Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm lê văn việt mẫn, lại mai hương

LÊ VĂN VIỆT MẪN (Chủ biên) LẠI MAI HƯƠNG THực phẩm Hư VIỆN HỌC NHA TRANG M 664.07 L 250 M THƯ VIỆN ĐH NHA TRANG Ó U Í)U Ư ZZíQ NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP Hồ CHÍ MINH ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP H ổ CHÍ MINH TRỪỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Lê V ă n V iệ t M ẫn (Chủ biên) L i M H n g THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT HỌC THựC phẩm (Tái lần thứ hai) TRƯƠNGBệt HỌCNllÀĩ^NG THƯ VIỆN « 30022785 N H À X U Ấ T B Ả N Đ Ạ I HỌC Q U ố C G IA T P HỒ CHÍ M INH - 2010 G T 03.S V (V ) Đ H Q G H C M - ío 191 -2010/CXB/326-08 GT.SV 843-10(T) MỤC LỤC LỜI NỒI ĐẨU Chương MỘT sổ KỸ THUẬT BẢN CỦA VI SINH VẬT HỌC Bài l Tiệt trùng dụng cụ môi trường làm việc Bài Chuẩn bị môi trường nuôi cấy vi sinh vật Bài Kỹ thuật gieo cấy vi sinh vật 10 Bài Kỹ thuật nuôi cấy vi sinh vật 12 Bài Các kỹ thuật phân lập vi sinh vật Bài Các phương pháp giữ giống vi sinh vật 13 15 PHƯƠNG PHÁP DỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT 17 Bài Phương pháp đếm số tế bàovi sinh vật buồng đếm 18 Bài Bài Phương pháp Breed Định lượng vi sinh vật phương pháp xác định lượngchãi khô 21 23 Chương Bài l(0 Định lượng vi sinh vật phương pháp đo mật độ quang 26 Bài l l Định lƯỢng vi sinh vật phương pháp đếm số khuẩn lạc phát triển môi trường đặc 28 Bài 34 l2 Định lượng vi sinh vật phương pháp pha loãngtới hạn Bài l3 Bịnh lượng vi sinh vật phương pháp xác định hàm lượng ATP nội bào Bài 14 Xác định sinh trưởng vi sinh vật thông qua hoạt tính sinh khối 38 42 KHẢO SÁT HÌNH THÁI VÀ MỘT số TÍNH CHẤT SINH LÝ CỦA VI SINH VẬT Chương Bài l Quan sát tế bào vi khuẩn 44 Bài l6 Quan sát nha bào, bao nhày tiên mao vi khuẩn 47 Bài l7 Xác định khả chuyển động vi khuẩn 52 B ài18 Quan sát nấm sợi 53 B àil9 Quan sát nấm men 56 Bài 20 Khảo sát khả dị hóa carbohydrate 57 Bài l Khảo sát khả lên men loại đường 58 Bài 22 Khảo sát khả dị hóa sô" nguồn nitơ 59 Bài 23 Khảo sốt khả chịu đựng áp lực thẩm thcấu vi sinh vật 60 Chương XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ TIÊU VI SINH CỦA THỰC PHẨM Bài 24 Xác định tổng sô" vi khuẩn hiếu khí thực phẩm 61 Bài 25 Xác định tổng sô" nâ"m men nâm sợi thực phẩm 63 Bài 26 Xác định sô" bào tử gia vị thực phẩm Bài 27 Định lượng coliform tổng sô", coliform phân E coil 64 66 Bài 28 Phát nhận diện Salmonella 70 Bài 29 Định lượng Staphylococcus aureus thực phẩm 79 Bài 30 Phân lập Listeria spp từ thực phẩm 83 Bài 31 Phát Listeria phương pháp phản ứng dây chuyền sử dụng polymerase (PCR - polymerase chain reaction) 88 Bài 32 Định lượng Bacillus cereus thực phẩm 94 Bài 33 Định lượng Streptococcus faecalis 97 Bài 34 Định lượng Pseudomonas aeruginosa 101 Bài 35 Xác định Vibrio cholerae 103 Bài 36 Định lượng Clostridium perfringens 110 Bài 37 Phát phân lập Clostridium botulinum thực phấm 15 Chương VỆ SINH CỒNG NGHIỆP 119 Bài 38 Kiểm tra vi sinh nguồn nước sản xuât 119 Bài 39 Xác định mức độ nhiễm vi sinh vật không khí phân xưởng sản xuất 120 Bài 40 Xác định mức độ nhiễm vi sinh vật thiết bị sảnxuất 123 Phụ lục NHỮNG MÔI TRƯỜNG sử DỤNG TRONG CÁCBÀI THÍNGHIỆM Phụ lục NHỮNG THUỐC NHUỘM, THUỐC THỬ VÀ DUNG DỊCH ĐỆM sử DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIỆM TÀI LIỆU THAM KHẢO 126 150 152 LỜI NÓI ĐẨU Vi sinh vật học thực p h ẩ m môn học sở ngành Công nghệ thực phẩm Môn học cung cấp cho sinh viên kiến thức vi sinh đại cương vi sin h ứng dụng lĩnh vực sản xuất thực p h ẩ m quy mô công nghiệp T H Í N G H IỆ M V I S IN H V Ậ T HỌC T H ự C P H Ẩ M biền soạn đ ể giả n g dạy m ôn học T h í n g h iệm vi sin h vật học thực p h ẩ m cho sin h viên ngành Công nghệ thực p h ẩ m , Trường Đ ại học Bách klioa-Đ ại học Quốc gia T P Hồ Chí M inh N ội dung sách chia th n h p h ầ n chính: P h ầ n 1: M ộ t số kỹ th u ậ t vi sin h vật học-bao gồm kỹ th u ậ t chuẩn bị m ôi trường, p h â n lập, gieo cấy, nuôi cấy, giữ giống vi sin h vật (6 bài) P h ẩ n 2: Giới thiệu m ộ t số phương pháp đ ịn h lượng vi sin h vật (8 bài) P h ầ n 3: K hảo sá t h ìn h thái m ột số tín h chất sin h lý nhóm vi sinh vật thường gặp tro ng thực p h ẩ m (9 bài) P h ầ n 4: Giới th iệu phương p h p kiểm tra tiêu vi sin h thực p h ẩ m -b a o gồ m tiêu liên quan đ ến n h ó m vi sin h vật hoại sin h lẫn nhóm vi sin h vật gây b ện h (14 bài) P h ầ n 5: Vệ sin h công nghiệp-G iới thiệu phương p h p kiểm tra vi sin h nguồn nước, m ô i trường k h ô n g k h í p h â n xưởng sản x u ấ t tìn h trạng vệ sin h th iế t bị sản x u ấ t quy trìn h công nghệ (3 bài) Trong trìn h biên soạn, có giới th iệ u m ộ t sổ phương p h p phân tích vi sinh thực p h ẩ m n h phương p h p đ ịn h lượng sinh vật thông qua hà m lượng A denosine TriP hosphate A TP , phương p h p xác đ ịn h vi sin h vật kỹ th u ậ t p h ả n ứng dây chuyền sử d ụ n g polym erase (Polymerase Chain Reaction - PCR) kỹ th u ậ t m iễn dịch (Im m unological technique) Q uyển sách củng tà i liệ u th a m khảo cho nhữ ng người dang công tác lĩn h vực sản x u ấ t thực p h ẩ m nói chung Giáo trìn h p h â n công biên soạn n hư sau: T S Lê Văn V iệt M ẫn: biền soạn chương 2, T S Lại M Hương: biên soạn chương C húng m ong n h ậ n ý kiến đóng góp bạn dọc nội dung sách d ề n h ữ n g lần tái sau hoàn chỉnh liơn Tlui từ góp ỷ xin gửi về: Bộ môn Công nghệ thực phẩm , Trường Đại học Bách khoa-Đ ại học Quốc gia TP Hồ Chí M inh, 268 L ý T hư ng Kiệt, Quận 10, T P Hồ C hí M inh Điện th o i: (08) 864 62 51 T S L ê V ăn V iệ t M ẩ n Chương MỘT SỐ KỸ THUẬT BẢN CỦA VI SINH VẬT HỌC B i T IỆ T TRÙNG DỤNG c ụ V À MÔI TRƯỜNG LÀM VIỆC T iệ t tr ù n g b ề m ặ t m ô i trư n g m v iệ c Khi làm việc với vi sinh vật, đề tránh bị lây nhiễm vi sinh vật không mong muốn môi trường xung quanh, cần phải đảm bảo cho môi trường bề m ặt làm việc vô khuẩn Sự vô trùng nơi làm việc phụ thuộc vào