Nghiên cứu đặc điểm giải phẫu, sinh lý của một số giống hoa cúc nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm và hoàn thiện qui trình nhân giống bằng giâm chồi

NGUYỄN THỊ OANH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU, SINH LÝ CỦA MỘT SỐ GIỐNG HOA CÚC NUÔI CẤY MÔ GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM VÀ HOÀN THIỆN QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG BẰNG GIÂM CHỒI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌ

NGUYỄN THỊ OANH

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU, SINH LÝ CỦA MỘT SỐ GIỐNG HOA CÚC NUÔI CẤY MÔ GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM VÀ HOÀN THIỆN QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG BẰNG GIÂM CHỒI

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC

HÀ NỘI, NĂM 2017

NGUYỄN THỊ OANH

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU, SINH LÝ CỦA MỘT SỐ GIỐNG HOA CÚC NUÔI CẤY MÔ GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM VÀ HOÀN THIỆN QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG BẰNG GIÂM CHỒI

Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm

Mã số: 60.42.01.14

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC

Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN VĂN ĐÍNH

HÀ NỘI, NĂM 2017

Trước hết, tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và kính trọng tới

thầy hướng dẫn là PGS.TS.Nguyễn Văn Đính Ďã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn

tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn

Trong thời gian thực hiện Ďề tài tôi luôn nhận Ďược sự giúp Ďỡ tận tình

của thầy TS La Việt Hồng – Khoa Sinh KTNN; cô Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật; thầy T.S Hà Minh Tâm- Khoa Sinh KTNN và sinh viên Lê Thu Hằng – K39 sinh Ďã giúp Ďỡ, Ďóng góp ý kiến Ďể tôi hoàn

thành Ďề tài khóa luận, nhân Ďây tôi cũng xin chân thành cảm ơn

Tôi xin Ďược cảm ơn: Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật trường ĐHSP

Hà Nội 2; Phòng thí nghiệm thực vật; Tập thể cán bộ Viện Nghiên Cứu Khoa học Và Ứng dụng - trường ĐHSP Hà Nội 2 Ďã tạo Ďiều kiện thuận lợi về thiết

bị, phương tiện Ďể tôi có thể hoàn thành luận văn này

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy, cô trong Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2; Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN trường ĐHSP

Hà Nội 2; Phòng Sau Ďại học trường ĐHSP Hà Nội 2 Ďã tạo mọi Ďiều kiện trong thời gian tôi học tập chương trình thạc sĩ

Tôi xin chân thành cảm ơn gia Ďình và bạn bè những người Ďã luôn Ďộng viên, góp ý cho tôi trong thời gian qua

Hà Nội, tháng 7 năm 2017

Học viên

NGUYỄN THỊ OANH

Tôi xin cam Ďoan Ďề tài “Nghiên cứu đặc điểm giải phẫu, sinh lý của

một số giống hoa cúc nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm và hoàn thiện qui trình nhân giống bằng giâm chồi” là công trình nghiên cứu của tôi và một số

kết quả cùng cộng tác với cộng sự khác Những số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và không trùng lặp với các Ďề tài khác Tôi cũng xin cam Ďoan rằng mọi sự giúp Ďỡ cho việc thực hiện luận văn này Ďã Ďƣợc cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn Ďã Ďƣợc chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả

Nguyễn Thị Oanh

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn Ďề tài 1

2 Mục Ďích nghiên cứu 3

3 Nội dung nghiên cứu 3

4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của Ďề tài 3

NỘI DUNG 4

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 4

1.1 Giới thiệu về cây hoa cúc 4

1.1.1 Nguồn gốc cây hoa cúc 4

1.1.2 Vị trí phân loại của cây hoa cúc 5

1.1.3 Đặc Ďiểm hình thái 6

1.1.4 Yêu cầu Ďặc Ďiểm ngoại cảnh của cây hoa cúc 8

1.1.5 Yêu cầu về dinh dưỡng của cây hoa cúc 9

1.1.6 Thời vụ trồng của cây hoa cúc 9

1.1.7 Giá trị cây hoa cúc 9

1.1.7.1 Giá trị tài nguyên 9

1.1.7.2 Giá trị kinh tế của cây hoa cúc 10

1.2 Giá trị kinh tế của ngành sản xuất hoa trên thế giới và ở Việt Nam 11

1.2.1 Sản xuất hoa trên thế giới 11

1.2.2 Sản xuất hoa ở Việt Nam 13

Những thuận lợi, khó khăn khi trồng cúc ở nước ta 17

1.3 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật trong nhân giống cây hoa cảnh 18

1.3.1 Nhân giống bằng chồi chính hoặc chồi bên 19

1.3.2 Nhân giống bằng chồi bất Ďịnh 20

vật 24

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26

2.1 Vật liệu, hóa chất và thiết bị nghiên cứu 26

2.1.1 Vật liệu thực vật 26

2.1.2 Hóa chất và thiết bị nghiên cứu 27

2.2 Địa Ďiểm, thời gian nghiên cứu 29

2.3 Phương pháp nghiên cứu 29

2.4 Phương pháp xử lý số liệu 36

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37

3.1 Kết quả nhân giống in vitro tạo cây giống hoa cúc hoàn chỉnh từ Ďoạn thân 37

3.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP kết hợp với Kinetin Ďến khả năng ra chồi và chiều cao chồi cuả 3 giống cúc 37

3.1.2 Ra rễ - tạo cây cúc in vitro hoàn chỉnh 39

3.2 Nghiên cứu sự biến Ďổi sinh lí, hóa sinh và giải phẫu lá của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện trong vườn ươm 40

3.2.1 Đánh giá tỉ lệ sống sót 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 40

3.2.2 Nghiên cứu khả năng sinh trưởng của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 41

3.2.3 Nghiên cứu một số chỉ tiêu quang hợp của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 48

3.2.4 Nghiên cứu hàm lượng nước, khả năng giữ nước của mô lá của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 55

3.2.5 Nghiên cứu một số Ďặc Ďiểm giải phẫu lá của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 58

sinh chồi bên 64

3.3.2 Ảnh hưởng của N3M và α-NAA Ďến khả năng ra rễ của chồi bên 65

3.3.3 Quy trình nhân giống cúc bằng giâm chồi 67

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68

TÀI LIỆU THAM KHẢO 71

PHỤ LỤC 80

MS : Murashige & Skoog BAP : 6-Benzylaminopurine Kinetin : 6- Furfurylaminopurinne NAA : 1- Naphthaleneacetic acid NXB : Nhà xuất bản

nhanh chồi in vitro từ Ďốt thân cây hoa Cúc 38

Bảng 2: Tỉ lệ sống của các giống cúc giai Ďoạn vườn ươm sau 14 ngày 40

Bảng 3 Chiều cao cây của 3 giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 41

Bảng 4 Đường kính thân cây của 3 giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 43

Bảng 5 Chiều dài rễ của một số giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 44

Bảng 6 Số lượng rễ của một số giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 46

Bảng7 Khối lượng tươi của một số giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 47

Bảng 8 Khối lượng khô của một số giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 47

Bảng 9 Sự thay Ďổi chiều rộng, chiều dài và diện tích lá 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 49

Bảng 10 Sự thay Ďổi hàm lượng diệp lục a, diệp lục b và diệp lục tổng số 52

Bảng 11 Hàm lượng nước của mô lá 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 55

Bảng 12 Khả năng giữ nước của mô lá 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện 57

Bảng 13 Đặc Ďiểm giải phẫu lá 3 giống hoa cúc trong giai Ďoạn vườn ươm 60

Bảng 14 Ảnh hưởng của Atonik Ďến khả năng ra chồi 3 giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 64

Bảng 15 Ảnh hưởng của N3M và α-NAA Ďến khả năng ra rễ của chồi bên 66

Hình 2: Cây cúc 7 ngày tuổi có bộ rễ Ďủ Ďiều kiện Ďưa ra ngoài vườn

ươm 39 Hình 3 Chiều cao cây giống cúc Thạch Bích 0 ngày – 14 ngày 42 Hình 4 Chiều dài rễ giống cúc Thạch Bích 0 ngày – 14 ngày 46 Hình 5 Hình ảnh giải phẫu lá một số giống cúc in vitro giai Ďoạn vườn

ươm 59 Hình 6 Khả năng ra rễ của chồi 3 giống cúc giai Ďoạn vườn ươm 65

MỞ ĐẦU

1 Lý do chọn đề tài

Hoa là sản phẩm Ďặc biệt vừa mang giá trị tinh thần vừa mang giá trị kinh tế Ngay từ thời xa xưa, ông cha ta Ďã có nhu cầu sử dụng hoa Ďể trang trí làm Ďẹp thêm cho cuộc sống, ngày nay xã hội ngày càng phát triển thì nhu cầu về hoa ngày càng tăng Ngoài việc sử dụng hoa vào mục Ďích thẩm mỹ, con người còn coi việc sản xuất hoa thành một ngành kinh tế có thu nhập cao

Hoa cúc (Chrysanthemum sp) có nguồn gốc từ Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam và một số nước Châu Âu Hiện nay các giống hoa cúc thương mại

thường Ďược nhân giống vô tính bằng cách giâm cắt Ďốt hoặc chồi bên [72]

Do nhân giống vô tính trong một thời gian dài lại không Ďược phục tráng nên phần lớn các giống hoa cúc Ďang trong tình trạng thoái hóa, chất lượng giảm

do sâu bệnh Ďã làm giảm năng suất và phẩm chất hoa, nên chưa Ďáp ứng Ďược

nhu cầu của thị trường [11]

Nuôi cấy mô và tế bào Ďã có những Ďóng góp quan trọng Ďể cải tiến

giống cây trồng và còn nhiều tiềm năng ứng dụng trong tương lai Kỹ thuật vi

nhân giống Ďược thực hiện dựa trên khái niệm về tính toàn năng của tế bào

Ďược nhà khoa học Harberlandt Ďưa ra Nền công nghiệp cây cảnh Ďã Ďược ứng dụng rất nhiều phương pháp nhân giống in vitro nhằm mở rộng quá trình nhân giống ở quy mô công nghiệp Tính Ďến nay, Ďã có rất nhiều phòng thí

nghiệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Ďược hình thành, Ďặc biệt là ở các nước

Ďang phát triển, nơi có nhân công rẻ

Để hoa cúc trở thành sản phẩm mang lại giá trị kinh tế cao cho người

sản xuất thì công nghiệp nhân giống in vitro Ďang là hướng có nhiều triển

vọng vì dễ thực hiện trong phòng thí nghiệm, hệ số nhân cao, cung cấp số lượng lớn cây giống trong thời gian ngắn, cây Ďồng Ďều và sạch bệnh Theo

Teixeira da Silva (2014) [73], Ďối với cây hoa cúc, các chất Ďiều hòa sinh

trưởng như: Adenine sulphate, BA, kinetin giúp hình thành chồi; nước dừa giúp hình thành chồi và mô sẹo, IAA, IBA và NAA giúp tạo rễ với hệ số

tương Ďối cao Tuy nhiên, một hạn chế lớn trong quá trình áp dụng kỹ thuật

nuôi cấy mô Ďể sản xuất cây giống với quy mô lớn là tỉ lệ chết của cây con khi Ďưa ra Ďiều kiện tự nhiên là rất cao [80] Do Ďó cần có những hướng nghiên cứu Ďể khắc phục nhược Ďiểm này

Hiện nay, nhiều nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống các giống

cúc Ďã Ďược công bố Đối với công nghệ nhân giống in vitro, giai Ďoạn ra ngôi

(huấn luyện cây con Ďể chuyển từ giai Ďoạn phòng thí nghiệm ra môi trường tự nhiên) Ďóng vai trò rất quan trọng Trong giai Ďoạn này, cây con chịu ảnh hưởng của môi trường sống thay Ďổi từ môi trường nhân tạo Ďến môi trường tự nhiên trong một thời gian ngắn Để thích nghi, cơ thể chúng sẽ có những biến Ďổi về hình thái, giải phẫu cũng như sinh lý rất Ďáng chú ý Ďể có thể phù hợp với môi trường mới [83; 56; 57] Những nghiên cứu về những Ďộng thái trên ở thực vật còn ít Ďược thực hiện, Ďặc biệt với các giống cúc mà tôi nghiên cứu

Những kết quả nghiên cứu về các biến Ďổi hình thái, giải phẫu và sinh lý của các giống cúc giai Ďoạn rèn luyện ngoài tự nhiên có ý nghĩa lớn, cung cấp các thông tin khoa học bổ ích, Ďồng thời giúp con người Ďề ra các biện pháp kĩ thuật Ďể luyện cây một cách có hiệu quả Do vậy, hiệu quả của giai Ďoạn huấn

luyện Ďể cây in vitro thích nghi sẽ quyết Ďịnh Ďến sự thành công của cả quy

trình Một hạn chế nữa của việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô là giá thành sản xuất cây giống còn cao, chính vì vậy Ďể giảm giá thành sản xuất cây giống thì phương pháp giâm chồi là một lựa chọn tối ưu

Với những lý do trên và mong muốn tìm hiểu sâu hơn về Ďặc Ďiểm của cây con trong giai Ďoạn rèn luyện và nâng cao kỹ thuật nhân giống bằng giâm

chồi các cây sạch bệnh chúng tôi tiến hành chọn Ďề tài: “Nghiên cứu đặc

điểm giải phẫu, sinh lý của một số giống hoa cúc nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm và hoàn thiện qui trình nhân giống bằng giâm chồi”

2 Mục đích nghiên cứu

- Hoàn thiện nhân giống in vitro từ Ďốt thân 3 giống cúc (Đỏ Cờ, Thạch Bích, Chi Vàng ) và nhân giống ex vitro bằng phương pháp giâm chồi

- Nghiên cứu một số Ďặc Ďiểm sinh lý, hóa sinh và những biến Ďổi giải

phẫu lá 3 giống hoa cúc trong giai Ďoạn rèn luyện cây giống in vitro

3 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu nhân giống in vitro từ các Ďốt thân 3 giống cúc trong

phòng thí nghiệm

- Nghiên cứu tỷ lệ sống và sự biến Ďổi về giải phẫu lá, một số chỉ tiêu sinh lý, hóa sinh 3 giống cúc trong giai Ďoạn rèn luyện cây giống thông qua các chỉ tiêu về sinh trưởng, quang hợp, khả năng giữ nước, hàm lượng nước của mô lá.v.v

- Hoàn thiện quy trình nhân giống hoa cúc bằng phương pháp giâm chồi

4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

4.1 Ý nghĩa khoa học

Cung cấp các số liệu về những biến Ďổi giải phẫu lá và một số chỉ tiêu sinh lý, hóa sinh của cây cúc trong giai Ďoạn rèn luyện cây giống ngoài vườn ươm

4.2 Ý nghĩa thực tiễn

Làm sáng tỏ Ďặc Ďiểm của cây cúc in vitro trong quá trình luyện cây,

góp phần Ďề xuất các biện pháp kĩ thuật luyện cây có hiệu quả và cải tiến kĩ thuật nhân giống cúc bằng giâm chồi

NỘI DUNG CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU

1.1 Giới thiệu về cây hoa cúc

1.1.1 Nguồn gốc cây hoa cúc

Hoa cúc có tên khoa học (Chrysanthemum sp.) Ďược Ďịnh nghĩa từ Chrysos (Vàng) và Anthemon (hoa) bởi Linneaus năm 1753, có nguồn gốc

Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam và một số nước Châu Âu

Khoảng 500 năm trước công nguyên, hoa cúc lần Ďầu tiên Ďược trồng ở Trung Quốc như một loại thảo mộc có hoa Trong thế kỉ thứ VIII sau công nguyên, các giống hoa cúc Ďã Ďược giới thiệu từ Trung Quốc Ďến Nhật Bản Ở Trung Quốc, người ta Ďã làm lễ “Thắng Ďịa hoa Vàng” (hoa cúc) và cây hoa cúc Ďã Ďi vào tác phẩm hội họa từ thời gian này Một thành phố cổ xưa của Trung Quốc Ďã Ďặt tên là Ju – Xian, có nghĩa là: “Thành phố hoa Cúc” Ở Nhật Bản, hoa cúc Ďược sử dụng trong chính các lễ hội Tới thế kỉ thứ XVII,

Hà Lan dường như là quốc gia Ďầu tiên ở Châu Âu nhập khẩu hoa cúc vào năm 1688 nhưng nó không thể sống Đến năm 1789, 3 giống Ďược nhập khẩu

từ Trung Quốc Ďưa vào Pháp trong Ďó chỉ có 1 giống sống sót và Ďược trồng ở Anh năm 1975 Đầu thế kỉ XIX, 8 giống sau Ďó từ Trung Quốc Ďược nhập vào Anh và năm 1826 con số Ďó tăng dần lên tới 48 giống cây Năm 1836, hoa cúc

từ Anh Ďược Ďưa tới Tasmania và Ďược trồng ở New South Wales rồi mang tới Australia năm 1843 Đến năm 1855 nó cũng Ďược Ďưa Ďến Victoria (Mĩ)

và Ďến lượt New Zealan vào năm 1960 [35]

Ở Nhật, cúc Ďược coi là Quốc hoa dùng trong các buổi lễ quan trọng, người Nhật luôn coi cúc là người bạn tâm tình (Quách Trí Cương, Trương Vĩ, 1997) [3]

Còn tại Mỹ, hoa cúc là loài hoa rất quan trọng, chủ yếu sử dụng hoa cắt cành (Đặng Văn Đông, 2004) [4]; Và sau nhiều thế kỉ thì hiện nay hoa cúc Ďược trồng rộng rãi ở hầu hết các nước trên thế giới như: Thái Lan, Đức, Pháp, Hà Lan, Philippin, Malaysia, Australia, NewZealand, và ở Việt Nam hoa cúc Ďược nhập nội và trồng từ lâu Ďời (cách Ďây khoảng 165 năm) Vào Ďầu thế kỉ thứ XIX, hoa cúc ở Việt Nam Ďã Ďược trồng thành các vùng chuyên canh Hiện nay Đà Lạt có diện tích trồng hoa cúc lên tới 5000 ha; Hà Nội Ďã hình thành những vùng chuyên canh như: Tây Tựu (Từ Liêm) diện tích xấp xỉ

200 ha, quận Tây Hồ diện tích 70 ha Ďảm bảo cung cấp hoa cho người tiêu dùng [18]

1.1.2 Vị trí phân loại của cây hoa cúc

Theo Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến, 1988 Cây hoa cúc thuộc:

Chi : Hoa Cúc Chrysanthemum

* Qua hai hội thảo quốc tế về họ Asteraceae năm 1967 và 1994 mang tên

“Sinh học và hóa học của họ Cúc” Ďã có sự thống nhất tương Ďối về hệ thống học của họ Asteraceae Họ cúc trên thế giới xếp trong 2 phân họ, 13 tông [44] Nghiên cứu của Anderson (1987), Langton (1989) cho biết trên thế giới có hơn

7000 giống cúc Ďã Ďưa vào sử dụng với sự Ďa dạng về chủng loại, phong phú về màu sắc [21], [52] Việt Nam có 2 phân họ và 12 tông, nhưng hiện tại chia làm

17 tông Họ cúc có khoảng 1550 chi với 23000 loài [19], [72]

