Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm gây bệnh của vi sinh vật nội sinh từ cây neem (azadirachta indica a juss)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM GÂY BỆNH CỦA VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (Azadirachta indica A Juss) KHOA: CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH ‒ SINH HỌC PHÂN TỬ CBHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH SVHD: NGUYỄN TRUNG HIẾU MSSV: 1153010253 NIÊN KHÓA: 2011 ‒ 2015 Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2015 Lời cảm ơn Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô khoa Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Mở thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy truyền đạt kiến thức để giúp làm sở cho đề tài khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn cô Dương Nhật Linh thầy Nguyễn Văn Minh tận tình hướng dẫn, động viên, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành tốt đề tài Tôi xin cảm ơn chị Nguyễn Thị Mỹ Linh quan tâm, giúp đỡ thực tốt đề tài Bên cạnh đó, xin cảm ơn bạn em phòng thí nghiệm Vi sinh ủng hộ, giúp đỡ trình thực suốt đề tài Đề tài nghiên cứu kết thúc với kỷ niệm đẹp học hỏi thêm nhiều kinh nghiệm áp dụng kiến thức học nghiên cứu Tôi xin gửi lời chúc sức khỏe đến tất người thầy, người cô đáng kính khoa Công nghệ sinh học, Trường Đại Học Mở Tp Hồ Chí Minh, xin chúc thầy cô ngày gặt hái nhiều thành công Tôi xin chúc bạn hoàn thành tốt công việc học tập trường thành công sống Xin chân thành cảm ơn Sinh viên thực Nguyễn Trung Hiếu Tháng 05/2015 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG I DANH MỤC BIỂU ĐỒ II DANH MỤC HÌNH ẢNH .II CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 1.1.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Công dụng 1.1.5 Dược tính 1.2 SƠ LƯỢC VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH .8 1.3 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY BỆNH CHO NGƯỜI .10 1.3.1 Staphylococcus aureus 10 1.3.2 Escherichia coli 11 1.3.3 Salmonella typhi 12 1.3.4 Pseudomonas aeruginosa 12 1.3.5 Klebsiella spp 13 1.3.6 Acinetobacter spp 14 1.4 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ NẤM GÂY BỆNH TRÊN NGƯỜI 15 1.4.1 Trichophyton spp 16 1.4.2 Microsporum spp 17 1.4.3 Bệnh dermatophytes gây 17 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 20 1.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 21 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 CHƯƠNG VẬT LIỆU ‒ PHƯƠNG PHÁP 23 2.1 VẬT LIỆU 24 2.1.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất môi trường 24 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 25 2.2.2 Tái phân lập 26 2.2.3 Định tính khả kháng khuẩn, kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 28 2.2.4 Định lượng khả kháng khuẩn, kháng nấm dịch lọc vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 30 2.2.5 Khảo sát khả kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 32 2.2.6 Khảo sát khả kháng nấm vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 33 2.2.7 Định danh chủng vi nấm vi khuẩn có hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm cao theo phương pháp truyền thống 35 2.2.8 hương pháp thống k số liệu 44 CHƯƠNG KẾT QUẢ ‒ THẢO LUẬN 45 3.1 KẾT QUẢ TÁI PHÂN LẬP 46 3.1.1 Vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 46 3.1.2 Vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 49 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 51 3.2.1 Kết định tính khả kháng khuẩn vi sinh vật nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 51 3.2.2 Kết định lượng khả kháng khuẩn dịch lọc vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 