Báo cáo thực tập ở Trung tâm tiêu chuẩn đo lường chất lượng

SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TRUNG TÂM 3 1.1 Lòch sử hình thành phát triển Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.2 Chức nhiệm vụ Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng khu vực 1.3 Quá trình hoạt động Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.4 Sơ đồ tổ chức bố trí nhân 1.5 Sơ đồ bố trí mặt Trung Tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.6 Xử lý nước thải 1.7 Môi trường phòng thí nghiệm 1.8 Thiết bò chất chuẩn CHƯƠNG II: QUẢN LÝ MẪU THỬ 2.1 Khái niệm 2.2 Lấy mẫu 2.3 Lưu giữ mẫu thử nguy hiểm 2.4 Quản lý mẫu thử 2.5 Thủ tục CHƯƠNG III: CÁC TIÊU CHUẨN KIỂM TRA CHẤT LƯNG SỬ DỤNG TRONG NGÀNH THỰC PHẨM 3.1 Các phương pháp thử nước 3.2 Các phương pháp thử Tiêu chuẩn Việt Nam CHƯƠNG IV: PHÂN TÍCH CÁC CHỈ TIÊU TRONG NGÀNH THỰC PHẨM 4.1 Phân tích giá trò cảm quan sản phẩm 4.2 Phân tích tiêu hóa lý 4.3 Phân tích tiêu vi sinh CHƯƠNG V: KẾT LUẬN CHƯƠNG VI: PHỤ LỤC 18 20 22 22 26 26 26 26 27 29 38 49 51 89 109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng LỜI CẢM ƠN   Sau ba tháng làm luận án tốt nghiệp, xin chân thành cảm ơn: Các Ban lãnh đạo Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng tạo điều kiện thuận lợi hoàn thành tốt luận văn Các anh chò đồng nghuiệp truyền đạt kinh nghiệm quý báu Cô Tôn Nữ Minh Nguyệt tận tình hướng dẫn bảo Các bạn giúp đóng góp ý kiến - Sinh viên Hồ Thò Minh Vân Trang 2/131 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng MỞ ĐẦU Quản lý chất lượng nguyên liệu sản phẩm theo tiêu chuẩn nước chức quan trọng Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật 3) Đây nơi ban hành hiệu chuẩn tiến hành kiểm tra chất lượng nguyên vật liệu sản phẩm công nghiệp nói chung, sản phẩm thực phẩm nói riêng Trải qua nhiều năm tháng, hoạt động Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng ngày vào nề nếp, phương tiện, phương pháp kiểm tra đại hơn, phù hợp với yêu cầu khách hàng, góp phần ổn đònh chất lượng cho sản phẩm công nghiệp Nhằm tìm hiểu kỹ hoạt động kiểm nghiệm, quản lý chất lượng Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3, em nhận đề tài ‘’Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3’’ Bên cạnh việc trình bày tổ chức hoạt động kiểm nghiệm, có sở vật chất Trung tâm, em tổng hợp tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng thực phẩm sử dụng Trung tâm tập trung trình bày tiêu chuẩn kiểm tra nguyên liệu sản phẩm từ sữa Do khả có giới hạn em mong thầy cô bảo thêm Trang 3/131 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng CHƯƠNG I TỔNG QUAN TRUNG TÂM 1.1 Lòch sử hình thành phát triển 1.2 Chức nhiệm vụ 1.3 Quá trình hoạt động 1.4 Sơ đồ tổ chức bố trí nhân 1.5 Sơ đồ bố trí mặt 1.6 Xử lý nước thải 1.7 Môi trường phòng thí nghiệm 1.8 Thiết bò – Chất chuẩn Trang 4/131 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.1 LỊCH SỬ VÀ HÌNH THÀNH PHÁT TRIỂN: 1.1.1 Giới thiệu: Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 3(gọi tắt Trung tâm Kỹ Thuật 3), tên giao dòch tiếng Anh Quality Assurance & Testing Centre – QUATEST đơn vò trực thuộc Tổng Cục tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng, Bộ Khoa học Công nghệ Trung tâm Kỹ thuật thành lập theo đònh số 1275/ QĐ ngày 5/11/1994 Bộ Khoa học Công nghệ Môi trường (nay Bộ Khoa học công nghệ), cấu tổ chức Trung tâm theo Quyết đònh số 124/ QĐ-TĐC ngày 26/04/1999 Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.1.2 Lòch sử Trung tâm 3: Năm 1979, quan Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng miền Bắc Viện Đònh Chuẩn miền Nam kết hợp với Cục Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng Vào đầu năm 1984, lập thành Tổng Cục Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng Cũng từ Viện Đònh Chuẩn miền nam đổi tên Trung tâm Tiêu Chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm 3) văn phòng lúc dời 49 Pasteur, Q.1, TP Hồ Chí Minh Từ năm 1994 Trung tâm đổi tên thành Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật 3) - Văn phòng đặt 49 Pasteur, Nguyễn Thái Bình, Q.1, TP Hồ Chí Minh Điện thoại: (848) 8294274 Fax: (848) 8293012 Website: www.quatest3.com.vn - Khối thí nghiệm Biên Hòa nằm khu Công nghiệp Biên Hòa 1, Đồng Nai Điện thoại: 8461 - 836212 Fax: 8461 - 836298 Email: Testing@quatest3.com.vn - Xưởng thiết bò đo lường số 62 Lê Hồng Phong, Q.5, TP Hồ Chí Minh - Bộ phận dòch vụ phòng thí nghiệm: số 79 Trương Đònh, Q.3, TP Hồ Chí Minh 1.1.3 Nguồn nhân lực: Trung tâm có nguồn nhân lực hùng hậu 200 kỹ sư cán kỹ thuật có khả thực hoạt động kỹ thuật Trung tâm như:  Các cán với nhiều năm kinh nghiệm