Nghiên cứu bệnh lý huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai tại một số địa phương của tỉnh Thừa Thiên Huế

ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh huyết sắc tố là loại bệnh lý di truyền đơn gene thường gặp nhất ở người. Bệnh huyết sắc tố thường gặp nhất ở khu vực Đông Nam Á là thalassemia và HbE. Thalassemia có 2 loại chính (đó là α-thalassemia và βthalassemia), do sự giảm tổng hợp chuỗi polypeptid tương ứng α và β trong hồng cầu. Hậu quả làm giảm lượng Hb gây thiếu máu. Nguyên nhân của việc giảm sản xuất chuỗi α hoặc β đã được xác định do hàng trăm đột biến khác nhau ở locus globin α và β [30]. Số liệu thống kê của WHO (năm 2008) cho thấy bệnh huyết sắc tố ảnh hưởng tới 71% các nước trên thế giới, mỗi năm có hơn 300.000 trẻ em sinh ra bị bệnh lý di truyền này, trong có có đến hơn 80% những đứa trẻ này sinh ra ở những đất nước có thu nhập kinh tế thấp và trung bình. Bệnh huyết sắc tố là nguyên nhân gây ra 3,4% các trường hợp tử vong ở trẻ em dưới 5 tuổi [38]. Các bệnh huyết sắc tố ngày nay không còn giới hạn trong bất kỳ vùng lãnh thổ đặc biệt nào do sự di dân. Vì vậy, ngày càng xảy ra rộng rãi khắp thế giới và có vai trò trong vấn đề sức khỏe toàn cầu [17]. Dựa vào các số liệu của các tác giả đã nghiên cứu tại Việt Nam, tỷ xuất sinh hằng năm là 1,64% và ước tính mỗi năm có thêm hơn 2.000 đứa trẻ sinh ra bị bệnh thalassemia, số người mang gene bệnh trong cộng đồng vào khoảng 5,3 triệu người, đây là nguồn tiếp tục sinh ra những bệnh nhân thalassemia mới nếu không được phát hiện bệnh sớm và tư vấn đầy đủ trước khi kết hôn [11]. Tại Bệnh viện Nhi Trung ương, hàng năm có thêm khoảng 200 trẻ được chẩn đoán thể nặng, chủ yếu trẻ từ các dân tộc miền núi phía Bắc [12]. Nghiên cứu của Phạm Quang Vinh, Phùng Thị Hồng Hạnh (2009) trên 108 bệnh nhân thalassemia người lớn điều trị tại Viện Huyết Học Truyền Máu Trung ương đã ghi nhận: 57% là β-thalassemia/HbE và cũng là thể nặng nhất, khoang 33% là HbH, 9% là β-thalassemia [14]. Cho đến nay, ở hầu hết các nước những bệnh nhi thalassemia đều được điều trị bằng phương pháp kinh điển là truyền máu và thải sắt. Một số phương pháp điều trị khác đã được áp dụng như: kích thích sinh tổng hợp HbF, các biện pháp sử dụng các chất chống quá trình oxy hóa khử màng hồng cầu hay ghép tủy, nhưng đều chưa mang lại kết quả như mong muốn [17], [18]. Vì vậy, hướng giải quyết bệnh thalassemia là phòng bệnh. Mục tiêu của việc phòng bệnh là ngăn ngừa sinh ra những trẻ bị bệnh nặng. Sàng lọc cho đối tượng phụ nữ mang thai là rất cần thiết, điều này giúp chẩn đoán sớm các bệnh huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai thiếu máu hồng cầu nhỏ nhược sắc. Chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu bệnh lý huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai tại một số địa phương của tỉnh Thừa Thiên Huế” với mục tiêu: 1. Khảo sát tình trạng thiếu máu ở phụ nữ mang thai. 2. Xác định tần suất người mắc bệnh và người lành mang gen các loại bệnh lý huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai tại huyện A Lưới, Phú Vang và Thành phố Huế.

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC

LÊ QUANG VŨ

NGHIÊN CỨU BỆNH LÝ HUYẾT SẮC TỐ

Ở PHỤ NỮ MANG THAI TẠI MỘT SỐ ĐỊA PHƯƠNG

CỦA TỈNH THỪA THIÊN HUẾ

HUẾ - 2017

β0 Đột biến β0-thalassemia không tổng hợp chuỗi globin β

β+ Đột biến β+-thalassemia giảm tổng hợp chuỗi globin β

HbA Hemoglobin A (huyết sắc tố người lớn)

HbF Hemoglobin F (huyết sắc tố bào thai)

Hct Hematocrit (thể tích khối hồng cầu)

HPFH Hereditary persistence of fetal hemoglobin

(Tồn tại dai dẳng huyết sắc tố F)

HPLC High pressure liquid chromatography

(Sắc ký lỏng cao áp)

MCH Mean corpuscular hemoglobin

(Lượng Hb trung bình hồng cầu)

MCV Mean corpuscular volume

(Thể tích trung bình hồng cầu)

NPV Negative predictive value (Giá trị dự đoán âm tính)

OF Osmotic fragility (Sức bền hồng cầu)

PNMT Phụ nữ mang thai

PPV Positive predictive value (Giá trị dự đoán dương tính)

RNA Ribonucleic acid

WHO World Health Organisation (Tổ chức Y Tế Thế Giới)

ĐẶT VẤN ĐỀ

Bệnh huyết sắc tố là loại bệnh lý di truyền đơn gene thường gặp nhất ở người Bệnh huyết sắc tố thường gặp nhất ở khu vực Đông Nam Á là thalassemia và HbE Thalassemia có 2 loại chính (đó là α-thalassemia và β-thalassemia), do sự giảm tổng hợp chuỗi polypeptid tương ứng α và β trong hồng cầu Hậu quả làm giảm lượng Hb gây thiếu máu Nguyên nhân của việc giảm sản xuất chuỗi α hoặc β đã được xác định do hàng trăm đột biến khác nhau ở locus globin α và β [30]

Số liệu thống kê của WHO (năm 2008) cho thấy bệnh huyết sắc tố ảnh hưởng tới 71% các nước trên thế giới, mỗi năm có hơn 300.000 trẻ em sinh ra

bị bệnh lý di truyền này, trong có có đến hơn 80% những đứa trẻ này sinh ra ở những đất nước có thu nhập kinh tế thấp và trung bình Bệnh huyết sắc tố là nguyên nhân gây ra 3,4% các trường hợp tử vong ở trẻ em dưới 5 tuổi [38].Các bệnh huyết sắc tố ngày nay không còn giới hạn trong bất kỳ vùng lãnh thổ đặc biệt nào do sự di dân Vì vậy, ngày càng xảy ra rộng rãi khắp thế giới

và có vai trò trong vấn đề sức khỏe toàn cầu [17]