* Theo Nguyễn Quang Thạch và Đặng Văn Đông (2002) Ďã dựa vào cánh hoa Ďể chia hoa cúc làm 2 nhóm là cúc Ďơn và cúc kép

- Cúc Ďơn: Thường là dạng hoa nhỏ Ďường kính hoa từ 2-5 cm, chỉ có 1-3 hàng cánh ở vòng ngoài cùng còn vòng trong là cánh hoa rất nhỏ thường Ďược gọi là cồi hoa

- Cúc kép: Hoa có Ďường kính từ 5-15 cm, có nhiều cánh xếp từng vòng sít nhau, có loại cánh dài cong, có loại cánh ngắn

* Dựa vào thời vụ trồng: dựa vào Ďặc tính chịu nhiệt của hoa cúc Ďể phân loại và thường phân ra làm hai loại Ďó là cúc Ďông và cúc hè Cúc Ďông

là một số giống có nguồn gốc ôn Ďới, có tính chịu lạnh và trồng chủ yếu vào

mùa Ďông Cúc hè là một số giống chịu nhiệt Ďộ cao trồng Ďược vào mùa hè

Tuy nhiên, có nhiều tài liệu khác nhau về số liệu loài hoa cúc Theo tác giả Nguyễn Nghĩa Thìn thì họ cúc có 2500 loài và có 1100 chi [19] Theo Trần Lan Hương và cộng sự, hoa cúc có hơn 3000 loài với kích thước, màu sắc khác nhau [10]

1.1.3 Đặc điểm hình thái

- Rễ: rễ cây hoa cúc thuộc một loại rễ chùm, phát triển theo chiều

ngang, phân bố ở tầng mặt từ 5 – 20 cm Khối lượng bộ rễ lớn do sinh nhiều

rễ phụ và lông hút, nên khả năng hút nước và dinh dưỡng mạnh Kích thước các rễ trong bộ rễ cúc chênh lệch nhau không nhiều, số lượng rễ rất lớn Có 2 loại rễ là rễ mầm và rễ thứ sinh [11]

- Thân: hoa cúc thuộc thân thảo nhỏ Thân cây dạng Ďứng hoặc bò, có

khả năng phân nhánh mạnh và có nhiều Ďốt giòn dễ gãy, càng lớn càng cứng Thân có ống tiết nhựa mủ trắng, mạch có bản ngăn Ďơn Cây cao hay thấp, Ďốt dài hay ngắn, sự phân cành mạnh hay yếu tùy thuộc vào từng giống, Ďiều kiện sinh trưởng, phát triển Nhìn chung cây ở Ďiều kiện Việt Nam có thể từ 30 –

80 cm, ở Ďiều kiện ngày dài cây cúc có thể cao từ 1,5 – 2 m

- Lá: Lá cây cúc thường xẻ thùy và có răng cưa Lá Ďơn không có lá

kèm, mọc so le nhau, bản lá xẻ thùy lông chim, lá phẳng hoặc hơi nghiêng về phía trên Mặt trên nhẵn, gân hình mạng lưới, còn mặt dưới bao phủ một lớp lông tơ Phiến lá mềm mỏng có thể to hoặc nhỏ, màu sắc xanh Ďậm hoặc nhạt tùy thuộc vào từng giống Bởi vậy, trong sản xuất Ďể Ďạt hiệu quả cao trong kinh tế người ta thường tỉa bỏ các cành nhánh phụ Ďối với giống cúc Ďơn và

Ďể cây sinh trưởng phát triển tự nhiên với cúc chùm Cây hoa cúc có năng suất cao thường có bộ lá gọn, thân cứng, mập và thẳng, khả năng chống Ďổ tốt Trong thời kì sinh trưởng tùy từng giống mà trên một thân cây hoa cúc có từ

30 - 50 lá

- Hoa: Hoa cúc chủ yếu có 2 dạng là hoa Ďơn tính và hoa lưỡng tính

với nhiều màu sắc khác nhau như trắng, Vàng, tím,… Đường kính của bông phụ thuộc vào giống, giống hoa to có Ďường kính từ 10 – 20 cm, loại trung bình từ 5 – 7 cm và loại nhỏ từ 1 – 2 cm Mỗi hoa gồm nhiều loại hoa nhỏ gộp lại trên mỗi cuống hoa, hình thành hoa tự Ďầu trạng mà mỗi Ďầu trạng là một bông hoa Thường mọc nhiều hoa trên một cành, phát sinh từ nách lá Trong thực tế tùy theo mục Ďích sử dụng mà người ta Ďể một bông/cành hay nhiều bông/cành Tùy theo cách sắp xếp của cánh hoa mà người ta phân ra nhóm hoa Ďơn và nhóm hoa kép Những cánh hoa nằm ở phía ngoài thường có màu sắc Ďậm hơn, xếp nhiều tầng, sít nhau, chặt hay lỏng tùy thuộc vào từng giống, cánh hoa có nhiều hình dạng khác nhau cong hoặc thẳng, có loại cánh ngắn, có loại cánh dài, cuốn ra ngoài hay cuốn vào trong Hoa có 4 - 5 nhị Ďược dính vào nhau làm thành một ống bao xung quanh vòi nhụy, còn vòi nhụy mảnh hình trẻ Ďôi Khi phấn nhị Ďực chín bao phấn mở tung phấn ra ngoài, nhưng lúc này vòi nhụy còn non chưa trưởng thành nên không có khả năng tiếp nhận hạt phấn Vì vậy cúc tuy là hoa lưỡng tính nhưng thường giao phấn [11]

- Quả: Quả thuộc loại quả Ďóng (quả khô không mở) hay quả bế khô, hình

trụ dẹt chỉ chứa một hạt, quả có chùm lông do Ďài tồn tại Ďể phát tán hạt [11]

- Hạt: hạt cây hoa cúc có phôi trắng và không có nội nhũ [11]

1.1.4 Yêu cầu đặc điểm ngoại cảnh của cây hoa cúc

- Nhiệt độ: Hoa cúc có nguồn gốc ôn Ďới, nên Ďa số ưa khí hậu mát mẻ

Với Việt Nam, mùa thu là mùa có khí hậu tương Ďối mát mẻ và thuận lợi, nhiệt Ďộ thích hợp cho cây sinh trưởng và phát triển là 150

C - 200C, bên cạnh cũng có một số giống cúc chịu Ďược nhiệt Ďộ 30 – 350C Tuy nhiên, nhiệt Ďộ quá cao (350C) hay quá thấp (100C) Ďều làm ảnh hưởng tới sinh trưởng và phát triển của cây Ở thời kì cây con và thời kì ra hoa cây có yêu cầu nhiệt Ďộ cao hơn [18]

- Ánh sáng: Ánh sáng có ảnh hưởng mạnh tới quá trình phát sinh hình

thái của mô nuôi cấy, bao gồm cường Ďộ, chu kì và thành phần quang phổ ánh sáng cúc là cây trồng cạn, không chịu Ďược úng, có sinh khối lớn và bộ lá to,

do vậy cũng chịu hạn kém Ánh sáng có sự ảnh hưởng rất lớn Ďến sự ra hoa và phân hóa mầm hoa của cây hoa cúc Tuy nhiên ở mỗi thời kỳ sinh trưởng và phát triển cây có yêu cầu ánh sáng khác nhau:

+ Thời kỳ cây non: Khi cây ra rễ cây cần ít ánh sáng vì lúc này cây non còn sử dụng các chất dinh dưỡng dự trữ

+ Thời kỳ chuẩn bị phân cành: cây cần nhiều ánh sáng Ďể quang hợp tạo các chất hữu cơ cần thiết cho hoạt Ďộng sống của cây

Cúc Ďược xếp vào cây ngày ngắn, thời kỳ Ďể phân hóa mầm hoa tốt nhất là 10 giờ chiếu sáng/ngày với nhiệt Ďộ là 20 - 250C Thời gian chiếu sáng kéo dài thì thời gian sinh trưởng của cây cúc dài hơn, thân cao, lá to, chất lượng hoa tăng Thời gian chiếu sáng ngắn thì sẽ kích thích phân hóa mầm hoa sớm, cây ngắn, chất lượng hoa kém [18]

- Độ ẩm: Độ ẩm Ďất thích hợp khoảng 600C - 700C và Ďộ ẩm không khí thích hợp khoảng 550

C - 650C là thuận lợi cho cây sinh trưởng và phát triển [18] Nếu Ďộ ẩm trên dưới 80% thì cây sinh trưởng mạnh nhưng dễ mắc một

số bệnh nấm Đặc biệt vào thời kì thu hoạch, hoa cúc cần thời tiết trong xanh, khô ráo Nếu Ďộ ẩm cao, tuyến mật của hoa sẽ dễ bị thối do Ďọng nước lại, cản

trở quá trình thu hoạch [84]

1.1.5 Yêu cầu về dinh dưỡng của cây hoa cúc

- Đất cung cấp nước, dinh dưỡng cho sự sống của cây Cây hoa cúc có

bộ rễ ăn nông do vậy yêu cầu Ďất cao ráo, thoát nước, tươi xốp

Đất phải có hàm lượng mùn > 5%, Ďộ pH khoảng 6 - 6,5

- Các chất dinh dưỡng: Các loại phân hữu cơ (phân chuồng, phân vi sinh, than bùn), phân vô cơ (Ďạm, lân, kali) và các loại phân trung, vi lượng (Mg, Zn, Cu,…) có ý nghĩa hết sức quan trọng Ďối với sự sinh trưởng và phát triển, năng suất và chất lượng của cây cúc [18]

Cúc cần Ďược trồng trong nhà có mái che tránh mưa nắng bằng lưới, nhà lưới bán tự Ďộng hoặc plastic; có thể Ďiều chỉnh ánh sáng (bằng cách dùng tay kéo lưới che bớt ánh sáng), Ďiều chỉnh Ďộ ẩm (theo tần suất phun mưa và tưới cho cây)