lónh vực Tiêu chuẩn-Đo lường-Chất lượng Trang 5/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng  Các cộng tác viên có chuyên môn kỹ thuật giỏi ngành công nghiệp, viện nghiên cứu, trường đại học  Các chuyên gia, tổ chức nước có uy tín Ngoài nhiều cán thuộc Trung tâm học tập chuyên môn nước Trung tâm Kỹ thuật có đội ngũ nhân viên có trình độ cao, đồng thời Trung tâm Kỹ thuật có hội tốt giúp nhân viên học tập thăng tiến 1.2 CHỨC NĂNG NHIỆM VỤ CỦA TRUNG TÂM 1.2.1 Nhiệm vụ: − Tiến hành thử nghiệm phân đònh, giám đònh chất lượng hàng hóa đo lường phục vụ cho công tác Nhà nước Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng yêu cầu quản lý quan Hải quan, Môi trường, Quản lý thò trường Công nghệ, Tư pháp Ngoài ra, Trung tâm Kỹ thuật phép khai thác lực đo lường, thử nghiệm để phục vụ yêu cầu sở sản xuất kinh doanh − Bảo quản sử dụng thiết bò đo lường tiến hành kiểm đònh tiêu chuẩn theo phân cấp tổng cục TĐC chi cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng tỉnh, thành phố trực thuộc trung ương, sở sản xuất, kinh doanh − Tham gia xây dựng tiêu chuẩn Việt Nam, tiêu chuẩn quốc tế − Tổ chức công tác thông tin, đào tạo, hợp tác Quốc tế đòa bàn theo phân công tổng cục − Quản lý cán bộ, tài sản, tài theo quy đònh 1.2.2 Quyền hạn: − Cấp phiếu kết thử nghiệm, giấy chứng nhận chất lượng, chứng thư giám đònh chất lượng sản phẩm, hàng hóa, giấy chứng nhận kiểm đònh thiết bò theo quy đònh − Ký hợp đồng kiểm đònh thí nghiệm, dòch vụ khác nội dung khác theo yêu cầu sở sản xuất kinh doanh, tổ chức cá nhân − Thu lệ phí kiểm tra, kiểm đònh, thử nghiệm theo đònh Nhà nước.Phạm vi hoạt động trung tâm bao gồm nhiều lónh vực, trung tâm vừa phải thực nhiệm vụ Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng giao, vừa cung cấp dòch vụ kỹ thuật sở tận dụng lực có theo nhu cầu kinh tế Nhiều đơn vò trung tâm lúc thực nhiệm vụ khác thuộc trình khác đạo thống theo thủ tục điều hành o Phạm vi áp dụng chuẩn mực quản lý chất lượng lónh vực hoạt động sau: Trang 6/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng  Kiểm tra chất lượng sản phẩm, hàng hóa xuất nhập theo danh mục phủ ban hành theo qui trình Tổng cục TĐC  Thẩm đònh kỹ thuật liên quan đến tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng theo yêu cầu quan quản lý Nhà nước  Thử nghiệm chất lượng sản phẩm, hàng hóa thiết bò, công trình theo yêu cầu công tác quản lý Nhà nước Doanh nghiệp  Hiệu chuẩn phương tiện đo theo yêu cầu tổ chức doanh nghiệp, kiểm đònh phương tiện đo công tác chuẩn đo lường theo qui đònh pháp lệnh đo lường  Hướng dẫn xây dựng hệ thống quản lý, đào tạo chuyên môn, nghiệp vụ liên quan đến tiêu chuẩn hóa, đo lường chất lượng theo yêu cầu  Nghiên cứu chế tạo thử thiết bò thử nghiệm, phương tiện đo công tác chuẩn phục vụ cho công tác kiểm đònh, hiệu chuẩn đo lường công nghiệp 1.2.3 Hoạt động Trung tâm Kỹ thuật 3:  Kiểm tra nhà nước chất lượng hàng hóa xuất nhập khẩu, thẩm đònh kỹ thuật tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng  Thử nghiệm đánh giá chất lượng nguyên liệu, vật liệu, sản phẩm hàng hóa thuộc lónh vực khí thử nghiệm không phá hủy, sản phẩm tiêu dùng, xây dựng, điện – điện tử, hóa, môi trường, dầu khí, thực phẩm  Kiểm đònh hiệu chuẩn phương tiện đo phương tiện chuẩn lónh vực: khối lượng, độ dài, lực, độ cứng, điện, nhiệt, dung tích, lưu lượng, áp suất, chân không, hóa lý  Đánh giá phù hợp theo tiêu chuẩn (Việt Nam, nước ngoài)  Đào tạo tư vấn hoạt động liên quan đến tiêu chuẩn, đo lường chất lượng 1.3 QUÁ TRÌNH HOẠT ĐỘNG CHÍNH: - Trung tâm Kỹ thuật xây dựng hệ thống quản lý chất lượng phù hợp với yêu cầu tiêu chuẩn TCVN ISO 9001:2000 có kết hợp hợp lý với tiêu chuẩn khác TCVN ISO/ IEC 17025:2001  Yêu cầu chung lực phòng hiệu chuẩn thử nghiệm TCVN ISO/ IEC 17020:2001  Các chuẩn mực chung cho tổ chức giám đònh - Trong phòng thử nghiệm phòng Đo lường Vietnam Laboratory Accreadation schemes (VILAS)–Tổ chức công nhận phòng thử nghiệm công nhận xây dựng hệ thống quản lý chất lượng phù hợp với tiêu chuẩn TCVN ISO/ IEC 17025 Trang 7/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Phòng nghiệp vụ đơn vò hướng dẫn xây dựng áp dụng hệ thống quản lý chất lượng cho doanh nghiệp, chứng nhận có hệ thống quản lý chất lượng phù hợp với tiêu chuẩn TCVN ISO 9001:2000 Các phòng nghiệp vụ ,2 ,3, 5, giai đoạn xây dựng để tiến đến cuối năm 2006 tiến hành đăng ký xin công nhận phù hợp với TCVN ISO/ IEC 17020 - Hoạt động trung tâm bao gồm mảng sau: 1.3.1 Thẩm đònh kỹ thuật: - Trung tâm đònh quan kiểm tra chất lượng sản phẩm hàng hóa buộc phải kiểm tra nhà nước chất lượng - Thực thẩm đònh kỹ thuật yêu cầu quan quản lý