54 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA VI KHUẨN NỘI SINH TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 58 3.3.1 Kết định tính khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 58 3.3.2 Kết định lượng khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 60 3.4 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 61 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 66 3.6 ĐỊNH DANH CHỦNG VI SINH VẬT CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CAO NHẤT PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 72 3.6.1 Định danh chủng vi khuẩn có khả kháng khuẩn, kháng nấm cao phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 72 3.6.2 Định danh chủng vi nấm có khả kháng khuẩn, kháng nấm cao phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 75 CHƯƠNG KẾT LUẬN ‒ ĐỀ NGHỊ 78 4.1 KẾT LUẬN 79 4.2 ĐỀ NGHỊ 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 PHỤ LỤC 87 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số công dụng dược liệu phận neem Bảng 2.1 Biểu mức phát triển khóm nấm 44 Bảng Đặc điểm đại thể vi thể vi khuẩn nội sinh từ neem 46 Bảng Đặc điểm đại thể vi thể vi nấm nội sinh từ neem 49 Bảng 3 Kết định tính khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh 52 Bảng Kết định tính khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh 53 Bảng Kết định lượng khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh (mm) 54 Bảng Kết định tính khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh 59 Bảng Kết định tính khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh 59 Bảng Kết định lượng khả kháng nấm vi khuẩn nội sinh (mm) 60 Bảng Kết định tính khả kháng khuẩn gây bệnh với nấm nội sinh phân lập 62 Bảng 10 Kết định tính khả kháng khuẩn gây bệnh với nấm nội sinh phân lập 62 Bảng 11 Kết xác định khả kháng khuẩn gây bệnh chủng vi nấm nội sinh phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) (mm) 64 Bảng 12 Kết định tính khả kháng nấm gây bệnh chủng nấm nội sinh phân lập 67 Bảng 13 Kết định tính khả kháng nấm gây bệnh chủng nấm nội sinh 67 Bảng 14 Kết xác định phần trăm ức chế T rubrum chủng nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 68 Bảng 15 Kết xác định phần trăm ức chế T mentagrophytes chủng nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 69 Bảng 16 Kết xác định phần trăm ức M gypseum chủng nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) 70 Bảng 17 Kết xác định phần trăm ức chế vi nấm gây bệnh chủng nấm nội sinh thử nghiệm phân lập từ neem (Azadirachta indica A Juss) (%) 71 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU i KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Bảng 18 Kết định danh sinh hóa chủng KT1, KT2 KT3 74 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 So sánh khả kháng khuẩn dịch lọc vi khuẩn nội sinh 56 Biểu đồ 3.2 So sánh khả kháng T rubrum KT1, KT2 KT3 60 Biểu đồ 3 So sánh khả kháng khuẩn vi nấm nội sinh NT2 NL1 64 Biểu đồ So sánh phần trăm ức chế vi nấm gây bệnh với vi nấm nội sinh NT1, NT2 NL1 từ neem 71 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Kết quan sát đại thể vi thể vi khuẩn KT1 nội sinh 48 Hình 3.2 Kết quan sát đại thể vi thể vi khuẩn KT2 nội sinh 48 Hình 3.3 Ảnh đại thể vi nấm NT2 nội sinh từ neem 51 Hình Ảnh đại thể vi nấm NL1 nội sinh từ neem 51 Hình 3.5 Kết định lượngkhả kháng vi khuẩn gây bệnh vi khuẩn nội sinh từ neem 58 Hình 3.6 Kết kháng nấm T rubrum chủng KT1, KT2 KT3 61 Hình 3.7 Kết khảo sát khả vi nấm nội sinh kháng P aeruginosa .65 Hình 3.8 Nấm T rubrum đối chứng 68 Hình 3.9 Chủng NT1 kháng nấm T rubrum 69 Hình 3.10 Nấm T mentagrophytes