1.1.6 Thời vụ trồng của cây hoa cúc

- Vụ Xuân Hè: Trồng tháng 3, 4, 5 Ďể có hoa vào tháng 6, 7, 8

- Vụ Thu: Trồng tháng 5, 6, 7 Ďể có hoa bán vào tháng 9, 10, 11

- Vụ Thu Đông: Trồng tháng 8, 9 Ďể có hoa bán vào tháng 12, 1

- Vụ Đông Xuân: Trồng tháng 10, 11 Ďể có hoa bán vào tháng 2, 3

1.1.7 Giá trị cây hoa cúc

1.1.7.1 Giá trị tài nguyên

Trong cây cúc chứa tinh dầu, thành phần gồm: Chrysanthemol, camphor, monobornylphtalat; các flavinoid như luteolin, quercetin,

glucosid của apigenin Các acid chlorogenic, dẫn chất acid quinic Các sesquiterpen: chlorochrymorin, chrysandiol, chrysanthemin A, B Theo Đông

y, hoa cúc có vị ngọt, hơi Ďắng, tính hơi hàn, có tác dụng tán phong, thanh nhiệt, mát gan, sáng mắt Hoa thường dùng Ďể pha với trà hay ngâm rượu uống Thường dùng chữa Phong nhiệt cảm mạo, Ďau Ďầu, tăng huyết áp;

Chóng mặt, nhức Ďầu; mắt Ďỏ sưng Ďau, chảy nước mắt [5]

1.1.7.2 Giá trị kinh tế của cây hoa cúc

Cúc luôn là cây cảnh quan trọng nhất thế giới [82] Từ lâu hoa cúc Ďược xem như là một loại thảo dược có nhiều tác dụng tốt cho sức khỏe con người Ăn hoa cúc lâu ngày sẽ giúp làm Ďẹp nhan sắc, kéo dài tuổi thọ,… Cả hoa cúc khô và tươi Ďều Ďược dùng Ďể chế biến các loại trà Các thành phần hoạt chất trong tinh dầu hoa cúc là Bisabolol Ďược coi là có tác dụng chống kích ứng, chống viêm và chống vi khuẩn

Ngoài ra, ở các quốc gia khác nhau, hoa cúc Ďược sử dụng với các mục Ďích khác nhau vào các dịp khác nhau Ở Trung Quốc, một số loại hoa cúc Ďược sử dụng làm trà, thậm chí Ďược sử dụng làm thuốc trừ sâu thân thiện môi trường Ở Nhật Bản, hoa cúc Ďược coi là người bạn tâm tình và có một

“Lễ hội hạnh phúc” Ďể kỉ niệm Hoa cúc Ďược sử dụng rộng rãi ở Nhật Bản: 40% sử dụng làm quà, 25% cho các cơ sở thương mại (khách sạn, sự kiện), 25% sử dụng trong gia Ďình Ďể thờ cúng và 10% cho mục Ďích giáo dục trong giảng dạy cắm hoa nghệ thuật nhưng ở một số các nước Châu Âu như: Pháp, Balan,… cụm hoa màu trắng là biểu tượng của cái chết và Ďược sử dụng Ďể trên các ngôi mộ vào tất cả các Ngày Thần Thánh Cúc còn Ďược trồng làm cảnh của nhiều nước trên thế giới [37]

Riêng ở Việt Nam, hoa cúc thường có mặt ở các công viên, vườn hoa, phòng khách, bàn làm việc, trong các lễ viếng,… Cúc còn Ďược trồng Ďại trà nhằm mục Ďích cắm hoa bình, trồng trong bồn hay Ďể trang trí,…[4] Theo

Lê Kim Liên thì họ cúc gồm 374 loài, trong Ďó có 181 loài Ďã biết giá trị sử dụng [2]

Làm thuốc: Cây hoang dại 85%, 16 loài cây trồng

Làm cảnh: 30 loài (nhập nội có nguồn gốc nước ngoài)

Rau ăn: 31 loài tự nhiên, 4 loài trồng

Thuốc trừ sâu: 3 loài ( không gây Ďộc)

Phân xanh: 1 loài, cúc quỳ ở Mỹ dùng Ďể phủ Ďất trống bạc màu

Chất béo và tinh dầu: 12 loài, Ďặc biệt là cây thanh hao

Ngoài ra cúc còn Ďược dùng Ďể pha chè, ngâm rượu (cúc Vàng, Kim cúc,…), làm thuốc chữa bệnh (cúc Trắng chữa nhức Ďầu, Ďau mắt, ); rau cải cúc thường trồng làm rau ăn

Bên cạnh việc Ďáp ứng nhu cầu trên, hoa cúc Ďồng thời cũng Ďem lại nguồn kinh tế cho người dân Việt Nam: Quý 3 năm 2008 xuất khẩu hoa Ďạt

tới 1,4 triệu USD [85]

Việc xuất khẩu hoa ngày một tăng cao trong 10 tháng năm 2016 với kim ngạch Ďạt 11,5% triệu USD, tăng 37,9% Trong Ďó, kim ngạch xuất khẩu hoa Cúc các loại Ďạt cao nhất với 7 triệu USD, tăng 23,4% so với cùng kỳ

2009 [85]

Ngày nay cùng với sự phát triển khoa học công nghệ thì việc sản xuất

và nhân giống hoa cúc trở nên dễ dàng hơn rất nhiều Người ta Ďã có thể kéo dài tuổi thọ của hoa, Ďiều khiển hoa theo ý muốn, trồng trái vụ hoặc cho nở hoa vào các dịp lễ tết Ďã làm cho giá trị của hoa cúc Ďược tăng lên nhiều lần

1.2 Giá trị kinh tế của ngành sản xuất hoa trên thế giới và ở Việt Nam

1.2.1 Sản xuất hoa trên thế giới

Ngành trồng hoa Ďược bắt Ďầu từ những năm 1800 ở nước Anh khi mà cây hoa Ďược trồng trên những cánh Ďồng mênh mông Ngày nay, ngành trồng hoa là một trong những ngành công nghiệp chính ở cả nước Ďang và Ďã phát

triển Sản xuất của ngành trồng hoa trên thế giới tăng nhanh với tốc Ďộ 10% trên năm Hiện này có trên 50 quốc gia Ďã chủ Ďộng sản xuất hoa ở quy mô công nghiệp Tổng diện tích của ngành trồng hoa trên thế giới (tính cả diện tích Ďược bảo vệ và diện tích không Ďược bảo vệ) khoảng 628.972 ha Trong

số các nước trồng và sản xuất hoa, Hà Lan, Mỹ, Nhật Bản, Italia, Đức và Canada là những nước sản xuất hoa lớn nhất thế giới, Ďặc biệt là hoa cắt cành Một số nước Ďang phát triển ngành trồng hoa (gồm cả trồng và xuất khẩu) như Columbia, Hàn Quốc, Kenya, Ecuado, Ba Lan, Etiopia, Costarica, Thái Lan, Ấn Độ, Trung Quốc, Zimbabue và Mexia Trung Quốc với 286.068 ha,

Ấn Độ với 161.000 ha Ďang là hai nước có diện tích trồng hoa cắt cành chủ yếu trên thế giới, Vùng Châu Á-Thái Bình Dương chiếm khoảng 75% tổng diện tích trồng hoa của thế giới Ďã Ďem lại năng suất và lợi nhuận kinh tế cao Ďối với số lĩnh vực phát triển Ďặc biệt trong việc trồng cắt hoa [69]

Châu Âu, Mỹ và Nhật Bản là những nước tiêu thụ hoa lớn nhất Các siêu thị tiêu thụ hoa ở các nước lớn lần lượt là Đức (22%), Mỹ (15%), Pháp (10%), Anh (10%), Hà Lan (9%), Nhật Bản (6%), Thụy Sĩ (5%) và Italia (5%) Trong trường hợp hoa cắt cành, tính trên khả năng tiêu dùng thì Nhật Bản là quốc gia sử dụng nhiều hoa nhất thế giới, sau Ďó là Châu Âu và Mỹ

Cả Liên minh Châu Âu tiêu thụ trên 50% lượng hoa của thế giới, trong Ďó Đức là quốc gia Ďóng vai trò chủ yếu, sau Ďó là Anh, Pháp và Italia, tại Ethiopia nghề trồng hoa Ďược giám sát chặt chẽ, tuân thủ nghiêm ngặt các qui Ďịnh Ďể tránh ảnh hưởng Ďến môi trường [31]

Mức thương mại toàn cầu hàng năm Ďược công bố vào khoảng trên 100

tỷ Ďô la Trong Ďó hoa cắt cành chiếm phần lớn lợi nhuận, sau Ďó là hoa trồng chậu, cây giống, củ hoa… Ở các nước phát triển của Châu Âu, Châu Mỹ và Châu Á chiếm trên 90% sản lượng thương mại của ngành trồng hoa Đức là quốc gia nhập khẩu chủ yếu trong khi Ďó Hà Lan là nước xuất khẩu hoa chủ

yếu, sau Ďó là Colombia, Italia, Itxaren Các nước Châu Á-Thái Bình Dương

là những nước cung cấp hoa chủ yếu cho Nhật Bản và Hồng Kông

Sản phẩm xuất khẩu của ngành trồng hoa tính cả thế giới vào khoảng

17 tỷ Ďô la (2007) Hoa cắt cành tươi và hoa trang trí (bằng bộ lá) ước tính chiếm khoảng 49,1% (khoảng 8,31 tỷ Ďô la), thực vật tươi, củ và cành giâm chiếm khoảng 50,9% (khoảng 8,60 tỷ Ďô la) vào năm 2007 Trong Ďó, hoa hồng chiếm khoảng 70% sản lượng hoa thương mại Hà Lan là nước có ngành công nghiệp hoa phát triển vào bậc nhất thế giới, ước tính sản lượng thương mại của ngành trồng hoa nước này vào khoảng 49,6% (tương Ďương 8,56 tỷ