nhà nước chuyên ngành yêu cầu khác thuộc lónh vực: Thiết bò công nghệ, Cơ khí – Luyện kim, Vật liệu Xây dựng công trình xây dựng, sản phẩm tiêu dùng, nông sản – Thực phẩm, Hóa chất – Vật liệu, Dầu khí 1.3.2 Thử nghiệm: Thử nghiệm, phân tích chất lượng, yêu cầu vệ sinh, an toàn sản phẩm, hàng hóa công trình Trung tâm Kỹ thuật có hệ thống phòng thử nghiệm theo chuyên nghành sau:  Cơ khí – NDT: Vật liệu kim loại, thiết bò, kiểm tra không phá hủy  Hàng tiêu dùng: vải sợi, may mặc, giấy, cao su, chất dẻo,sơn, đồ chơi trẻ em  Xây dựng: vật liệu xây dựng, công trình xây dựng giao thông, nhựa đường  Điện: sản phẩm điện – điện tử: dây cáp điện, dụng cụ điện dân dụng, cấu đóng ngắt, thiết bò điện  Hóa – Môi trường: phân bón, hóa chất bản, vật liệu, khoáng sản, mỹ phẩm, nước sinh hoạt, nước thải, chất thải rắn, khí  Hóa hữu cơ: hợp chất thiên nhiên, hương liệu, phẩm màu, độc chất hữu cơ, thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, thuốc bảo vệ thực vật  Dầu khí: xăng, xăng máy bay, dầu bôi trơn, nhiên liệu, khí hóa lỏng  Thực phẩm: nông sản, ngũ cốc, thực phẩm, thủy sản, trà, cà phê, thuốc lá, đường, mật, bánh, kẹo, thức ăn gia súc, nước giải khát 1.3.3 Đo lường:  Kiểm đònh phương tiện đo: thuộc danh mục bắt buộc phải kiểm đònh Nhà nước  Hiệu chuẩn phương tiện đo chuẩn đo lường lónh vực độ dài, lực, độ cứng, áp suất, chân không, khối lượng, điện, nhiệt, đại lượng, hóa lý Trang 8/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng  Tư vấn trang bò, lắp đặt vận hành dụng cụ đo lường thử nghiệm thiết bò, chế tạo, lắp đặt chuẩn, dụng cụ đo lường khối lượng, áp suất, sung tích, lưu lượng, điện 1.3.4 Hướng dẫn – Đào tạo: - Hướng dẫn cho tổ chức, doanh nghiệp việc xây dựng áp dụng hệ thống về:  Quản lý chất lượng theo ISO 9000  Quản lý chất lượng theo ISO 14000  An toàn vệ sinh thực phẩm theo HACCP, GMP  Quản lý phòng thí nghiệm theo ISO 17025 - Tổ chức khóa đào tạo nâng cao theo nội dung:  Hệ thống quản lý: ISO 9000, ISO 14000, SA 8000, ISO/ IEC 17025  Các công cụ quản lý chất lượng  Kỹ thuật thống kê  Công tác tiêu chuẩn hóa, đo lường, quản lý chất lượng doanh nghiệp  Kỹ thuật thử nghiệm theo lónh vực: lý, hóa học, vi sinh - Kiểm đònh viên đo lường thuộc lónh vực khối lượng, áp suất, lực, nhiệt - Kỹ thuật đo lónh vực - Bảo dưỡng, hiệu chỉnh, bảo trì phương tiện đo kiểm doanh nghiệp 1.3.5 Thông tin Tiêu chuẩn:Dòch vụ tìm kiếm thông tin tư liệu tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng theo chủ đề cung cấp, cập nhật loại tiêu chuẩn tài liệu sau:  Tiêu chuẩn Việt nam (TCVN)  Tiêu chuẩn nước ngoài: ASTM, JIS, GOST, BS, AS, IS, DIN, NF, APHA, ASME, AWS, AOAC, AOCS, CIPAC, FAO FNP  Tiêu chuẩn tài liệu quốc tế: ISO, IEC, CODEX, OIML  Tài liệu pháp chế nghiệp vụ tiêu chuẩn đo lường chất lượng 1.4 SƠ ĐỒ TỔ CHỨC VÀ BỐ TRÍ NHÂN SỰ: 1.4.1 Cơ cấu tổ chức: - Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượ gọi tắt Trung tâm Kỹ thuật ba trung tâm Kỹ thuật trực thuộc Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Cơ cấu tổ chức máy trung tâm Kỹ thuật xếp sau: - Lãnh đạo Trung tâm: Gồm 01 giám đốc, 02 phó giám đốc phân công:  Giám đốc phụ trách chung  Phó giám đốc phụ trách kỹ thuật  Phó giám đốc nghiệp vụ Trang 9/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 1.4.2 Các đơn vò trực thuộc: Trung tâm kỹ thuật có 20 đơn vò trực thuộc: gồm 19 phòng, 01 xưởng Nhiệm vụ phòng sau:  Phòng tổng hợp: - Tổ chức xây dựng kế hoạch theo dõi, điều độ việc thực công tác chuyên môn - Đầu mối giải vấn đề nghiệp vụ Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Theo dõi công tác pháp chế Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Theo dõi công tác hợp tác quốc tế - Tổ chức thực hoạt động đào tạo Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng cho bên - Thông tin phát hành phục vụ tra cứu tài liệu Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - Tiếp nhận đăng ký kiểm tra hàng hóa xuất nhập thẩm đònh kỹ thuật  Phòng hành chánh – Tổ chức: - Hành chánh: văn thư lưu trữ, công văn – đến, tiếp tân hướng dẫn thủ tục xuất nhập cảnh, gửi nhận hàng, bếp ăn, tạp vụ - Quản trò: Tổ chức thực xây dựng, sửa chữa nhà xưởng, bảo vệ, PCCC, quản lý sử dụng tài sản văn phòng, điện, nước, điện thoại - Tổ chức cán bộ: Nhân sự, đào tạo, chế độ sách, trò nội - Tài vụ: Quản lý công tác thu chi, báo cáo tài chính, quản lý tài sản - Tiếp thò: Quản lý công tác tiếp thò, tổ chức hoạt động xúc tiến Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng (quản bá giới thiệu, hội thảo)  Phòng nghiệp vụ chuyên ngành: Gồm 06 phòng nghiệp vụ 1, 2, 3, 4, 5,6 - Nhiệm vụ: Kiểm tra chất lượng hàng hóa, Thẩm đònh kỹ thuật