Dựa vào các số liệu của các tác giả đã nghiên cứu tại Việt Nam, tỷ xuất sinh hằng năm là 1,64% và ước tính mỗi năm có thêm hơn 2.000 đứa trẻ sinh

ra bị bệnh thalassemia, số người mang gene bệnh trong cộng đồng vào khoảng 5,3 triệu người, đây là nguồn tiếp tục sinh ra những bệnh nhân thalassemia mới nếu không được phát hiện bệnh sớm và tư vấn đầy đủ trước khi kết hôn [11] Tại Bệnh viện Nhi Trung ương, hàng năm có thêm khoảng 200 trẻ được chẩn đoán thể nặng, chủ yếu trẻ từ các dân tộc miền núi phía Bắc [12]

Nghiên cứu của Phạm Quang Vinh, Phùng Thị Hồng Hạnh (2009) trên

108 bệnh nhân thalassemia người lớn điều trị tại Viện Huyết Học Truyền Máu Trung ương đã ghi nhận: 57% là β-thalassemia/HbE và cũng là thể nặng nhất, khoảng 33% là HbH, 9% là β-thalassemia [14]

Cho đến nay, ở hầu hết các nước những bệnh nhi thalassemia đều được

điều trị bằng phương pháp kinh điển là truyền máu và thải sắt Một số phương pháp điều trị khác đã được áp dụng như: kích thích sinh tổng hợp HbF, các biện pháp sử dụng các chất chống quá trình oxy hóa khử màng hồng cầu hay ghép tủy, nhưng đều chưa mang lại kết quả như mong muốn [17], [18]

Vì vậy, hướng giải quyết bệnh thalassemia là phòng bệnh Mục tiêu của việc phòng bệnh là ngăn ngừa sinh ra những trẻ bị bệnh nặng

Sàng lọc cho đối tượng phụ nữ mang thai là rất cần thiết, điều này giúp chẩn đoán sớm các bệnh huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai thiếu máu hồng cầu nhỏ nhược sắc

Chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu bệnh lý huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai tại một số địa phương của tỉnh Thừa Thiên Huế” với

mục tiêu:

1 Khảo sát tình trạng thiếu máu ở phụ nữ mang thai

2 Xác định tần suất người mắc bệnh và người lành mang gen các loại bệnh lý huyết sắc tố ở phụ nữ mang thai tại huyện A Lưới, Phú Vang

và Thành phố Huế

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ THIẾU MÁU

1.1.1 Đại cương về thiếu máu

Thiếu máu là sự mất cân bằng sinh lý giữa mất máu và bù đắp máu của

cơ thể, hoặc do sự mất cân bằng giữa sự tiêu hủy quá mức với sự giảm thiểu các quá trình tái tạo máu

Hồng cầu có đời sống từ 120 ngày, mỗi ngày có khoảng 1/100 – 1/200 lượng hồng cầu bị tiêu hủy do hiện tượng thực bào ở lách trong điều kiện sinh

lý bình thường Vận chuyển Oxy hay Cacbonic là do huyết sắc tố của hồng cầu Huyết sắc tố là thành phần cơ bản cuả hồng cầu, chiếm 1/3 trọng lượng hồng cầu chứa khoảng 300 triệu phân tử hemoglobin trong hồng cầu [2], [10]

Huyết sắc tố (Hb) ở người phụ thuộc vào tuổi, giới, hoạt động hay nằm nghỉ, nơi cư trú đồng bằng hay núi cao và màu da Trong xác định thiếu máu, việc xác định các yếu tố sinh học của máu là chính, các dấu hiệu lâm sàng thường đến sau sự thiếu hụt các yếu tố sinh học Thiếu máu là sự giảm khả năng mang oxy của máu khi nồng độ Hb giảm, số lượng hồng cầu giảm do hematocrite giảm Tuy nhiên chẩn đoán thiếu máu bằng cách dựa vào nồng độ

Hb là chính xác nhất [27], [35]

Hb giảm sẽ làm giảm sự trao đổi oxy trong tổ chức, khi oxy tổ chức giảm

sẽ làm tăng hô hấp và tim đập nhanh Nhằm bù đắp sự giảm Hb cơ thể sẽ kích thích tiết Erythropoietin (EO) để tăng Hb, tăng sự tạo máu Thiếu máu làm ảnh hưởng quá trình trao đổi khí trong máu làm tim đập nhanh và nếu kéo dài sẽ gây ra bệnh lý cơ tim Thiếu máu gây thiếu oxy não làm nhức đầu, chóng mặt, hoa mắt, khả năng lao động giảm

1.1.2 Phân loại thiếu máu

1.1.2.1 Phân loại theo cơ chế bệnh sinh

- Thiếu máu do rối loạn tại tủy xương (tế bào gốc): là thiếu máu do sản xuất không đủ hồng cầu hoặc không đủ huyết sắc tố

- Thiếu máu do tan máu: là rối loạn do bản thân hồng cầu hoặc do các yếu tố trong huyết tương

- Thiếu máu do chảy máu

1.1.2.2 Phân loại theo hình thái kích thước hồng cầu

- Hồng cầu nhỏ, nhược sắc khi: MCV < 80 fL, MCHC ≤ 300 g/L, MCH

< 27 pg [1], [3]

- Thiếu máu hồng cầu to khi: MCV > 105 fL

- Thiếu máu hồng cầu bình sắc: MCV ≥ 80 fL, MCHC ≥ 300 g/L, MCH

≥ 27 pg

1.1.2.3 Phân loại thiếu máu dựa theo mức độ thiếu máu

Theo WHO phân loại thiếu máu thành các mức độ sau [33], [34]:

Bảng 1.1 Phân loại mức độ thiếu máu

Độ tuổi

Không thiếu máu

1.1.2.4 Xác định thiếu máu và phân loại dựa vào các thông số huyết học của máu ngoại vi

- Định lượng huyết sắc tố (Hb)

- Đếm số lượng hồng cầu (RBC)

- Đo hematocrite (Hct)

- Tính lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH)

- Tính thể tích trung bình hông cầu (MCV)

- Tính nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCHC)

- Sự phân bố kích thước hồng cầu (RDW)