đối chứng 69 Hình 3.11 Chủng NL1 kháng T mentagrophytes 70 Hình 3.12 Nấm M gypseum đối chứng 70 Hình 3.13 Chủng NT2 kháng M gypseum .71 Hình 3.14 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc môi trường NA 73 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU ii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Hình 3.15 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc môi trường NA chủng KT2 73 Hình 3.16 Kết nhuộm Gram hình thái khuẩn lạc môi trường NA chủng KT3 74 Hình 3.17 Quan sát hình thái nấm NT2 môi trường PDA 76 Hình 3.18 Bào tử chủng NT2 kính hiển vi 76 Hình 3.19 Quan sát hình thái nấm NL1 môi trường PDA 77 Hình 3.20 Bào tử chủng NL1 kính hiển vi .77 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Bố trí thí nghiệm 26 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU iii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CFU Colony Forming Unit – Đơn vị hình thành khuẩn lạc Cs Cộng E coli Escherichia coli ESBL Extend Spectra Beta – Lactamases I (%) Phần trăm ức chế M canis Microsporum canis M gypseum Microsporum gypseum NA Nutrient Agar NB Nutrient Broth OD Optical Density PDA Potato Dextrose Agar P aeruginosa Pseudomonas aeruginosa SDA Sabouraud Dextrose Agar S aureus Staphylococcus aureus S typhi Samonella typhi T mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes T rubrum Trichophyton rubrum SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU iv KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, tình hình sử dụng kháng sinh Việt Nam không kiểm soát chặt chẽ, người bệnh tự ý sử dụng mà không theo hướng dẫn bác sĩ khiến vi khuẩn phơi nhiễm nhiều kháng sinh dẫn đến vi khuẩn kháng thuốc phát triển lây lan Sự gia tăng tình trạng kháng kháng sinh dẫn đến nguy không kháng sinh để điều trị nhiễm khuẩn tương lai ( GARP ‒ Vietnam, 2010) Một hướng giải pháp đề tìm hợp chất có nguồn gốc từ thực vật Hiện với phát triển y học, thuốc từ thực vật sử dụng để chữa bệnh ngày nhiều Các loài thực vật có tự nhiên, dễ kiếm lại có tác dụng phụ cho người, thu hút quan tâm nhà nghiên cứu hóa sinh y dược học nước giới (Võ Thị Mai Hương, 2009) Bên cạnh đó, số nghiên cứu trước cho thấy rằng, vi khuẩn nội sinh thực vật có khả sinh chất có khả ứng dụng để sản xuất kháng sinh, nguồn chất kháng khuẩn, kháng nấm có tiềm quan trọng dùng cho việc phòng trị loại vi nấm vi khuẩn gây bệnh (Ryan cs., 2008) Trong nhiều hợp chất có nguồn gốc từ thực vật hợp chất chiết xuất từ neem (Azadirachta indica A Juss), loại thảo dược từ cổ xưa có nguồn gốc Ấn Độ quan tâm công dụng to lớn sức khỏe đời sống người Tại Việt Nam, neem mọc hoang trồng nhiều tỉnh miền Nam Trung Bộ Bình Thuận, Ninh Thuận Cây neem có hợp chất chống viêm, chống ung thư, chống khối u, kháng virus, kháng khuẩn, kháng nấm kháng kí sinh trùng, giúp ngăn chặn hình thành tế bào bất thường, loại trừ bệnh nhiễm trùng đẩy nhanh chữa lành nhiều vấn đề sức khỏe nimbin, nimbinon, margocin, azadirachtin (Võ Quang Yến, 1996; Conrick, 2001) Năm 2012, Hashmat cộng khảo sát cao chiết neem methanol có khả ức chế Bacillus subtilis với đường kính kháng 28 mm Năm 2007, Chandrashekhara cộng phân lập SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC PHỤ LỤC Môi trường  Môi trường PGA Potato 200 g Glucose 20 g Agar 20 g Nước cất 1000 mL  Môi trường SDA (Sabouraud Dextrose Agar) bổ sung Cloramphenicol Peptone 10 g Dextrose 20 g Cloramphenicol 0,05 g Agar 20 g Nước cất 1000 mL  Môi trường NA (Nutrient agar) Cao thịt 5g Peptone 10 g NaCl 5g Agar 15 g Nước cất 1000 mL  Môi trường Nutrient Broth ( NB ) Cao thịt 5g Pepton bột 10g NaCl 5g Nước cất 1000mL pH: 7,4 – 7,6 