sản phẩm (hàng hóa) thiết bò công nghệ, Đánh giá phù hợp - Phạm vi: o Phòng nghiệp vụ 1: Cơ khí tiêu dùng, Thiết bò công nghệ o Phòng nghiệp vụ 2: Công nghệ tiêu dùng, Hóa chất vật liệu, Công nghệ dầu khí o Phòng nghiệp vụ 3: Nông sản thực phẩm, thủy sản hóa nông o Phòng nghiệp vụ 4:  Hướng dẫn doanh nghiệp áp dụng hệ thống quản lý chất lượng, đo lường, hiệu chuẩn, hệ thống quản lý môi trường hệ thống quản lý phòng thí nghiệm  Tham gia đánh giá hệ thống quản lý chất lượng, môi trường, phòng thí nghiệm sản phẩm phù hợp tiêu chuẩn Trang 10/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng − Lấy số E.coli giả đònh ml gam sản phẩm cách nhân số MPN với nghòch đảo độ pha loãng thấp chọn (tức dòch pha loãng có nồng độ mẫu cao nhất) − Khi độ pha loãng thấp chọn ứng với ống chuẩn bò với môi trường nồng độ kép (nuôi cấy với 10ml) trước hết chia số MPN cho 10 − Biểu thò kết số nằm khoảng từ 1,0 9,9 nhân với 10 2, x luỹ thừa − MPN nhỏ 0,3 vi sinh vật ml g sử dụng qui trình thích hợp số E.coli giả đònh thấp, biểu thò kết theo cách sau: ‘’không có E.coli giả đònh ml g sản phẩm) 4.3.2.15 Báo cáo thử nghiệm: Báo cáo thử nghiệm phải qui đònh phương pháp sử dụng, nhiệt độ ủ ấm kết thu báo cáo thử nghiệm phải cập đến tất chi tiết thao tác không qui đònh tiêu chuẩn này, điều coi tùy ý cố ảnh hưởng đến kết thử 4.3.3 Đònh lượng đơn vò khuẩn lạc nấm men nấm mốc theo phương pháp TCVN 6265:1997: 4.3.3.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn qui đònh phương pháp đònh lượng đơn vò hình thành khuẩn lạc từ nấm men nấm mốc nhìn thấy sữa sản phẩm sữa kỹ thuật đếm khuẩn lạc 25oC 4.3.3.2 Đònh nghóa:Nấm men nấm mốc vi sinh vật 25 oC điều kiện qui đònh tiêu chuẩn tạo thành khẩun lạc 4.3.3.3 Nguyên tắc: − Chuẩn bò đóa nuôi cấy, sử dụng môi trường nuôi cấy chọn lọc lượng mẫu thử xác đònh sản phẩm dạng lỏng, dạng huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác Chuẩn bò đóa khác điều kiện, với dung dòch pha loãng thập phân huyền phù từ mẫu thử − Nuôi ấm đóa ngày 25oC môi trường có không khí − Tính số đơn vò khuẩn lạc tạo thành nấm men nấm mốc gam ml sản phẩm từ số khuẩn lạc thu đóa chọn mức độ pha loãng để có kết 4.3.3.4 Môi trường cao men/ dextroza/ oxitetraxiclin/ thạch: a) Môi trường bản: − Thành phần: Bột cao men 5,0g Dextroza (C6H12O6) 20,0 g Thạch 10 g đến 15 g Trang 117/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Nước 900 ml − Chuẩn bò: Hoà tan thành phần môi trường hoàn chỉnh khô nước đun nóng, cần chỉnh pH để đạt sau khử trùng pH 6,6 25oC Khử trùng hấp nồi hấp áp lực 121 oC ±1oC khoảng 15 phút b) Dung dòch Oxitetraxiclin: − Thành phần: Oxitetraxiclin hidroclorua (C22H30N2O11).HCl 50 mg Nước 50 ml − Chuẩn bò:Hoà tan Oxitetraxiclin nước Chuẩn bò dung dòch trước lần sử dụng Khử trùng dung dòch cách lọc c) Môi trường hoàn chỉnh: − Thành phần: Oxitetraxiclin hidroclorua (C22H30N2O11).HCl 10 ml Môi trường 90 ml − Chuẩn bò: Làm nguội môi trường khử trùng tới 45 oC Ngay trước sử dụng đưa dung dòch Oxitetraxiclin 45oC cho 10 ml dung dòch vào 90 ml môi trường 4.3.3.5 Cách tiến hành: − Để tăng độ xác phương pháp, việc chuẩn bò dung dòch pha loãng phải chuẩn hóa cần thận Những yếu tố tác động độ xác là:  Kiểu loại thiết bò khuấy trộn  Thời gian khuấy trộn  Chất pha loãng  Thời gian hạt tơ lắng xuống  Thời gian trộn cho phép chuẩn bò dung dòch loãng thập phân − Cấy nuôi ấm:  Lấy hai đóa petri vô trùng Dùng pipet vô trùng cho vào đóa ml mẫu thử, dạng lỏng, 1ml chất huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác  Lấy tiếp hai đóa petri vô trùng Dùng pipet vô trùng khác, cho vào đóa ml dung dòch pha loãng 10 -1 (sản phẩm dạng lỏng) ml dung dòch pha loãng 10-2 (sản phẩm dạng khác)  Nếu cần, lặp lại thao tác này, sử dụng dung dòch pha loãng thập phân  Rót vào đóa petri khoảng 15 ml môi trường chứa oxitetraxiclin môi trường chứa cloramphenicol làm cho nóng chảy từ trước giữ 45 oC nồi cách thủy Trang 118/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng  Khuấy trộn thật kỹ chất cấy với môi trường cách xoay đóa petri hỗn hợp đông đặt đóa petri mặt phẳng nằm ngang, mát  Thời gian từ chuẩn bò dung dòch pha loãng thứ đến trộn chất nuôi cấy với môi trường không vượt 15 phút  Chuẩn bò đủ số đóa đối chứng để kiểm tra độ vô trùng  Lật ngược đóa cấy xong đặt chúng vào tủ ấm ngày, nhiệt độ 25oC o Phủ thêm lớp môi trường nuôi cấy lên bề mặt đóa cấy sau đông đặc o Nhỏ thêm giọt glixerol lên giấy lọc nắp đóa  Không chồng đóa lên Để chồng đóa tách xa hẳn nhau, xa thành xa tủ ấm 4.3.3.6 Đọc kết quả: − Đếm số khuẩn lạc đóa, tránh đếm nhầm khuẩn lạc mọc bất thường Nếu cần, phân biệt khẩun lạc nấm men nấm mốc dựa