1.1.3 Thiếu máu ở phụ nữ mang thai

1.1.3.1 Sự thay đổi sinh lý về huyết động ở phụ nữ mang thai

* Thay đổi các thành phần tế bào máu

- Thay đổi hồng cầu và các chỉ số

Trong khi có thai, khối lượng máu của phụ nữ mang thai tăng lên khoảng 50% Bình thường, người phụ nữ ngoài thời kỳ thai nghén có khoảng 4 lít máu thì khi có thai có thể tăng lên tới 6 lít Khối lượng máu bắt đầu tăng trong 3 tháng đầu, tăng nhanh trong 3 tháng giữa và cao nhất ở tháng thứ 7 của thai kỳ Sau đó khối lượng máu hằng định ở trong những tuần lễ cuối của thai kỳ Nguyên nhân làm tăng khối lượng máu ở cơ thể người phụ nữ có thai là do cơ thể người phụ nữ tăng giữ nước, làm khối lượng huyết thương tăng lên, khối lượng máu tăng lên Do khối lượng huyết tương tăng nhiều hơn hồng cầu làm

tỷ lệ huyết sắc tố hơi giảm, hematocrit cũng giảm (từ 39.5% khi chưa có thai xuống 35.8% khi có thai) Độ nhớt máu cũng giảm, máu có xu hướng loãng làm thiếu máu nhược sắc [1], [3], [9]

- Thay đổi về bạch cầu, công thức bạch cầu và tiểu cầu

Số lượng bạch cầu có thay đổi nhiều ở PNMT, giao động trong khoảng

5000 – 12000/mm3 Số lượng bạch cầu đặc biệt tăng lên rất cao trong lúc chuyển

dạ và ở đầu thời kỳ hậu sản Riêng tiểu cầu là chưa thấy có sự thay đổi nào về

số lượng, cấu trúc hay chức năng ở người PNMT bình thường [1], [3]

* Thay đổi về mạch máu

Các mạch máu mềm, dài và to ra, dễ giãn Do đó huyết áp động mạch không tăng Thông thường huyết áp hơi giảm trong 3 tháng giữa và giai đoạn đầu của 3 tháng cuối, sau đó tăng lên

* Thay đổi về thể tích máu lưu hành

Hiện tượng tăng thể tích máu ở PNMT được phát hiện từ năm 1915 nhờ

kỹ thuật pha loãng máu Các kỹ thuật ngày nay đo lường trực tiếp thể tích hồng cầu có độ chính xác cao hơn nhiều và giúp đưa ra các thông tin chính xác về thể tích máu mẹ Hầu hết những nghiên cứu trong những năm gần đây đều tìm thấy sự tăng đáng kể thể tích máu mẹ, các nghiên cứu đều chỉ ra rằng tổng thể tích máu mẹ tăng 40 – 50% Thể tích máu tăng tối đa ở quý 3 của thời kỳ mang thai và giữ nguyên ở mức đó vài tuần trước sinh

Quá trình tăng thể tích máu bắt đầu ngay từ quý đầu của quá trình mang thai, nhưng lúc đầu tăng rất ít trong 20 tuần đầu Quá trình này diễn ra nhanh hơn ở quý 2 của thai kỳ và tiếp tục tăng cho tới vài tuần trước sinh và từ đó tổng lượng thể tích máu thường được duy trì ổn định trong khoảng 6 – 8 tuần trước sinh

Sự tăng thể tích huyết tương và thể tích hồng cầu làm cho thể tích máu toàn phần tăng khoảng 1300ml, nhưng do thể tích huyết tương tăng sớm hơn

và nhiều hơn dẫn đến hiện tượng giảm độ nhớt của máu, dẫn đến tình trạng được mô tả như thiếu máu do pha loãng máu ở thời kỳ có thai Sựu thay đổi này làm cho tỷ lệ Hb giảm xuống 1 – 2g/100ml máu được thấy ở cả phụ nữ có thai bình thường được cung cấp dinh dưỡng đầy đủ, có bổ sung sắt và acid folic

Vì vậy, một số tác giả gọi đó là tình trạng thiếu màu sinh lý ở phụ nữ có thai [9]

1.1.3.2 Định nghĩa thiếu máu ở phụ nữ mang thai

Theo WHO thiếu máu ở PNMT khi hemoglobin của PNMT < 110 g/l [33], [34]

1.2 CẤU TRÚC HEMOGLOBIN VÀ SINH TỔNG HỢP HEMOGLOBIN 1.2.1 Cấu trúc hemoglobin

Hemoglobin (Hb) là thành phần quan trọng nhất của hồng cầu Chức năng chính của Hb là vận chuyển oxy trong máu

“Nguồn: Wajcman, 2001” [Error! Reference source not found.]

Phần globin có bản chất là protein Phần này đặc trưng cho từng loài

Ở người, phần globin được cấu tạo bởi 4 chuỗi polypeptide, giống nhau từng đôi một, gắn chặt với nhau Mỗi chuỗi polypeptide gắn với 1 hem Vì vậy, mỗi phân tử Hb có 2 đôi chuỗi polypeptide và 4 hem có khả năng vận chuyển được

4 phân tử oxy [28]

1.2.2 Sinh tổng hợp hemoglobin

Ở người, sự sản xuất các loại chuỗi globin thay đổi theo từng giai đoạn phát triển, loại chuỗi globin ở giai đoạn sau thay thế cho loại chuỗi globin ở giai đoạn trước (hình 1.2) Giai đoạn phôi sớm, túi noãn hoàng sản xuất chuỗi

globin ζ và ε để tạo thành Hb chính của phôi là Hb Gower 1 (ζ2ε2), Hb Gower 2 (α2ε2), Hb Portland 1 (ζ2γ2) và Hb Portland 2 (ζ2ε2) Khi thai

khoảng 4 tháng, sự sản xuất globin ζ bị dừng lại [23], [Error! Reference source not found.]

Từ tuần thai thứ 6, globin α và γ bắt đầu được sản xuất, HbF (α2γ2) tăng trở thành Hb chính HbA (α2β2) bắt đầu được sản xuất khi thai 28 tuần Đến khi sinh, tỉ lệ HbA chiếm khoảng 15% tổng số Hb, HbA2 (α2δ2) chiếm tỉ lệ rất nhỏ, phần lớn còn lại là HbF Tuy nhiên, chuỗi γ và HbF giảm nhanh sau sinh,

thường ổn định khoảng 1 tuổi nhưng đôi khi kéo dài đến 2 tuổi [Error! Reference source not found.]