Ďô la) tổng giá trị của ngành hoa xuất khẩu của thế giới năm 2007 Colombia

là nước xuất khẩu hoa lớn thứ hai trên thế giới, chiếm khoảng 6,5% (tương Ďương 1,12 tỷ Ďô la) Đức là nước nhập khẩu hoa lớn nhất trên thế giới khoảng 2,59 tỷ Ďô la, sau Ďó là Anh (1,89 tỷ Ďô la), Mỹ (1,81 tỷ Ďô la), Hà Lan vừa là nước sản xuất vừa là nước nhập khẩu hoa, hàng năm Hà Lan nhập khoảng 1,55 tỷ Ďô la, Pháp nhập khoảng 1,43 tỷ Ďô la, qua Ďây Ďã cho thấy năng suất và lợi nhuận Ďặc biệt của lĩnh vực trồng cắt hoa [69] mang lại kinh

tế như thế nào cho quốc gia Trong số các sản phẩm của ngành trồng hoa Ďược các nước nhập khẩu thì hoa hồng là loại hoa chủ yếu Ďược nhập khẩu bởi các nước Châu Âu, ngoài ra còn nhập khẩu các loại hoa mùa hè, hoa vùng nhiệt Ďới và hoa lan Nhật Bản là một nước nhập khẩu hoa lớn nhất ở vùng Châu Á - Thái Bình Dương

1.2.2 Sản xuất hoa ở Việt Nam

Thực trạng của ngành sản xuất hoa và cây cảnh ở Việt Nam

Hoa tươi xuất khẩu của các nước Đông Nam Á nói chung và Việt Nam nói riêng khó có thể thâm nhập vào thị trường khu vực Bắc Mỹ hoặc Trung Âu

vì các thị trường này Ďã có truyền thống nhập khẩu hoa tươi từ các khu vực khác như vùng Nam Mỹ và Trung Mỹ, các nước Nam Âu, Itxaren và Châu Phi

Những thị trường này cũng khá xa về khoảng cách Ďịa lý nên chi phí vận chuyển sẽ không phải là lợi thế Các yếu tố liên quan Ďến việc Ďạt Ďược những mục tiêu trung hạn này chỉ có thể là giá cả và các dịch vụ khách hàng

Đối với xuất khẩu hoa, mục tiêu ngắn hạn là phát triển sang các nước Châu Á như Nhật Bản, Hàn Quốc, Đài Loan, Singapore Những thuận lợi khi bán hàng cho những nước này chính là vị trí Ďịa lý gần, các yêu cầu vận chuyển và chi phí cho việc bảo quản sau khi thu hoạch thấp và sự liên hệ Ďể

tìm khách hàng thường có thể dựa vào các mối quan hệ kinh doanh hiện tại

Thị trường trong nước rộng lớn và phong phú, bên cạnh Ďó tiềm năng xuất khẩu cũng Ďầy hứa hẹn, hoa và cây cảnh Việt Nam nếu Ďược tổ chức tốt

từ khâu sản xuất, quảng bá Ďến tiêu thụ sẽ tạo tiềm lực kinh tế lớn cho ngành sản xuất nông nghiệp Việt Nam trong tiến trình chuyển Ďổi cơ cấu cây trồng

Với khí hậu và thổ nhưỡng thuận lợi Ďể có thể trồng Ďược nhiều loại hoa và cây cảnh, hiện Việt Nam Ďang sở hữu một nguồn tài nguyên hoa rất Ďa dạng, từ các loại hoa xứ nhiệt Ďới Ďược trồng ở các vùng Ďồng bằng Ďến hoa

xứ lạnh trồng trên các cao nguyên như Lâm Đồng, Pleiku và vùng núi như Sapa, Hoàng Liên Sơn Sự phát triển của ngành hoa Việt Nam trong thời gian qua Ďã mang lại cho các sản phẩm hoa của Việt Nam sự Ďa dạng và chất lượng vượt bậc so với thời gian trước

Phương hướng phát triển sản xuất và xuất khẩu hoa tươi

Đời sống tinh thần ngày càng Ďược coi trọng hơn, sản phẩm hoa và cây cảnh cũng có vai trò quan trọng trong cuộc sống khi thu nhập và nhu cầu thẩm

mỹ của người dân ngày càng cao

Dự kiến Ďến năm 2020 vùng hoa TP Hồ Chí Minh có 1500 ha, diện tích tập trung chính ở các huyện Củ Chi, Thủ Đức; diện tích hoa Ďược trồng theo quy trình công nghệ cao chiếm tỷ lệ lớn (khoảng 60-70% diện tích)

Vùng Đông Nam Bộ: Dự kiến Ďến năm 2020 vùng hoa Lâm Đồng 3000

ha, diện tích tập trung chính ở TP Đà Lạt (chiếm 1/3 diện tích toàn tỉnh); chủ yếu hoa ôn Ďới Ďược trồng theo quy trình công nghệ cao

Vùng Trung du Miền núi Bắc bộ: Dự kiến Ďến năm 2020 vùng hoa hàng hoá có khoảng 500 ha, tập trung chính ở Lào Cai, Hà Giang, Sơn La

Hà Nội có 3000 ha, diện tích tập trung chính ở huyện Từ Liêm (Tây Tựu), Đông Anh, Quận Tây Hồ, Mê Linh v.v

Sản xuất của ngành hoa ở Việt Nam

Đà Lạt là vùng sản xuất hoa nổi tiếng và là vùng có tiềm năng lớn nhất

về sản xuất hoa của cả nước Hiện nay công ty TNHH Đà Lạt - Hasfarm 100% vốn nước ngoài Ďang áp dụng công nghệ sản xuất hoa tiên tiến với qui

mô diện tích 15 ha sản xuất trong nhà kính và 2 ha nhà thép; có hệ thống tự Ďộng Ďiều chỉnh nhiệt Ďộ, ẩm Ďộ, hệ thống tưới nhỏ giọt bằng nguồn nước sạch hòa tan với phân bón, thuốc bảo vệ thực vật Các chủng loại hoa Công ty

Đà Lạt - Hasfarm Ďang sản xuất bao gồm hoa hồng, cúc, cẩm chướng, ly ly, Ďồng tiền và lá hoa trang trí Sản lượng hoa xuất khẩu sang các nước Hồng Kông, Nhật, Đài Loan, Singapore chiếm 55%, phần còn lại dành cho tiêu thụ nội Ďịa

Hiện nay, sản xuất hoa ở nước ta Ďược thực hiện bởi 2 Ďối tượng chính: Nông dân sản xuất tự phát theo xu hướng nhu cầu thị trường trong nước và bởi các doanh nghiệp tư nhân trong nước, liên doanh với nước ngoài hoặc 100% vốn nước ngoài sản xuất hoa chủ yếu cho xuất khẩu Hoa tiêu thụ trong nước chủng loại Ďa dạng và cung cấp ra thị trường theo mùa vụ, chất lượng từ thấp Ďến cao, giá cả vừa phải, hiệu quả kinh tế không cao, sản xuất nhỏ lẻ và thiếu ổn Ďịnh Các doanh nghiệp sản xuất hoa xuất khẩu lượng hoa nhiều hơn mang tính hàng hoá, chất lượng hoa cao hơn và Ďược sản xuất trong Ďiều kiện

kỹ thuật cao, sản phẩm Ďược tiêu thụ theo hợp Ďồng Hiện nay, Việt Nam Ďã

xuất khẩu Ďược các sản phẩm hoa cắt cành như hồng, phong lan, cúc, Ďồng tiền, cẩm chướng, ly ly, sao tím sang Trung Quốc, Hồng Kông, Đài Loan, Nhật bản, Singapore Australia, Ả rập; vạn niên thanh, mai chiếu thủy, mai cảnh sang Trung Quốc, Hoa Kỳ, Nhật Bản Tuy nhiên, số lượng xuất khẩu không nhiều, với doanh thu hơn 10 triệu USD/năm Sở dĩ, sản phẩm hoa, cây cảnh của Việt Nam khó thâm nhập thị trường thế giới là do chủng loại, chất lượng, kích cỡ không Ďồng Ďều, chưa Ďáp ứng Ďược thị hiếu của khách hàng quốc tế Trong khi Ďó, tiêu thụ trong nước lại có xu hướng chạy theo mùa vụ (rằm, lễ, Tết, các ngày kỷ niệm) là chính

Sản xuất và xuất khẩu hoa tươi Ďòi hỏi phải có những Ďiều kiện chặt chẽ từ giống, gieo trồng, chăm sóc…Ďến thu hoạch, công nghệ bảo quản, Ďóng gói, vận chuyển, an toàn thực phẩm và thâm nhập vào các kênh phân phối của thị trường nhập khẩu Trong Ďiều kiện hiện nay, ít có doanh nghiệp Việt Nam có thể Ďáp ứng Ďược các yêu cầu này Vì vậy, trước mắt cần tập trung phát triển một số loại hoa Việt Nam có tiềm năng xuất khẩu và tương Ďối dễ Ďáp ứng yêu cầu của Ďối tác nước ngoài

Về ứng dụng công nghệ cao: Đã Ďược cải thiện Ďáng kể, như thay Ďổi

cơ cấu giống, nuôi cấy mô, kỹ thuật canh tác và bảo vệ thực vật tiên tiến; áp dụng công nghệ nhà lưới có mái che sáng Tuy nhiên, sự thay Ďổi này diễn ra không Ďồng Ďều giữa các vùng sản xuất vì nhiều lý do (khí hậu thời tiết, trình

