chỉ sử dụng từ 10 - 15 trứng trong suốt một đời sinh sản, tức là cha tới 0,01% tiềm năng nang trứng có trong buồng trứng (Nguyễn Thị Ư ớc vcs 1996)[16]. Trng i hc Nụng nghip H Ni - Lun vn Thc s khoa hc Nụng nghip ----------------------- 9 Các nghiên cứu công nghệ sinh sản và các ứng dụng công nghệ sinh sản cần rất nhiều tế bào trứng đ thành thục, là những tế bào trứng có nhân phát triển ở giai đoạn trung kỳ II , biểu hiện bằng sự xuất hiện thể thực thứ nhất có thể quan sát thấy dới kính hiển vi. Theo kết quả nghiên cứu đánh giá trạng thái phát triển tế bào trứng đợc khai thác từ buồng trứng nguyên thể cho thấy cần phải nuôi chín trong ống nghiệm vì tỷ lệ trứng thành thục, có thể thụ tinh trong ống nghiệm, trứng có nhiễm sắc thể ở giai đoạn trung kỳ II , có thể thấy thể cực thứ nhất lại chỉ chiếm một tỷ lệ rất nhỏ. Vì vậy để công nghệ sinh sản thật sự thành công, đáp ứng đợc những mong muốn trong sản xuất chăn nuôi, bảo tồn đa dạng sinh học, sản xuất tế bào phôi gốc phục vụ trong nghiên cứu và điều trị bệnh, ngời ta đ tiến hành khai thác trứng bằng phơng pháp in vitro từ lúc cha thành thục với số lợng tơng đối lớn rồi nuôi thành thục. Kết quả nuôi trứng thành thục chịu ảnh hởng bởi rất nhiều yếu tố nh môi trờng nuôi, thời gian nuôi, nhiệt độ nuôi, điều kiện chăm sóc nuôi dỡng con vật, . Với môi trờng sống ở miền bắc Việt Nam, điều kiện khí hậu nh: nhiệt độ, ẩm độ, ánh sáng, thức ăn nớc uống, . thay đổi giữa các mùa khác nhau trong một năm sẽ có rất nhiều ảnh hởng đến đời sống sinh hoạt của gia súc cái từ đó ảnh hởng đến hoạt động sinh lý sinh sản của chúng và kết quả khai thác và nuôi thành thục trứng. Chính vì vậy việc tiến hành những nghiên cứu so sánh khả năng nuôi thành thục trứng của ba loài vật nuôi có số lợng phong phú giữa các mùa trong năm ở miền bắc Việt Nam là một việc rất cần thiết để từ đó chúng ta chủ động trong thiết kế những thí nghiệm trong tổ hợp các công nghệ sinh học sinh sản, Với khuôn khổ của thời gian thực hiện đề tài, chúng tôi tiến hành nghiên cứu về khả năng nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn của hai mùa trong năm đó là mùa xuân và mùa hè, đây là hai mùa có kiểu thời tiết cũng khá khác biệt, với đề tài: Nghiờn cu nh hng ca mựa v thu trng ủn kt qu nuụi thnh thc trng mt s loi vt nuụi . hiền Nghiên cứu ảnh hởng của mùa vụ thu trứng đến kết quả nuôi thành thục trứng một số loài vật nuôi Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : Thú y M số. chất lợng trứng lợn thu đợc theo mùa 55 Bảng 4.16 Kết quả nuôi thành thục trứng trâu theo mùa 65 Bảng 4.17 Kết quả nuôi thành thục trứng bò theo mùa 67 Bảng