Ở người lớn bình thường, HbA chiếm đa số với tỉ lệ khoảng 96%, HbA2

có tỷ lệ 2,5 - 3%, HbF ít hơn 1% Tỉ số HbA2: HbA ở mức 1:40 [16]

Hình 1.2 Tổng hợp globin ở các giai đoạn phát triển

“Nguồn: Grosso, 2012” [23]

1.3 PHÂN LOẠI BỆNH LÝ HEMOGLOBIN

1.3.1 Bệnh thalassemia do đột biến số lượng trong tổng hợp chuỗi globin

1.3.1.1 β-thalassemia

- Phân loại theo lâm sàng:

+ β-thalassemia thể nhẹ hoặc thể ẩn

+ β-thalassemia “trội” (biến đổi cấu trúc với kiểu hình β-thalassemia)

- β-thalassemia với những biến thể khác:

+ Mất 2 gene dạng cis: α0-thalassemia

+ Mất 2 gene dạng trans: α+-thalassemia đồng hợp tử

(kiểu hình của α0-thalassemia)

+ Mất 3 gene: bệnh HbH

+ Mất 4 gene: phù thai trong HbBart's

- Đột biến không mất gene:

+ Hb Constant Spring

+ Khác…

+ Do đột biến của gene yếu tố sao chép ATRX trên nhiễm sắc thể X

- α-thalassemia kết hợp với hội chứng rối loạn sinh tủy (ATMDS): do đột biến của gene ATRX

1.3.1.3 α-thalassemia mắc phải và tiên phát (De novo and acquired α-thalassemia)

- α-thalassemia với hội chứng chậm phát triển trí tuệ (ATR): do mất đoạn lớn trên nhiễm sắc thể 16 có chứa gene α globin

1.3.2 Đột biến làm rối loạn cấu trúc globin dẫn đến thay đổi cấu trúc hemoglobin

1.3.2.1 Bệnh hồng cầu hình liềm

- SA: hồng cầu hình liềm thể nhẹ

- SS: bệnh thiếu máu hồng cầu hình liềm

- SC: bệnh HbSC

- S/β-thalassemia: bệnh HbS/β-thalassemia

- S với những biến thể Hb khác: HbD, HbO-Arab,…

- SF: HbS/HPFH

1.3.2.2 Biến dị tạo hemoglobin không ổn định

- Đột biến tạo bệnh thiếu máu tan máu thể Heinz bẩm sinh

- Chứng tan máu do oxy hóa không ổn định mắc phải: cảm ứng thuốc, 1.3.2.3 Hemoglobin bị biến đổi ái lực với oxy

- Tình trạng tăng ái lực với oxy

+ Hồng cầu bào thai (Fetal red cells)

+ Bị thiếu enzyme khử b5 cytochrome

- Methemoglobin máu mắc phải (do độc chất)

1.3.2.5 Những biến đổi hậu dịch mã

- Glycosyl hóa không enzyme

- Acetyl hóa acid amin cuối cùng

- Carbamyl hóa acid amin cuối cùng

- Khử amid [21]

1.4 CƠ CHẾ BỆNH SINH CỦA BỆNH THALASSEMIA

Trong hội chứng thalassemia có một hiện tượng chung nhất là sự thiếu hụt một loại chuỗi polypeptide của phần globin, gây ra dư thừa tương đối loại chuỗi kia Hiện tượng này xảy ra ở các mức độ rất khác nhau phụ thuộc vào từng thể bệnh, song hậu quả trực tiếp của nó là 2 quá trình sau:

- Giảm tổng hợp Hb do thiếu phần globin

- Mất cân bằng giữa các chuỗi α và “không α”

Giảm tổng hợp Hb là hậu quả trực tiếp của việc thiếu hụt tổng hợp phần globin Vì thiếu một loại chuỗi polypeptide nào đó mà việc tổng hợp globin bị giảm, do đó làm giảm tổng hợp Hb Biểu hiện của việc giảm tổng hợp Hb này

là hồng cầu nhược sắc và tăng sinh các hồng cầu non trong tủy xương [31]

Mất cân bằng giữa 2 loại chuỗi globin là hậu quả thứ 2 của việc thiếu hụt một loại chuỗi globin nào đó Việc thiếu hụt một loại chuỗi globin sẽ gây ra sự

dư thừa tương đối loại chuỗi kia Trong β-thalassemia do thiếu hụt chuỗi β gây

ra dư thừa chuỗi α Trong α-thalassemia do thiếu chuỗi α gây ra dư thừa các chuỗi γ, β, δ [24], [37]

Người bình thường β-thalassemia -thalassemia

( = β) (dư thừa chuỗi ) (dư thừa chuỗi β)

Hình 1.3 Cơ chế thiếu hụt các chuỗi polypeptide trong thalassemia

“Nguồn: Nguyễn Công Khanh, 2004” [7]

Do tính chất lý hóa của các chuỗi α và “không α” khác nhau nên những rối loạn do các chuỗi thừa gây ra cũng khác nhau Các chuỗi α thừa tạo thành các hạt tủa trên màng hồng cầu và nguyên sinh chất của các hồng cầu trưởng thành và hồng cầu non trong tủy xương

Đối với các hồng cầu ở máu ngoại vi các hạt tủa này làm cho màng hồng cầu mất tính mềm dẻo, trở thành cứng đờ, khó vượt qua các “màng lọc” ở lách Mặt khác, các hạt tủa ở màng hồng cầu làm cho màng này tăng diện tiếp xúc,

và dễ bị các tác nhân oxy hóa, phá hủy màng hồng cầu Các hạt tủa còn làm cho tính thấm của màng hồng cầu thay đổi gây mất kali bên trong tế bào ra ngoài huyết tương Những tác hại của các hạt tủa làm cho các hồng cầu bị vỡ sớm gây nên hiện tượng tan máu

Hình 1.4 Hạt tủa ở màng hồng cầu do dư thừa chuỗi alpha

“Nguồn: Cornelis, 2010” [19]

Còn ở trong tủy xương, các hạt tủa trên gắn lên nguyên sinh chất, màng của các hồng cầu non, làm cho chúng bị chết trước khi trưởng thành Điều này làm tăng sinh mạnh các hồng cầu non trong tủy xương, gây nên các biến dạng xương, tăng hấp thu sắt gây ra nhiễm sắt cho cơ thể Hiện tượng các hồng cầu non chết sớm không đến được giai đoạn trưởng thành trên gọi là hiện tượng sinh hồng cầu không hiệu quả Đây là cơ chế chủ yếu gây ra những biến đổi về lâm sàng và huyết học của β-thalassemia thể nặng [31]

Sơ đồ 1.1 Cơ chế bệnh sinh của bệnh thalassemia

Rối loạn

chuyển hoá

HEM

Thiếu hụt một loại chuỗi globin

Giảm tổng hợp lượng Hb

Dư thừa 1 loại chuỗi kia

Hạt tủa

Hồng cầu non

ở tuỷ

Hồng cầu ngoại vi

Ribosome

HỒNG CẦU NHƯỢC SẮC Sinh hồng

cầu không hiệu quả

Vỡ hồng cầu

THIẾU MÁU THỪA SẮT

“Nguồn: Nguyễn Công Khanh, 2004” [7]