sở đặc tính hình thái sinh vật − Chỉ giữ lại đóa có từ 10 khuẩn lạc đến 150 khuẩn lạc Nếu phần đóa bò nấm mốc che phủ, khó khuẩn lạc riêng biệt đếm khuẩn lạc đóa có độ pha loãng cao tiếp theo, chí số khuẩn lạc 4.3.3.7 Trong trường hợp tiến hành:  Nếu có hai đóa tương ứng với mẫu thử (sản phẩm lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) có chứa 10 khuẩn lạc báo cáo kết sau: - 10 CFU nấm men nấm mốc có mililit - hôn 10 x 1/d CFU nấm men nấm mốc có gam (sản phẩm dạng khác), d hệ số pha loãng chất huyền phù ban đầu  Nếu tất đóa chứa nhiều 150 khuẩn lạc số lượng ước tính từ đóa có số khuẩn lạc gần 150 nhân số với số nghòch đảo hệ số pha loãng cao Báo cáo kết theo ‘’số lượng đơn vò khuẩn lạc CFU nấm men nấm mốc ước tính gam mililit sản phẩm’’ 4.3.3.8 Biểu thò kết quả: − Chỉ giữ lại đóa có 10 khuẩn lạc, nhiều 150 khuẩn lạc − Tính số CFU nấm mốc nấm men, N gam mililit sản phẩm, theo công thức: N= ∑C (n1 + 0,1n 2) xd Trang 119/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Trong đó: ΣC: tổng số khuẩn lạc đếm tất đóa giữ lại n1: số đóa độ pha loãng thứ có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc n2: số đóa độ pha loãng thứ hai có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc d: hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ − Nếu có nhiều hai độ pha loãng đếm được, cho kết từ 10 đến 150 khuẩn lạc công thức phải sửa đổi, có tính đến độ pha loãng Với ba độ pha loãng theo công thức: N= ∑C (n1 + 0,1n2 + 0,01n3) xd Trong đó: n3: số đóa độ pha loãng thứ ba có chứa từ 10 đến 150 khuẩn lạc − Làm tròn số kết thu đến chữ số có nghóa Khi số cần làm tròn mà chữ số có nghóa theo sau làm tròn trước chữ số cho thành số chẵn Thí dụ: 28 500 làm tròn thành 28000 − Lấy kết số CFU nấm mốc nấm men có ml gam sản phẩm biểu thò số từ 1,0 đến 9,9 nhân với 10 X, X lũy thừa tương ứng 10 Thí dụ: Việc đếm khuẩn lạc CFU nấm men nấm mốc cho kết sau (hai đóa poetri cho độ pha loãng ủ) - Độ pha loãng thứ (10-2) giữ lại chứa 83 97 khuẩn lạc - Độ pha loãng thứ hai (10-3) giữ lại chứa 33 28 khuẩn lạc N = ΣC/ (n1 + 0,1 n2) d = 83 + 97 + 33 + 28/ -[2+(0,1x2)]10-2 = 241/ 0,022 = 10 954 Làm tròn kết hướng dẫn thu 11 000 1,1 x 104 CFU nấm men nấm mốc có gam, mililit sản phẩm − Nếu có hai đóa tương ứng với mẫu thử (sản phẩm lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) có chứa 10 khuẩn lạc báo cáo kết sau: - 10 CFU nấm men nấm mốc có ml (sản phẩm lỏng) - 10 x 1/d CFU nấm men nấm mốc có g (sản phẩm dạng khác), d hệ số pha loãng chất huyền phù ban đầu − Nếu tất đóa chứa nhiều 150 khuẩn lạc tính số lượng ước tính từ đóa có số khuẩn lạc gần 150 khuẩn lạc nhân số với số nghòch đảo hệ số pha loãng cao Báo cáo kết theo ‘’số lượng đơn vò khuẩn Trang 120/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng lạc CFU nấm men nấm mốc ước tính gam mililit sản phẩm’’ 4.3.3.9 Báo cáo kết quả: Báo cáo kết phải phương pháp sử dụng, kết thử nghiệm thu phương pháp biểu thò sử dụng Cũng phải đề cập đến tất chi tiết không qui đònh tiêu chuẩn tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết 4.3.4 Xác đònh tổng số vi khuẩn hiếu khí theo phương pháp TCVN 5165-90: 4.3.4.1 Nguyên tắc: Sử dụng kỹ thuật đổ đóa, đếm khuẩn lạc môi trường thạch sau ủ hiếu khí nhiệt độ 30 ± 1oC thời gian từ 48 đến 72 Số lượng vi khuẩn hiếu khí 1g 1ml mẫu sản phẩm thực phẩm kiểm nghiệm tính từ số khuẩn lạc đếm từ đóa nuôi cấy theo đậm độ pha loãng 4.3.4.2 Lấy mẫu chuẩn bò mẫu : Lượng mẫu cân tối thiểu để pha loãng không 1ml sản phẩm lỏng 10 ± 0,1 g sản phẩm khác 4.3.4.3 Hóa chất: − Thạch dùng cho vi sinh vật; Pepton dùng cho vi sinh vật; Cao thòt − Natri clorua tinh khiết (NaCl); Trypton; Clucoza tinh khiết; − Natri hydrophophat tinh khiết (Na2HPO4) − Kali dihydrophophat tinh khiết (KH2PO4) − Natri hydroxit tinh khiết (NaOH), dung dòch 0,1 N 4.3.4.4 Môi trường: a) Nước đệm pepton: Pepton, g NaCl, g Na2HPO4 , g KH2PO4, g Nước cất, mL 10 1,5 1000 b) Nước pepton: Pepton, g NaCl, g Nước cất, mL 8,5 1000 Cách pha chế: Đun sôi để hoà tan chất Để nguội đến 30±5oC Điều chỉnh pH dung dòch NaOH 0,1 N cho sau tiệt khuẩn pH = 7,0 ±0,2 Rót vào bình dung tích 250 ml bình 90 ml, vào ống nghiệm ống ml môi trường Tiệt khuẩn nồi hấp nhiệt độ 120 oC 15 phút Môi trường không dùng ngay, cần bảo quản nơi khô ráo, bóng tối, nhiệt độ từ đến 5oC không 30 ngày c) Môi trường thạch thường: Pepton, g NaCl, g Cao thòt , Glucoza, g Thạch, g Nước cất, Trang 121/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN 10 Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng g Trang 122/109 15-20 mL 1000 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng d) Môi trường