Ďộ thâm canh, khả năng Ďầu tư, khả năng tiếp cận kỹ thuật tiến bộ và thị trường…) Đà Lạt có thể coi là Ďịa bàn có tiến bộ nhanh nhất trong cả nước về phát triển sản xuất hoa cắt cành

Kỹ thuật trồng hoa: Ở nhiều nơi vẫn chủ yếu dựa vào kinh nghiệm và phương pháp nhân giống cổ truyền như gieo từ hạt, trồng từ củ, mầm, nhánh Các phương pháp này dễ trồng, giá thành cây giống thấp nhưng chất lượng giống không cao, dễ bị thoái hóa, làm giảm chất lượng hoa vì vậy tuy chủng loại hoa của Việt Nam khá phong phú nhưng thiếu giống hoa Ďẹp, chất lượng cao

Về quy mô và tổ chức sản xuất: Hầu hết những cơ sở sản xuất hoa cắt cành ở nước ta còn ở quy mô nông hộ nhỏ, tổ chức sản xuất Ďơn lẻ, với diện tích trung bình từ 2.000 Ďến 3.000 m2/hộ Hộ sản xuất hoa lớn cũng chỉ từ 1 Ďến 2 ha Ở quy mô sản xuất này không thể áp dụng những kỹ thuật tiến bộ như nhà kính, nhà lưới, sân bãi, mặt bằng, dây chuyền chế biến, bảo quản vận chuyển lạnh… Ďể Ďưa ngành sản xuất hoa trở thành sản xuất công nghiệp Từng hộ nông dân sản xuất cá lẻ, thiếu hợp tác là trở ngại lớn cho việc tạo nguồn hàng hóa lớn và Ďa dạng với chất lượng cao, Ďồng nhất Trên thực tế, Ďã

có nhiều hợp Ďồng xuất khẩu không thể thực hiện Ďược do không thể tổ chức cung cấp sản phẩm theo yêu cầu, trong khi tiềm năng sản xuất là rất lớn

Những thuận lợi, khó khăn khi trồng cúc ở nước ta

+ Có ít giống hoa chất lượng cao thích nghi với Ďiều kiện của từng vùng

+ Sản xuất hoa còn nhỏ, lẻ, tiến bộ kỹ thuật chưa Ďồng Ďều, chưa cao + Thiếu trang thiết bị nhà lưới, nhà kính, nhà bảo quản

+ Thiếu Ďội ngũ cán bộ kỹ thuật, các nhà nghiên cứu về cây hoa

1.3 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật trong nhân giống cây hoa cảnh

Sản xuất thương mại các loại cây trang trí (cây cảnh, cây hoa…) Ďang phát triển trên thế giới Đây là một ngành mang lại lợi nhuận cao và không ngừng phát triển trong hai thập kỉ qua, hứa hẹn là một ngành công nghiệp tiềm năng trong tương lai [18] Quá trình nhân giống và cải tiến chất lượng sản phẩm cây cảnh chẳng hạn như kiểu lá, màu hoa, mùi hương, Ďộ bền của

sản phẩm Ďang là những mục tiêu quan trọng của ngành công nghiệp này

Nuôi cấy mô và tế bào Ďã có những Ďóng góp quan trọng Ďể cải tiến giống cây trồng và còn nhiều tiềm năng ứng dụng trong tương lai Trong một vài năm gần Ďây, vi nhân giống Ďã trở thành một kỹ thuật Ďầy hứa hẹn Ďể nhân nhanh và mở rộng sản xuất của những Ďối tượng thực vật Ďược con người chọn lựa Vi nhân giống thực tế là phiên bản thu nhỏ của nhân dòng Ďược thực hiện trong Ďiều kiện vô trùng Kỹ thuật vi nhân giống Ďược thực hiện dựa trên khái niệm về tính toàn năng của tế bào Ďược nhà khoa học Harberlandt Ďưa ra Mỗi

tế bào của cơ thể thực vật Ďều có tính toàn năng, chẳng hạn như khả năng phát triển thành cây mới dưới Ďiều kiện nuôi cấy cụ thể

Nền công nghiệp cây cảnh Ďã Ďược ứng dụng rất nhiều phương pháp

nhân giống in vitro nhằm mở rộng quá trình nhân giống ở quy mô công

nghiệp Tính Ďến nay, Ďã có rất nhiều phòng thí nghiệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Ďược hình thành, Ďặc biệt là ở các nước Ďang phát triển, nơi có nhân công rẻ

Các qui trình vi nhân giống Ďã Ďược phát triển trên nhiều Ďối tượng cây cảnh, chẳng hạn như cây hoa lay ơn [30], [33], hoa hồng [66], [79], hoa cúc [71], [77], hoa cẩm chướng [43], [49] và cây hoa phong lan [25], [30]

Quá trình vi nhân giống là một quá trình phức tạp, Ďược phân chia thành ba nhóm phương pháp chính:

1/ Nhân giống bằng chồi chính hoặc chồi bên

2/ Nhân giống bằng cách phát sinh chồi bất Ďịnh

3/ Quá trình phát sinh phôi sôma

Hai phương pháp nhân giống Ďầu tiên có cây con Ďược hình thành thông quá trình phát sinh cơ quan: Các chồi Ďơn cực Ďược hình thành (cực chồi), sau Ďó các chồi này Ďược chuyển sang môi trường ra rễ Ďể hình thành nên cực còn lại (cực rễ) Ngược lại, quá trình phát sinh phôi sôma dẫn Ďến sự hình thành phôi lưỡng cực thông qua một số bước tương tự như quá trình phát triển của phôi hữu tính.Tất cả các phương pháp này Ďược sử dụng Ďể sản xuất

cây cảnh trong Ďiều kiện in vitro

1.3.1 Nhân giống bằng chồi chính hoặc chồi bên

Chồi chính và chồi bên ở trạng thái nghỉ hoặc trạng thái hoạt Ďộng, tùy thuộc vào trạng thái sinh lý của mẫu Vi nhân giống thông qua hình thành chồi chính hoặc chồi bên là một trong những kỹ thuật tốt nhất Ďể nhân nhanh giống cây trồng bởi vì sự ổn Ďịnh di truyền của các dòng Ďược nhân ra Một Ďỉnh chồi và một chồi bên khi Ďược sinh trưởng trong Ďiều kiện có nồng Ďộ cytokinin cao thường phát triển chồi bên tạo thành cụm chồi, từ Ďó có thể Ďược nhân lên thành các cụm chồi theo cách tương tự Quá trình nhân lên này

có thể là vô hạn, từ Ďó có hàng triệu cây giống có thể Ďược nhân lên từ một chồi chính hoặc chồi bên Phương pháp này có Ďộ di truyền ổn Ďịnh cao bởi vì các tế bào của mô phân sinh Ďồng nhất lưỡng bội, các tế bào có Ďộ Ďồng Ďều cao Hệ số nhân giống bằng kỹ thuật này khác nhau, tùy thuộc vào kiểu gen

và lượng cytokinin sử dụng Theo tác giả Udom và cộng sự (2009), hệ số nhân chồi từ Ďoạn thân trưởng thành của cây hoa hồng lai Rosa hybrida trên môi trường bổ sung BAP (13,2 µM) kết hợp với NAA (0,022 µM) cho tỷ lệ

hình thành số chồi trên mẫu là cao nhất [75] Còn tác giả Waseem và cộng sự

(2009) Ďưa ra quy trình nhân giống in vitro cây hoa cúc từ Ďỉnh chồi trên môi

trường bổ sung IAA với nồng Ďộ 0,48 µM cho tỷ lệ hình thành chồi cao nhất (86,6%) [77] Sự hình thành Ďa chồi cũng Ďược nghiên cứu trên Ďối tượng hoa hồng Rosa rugosa từ Ďốt thân trên môi trường MS có bổ sung BAP (2,2 µM) + NAA (0,054 µM) + GA3 (2,0 µM) với lượng Ďường sacarozơ 3% [76] Tác

giả Haouala và cộng sự (2012) Ďã phát triển một quy trình Ďể nhân giống in vitro cây hoa lay ơn từ chồi Ďỉnh trên môi trường MS có bổ sung IBA (2,46

µM) và BAP (9,84 µM) [33] Trên Ďối tượng cây hoa cúc, tác giả Nalini (2012) Ďưa ra kết luận sự hình thành chồi từ chồi Ďỉnh trên môi trường MS có

bổ sung Kinetin (13,85 µM) và IAA (9,6 µM) [51] Tác giả Shirdel và cộng

sự (2013) thông báo quá trình nhân dòng cây hoa hồng Rosa canina từ chồi bên trên môi trường MS có bổ sung BAP (26,4 µM) là phù hợp nhất [66]

1.3.2 Nhân giống bằng chồi bất định

Có rất nhiều loại cây cảnh Ďã Ďược nhân giống in vitro thành công bằng việc hình thành các chồi bất Ďịnh Các chồi bất Ďịnh có thể Ďược:

- Phát triển trực tiếp từ các loại mẫu như rễ, thân, cuống lá, phiến lá và các bộ phận của hoa

- Phát triển gián tiếp từ mô sẹo (callus) thu Ďược từ các nguồn mẫu thực vật

Việc lựa chọn loại mẫu và hàm lượng chất Ďiều hòa sinh trưởng thực vật là hai nhân tố quan trọng nhất trong quá trình phát sinh chồi bất Ďịnh