1.5 LỊCH SỬ PHÁT HIỆN VÀ NGHIÊN CỨU BỆNH THALASSEMIA 1.5.1 Lịch sử phát hiện và nghiên cứu ở nước ngoài

β-thalassemia được phát hiện tương đối sớm, ngay từ năm 1910 bởi Jame Henrick và năm 1925 bởi Lee và Cooley Những biểu hiện lâm sàng được coi như những chứng cớ phát hiện đầu tiên của bệnh, hai ông đã miêu tả 5 trẻ bị thiếu máu, kèm theo có lách to và gan to giống như bệnh mà Von Jaksch mô tả năm 1989 Năm 1927, Cooley phát hiện thêm 2 trường hợp khác, ngoài triệu chứng thiếu máu, lách to, gan to, còn thấy da bị nhiễm sắc tố, xương sọ dày lên,

có biến đổi sức bền hồng cầu Đó là những trường hợp β-thalassemia mô tả đầu tiên, sau này được gọi là thiếu máu Cooley [20]

Tiếp nối những phát hiện lâm sàng đầu tiên của Cooley, rất nhiều nghiên cứu về lâm sàng đươc công bố, nhất là nghiên cứu ở Italia của Rietti (1925), Greppi (1928), Michcheli (1935), Wintrobe và cs (1940)… Năm 1936, Whipple và Bradford đã đề nghị từ “thalassemia” để gọi bệnh mà Cooley mô tả

Năm 1944, Valentine và Neel phân tích về di truyền gia đình đã đề nghị

từ “major” và “minor” cho hai thể “nặng” và “nhẹ” của thalassemia Vecchio (1948) đã chứng minh có tăng hemoglobin F (HbF) trong bệnh thalassemia Năm 1955, Stugerol và cs đã mô tả thalassemia thể trung gian giữa thể nặng và nhẹ trên lâm sàng Cho tới nay các tác giả đều thống nhất có 3 thể lâm sàng của β-thalassemia, đó là thể nặng (major), thể nhẹ (minor), và thể trung gian

(intermedia) [36]

Trong khi bệnh β-thalassemia được phát hiện tương đối sớm, thì bệnh thalassemia được phát hiện chậm hơn nhiều Năm 1954, Minich và cs đã có bước nghiên cứu đầu tiên về α-thalassemia Đó là một bệnh thiếu máu ở người Thái Lan với một đặc điểm là có nhiều thể vùi trong hồng cầu Ngoài đặc điểm trên, Minich còn phát hiện bệnh nhân này có hồng cầu biến dạng kiểu thalassemia, nhiều hồng cầu hình bia và một số hồng cầu mảnh Năm 1955, Rigar cùng Gouttas đã tìm được HbH trong thành phần huyết sắc tố của bệnh

α-nhi trên Tuy α-nhiên, lúc đó các tác giả còn gọi bệnh HbH như một bệnh hemoglobin riêng biệt

Qua nhiều công trình nghiên cứu về bệnh, Rigar và cs (1955), Gouttas (1956), Ramot (1959), Huehns (1960)…, đặc biệt là Dance và cs (1963) đã phát hiện ra cơ chế tạo thành HbH gồm 4 chuỗi β Các chuỗi β thừa dư kết hợp với nhau, tạo thành phần globin của HbH

Đầu những năm 1960, ngoài một số quan sát lâm sàng, các tác giả còn bắt đầu nghiên cứu cấu tạo gene di truyền và đã đưa ra 2 mô hình gene di truyền của α-thalassemia, điều đó đã giải thích được các biểu hiện phong phú của các thể α-thalassemia nói chung và HbH là một thể bệnh của nó

Trong thập kỷ 80, nhờ sự phát triển mạnh mẽ của các kỹ thuật gene nên việc áp dụng các kỹ thuật này vào chẩn đoán α-thalassemia đã giúp cho khả năng chẩn đoán chính xác các thể bệnh, kể cả chẩn đoán trước sinh Mô hình gene di truyền của các thể bệnh ở các cá thể đã được phát hiện Nhờ vậy, các tác giả đã giải thích được sự khác nhau giữa bệnh cảnh lâm sàng và huyết học của bệnh Philip và cs đã tìm thấy những đặc điểm riêng bệnh HbH ở người Mỹ

da đen Ở vùng Địa Trung Hải, Kan và cs đã có những nghiên cứu bệnh ở người vùng này Còn ở Châu Á, ngoài những nghiên cứu đã được kể trên thì Klegg

và Weatheral đã có một số nghiên cứu những đặc điểm di truyền bệnh này ở Thái Lan Những nghiên cứu trên đã giúp cho việc tổng hợp tổng thể bệnh cảnh lâm sàng huyết học của bệnh HbH cũng như toàn bộ các bệnh α-thalassemia nói chung [13]

Ngoài bệnh thalassemia, những nghiên cứu về hemoglobin được thực hiện vào giai đoạn đầu thế kỷ XX đã thông báo về một loại bệnh đặc trưng bởi

sự có mặt của những tế bào hồng cầu hình liềm gây ra hiện tượng tan máu trong cộng đồng dân Mỹ gốc Phi Nhưng cho đến tận cuối những năm 1940, nguyên nhân của căn bệnh này vẫn chưa được làm sáng tỏ Vào năm 1949, khi điện di mẫu máu của những bệnh nhân thiếu máu hồng cầu hình liềm, Itano cùng với Pauling và cs đã phát hiện ra sự có mặt của một loại hemoglobin bất thường mà

không tìm thấy ở người khỏe mạnh Rõ ràng rằng bệnh hồng cầu hình liềm là một bệnh lý có tổn thương ở mức độ phân tử của hemoglobin nằm trong các tế bào hồng cầu Phân tử hemoglobin bất thường này được đặt tên là HbS Sau sự kiện này, rất nhiều bệnh lý có liên quan đến Hb có mặt trong hồng cầu, và rất nhiều hemoglobin bất thường trong đó có HbC, HbD, HbE, đã được xác định

từ các bệnh nhân thiếu máu tan máu Các công trình này đóng góp phần lớn vào

sự phát triển của chuyên ngành Hóa học - Protein, chẳng hạn như hiểu rõ thành phần acid amin của hemoglobin và các phương pháp phân tích trình tự acid amin

Tại Nhật Bản, vào những năm đầu của 1960, phòng thí nghiệm của giáo

sư Susumu Shibata ở trường Đại học Y Khoa thuộc Đại học Yamaguchi đã xác nhận sự tồn tại của một căn bệnh tương tự như HbS Căn bệnh này trong một thời gian dài được coi như một bệnh mang tính chất địa phương của vùng Iwate Bệnh nhân luôn xanh tím và máu thì có màu nâu đen như màu chocolate Nhóm nghiên cứu đã tiến hành phân tích cấu trúc của chuỗi globin để tìm đột biến gây bệnh Người ta nhận thấy có sự thay thế acid amin thứ 87 là Histidine (His) ở đầu N của chuỗi globin α bằng Tyrosine (Tyr), và làm rõ nguyên nhân gây xanh tím chính là bệnh HbM Phát hiện này đã đặt tên cho phân tử Hb bất thường là

HbM - Iwate [Error! Reference source not found.].