thạch thường: Trypton, g Cao men, g Glucoza, g Nước cất, mL 2,5 15-20 1000 Cách pha chế: Đun nhỏ lửa, quyấy để hòa tan chất đến sôi Để nguội môi trường đến 55±5oC, điều chỉnh pH cho sau tiệt khuẩn pH = 7,0 ±0,2 Rót vào bình thủy tinh lượng môi trường không 1/ dung tích bình Tiệt khuẩn nồi hấp nhiệt độ 120 oC 15 phút Nếu môi trường sử dụng ngay, để nguội đến 45±1oC nồi cách thủy, chưa sử dụng cần bảo quản nơi khô ráo, bóng tối với nhiệt độ từ đến 5oC không 30 ngày Trước nuôi cấy đun cách thủy cho môi trường nóng chảy để nguội đến 45±1oC 4.3.3.5 Các bước nuôi cấy: 4.3.3.5.1 Pha loãng mẫu: Pha loãng mẫu có đậm độ pha loãng cần thiết đủ đếm số khuẩn lạc đóa theo dự tính 4.3.3.5.2 Đỗ đóa: − Đối với mẫu kiểm nghiệm phải nuôi cấy đậm độ, đậm độ dùng đóa petri pipet vô khuẩn riêng − Lấy 1ml sản phẩm (lỏng) dung dòch pha loãng đậm độ khác cho vào đóa petri − Rót vào đóa 12-15 ml môi trường thạch c d, trộn đảo dung dòch mẫu môi trường cách lắc sang phải sang trái chiều lần − Để đóa thạch đông tự nhiên mặt ngang − Thời gian từ bắt đầu pha loãng mẫu đến rót môi trường không 30 phút − Nếu dự đoán sản phẩm có chứa vi sinh vật mọc lan bề mặt thạch sau môi trường đông đổ tiếp 4ml thạch màng lên mặt 4.3.3.5.3 Ủ ấm − Khi thạch đông, lật sáp đóa petri để vào tủ ấm nhiệt độ 30±1oC từ 48 đến 72 − Sau 48 tính kết sơ cách đếm khuẩn lạc mọc đóa nuôi cấy, sau 72 tính kết thức 4.3.3.6 Tính kết Chọn tất đóa có không 300 khuẩn lạc để tính kết Sự phân bố khuẩn lạc đóa nuôi cấy phải hợp lý: độ pha loãng cao số khuẩn lạc kết không hợp lý, phải tiến hành lại bước nuôi cấy Tính trung bình cộng tổng số khuẩn lạc đóa theo công thức sau: N= ∑C (n1 + 0,1xn2) xd Trang 123/109 Thạch, g SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Trong đó: C: số khuẩn lạc đếm đóa chọn n1, n2: số đóa đậm độ pha loãng liên tiếp chọn thứ 1, thứ d hệ số pha loãng đậm độ pha loãng chọn thứ 4.3.5 Phát Listeria monocytogen theo phương pháp TCVN 6401-98: 4.3.5.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn qui đònh phương pháp phát Listeria monocytogens sữa sản phẩm sữa 4.3.5.2 Đònh nghóa: − Listeria spp: vi sinh vật tạo thành khuẩn lạc đặc trưng môi trường đặc chọn lọc cho thấy rõ đặc tính hình thái học, sinh lý sinh hóa mô tả, tiến hành thử theo tiêu chuẩn − Listeria monocytogen: loài Listeria gây bệnh phân biệt với loài Listeria không gây bệnh khác có mặt sữa sản phẩm sữa đặc tính sinh hóa đònh − Phát Listeria monocytogen: việc xác đònh có mặt hay không vi sinh vật khối lượng hay thể tích qui đònh, tiến hành thử theo tiêu chuẩn 4.3.5.3 Nguyên tắc: − Tăng sinh môi trường lỏng chọn lọc: cấy phần mẫu vào môi trường chọn lọc nuôi ấm 30oC 48h − Phân lập nhận dạng sơ bộ: cấy từ mẫu thử môi trường tăng sinh vào môi trường phân lập, nuôi ấm 37 oC sau 48h kiểm tra có mặt khuẩn lạc coi Listeria spp giả đònh theo dáng vẻ bên − Khẳng đònh: cấy truyền khuẩn lạc Listeria spp giả đònh lên môi trường đặc không chọn lọc khẳng đònh thử nghiệm hình thái, sinh lý sinh hóa 4.3.5.4 Môi trường chọn lọc (môi trường tăng sinh): a) Môi trường bản: − Thành phần Canh thang tripton đậu tương, g Cao men, g Nước, mL 30 1000 − Chuẩn bò: Hòa tan thành phần khô môi trường hoàn chỉnh khô nước cách đun sôi Nếu cần, chỉnh pH cho sau khử trùng pH 7,3 nhiệt độ 25oC Phân phối lượng 225 ml vào bình thí nghiệm dung tích 500ml (hoặc bội số 225ml vào bình thí nghiệm có dung tích thích hợp) Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực 121 oC Trang 124/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng b) Phần bổ sung 1: Thành phần: Acriflavin hidroclorua Nước c) Phần bổ sung 2: Thành phần: Axit nalidixic (muối natri) Natri hidroxit (0,05 mol/l) 23 mg 10 mL 46 mg 10 mL Chuẩn bò: Hòa tan Acriflavin hidroclorua nước Khử trùng qua lọc Chuẩn bò: Hòa tan Axit nalidixic dung dòch natri hidroxit Khử trùng qua lọc d) Phần bổ sung 3: Thành phần: Chuẩn bò: Xicloheximid 57,5 mg Hòa tan Xicloheximid hỗn hợp Etanol/ nước Khử trùng qua Etanol mL lọc Nước mL e) Môi trường hoàn chỉnh: Bảo quản riêng môi trường phần bổ sung chuẩn bò chỗ tối nhiệt độ từ oC đến 5oC Chuẩn bò môi trường hoàn chỉnh cách thêm: 1ml phần bổ sung 1; 2ml phần bổ sung 2ml phần bổ sung vào 225 ml môi trường 4.3.5.5 Môi trường phân lập (thạch Oxford): a) Môi trường bản: Thành phần: Chuẩn bò: Môi trường thạch columbia 39 g Hòa tan thành phần rắn nước cách Aesculin 1g đun sôi Amoni sắt (III) xitrat 0,5 g Liti clorua 15 g Nước 1000 mL b) Môi trường bản: Thành phần: Chuẩn bò: Xicloheximid:200mg Fosfomixin : mg Hòa tan thành phần rắn Colistin sunfat: 10mg Etanola : 2,5 mg hỗn hợp etanol/ nước Khử trùng qua lọc Acriflavin : 