Phát triển trực tiếp từ nguồn mẫu thực vật: Theo nghiên cứu của nhóm tác giả Kantia và cộng sự (2002) Ďã Ďưa ra một qui trình phát sinh chồi bất Ďịnh

có hiệu quả cao từ lá cây hoa cẩm chướng (Dianthus chinensis) Ďược nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung BAP (13,2 µM) kết hợp với NAA (7,35 µM) [41] Tác giả Martin và cộng sự (2003) Ďã tái sinh trực tiếp chồi từ phiến lá

của hai giống hoa hồng môn (Anthurium andraeanum) cắt cành, hiệu quả tái sinh chồi cao nhất là 67% từ lá với hệ số Ďạt 7 chồi/mẫu [53] Nhóm nghiên cứu của tác giả Chen và cộng sự (2004) cũng phát triển một quy trình nhân giống hiệu suất tái sinh trực tiếp chồi từ lá của cây lan Paphiopedilum Ba công thức nghiên cứu (2,4-D 4,52 µM; TDZ 22,71 µM và 2,4-D (4,52 µM) kết hợp TDZ (4,54 µM)) Ďã cho số chồi trung bình/mẫu cao từ mẫu lá [25] Nhóm nghiên cứu Waseem và cộng sự (2009) Ďã chứng minh ảnh hưởng của các loại auxin Ďến khả năng tái sinh chồi bất Ďịnh trực tiếp từ mảnh lá của cây hoa cúc [77].Quá trình phát sinh cơ quan Ďã Ďược thực nghiệm trên một số loại cây cảnh, ví dụ các tế bào sôma của cây thuốc lá cảnh [24], cây san hô xanh (Euphorbia tirucalli) [32], cây Hygrophila polysperma [42]

- Phát triển gián tiếp thông qua mô callus

Tác giả Kantia và Kithari (2002) Ďã nghiên cứu quá trình hình thành chồi bất Ďịnh trên môi trường MS có bổ sung BAP (2,2 µM) và 2,4-D (4,87 µM) từ mô sẹo callus Ďược hình thành nhiều trên bề mặt lá của loài cẩm chướng Dianthus chinesis [41] Nhóm nghiên cứu Smaranda (2005) Ďã thực hiện quá trình vi nhân giống gián tiếp của cây hoa cúc thông quá nuôi cấy callus thu Ďược từ các Ďốt thân [64] Kaviani và cộng sự (2011) Ďã hoàn chỉnh một quy trình cảm ứng hình thành callus và hình thành chồi và rễ từ mẫu lá ở cây Matthiola incana [40]

- Phát sinh phôi sôma

Sự hình thành cấu trúc lưỡng cực chứa cả mô phân sinh chồi và mô phân sinh rễ tương tự như quá trình phát triển phôi hữu tính (Ďược hình thành

từ hợp tử).Các thể phôi này có thể phát triển thành thực vật Ďủ chức năng dưới Ďiều kiện thích hợp

Theo nhóm nghiên cứu Tanaka (2004), sự phát sinh phôi sôma cao nhất

từ mẫu lá của cây hoa cúc (Dendranthema grandiflorum) trên môi trường MS

có chứa IAA (57,08 mM) + kinetin (0,465 mM) [71] Phôi Ďược phát sinh trên môi trường không chứa kinetin.Tác giả Kumar và cộng sự (2002) Ďã thông báo rằng sốc nhiệt cảm ứng quá trình phát sinh phôi sôma ở mô sẹo callus Ďược nuôi cấy và tái sinh cây từ callus nuôi cấy ở một số loài Tricyrtis [45] Tác giả Datta và cộng sự (2001) Ďã phát sinh trực tiếp phôi sôma từ mẫu là các cánh hoa hình tia ở chi hoa cúc trên môi trường MS có bổ sung 2,4-D và BAP [26]

1.3.3 Các nghiên cứu về giai đoạn ra ngôi

Các nghiên cứu về các Ďặc Ďiểm hình thái, sinh lí, hóa sinh của cây trồng trước những biến Ďổi của khí hậu, Ďiều kiện nuôi trồng cũng Ďược quan

tâm sâu sắc Gần Ďây, những Ďặc Ďiểm này của cây trong giai Ďoạn ra ngôi (ex vitro) các cây có nguồn gốc nuôi cấy mô cũng Ďược quan tâm

Hofman nghiên cứu giai Ďoạn ra ngôi ở Ďối tượng cây thuốc lá: khi

chuyển từ trạng thái in vitro sang ex vitro sau 35 ngày có sự biến Ďổi về hàm

lượng diệp lục, khả năng quang hợp và hàm lượng tinh bột [34]

Tương tự, cây phong lan Doritaenopsis in vitro cũng có những sự thay

Ďổi về Ďặc Ďiểm của hệ sắc tố quang hợp (tăng tỉ lệ carotenoid), hình thái lá

sau 30 ngày ra ngôi ex vitro [38]

Sự hóa gỗ của cây trong quá trình ra ngôi ex vitro cũng Ďược nghiên

cứu ở cây dương [39]

Trong thời kì ra ngôi ex vitro, ở một số thực vật có những lá hình thành trong Ďiều kiện in vitro không thể tiếp tục phát triển tiếp và dần Ďược thay thế

bằng các lá mới hình thành [27; 57]

Nghiên cứu của Pospóšilová trên cây thuốc lá, ở loài này, số lượng lá

tăng ngay khi chuyển cây ra môi trường ex vitro, trong Ďiều kiện in vitro cây

thuốc lá có 6,7 lá; sau ra ngôi 17 ngày và 45 ngày số lượng lá lần lượt là 13,3

lá và 22,7 lá [58] Trong một số nghiên cứu trước Ďây cũng chỉ ra rằng khi

chuyển cây từ Ďiều kiện in vitro ra ngoài môi trường tự nhiên, Ďộ dày lớp biểu

bì, lớp cutin có xu hướng tăng lên [78]

Nghiên cứu hàm lượng nước giai Ďoạn ra ngôi trên cây Malus pumilacủa Díaz-Pérez, hàm lượng nước của cây này giảm sau 10 ngày ra ngôi và Ďược

phục hồi tương Ďương với hàm lượng nước cây in vitro ở thời kì sau ra ngôi,hàm

lượng chất khô của cây này tăng sau 10 ngày ra ngôi và thời kì sau ra ngôi hàm

lượng chất khô tương Ďương với thời Ďiểm cây trong Ďiều kiện in vitro [28]

Tác giả Nautiyal, 1994 nghiên cứu về hàm lượng chất khô trên thân và

rễ cây bạch Ďàn in vitro, hàm lượng chất khô của cây này tăng mạnh trong

thời kì 4 ngày Ďưa cây ra ngoài môi trường tự nhiên, sau Ďó giảm dần vào thời

kỳ sau ra ngôi [50]

Nghiên cứu của các tác giả Sciutti và Morini trên cây Prunus cerasifera, cây trong ống nghiệm với Ďộ ẩm tương Ďối là 100% sẽ bị mất

nhiều nước hơn so với cây Ďược trồng ở Ďộ ẩm tương Ďối từ 70% Ďến 80%

[63]; theo Khan et al, cây Quercus robur trong bình thủy tinh mất nước mạnh

hơn so với cây ngoài tự nhiên trong thời gian 30 phút Ďến 90 phút thí nghiệm

[46]; nghiên cứu của tác giả Romano & Martins-Loucao cho thấy cây in vitro mất nước nhiều hơn so với cây ex vitro, mất tới 53% và 14% trong 30 phút thí nghiệm [61] Theo một số nghiên cứu trước Ďây, khi chuyển cây in vitro ra

ngoài môi trường tự nhiên, lớp biểu bì, lớp cutin có xu hướng dày lên cùng với sự giảm số lượng khí khổng bề mặt lá và hoạt Ďộng Ďóng mở khí khổng hiệu quả hơn Do vậy, khi Ďưa cây ra ngoài sẽ xảy ra hoạt Ďộng bất thường của khí khổng là nguyên nhân làm cho cường Ďộ thoát hơi nước ở lá diễn ra mạnh hơn [65; 62]

Trong thời kì Ďầu ra ngôi lá cây in vitro bị mất nước nhanh, chỉ số

Fv/Fm giảm xuống nhanh chóng như cây thuốc lá [34], cây khoai lang Ďược trồng vào môi trường nhân tạo có bổ sung 40g sucrose /lít môi trường [23] hay cây Doritaenopsis khi Ďược Ďặt ở Ďiều kiện Ďộ ẩm không khí dưới 70%

hoặc nhiệt Ďộ môi trường bằng 15°C, 20°C hoặc 35°C [83]

Silva Junior và cộng sự nghiên cứu về giải phẫu rễ của cây L purpurata, cây Ďược Ďưa ra ngoài trồng trong môi trường có chứa 75% urê

cho thấy sự thay Ďổi trong cấu trúc giải phẫu rễ, Ďặc biệt có sự gia tăng diệp lục a và b với cây Ďược xử lý 50, 75 và 100% urê so với cây trong ống nghiệm [70] và nghiên cứu giải phẫu lá cây Yến Mạch của Aracama và cộng

sự [60] trong giai Ďoạn ra ngôi

1.3.4 Hướng nghiên cứu kỹ thuật nhân giống bằng giâm cành ở thực vật

Đặng Văn Đông (2005) [5] Ďã nghiên cứu 4 phương pháp nhân giống là: tách mầm giá, giâm cành từ cây mẹ chọn lọc trong vườn, nuôi cấy mô tế bào, giâm cành từ cây mẹ nuôi cấy mô tế bào

Khảo sát hiệu ứng tăng trưởng thực vật của chế phẩm Oligoalginat (OA) bằng kĩ thuật bức xạ trên cây hoa cúc, Lê Quang Luận sử dụng dung dịch OA phun lên lá cúc ở các nồng Ďộ khác nhau khi cúc Ďược 12-14 ngày tuổi sau giâm cành Kết quả là dung dịch OA có nồng Ďộ 80 ppm làm tăng quá trình sinh trưởng về chiều cao, số lá, Ďường kính hoa, tăng trọng lượng cành hoa (Lê Quang Luận, 1999)