Lehman (1972) mô tả sự phân bố bệnh hemoglobin trên bản đồ thế giới Bệnh lý hemoglobin là kết quả của quá trình chọn lọc tự nhiên do sự đề kháng

của người mang gene bệnh chống lại ký sinh trùng sốt rét Plasmodium falciparum Sự phân bố không đồng đều của các bệnh lý hemoglobin ở những

đất nước khác nhau phản ánh sự tương tác phức tạp giữa các loại gene với sự

đề kháng của người mang gene chống lại ký sinh trùng sốt rét Những yếu tố khác như hôn nhân cận huyết, tuổi mẹ, sự lưu lạc gene và những tác động ngầm khác cũng làm tăng tần suất gene bệnh [29], [32]

Hình 1.5 Sự phân bố bệnh thalalassemia trên thế giới

“Nguồn: Weatherall, 2010” [32]

Các bệnh lý Hb ngày nay không còn giới hạn trong bất kỳ vùng lãnh thổ đặc biệt nào do sự di dân Vì vậy, ngày càng xảy ra rộng rãi khắp thế giới và có vai trò trong vấn đề sức khỏe toàn cầu [17]

Người ta ước tính: Mỗi năm có hơn 300.000 trẻ em sinh ra bị bệnh lý di truyền này, trong đó có đến hơn 80% những đứa trẻ này sinh ra ở những đất nước có thu nhập kinh tế thấp và trung bình [31]

Bảng 1.2 Ước tính số trẻ sinh ra mắc bệnh lý hemoglobin hằng năm

β-thalassemia phân bố rộng rãi ở vùng Địa Trung Hải, Trung Đông, Ấn

Độ và Pakistan và ở khắp nơi khu vực Đông Nam Á [31]

HbE được tìm thấy ở Đông Ấn Độ, Bangladesh, Miến Điện và khắp Đông Nam Á, tần suất rất cao ở vùng Đông Bắc Thái Lan và một vài vùng ở

Ấn Độ, Việt Nam và Indonexia HbE khi đồng di truyền với β-thalassemia (dị hợp tử kép HbE/β-thalassemia) thường biểu hiện lâm sàng nặng nề, ước tính khoảng 50% dạng nặng của β-thalassemia và đây là dạng nặng nhất thường gặp

ở Đông Ấn Độ, Bangladesh và khắp Đông Nam Á [22]

1.5.2 Nghiên cứu trong nước

1.5.2.1 Nghiên cứu bệnh thalassemia theo phân tích thành phần Hb

Tại Việt Nam, việc nghiên cứu các bệnh hemoglobin đã được bắt đầu từ năm 1963 Ở Hà Nội, đã có nhiều công trình nghiên cứu của Bạch Quốc Tuyên,

Hồ Vân, Nguyễn Đắc Lai và một số tác giả khác ở Viện Huyết học Truyền máu trung ương, công trình nghiên cứu của Nguyễn Công Khanh, Dương Bá Trực cùng cs ở Viện Bảo vệ sức khỏe Trẻ em Ở thành phố Hồ Chí Minh đã có một

số nghiên cứu của Trần Văn Bé, Trần Văn Bình Song những công trình nghiên cứu về bệnh hemoglobin chỉ mới tập trung vào β-thalassemia và HbE

Từ năm 1985, một số trường hợp bệnh HbH đầu tiên đã được phát hiện tại Bệnh viện Bạch Mai và Viện bảo vệ Sức khỏe Trẻ em Hà Nội Tại Viện bảo

vệ Sức khỏe Trẻ em, nhóm bệnh nhi trước đó được xếp vào nhóm “huyết tán chưa rõ nguyên nhân” đã được phát hiện HbH ở hầu hết các trường hợp Từ đó đến nay, hằng năm đều có thêm một số bệnh nhi mới được phát hiện bệnh HbH, một số cần phải được truyền máu định kỳ và/hoặc cắt lách [13]

Qua khảo sát 124 người dân tộc Gia Jai, Nguyễn Văn Dũng và cs (2002) nhận thấy tỷ lệ lưu hành bệnh hemoglobin là 39% trong đó sự lưu hành β-

thalassemia là 5% và HbE là 34% [Error! Reference source not found.]

Nghiên cứu của Phạm Quang Vinh, Phùng Thị Hồng Hạnh (2009) trên

108 bệnh nhân thalassemia người lớn điều trị tại Viện Huyết Học Truyền Máu Trung ương đã ghi nhận: 57% là β-thalasemia/HbE và cũng là thể nặng nhất,

khoảng 33% là HbH, 9% là β-thalassemia [14]

Tác giả Phan Thị Thùy Hoa, Nguyễn Duy Thăng và cs (2011) nghiên cứu ở 130 người Kinh khỏe mạnh từ 12 xã của huyện Minh Hóa, tỉnh Quảng Bình tham gia hiến máu tình nguyện đã cho thấy: HbE thể nhẹ chiếm 8,5%, β-thalassemia thể nhẹ chiếm 10,8% Ngoài ra, 10 trường hợp có khả năng mang gene α-thalassemia (7,7%) và 8 trường hợp có thể mang gene α-thalassemia (6,2%) Tần suất người Kinh mang gene thalassemia vùng miền núi này chiếm

tỷ lệ khá cao

Khi khảo sát bệnh thalassemia ở nhóm người dân tộc Mường huyện Kim Bôi tỉnh Hoà Bình, Nguyễn Thanh Liêm và cs (2009) nhận thấy bệnh β-thalassemia rất phổ biến ở dân tộc Mường, huyện Kim Bôi, tỉnh Hòa Bình với tần suất 10,67% [8]

Sean O’Riordan và cs Việt Nam (2010) đã thực hiện nghiên cứu tình hình bệnh thalassemia và các biến thể Hb của 9122 người thuộc các nhóm dân tộc khác nhau ở miền Nam Việt Nam bằng phân tích Hb (kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp) Nghiên cứu đã ước tính số trẻ mắc bệnh được sinh ra trong một năm (độ tin cậy 95%) như sau:

Bảng 1.3 Ước tính số trẻ mắc bệnh được sinh ra/năm của một số dân tộc ở Việt Nam

“Nguồn: O’Riordan, 2010” [26]