2,5mg Nước : 2,5 mL Xefotetan : 1mg c) Môi trường hoàn chỉnh: Lấy 5ooml môi trường thạch Khử trùng 15 phút nồi hấp nhiệt độ 121oC Làm nguội 50oC, vô trùng Độ ph môi trường 7,0 25oC 4.3.5.6 Thuốc thử: dung dòch hidro peroxit, 3% (v/v) Trang 125/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 4.3.5.7 Cách tiến hành: a) Cấy vào môi trường tăng sinh: Cho phần mẫu vào môi trường tăng sinh − Sữa bột: cân 25 ml mẫu thử cách vô trùng cho vào bình thí nghiệm có nút, chứa 225 ml môi trường tăng sinh Lắc để hòa tan − Nuôi ấm: môi trường tăng sinh cấy mẫu tủ ấm 30 oC -48h − Phân lập nhận dạng sơ bộ: • Dùng que cấy vòng, ria cấy mẫu nuôi lên bề mặt đóa thạch Oxford để thu khuẩn lạc tách biệt rõ ràng • Lật sấp đóa đặt vào tủ ấm để 37oC 48h • Kiểm tra đóa cấy có mặt khuẩn lạc listeria spp đặc trưng − Khẳng đònh: • Chọn khuẩn lạc để khẳng đònh: Từ đóa môi trường phân lập chọn năm khuẩn lạc điển hình có nghi ngờ, có năm khuẩn lạc tất để thử khẳng đònh • Nuôi ấm: Ria cấy khuẩn lạc chọn lên bề mặt đóa thạch TSYEA cho khuẩn lạc mọc phân tách rõ đặt đóa tủ ấm 37oC 24h, có khuẩn lạc mọc Độ dày lớp môi trường thạch (15ml/đóa) quan trọng độ rọi Herry tốt b) Diễn giải đặc tính hình thái sinh lý phản ứng sinh hóa : tất chủng listeria spp trực khuẩn nhỏ, gram dương (chỉ với mẫu cấy 24h tuổi) có tính chuyển động tiêu ướt môi trường di động Chúng chủng listeria spp, catalaza dương tính, L.monocytogens chuyển hóa ramnoza không chuyển hóa xyloza, L.monocytogens, L.ivanovii L seeligeri (phản ứng yếu) tạo tan máu β cấy thạch máu lấy khuẩn lạc để kiểm tra tính tan máu mặt khuẩn lạc Trong ba chủng listeria spp làm tan máu, chí có L.monocytogens không chuyển hóa xyloza dương tính với ramnoza (bảng 4.3.5) Bảng 4.3.5 phản ứng nhận biết Listeria spp Các loại Sinh axit Thử CAMP Ramnoza Xyloza S aureus R equi L.monocytogens + + L innocua v L.ivanovii + + L seeligeri + (+) L.welshimeri v + L.murrayi v v = phản ứng thay đổi (+) = phản ứng yếu + = phản ứng dương tính Trang 126/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng - = không phản ứng Trang 127/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 4.3.5.8 Biểu thò kết quả: báo cáo có mặt hay không listeria monocytogens phần mẫu thử, ghi rõ mẫu thử theo khối lượng gam, theo thể tích mililit 4.3.5.9 Báo cáo kết : báo cáo ghi rõ, phương pháp lấy mẫu, phương pháp sử dụng, kết thu 4.3.6 Xác đònh tổng số vi khuẩn hiếu khí theo phương pháp TCVN 5165-90: 4.3.6.1 Phạm vi áp dụng: phương pháp đònh lượng coliform kỹ thuật nuôi cấy môi trường lỏng tính số có xác suất lớn (MPN) sau nuôi cấy 30oC áp dụng cho sữa bột, sản phẩm sữa đông lạnh, sữa dạng lỏng 4.3.6.2 Đònh nghóa: Coliform vi khuẩn nhiệt độ 30oC tạo thành khuẩn lạc đặc trưng lên men lactoza kèm theo sinh điều kiện 4.3.6.3 Nguyên tắc: − Nuôi cấy phần mẫu thử lượng từ loạt mẫu thử pha loãng theo hệ thập phân vào dãy ba ống môi trường nuôi cấy lỏng chọn lọc qui đònh có chứa ống Durham − Nuôi ấm ống nghiệm 30 oC 48h − Lấy từ ống nghiệm coi dương tính nghóa ống cho thấy có sinh ống Durham canh thang lục sáng mật lactoza,cấy truyền lên bề mặt thạch eosin xanh metylen − Nuôi ấm 30oC 24h 4.3.6.4 Chất pha loãng môi trường 4.3.6.4.1 Nguyên liệu chính: Để làm tăng độ tái lập kết quả, nên sử dụng thành phần khô môi trường hoàn chỉnh khô để chuẩn bò chất pha loãng môi trường nuôi cấy Các hóa phẩm phải đạt chất lượng phân tích Nước sử dụng phải nùc cất dung cụ thủy tinh nước khử ion Nước không chứa chất ức chế sinh trưởng vi sinh vật điều kiện thử 4.3.6.4.2 Chất pha loãng: − Dung dòch pepton/ muối: Thành phần Pepton, g Natri clorua (NaCl), g Nước, mL 1,0 8,5 1000 Chuẩn bò: Hoà tan thành phần nước, đun nóng cần Điều chỉnh pH cho sau khử trùng, pH 7,0 ±0,1 25oC Trang 128/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN − Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng Dung dòch pepton: Thành phần Pepton, g Nước, mL 1,0 1000 Chuẩn bò: Hoà tan pepton nước Điều chỉnh pH cho sau khử trùng, pH 7,0 ±0,1 25oC 4.3.6.5 Phân phối, khử trùng bảo quản chất pha loãng: Phân phối chất pha loãng dùng cho độ pha loãng ban đầu vào bình lọ, phân phối chất pha loãng dùng cho độ pha loãng vào ống nghiệm lọ nhỏ Lượng phân phối sau khử trùng chứa bình lọ phải 90 ml chất pha loãng bội số 90 ml ống nghiệm lọ nhỏ phải chứa 9,0 ml chất pha loãng Đậy nắp ống nghiệm, bình lọ 4.3.6.6 Cách tiến hành: 4.3.6.6.1 Chuẩn bò mẫu thử dung dòch pha loãng ban đầu : Để tránh làm ảnh hưởng vi sinh vật thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ chất pha loãng suốt trình thao tác:  Sữa sản phẩm sữa dạng lỏng: − Trộn mẫu thử thật kỹ cho vi sinh vật phân bố tốt cách