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 87 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH  Môi trường NA bổ sung 1% tinh bột NB 8g Tinh bột 10 g Nước cất 1000 mL Đem hấp khử trùng 121oC/15 – 20 phút  Môi trường Clark – lub ( môi trường canh MR - VP) Pepton 7g Glucose 5g K2HPO4 5g Nước cất 1000 mL pH : 6,9 ± 0,2  Môi trường lên men loại đường NB g Đường 10 g Phenol red Nước cất 0,01 g 1000 mL pH : 7.4 Đem hấp khử trùng 110oC/15 – 20 phút  Môi trường khử nitrate NB 8g KNO3 ( NaNO3) 2g Nước cất 1000 mL pH = 7,2 Hấp khử trùng 121oC/15 – 20 phút  Môi trường Chiri ten en’ urea Môi trường bản: Pepton SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 1g 88 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH NaCl 5g Glucose 1g KH2PO4 2g Phenol red 0,012 g Nước cất 900 mL Hòa tan tất thành phần 900 mL nước Hấp 121oC/ 15 phút, để nguội đến 50 – 55oC Dung dịch urê Urea Nước cất 20 g 100 mL pH 6.8 ± 0.1 Hòa tan urê 100 mL nước cất, lọc vô trùng, thêm vào môi trường làm nguội  Môi trường Simmon’ citrat Sodium citrate 2g K2HPO4 1g MgSO4 0,2 g Bromothymol blue 0,08 g NaCl 5g NH4H2PO4 1g Agar 18 g pH = 6,9 – Đem hấp khử trùng 121oC (1atm) / 15 – 20 phút Thuốc nhuộm – Thuốc thử  Thuốc thử Tricloroacetic acid (TCA) TCA Nước cất SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 5g 100 mL 89 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH  Thuốc thử α – naphtol 10% α – naphtol Ethanol 96o đủ 10 g 100 mL  Thuốc thử KOH 40% KOH 40 g Nước cất 100 mL  Thuốc thử Kovac’ Isoamyl alcohol (butyl alcohol) p-Dimethylaminobenaldehyde HCl đậm đặc 75 mL 5g 25 mL  Thuốc thử Gress A Sulfanilic acid Acid acetic (glacial) 30% đủ Nước cất 0,5 g 30 mL 100 mL  Thuốc thử Gress B α-naphthylamine Acid acetic (glacial) 30% đủ Nước cất 0,8 g 30 mL 100 mL  Thuốc thử H2O2 5% H2O2 mL H2O 100mL  Thuốc nhuộm Crystal violet Dung dịch Crystal violet 0,4 g Cồn 96o 10 mL Dung dịch SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 90 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Phenol 1g Nước cất 100 mL  Thuốc nhuộm Lugol I2 1g KI2 2g Nước cất đủ 300 mL  Thuốc nhuộm Safranin O Safranin O (dung dịch 2,5% cồn 96o) 0,25 g Ethanol 10 mL Nước cất 90 mL SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 91 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH PHỤ LỤC  Hình ảnh test sinh hóa Thử nghiệm catalase Thử nghiệm oxidase Thử nghiệm phân giải tinh bột SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU Thử nghiệm phân giải casein 92 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Thử nghiệm citrate GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Thử nghiệm kị khí Thử nghiệm nitrate Thử nghiệm di động (+) Thử nghiệm NaCl 10% Thử nghiệm VP SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 93 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Thử nghiệm Uresea Test khả sinh trưởng 50oC Thử nghiệm Indol SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 94 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH Test khả lên men loại đường SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 95 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC Kết xử lý số liệu Kết đường kính vòng kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Đối với chủng KT1 Anova: Single Factor SUMMARY Groups E coli E coli 4a (A) E coli 70a (A, E) P aeruginosa P aeruginosa 86c (C) Klebsiella spp 153b (A,E) Klebsiella spp 81b (A) Klebsiella spp 26b (E) Acinetobacter spp 2d (C) S aureus S typhi ANOVA Source of Variation Count Sum Average Variance 81 27 13 70 23.33333333 2.333333333 87 29 0 0 92 30.66666667 0.333333333 95 31.66666667 2.333333333 84 