Dân

tộc

β- thalassemia

(ĐHT)

thalassemia /HbE

β-HbH HbBart’s Tổng cộng

(50 - 124)

341 (257 - 438)

743 (137- 3.060)

343 (92-1.033)

1507 (536 - 4.655)

(41 - 136)

55 (29 - 93)

167 (18 - 798)

298 (88 - 1.027)

(23 - 87) (10 - 44) (1 - 702) (34 - 833)

(17 - 187) 0

63 (17 - 187)

(19 - 155)

72 (19 - 155)

(32 - 95)

4 (2 - 6)

60 (34 - 101)

Tổng

cộng

266 (131 - 534)

492 (313 - 730)

799 (169-3.155)

581 (113-2.539)

2138 (728 - 6.958)

1.6 VÀI ĐẶC ĐIỂM CỦA TỈNH THỪA THIÊN HUẾ

Thừa Thiên - Huế là một tỉnh ven biển nằm ở vùng Bắc Trung Bộ Việt Nam

có tọa độ ở 16-16,8 Bắc và 107,8-108,2 Đông Diện tích của tỉnh là 5.053,990 km², dân số theo kết quả điều tra tính đến năm 2012 là 1.115.523 người

Thừa Thiên - Huế giáp tỉnh Quảng Trị về phía Bắc, biển Đông về phía Đông, thành phố Đà Nẵng về phía Đông Nam, tỉnh Quảng Nam về phía Nam, dãy Trường Sơn và các tỉnh Saravane và Sekong của Cộng hòa Dân chủ Nhân dân Lào

về phía Tây Toàn tỉnh có 06 huyện, 02 thị xã, 01 thành phố với 152 xã, phường, thị trấn, trong đó có thành phố Huế, huyện Phú Vang và hai huyện miền núi là Nam Đông và A Lưới

Thành phố Huế là khu vực đồng bằng thuộc vùng hạ lưu sông Hương và sông Bồ, có độ cao khoảng 3-4 m so với mực nước biển, diện tích tự nhiên 71,68km2, dân số ước tính là 344,581 người (năm 2012), có 27 đơn vị hành chính

gồm 27 phường Thành phố Huế là trung tâm về nhiều mặt của miền Trung như văn hóa, chính trị, giáo dục, du lịch và đặc biệt là y tế

Huyện Phú Vang là huyện đồng bằng ven biển và đầm phá của tỉnh Thừa Thiên Huế Toàn huyện có 18 xã và 2 thị trấn , năm 2013 dân số trung bình toàn huyện có 186,784 người , mật độ dân số trung bình là 667 người/ km2 , là địa phương có mật độ dân số cao nhất trong các huyện

Nam Đông nằm ở thung lũng phía Đông dãy Trường Sơn với độ cao 500m so với mực nước biển, có chiều dài 37km, nơi rộng nhất là 27km, hẹp nhất là 14km.Dân số 24.546 người (thống kê năm 2012), mật độ dân số bình quân 37 người/km2.Toàn huyện có 10 xã và 01 thị trấn, trong đó 6 xã chủ yếu

là đồng bào dân tộc thiểu số.A Lưới là huyện miền núi thứ hai của tỉnh Thừa Thiên Huế, có độ cao 700 m so với mực nước biển Diện tích tự nhiên là 1.232,73 km2 Dân số 45.546 người (thống kê năm 2012), mật độ dân số bình quân 33,8 người/km2 Toàn huyện có 20 xã và 1 thị trấn

Cả hai huyện miền núi này đều có đặc điểm chung là điều kiện kinh tế, văn hoá thấp Tổng dân số hai huyện là 70.092, trong đó đồng bào dân tộc thiểu

số chiếm hơn 70%, phân bố tập trung theo các xã

Hai huyện này trước đây là vùng dịch tễ sốt rét Bệnh lý huyết sắc tố thường chiếm tỷ lệ cao ở những vùng dịch tễ sốt rét do cơ chế đề kháng với loại

ký sinh trùng sốt rét này Tình trạng hôn nhân cận huyết và gia đình đông con vẫn xảy ra phổ biến trên địa bàn hai huyện, đặc biệt là huyện A Lưới Đây là những cơ hội cho các loại bệnh di truyền ngày càng lan rộng trong cộng đồng người dân

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ĐỊA BÀN VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU

Đề tài được triển khai trên địa bàn tỉnh Thừa Thiên Huế, chúng tôi chọn

3 khu vực A Lưới, Phú Vang và Thành phố Huế (và các xã, thị xã lân cận thành phố Huế) đại diện cho các vùng địa lý - kinh tế - xã hội của tỉnh

Thời gian nghiên cứu: Tháng 4/2016 đến tháng 5/2017

2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Phụ nữ mang thai đến khám thai tại các Trạm Y tế và Trung tâm Y tế huyện A Lưới, Phú Vang và các Bệnh viện (Trung ương Huế, Đại học Y Dược Huế, Đa khoa Bình Điền) thời gian từ tháng 4/2016 đến tháng 5/2017

2.2.1 Tiêu chuẩn chọn phụ nữ mang thai vào mẫu nghiên cứu

Phụ nữ mang thai đến khám và tình nguyện tham gia sàng lọc

2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ đối với phụ nữ mang thai

Các trường hợp sau đây sẽ bị loại khỏi mẫu nghiên cứu:

- Không đồng ý hoặc từ chối tham gia tầm soát hoặc chẩn đoán trước sinhsau khi được cung cấp thông tin

- Thai kỳ đang có nguy cơ bị sẩy thai

- Thai phụ có tiền sử sẩy thai tự nhiên từ 2 lần trở lên

- Thai phụ đang mắc bệnh lý sản khoa khác như thiểu ối, nhau tiền đạo

- Sức khỏe và tâm lý thai phụ không ổn định

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu cắt ngang

Δ

p)(1pΖ

- Với p = 0,093, Δ = 0,02 và α = 0,05, theo công thức trên ta tính được

cỡ mẫu tối thiểu cần thiết là: n = 810 đối tượng

Chúng tôi thống nhất chọn cỡ mẫu là 1000

2.3.3 Các biến số nghiên cứu

Bảng 2.1 Các biến số phụ thuộc của nghiên cứu Tên biến số Loại biến số Cách thu thập Giá trị

Phụ nữ mang thai thiếu

Kết quả phân tích

CTM

Thiếu máu (+) Thiếu máu (-)

Thành phần các loại Hb Định tính Kết quả phân tích

điện di Hb

HbA% HbA2% HbF% HbE%

2 /





2 /





Bảng 2.2 Các biến số độc lập của nghiên cứu Tên biến số Loại biến số Cách thu thập Giá trị