đảo chiều lọ chứa liên tục 25 lần Cần phải tránh tạo bọt để bọt tan hết Khoảng thời gian từ trộn đến lấy phần mẫu thử không phút − Dùng pipet lấy 1ml mẫu thử cho vào ml chất pha loãng Lắc dung dòch pha loãng ban đầu Như thu dung dòch pha loãng 10 -1 4.3.6.6.2 Dung dòch pha loãng thập phân tiếp theo: − Dùng pipet lấy ml dung dòch pha loãng ban đầu cho vào ống nghiệm khác chứa ml chất pha loãng vô trùng, không để pipet tiếp xúc với chất pha loãng Mỗi lần phải sử dụng pipet − Trộn kỹ cách dùng pipet hút thả 10 lần để thu dung dòch pha loãng 10-2 − Nếu thấy cần, lặp lại thao tác sử dụng dung dòch pha loãng 10 -2 dun dòch pha loãng để nhận dung dòch pha loãng 10 -3, 10-4 − Khi lấy tỉ lệ 10ml cộng 90ml, 11ml cộng 99ml 1ml cộng 99ml lắc tay − Pha đủ số lượng dung dòch pha loãng để đảm bảo tất ống nghiệm tương ứng với độ pha loãng cuối cho kết âm tính 4.3.6.6.3 Thời gian thao tác: Khoảng thời gian từ lúc bắt đầu cân đo phần mẫu thử từ lúc kết thúc việc chuẩn bò dung dòch pha loãng ban đầu trộn dung dòch cấy với môi trường không 15 phút, trừ có qui đònh khác Trang 129/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 4.3.6.7 Cấy mẫu: − Lấy ba ống nghiệm đựng canh thang nồng độ kép dùng pipet cho vào ống 10 ml mẫu thử dạng lỏng 10ml dung dòch pha loãng ban đầu − Lấy ba ống nghiệm đựng canh thang nồng độ đơn dùng pipet cho vào ống ml mẫu thử dạng lỏng 1ml dung dòch pha loãng ban đầu − Đối với dung dòch pha loãng (10 -1 10-2, tùy theo trường hợp) lấy ba ống nghiệm canh thang nồng độ đơn Cho vào ống 1ml dung dòch pha loãng thích hợp Đối với độ pha loãng dùng pipet Trộn cẩn thận chất nuôi cấy với môi trường − Nuôi ấm ống nghiệm canh thang nồng độ đơn 30 oC±1oC 24h±2h − Nuôi ấm ống nghiệm canh thang nồng độ kép 30oC ±1oC 24h±2h − Cấy truyền từ ống nghiệm canh thang nồng độ kép nuôi ấm: Từ ống nghiệm canh thang nồng độ kép nuôi ấm dùng que cấy vòng cấy vào ống nghiệm canh thang nồng độ đơn Nuôi ấm 30 oC ±1oC 48h±2h − Thử khẳng đònh: − Từ ống nghiệm nuôi ấm cho thấy có sinh ống Durham, cấy vòng đầy lên thạch eosin xanh metylen Nuôi ấm 30 oC ±1oC 24h±2h − Các khuẩn lạc mọc có màu đỏ/ hồng, ánh kim đục coi đặc trưng cần khẳng đònh thêm nữa, nuôi cấy khuẩn lạc vào ống nghiệm chứa canh thang nồng độ đơn kiểm tra sinh sau nuôi ấm − Ghi lại số ống khẳng đònh dương tính độ pha loãng 4.3.6.8 Biểu thò kết quả: − Lựa chọn độ pha loãng − Xác đònh số MPN − Tính số xác suất lớn (MPN) − Độ xác 4.3.6.9 Báo cáo kết quả: − Báo cáo phương pháp xác đònh sử dụng kết thu được, rõ phương pháp biểu thò dùng Nó phải đề cập đến tất chi tiết thao tác không qui đònh phần tiêu chuẩn Trang 130/109 SVTH: HỒ THỊ MINH VÂN Báo cáo Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng CHƯƠNG V: KẾT LUẬN  Trung tâm Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đơn vò nghiệp khoa học phục vụ cho công tác quản lý Nhà nước tiêu chuẩn, đo lường, chất lượng Bao gồm chức nhiệm vụ Trung tâm là: − Kiểm tra nhà nước chất lượng hàng hóa xuất nhập − Thẩm đònh kỹ thuật thiết bò công nghệ hàng hóa − Kiểm đònh, hiệu chuẩn phương tiện đo kiểm − Thử nghiệm chất lượng sản phẩm (hàng hóa) hệ thống quản lý − Hướng dẫn, đào tạo, tư vấn tiêu chuẩn, đo lường quản lý chất lượng − Cung cấp thông tin tiêu chuẩn hóa, đo lường quản lý chất lượng − Nghiên cứu, chế tạo chuẩn đo lường phương tiện đo − Trung tâm đònh quan kiểm tra sản phẩm hàng hóa bắt buộc phải kiểm tra Nhà nước chất lượng − Hiện nay, Trung tâm xây dựng nhà thử nghiệm sóng điện từ (EMC) với hệ thống công nghệ cao Nhật đảm nhiệm, lắp ráp thiết bò  Các hệ thống tiêu chuẩn: − Phần lớn tiêu chuẩn có thời gian ban hành lâu theo thống kê Trung tâm Tiêu chuẩn có khoảng 40% số lượng tiêu chuẩn không phù hợp với xu Điều bất lợi lớn trình hội nhập với giới thông qua WTO, AFTA − Giải pháp cho tiêu chuẩn là: Các quan quản lý có chức đưa khoảng thời gian đònh, để đònh kỳ xem xét lại hệ thống tiêu chuẩn phù hợp với nhòp độ phát triển xã hội nhằm nâng cao chất lượng sản phẩm Đây khó khăn lớn tốn nhiều chi phí, nguồn lực để thực phải có phối hợp tốt, quán Bộ, Ngành liên quan − Ngoài ra, tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) sử dụng nước, trung tâm thực phép thử theo phương pháp khác như: AOAC,AOCS, AACC, BS, CODEX STAN, FAO FNP, ISO, IS, EEC, GAFTA, ICUMSA  Sản phẩm sữa có nhiều tiêu phương pháp thử khác nhau: − Phần hóa lý: phân tích hàm lượng béo, đạm, casein, số acid, canxi, lactose, chất khô − Phần vi sinh: tổng số vi sinh vật, men, mốc − Hiện nay, sữa có nhiều tiêu cần thử nghiệm quan chưa có đủ thiết bò để thử nghiệm hết tiêu như: vitamin B5, B12, màng béo sữa, số thông minh A+ DHA, WG3 Trang 131/109