Nguyễn Thị Kim Lý (2001), Ďã tiến hành các nghiên cứu thí nghiệm xây dựng quy trình nhân giống bằng giâm cành cho thấy: Việc giâm cành vào

vụ Xuân và vụ Thu tiến hành dễ dàng hơn, còn vào vụ Hè-Thu khó khăn hơn Để giải quyết những khó khăn này, Nguyễn Thị Kim Lý (2001), Ďã tiến hành nghiên cứu một số biện pháp giâm cành với 2 giống Ďược trồng khá phổ biến ngoài sản xuất giống cúc CN 97 và Họa Mi Kết quả Ďã thu Ďược

là trong các biện pháp xử lý cành giâm, biện pháp giâm trên nền Ďất phù sa nhẹ, chỉ tưới Ďẫm 1 lần kết hợp với xử lý IBA 1.000 ppm và Zinep 0,1%, cho

tỷ lệ hình thành rễ và tỷ lệ cây xuất vườn cao nhất Biện pháp này khi áp dụng ngoài sản xuất Ďã Ďạt hiệu quả kinh tế cao, cung cấp Ďủ cây cho sản xuất cây thay vì trước Ďây việc giâm trên nền cát ẩm là không thích hợp cho sự ra rễ cành giâm

Khi nghiên cứu biện pháp nhân giống hoa cúc bằng giâm cành vào mùa

hè, Nguyễn Thị Kim Lý, Nguyễn Xuân Linh (1999) Ďã sử dụng Kích phát tố của công ty Thiên Nông và Ďi Ďến kết luận: việc sử dụng loại phân bón này với liều lượng 1g thuốc pha trong 1 lít nước sạch và nhúng phần gốc của cành khoảng 3 phút, rồi Ďem phần dung dịch thuốc còn lại pha thêm 5g phân bón lá phun lại lên cành giâm, cứ 3-5 ngày phun dung dịch này 1 lần, có thể Ďảm bảo

80 Ďến 90% số cây ra rễ, với thời gian rút ngắn so với Ďối chứng từ 3-4 ngày Phương pháp này thường Ďược áp dụng có hiệu quả cao hơn cho việc nhân giống vào mùa Hè Hệ số nhân giống cúc theo phương pháp này Ďạt từ 15-

20 lần, tức là trồng từ 15-20 ha phải có 1 ha vườn cây mẹ

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu, hóa chất và thiết bị nghiên cứu

2.1.1 Vật liệu thực vật

Ba giống cúc Thạch Bích, Đỏ Cờ, Chi Vàng dạng cúc chùm, Ďược thu tại xã Đại Thịnh, huyện Mê Linh, thành phố Hà Nội Các giống Ďược lưu giữ dưới dạng cây in vitro tại phòng thí nghiệm Sinh lí thực vật, khoa Sinh-

KTNN, trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Đặc Ďiểm phân biệt các giống nghiên cứu:

- Chiều cao cây 100- 105

cm thì ra hoa, thân yếu

Chiều cao cây từ

90-100 cm, thân to, yếu phải có cọc Ďỡ; mọc Ďứng, có nhiều cành

- Lá xanh, phiến lá

dày,có phiến xẻ 3-5 thùy chân vịt, phiến lá thay Ďổi về kích thước;

viền có răng; mặt dưới

- Chiều cao cây 80-85

cm, thân to, yếu phải

có cọc Ďỡ; mọc Ďứng,

có nhiều cành

- Lá xanh, phiến lá dày;

có phiến xẻ 3-5 thùy chân vịt, phiến lá thay Ďổi về kích thước; viền

có răng; mặt dưới phủ

- Hoa màu thạch Bích tím, cánh hoa ngắn, kép xếp thành nhiều tầng, Ďường kính hoa từ 10-15cm, cụm hoa Ďầu, ở nách lá hoặc Ďỉnh cành

- Thời gian sinh trưởng

từ 3-4 tháng, ra hoa trong Ďiều kiện ngày ngắn

lông trắng, mặt trên

nhẵn; cuống dài 1-1,5

cm

- Hoa màu Vàng, kép xếp nhiều tầng, Ďường kính hoa từ 10-15 cm, cánh dày, xếp không chặt, cụm hoa Ďầu, ở nách lá hoặc Ďỉnh cành

- Thời gian sinh trưởng

từ 4 -5 tháng, ra hoa trong Ďiều kiện ngày ngắn

2.1.2 Hóa chất và thiết bị nghiên cứu

* Hóa chất:

- Môi trường sử dụng nuôi cấy là MS (Murashige và Skoog, 1962) [54] gồm các khoáng vi lượng, Ďa lượng, vitamin… kết hợp với Ďường saccaroze 30g/lít và aga 7g/lít; BAP (6- Benzyl amino purin), α-NAA (Naphthalene acetic acid)

+ Tổ chức xin Ďăng ký: Asahi chemical MFG Co., Ltd Nhà phân phối: Công ty Thuốc sát trùng Cần Thơ

Atonik 1,8DD là chế phẩm chứa các hợp chất nitơ, là thuốc kích thích

sinh trưởng cây trồng thế hệ mới, làm tăng khả năng sinh trưởng, thành phần chính xác của hợp chất kích thích tạo lá thì chưa rõ do nhà sản xuất không cung cấp, tuy nhiên từ thành phần chính ở trên có thể chế phẩm Atonik chứa các nguyên tố vi lượng, chất Ďiều hòa sinh trưởng thuộc nhóm kích thích sinh trưởng thực vật…

Atonik 1,8DD là thuốc kích thích sinh trưởng cây trồng thế hệ mới Cũng như các loại vitamin Atonik 1,8DD làm tăng khả năng sinh trưởng Ďồng thời giúp cây trồng tránh khỏi những ảnh hưởng xấu do những Ďiều kiện sinh trưởng không thuận lợi gây ra

Atonik 1,8DD có tác dụng làm tăng khả năng ra rễ, nẩy mầm, tăng khả năng ra chồi mới sau khi thu hoạch Ngoài ra Atonik 1,8DD cũng làm tăng khả năng sinh trưởng, ra hoa Ďậu quả của các loại cây trồng Đặc biệt là làm tăng năng suất và chất lượng nông sản

Atonik 1,8DD có hiệu lực Ďối với hầu hết các loại cây trồng và rất dễ dàng áp dụng vào tất cả các giai Ďoạn sinh trưởng của cây trồng kể từ giai Ďoạn nẩy mầm cho Ďến giai Ďoạn thu hoạch

+ Liều lượng sử dụng: pha 1 gói 10 ml trong 8 lít máy phun cho 360

m2 Có thể phun từ 1 – 2 lần

- Chế phẩm N3M:

Chế phẩm N3M là phân bón lá, kích thích ra rễ cực mạnh do Công ty TNHH MTV Sinh hóa nông Phú Lâm cung cấp

Máy cất nước hai lần Trung Quốc

Buồng cấy vô trùng AV – 110/TELSTAR

Máy khuấy từ gia nhiệt ARE/VELP, Italia

2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu

- Thí nghiệm Ďược tiến hành tại phòng thí nghiệm Sinh lý học thực vật khoa Sinh - KTNN và Vườn thực nghiệm khoa Sinh – KTNN của trường Đại Học Sư phạm Hà Nội 2

- Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 8/2016 Ďến tháng 5/2017

2.3 Phương pháp nghiên cứu

Để thực hiện mục tiêu Ďề tài chúng tôi sử dụng các nhóm thí nghiệm sau:

Nhóm 1 Thí nghiệm nhân giống in vitro tạo cây giống hoa cúc hoàn

chỉnh từ đoạn thân

Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp BAP + Kinetin

* Tiến hành thí nghiệm: Từ các cây giống in vitro Ďược lưu giữ trong

phòng thí nghiệm Sinh lí thực vật, chọn các cây khỏe, cắt bỏ lá và cắt thân thành những Ďoạn 4 cm Nuôi các Ďoạn thân trong 2 môi trường:

1 MS + saccharose 3% + agar 0,7%

(MS: Murasihge và Skoog, 1962) MS0

2 MS0 + BAP 0,3 mg/lít + Kinetin 0,7 mg/lít MS0 + B0,3 + K0,7

* Các chỉ tiêu theo dõi:

- Số chồi/mẫu bằng cách Ďếm trực tiếp trên các mẫu sau 4 tuần nuôi cấy

- Chiều cao chồi: Ďo trực tiếp bằng thước ( Ďo từ sát gốc Ďến chóp chồi)

ở 30 chồi ngẫu nhiên trong mỗi ô thí nghiệm sau 4 tuần nuôi cấy

Thí nghiệm 2: Ra rễ - tạo cây in vitro hoàn chỉnh

* Cách tiến hành: Chọn các chồi khỏe ở thí nghiệm 1 có Ďộ dài 3-4 cm,

có 3 – 4 lá thật Ďược chuyển sang môi trường ra rễ gồm MS0 + α – NAA 0,2 mg/lít

* Chỉ tiêu theo dõi: Theo dõi khả năng ra rễ của các chồi và Ďặc Ďiểm

bộ rễ sau 7 ngày nuôi cấy

Nhóm 2 Nghiên cứu sự biến đổi sinh lí, hóa sinh và giải phẫu lá của 3 giống cúc giai đoạn rèn luyện trong vườn ươm

Thí nghiệm 3: Nghiên cứu sự biến Ďổi sinh lí, hóa sinh và giải phẫu lá

của 3 giống cúc giai Ďoạn rèn luyện trong vườn ươm

* Tiến hành thí nghiệm

- Chuẩn bị Ďất: Đất dùng Ďể rèn luyện cây in vitro Ďược trộn theo tỉ lệ 5

Ďất : 3 trấu : 2 phân gà ủ hoại

- Chuẩn bị mái che: Luống thí nghiệm Ďược làm khung che bằng nylon

trắng Ďể tránh mưa và lưới chắn sáng (chắn Ďược 70% ánh sáng tự nhiên)