Tuổi Liên tục Phỏng vấn bằng

bảng câu hỏi Tuổi (làm tròn năm)

Tuổi thai Liên tục Phỏng vấn bằng

bảng câu hỏi Tuổi (làm tròn tuần)

PARA Định tính Phỏng vấn bằng

bảng câu hỏi

Số lần mang thai, số con sinh ra và số con bị sảy

+ Làm việc, liên hệ với các khoa phòng liên quan tại các bệnh viện, trung tâm y tế trên địa bàn nghiên cứu

+ Lập danh sách đối tượng nghiên cứu

- Bướ c 2: Phỏng vấn, khám và lấy mẫu cho tất cả các đối tượng nghiên cứu tại các xã của huyện trên địa bàn nghiên cứu

+ Xây dựng phiếu điều tra nghiên cứu

+ Phỏng vấn và khám đối tượng nghiên cứu

+ Lấy mẫu máu: 3 ml máu chống đông EDTA và 2 ml máu đông Máu được lưu trữ ở nhiệt độ 2 - 60C, và được chuyển về Khoa xét nghiệm Huyết học, Trung tâm Huyết học Truyền máu để phân tích

- Bước 3: Phân tích mẫu máu của đối tượng nghiên cứu theo sơ đồ 2.1 và

Kết quả bình thường

Kết quả bình thường

Phân tích đột biến để xác định bất thường về gene alpha

Sơ đồ 2.1 Quy trình phân tích mẫu máu nghiên cứu

Sơ đồ 2.2 Định hướng thể bệnh thalassemia dựa vào kết quả thành phần Hb

2.3.4.2 Phương tiện thực hiện nghiên cứu

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, kim tiêm

- Ống chống đông EDTA, ống không có chất chống đông, lam kính

- Pipette, eppendorf, cốc mỏ, bình lọc

- Hóa chất sức bền hồng cầu 0,35%, Giemsa, xanh Brilliant Crésyl, DCIP (2,6-Dichlorophenol-indophenol)

HbA, HbA 2 và HbF

HbA 2 < 4%

HbF < 1%

HbA, HbA 2 và HbF

HbA 2 < 4%

HbF 2 - 30%

HbA và HbE HbE 25-35%

Thành phần Hb

HbA và HbA 2

HbA 2 > 4%

HbA và HbE HbE < 25%

Bệnh thalassemia:

- α-thalassemia: HbH, HbBart’s, HbCs

- β-thalassemia: HbE (đồng hợp tử), dị hợp tử kép β-thalassemia/HbE, β- thalassemia (đồng hợp tử)

- αβ-thalassemia: Bệnh lý AE Barts’

α-thalassemia?

(δβ)-thalassemia HPFH

β-thalassemia

± α-thalassemia?

HbE thể nhẹ + α-thalassemia

HbE thể nhẹ

- Máy đếm tế bào máu tự động XS 800i

- Máy điện di Hb Hydragel - Sebia (Pháp)

- Máy giải trình tự ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Mỹ)

- Máy ly tâm ống nghiệm, máy ly tâm Eppendorf, máy lắc ngang, máy trộn Vortexer BR-2000 của hãng Bio-Rad; Block nhiệt có lắc Thermomixer compact của hãng Eppendorf dùng để tách chiết DNA

- Tủ lạnh thường, tủ lạnh âm sâu

- Hệ thống máy vi tính để phân tích kết quả

2.3.4.3 Kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu

* Công thức máu:

Công thức máu được thực hiện trên máy đếm tế bào máu tự động XS 800i

của hãng Sysmex, Nhật Bản

Máy đếm tế bào theo nguyên lý điện trở kháng và quang học Các thông

số cần cho nghiên cứu là: Hb, MCV, MCH

Chỉ số MCV và MCH thường biến đổi trong các bệnh lý Hb Mẫu có MCV

< 80 fl hoặc MCH < 27 pg sẽ được phân tích trong những bước tiếp theo

* Sức bền hồng cầu 0,35%: Sức bền hồng cầu được thực hiện nhằm đánh

giá tình trạng vỡ hồng cầu (hồng cầu của máu toàn phần) hay không vỡ hồng cầu ở môi trường NaCl nhược trương 0,35% Nếu hồng cầu vỡ hoàn toàn kết quả xem như âm tính và kết luận sức bền hồng cầu bình thường Nếu vẫn còn hồng cầu không vỡ thì kết luận sức bền hồng cầu tăng (hay dương tính), phần lớn gặp trong bệnh thalassemia

* Dichlorophenol-indophenol (DCIP)

HbE trở nên đục khi tiếp xúc với chất nhuộm xanh DCIP ở nhiệt độ 370C Xét nghiệm này đánh giá tình trạng có tủa (dương tính) hay không có tủa (âm tính) trong môi trường DCIP để sàng lọc bệnh huyết sắc tố E

* Điện di định lượngcác thành phần huyết sắc tố trên máy Sebia

* Tách DNA: Tách DNA các mẫu máu đã được sàng lọc với bộ kít tách

chiết DNA của Qiagen và lưu trữ ở - 20oC

- Phân tích đột biến gene: Tiến trình phân tích đột biến α-thalassemia được thực hiện theo sơ đồ 2.3

2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU

- Chúng tôi thực hiện chương trình nghiên cứu trên vì lợi ích người tham gia nghiên cứu là trên hết, không vì lợi ích cá nhân và không làm tổn hại đến người tham gia nghiên cứu

- Người tham gia nghiên cứu được giải thích rõ ràng và đồng ý tham gia nghiên cứu, đối tượng nghiên cứu có quyền từ chối tham gia nghiên cứu mà không có sự ép buộc nào

- Tất cả các thông tin của bệnh nhân tham gia nghiên cứu được xử lý và công bố dưới hình thức số liệu, không lưu danh tính cá nhân Số liệu được nghiên cứu và lưu trữ cẩn thận

- Các phương pháp sử dụng trong nghiên cứu là những phương pháp hiện đang được sử dụng trên thế giới và Việt Nam để phát hiện, chẩn đoán bệnh

αTHALASSEMIA

?

Gap-PCR khẳng định chẩn đoán

Multiplex Gap-PCR tìm 3 ĐB mất đoạn

KẾT QUẢ

Sequencing gene α1, α2

dò tìm ĐB MLPA ổ gene α

dò tìm ĐB mất đoạn

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 CÁC ĐẶC ĐIỂM CHHUNG CỦA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

3.1.1 Đặc điểm về dân tộc

Bảng 3.1 Phân bố thành phần dân tộc của đối tượng nghiên cứu

Đa số đối tượng NC là người kinh chiếm 82,1%, người dân tộc Pako chiếm tỷ

lệ cao 9,75% tiến đến tà ôi (5,69%