3 71 23.66666667 0.333333333 35 11.66666667 0.333333333 39 13 SS df 28 MS F Between Groups Within Groups 4159.576 47.33333 10 415.9575758 193.3323944 22 2.151515152 Total 4206.909 32 P-value F crit 4.79036E19 2.296695957  Đối với chủng KT2 Anova: Single Factor SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 96 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP SUMMARY Groups E coli E coli 4a (A) E coli 70a (A, E) P aeruginosa P aeruginosa 86c (C) Klebsiella spp 153b (A,E) Klebsiella spp 81b (A) Klebsiella spp 26b (E) Acinetobacter spp 2d (C) S aureus S typhi Count 3 3 Sum Average Variance 76 25.33333333 17.33333333 0 44 14.66666667 0.333333333 51 17 80 26.66666667 9.333333333 59 42 14 0 3 34 40 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups Within Groups 2738.727 58 10 22 Total 2796.727 32 19.66666667 0.333333333 0 11.33333333 0.333333333 13.33333333 0.333333333 MS F 273.8727273 103.8827586 2.636363636 P-value 3.85793E16 F crit 2.296695957  Đối với chủng KT3 Anova: Single Factor SUMMARY Groups E coli E coli 4a (A) E coli 70a (A, E) P aeruginosa P aeruginosa 86c (C) Klebsiella spp 153b (A,E) Klebsiella spp 81b Count 3 3 Sum 63 57 0 Average 21 19 0 Variance 1 0 3 69 63 23 21 1 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 97 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP (A) Klebsiella spp 26b (E) Acinetobacter spp 2d (C) S aureus S typhi ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total 51 17 3 44 67 36 14.66666667 6.333333333 22.33333333 6.333333333 12 SS 2620.303 43.33333 df 10 22 MS F P-value F crit 262.030303 133.0307692 2.71553E-17 2.296695957 1.96969697 2663.636 32 Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng khuẩn gây bệnh vi khuẩn nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Đối với chủng KT1  Đối với chủng KT2 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 98 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP  Đối với chủng KT3 Kết đường kính vòng kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Đối với chủng NT2 Anova: Single Factor SUMMARY Groups P aeruginosa S typhi Count Sum 87 96 Average Variance 29 32 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 99 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 13.5 df Total 17.5 MS 13.5 F 13.5 P-value 0.021311641 F crit 7.708647 Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng nấm gây bệnh vi khuẩn nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Đối với chủng NT2 Kết phần trăm kháng nấm vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Đối với chủng NL1 Anova: Single Factor SUMMARY Groups T mentagrophytes M gypseum Count 3 Sum Average Variance 300 100 300 100 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 100 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS df MS 0 0 F 65535 P-value F crit 0.000 7.70865 Kết xử lý thống kê ANOVA yếu tố khả kháng nấm gây bệnh vi nấm nội sinh từ neem phần mềm STATGRAPHICS Plus 3.0  Đối với chủng NL1 SVTH: NGUYỄN TRUNG HIẾU 101 ... QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA INDICA A JUSS) 61 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA VI NẤM NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY NEEM (AZADIRACHTA. .. kháng khuẩn, kháng nấm số chủng vi sinh vật nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)  Định lượng khả kháng khuẩn, kháng nấm số chủng vi sinh vật nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss). .. A Juss) 30 2.2.5 Khảo sát khả kháng khuẩn vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss) 32 2.2.6 Khảo sát khả kháng nấm vi nấm nội sinh từ neem (Azadirachta indica A Juss)