phương pháp tiệ t trùng m phụ thuộc rấ t nhiều vào điều kiện thông gió nơi làm việc Nơi làm việc thông khí không khí lọc Cách tiến hành: - Cửa sổ cửa vào phải đóng c h ặ t trước thờ i điểm làm việc - Để tiệ t trù n g không khí phòng dùng đèn u v , lắp trê n trầ n n h à, b ậ t tro n g thời gian 15 phút K hông khí chiếu ƯV sinh ozone, sau thời gian b ậ t đèn u v , không khí có mùi đặc trưng - Bề m ặ t iàm việc có th ế dược tiệ t tru n g b ằn g cách lau VỚI e th an o l 70%, hay tố t với p ropanol 70% Khi lau cồn, lưu ý k h ô n g b ậ t đ èn cồn có th ể x ả y r a h ỏ a hoạn T iệ t tr ù n g d ụ n g cụ m v iệ c a- Đ ụ n g cụ b ằ n g th ủ y tin h h o ặ c k im lo i C huẩn bị trước k h i tiệt trùng: - Trước t iệ t trùng, dụng cụ thủy tin h cần làm sây khô - Sau đó, gói kín giấy, giấy bạc hay để hộp đậy kín để đảm bảo sau tiệt trùng, dụng cụ không bị nhiễm lại vi sinh vật từ môi trường - Ô ng n ghiệm th ủ y tin h cần đậy b ằ n g n ú t k h ô n g th ấ m nước, sau gói kín p h ầ n đầu ống nghiệm có nú t vào giấy đem tiệ t trùng - Hộp p etri cần gói kín giấy - P ip e t th ủ y tin h cần gắn m ột n ú t nhỏ p h ầ n cuối pipet, sau bọc kín tro n g giấy - Que trang, đũa thủy tinh cần tiệt trùng cần phải gói kín vào giấy N ng dụng cụ b ằn g thủy tin h có th ể tiệ t trù n g b ằ n g h phương pháp: tr iệ t trù n g b ằ n g n h iệ t khô tiệ t trù n g b ằ n g n h iệ t ẩm CHƯƠNG Phương p h p tiệ t trù n g n h iệt khô: - Sấy tro n g tủ sấy n h iệ t độ 170-180°c tro n g thời gian 2,5 v ật cần tiệ t trù n g n ắ p - Nếu v ậ t cần tiệ t trù n g có nắp bông, sấy tủ sấy 150-160°c Phương pháp tiệt trùng nhiệt ẩm: thường thực nồi autoclave áp suất 0,1 M Pa tương ứng với n h iệt độ 121°c thời gian 20-30 phút b- D ụ n g cụ b ằ n g p l a s t i c c h ịu n h iệ t O ng nghiệm có n ắ p nhự a chịu n h iệt, n ắp b ằn g teflon, b ằ n g cao su hay đầu m icropipette tiệ t trù n g b ằn g n h iệ t ẩm tro n g nồi autoclave áp su ấ t ,lM P a tương ứng với n h iệ t độ 121°c tro n g thời gian 20-30 phút c- M ôi tr n g n u ô i c ấ y v i s in h v ậ t - Môi trư ng nuôi cấy vi sinh v ậ t thường tiệ t trù n g tro n g autoclave 121°c T hời gian tiệ t trù n g phụ thuộc vào khối lượng môi trường đem tiệ t trù n g thư ng kép dài từ 20-30 phút - Đối với th n h phần môi trường dinh dưỡng nhạy cảm với n h iệt độ cao không th ể sử dụng phương pháp tiệ t trùng n h iệ t nồi autoclave Trong trường hợp cần sử dụng m àng lọc vi khuẩn đế tiệt trùng Có thế' th a m k h ảo m ột số phương pháp tiệ t trù n g khác ứng dụng phương p h p tro n g b ả n g 1.1 B ả n g 1.1 Các phương pháp tiệt trù n g ứng d ụ n g Ưng dụng Tác nhân tiệt trùng 1- Dụng cụ kim loại 2- Dụng cụ có nắp cao su, teflon, nắp bống, nắp giấy nhôm, màng lọc Nhiệt ẩm tới 142°c 3- Dụng cụ plastic chịu nhiệt 4- Ống nghiệm hay bình thủy tinh có chứa môi trường nuôi cấy 5- Dụng cụ lọc tiệt trùng 6- Môi trường rẳn, môi trường lòng, paraffin 1- Dụng cụ thủy tinh không chứa môi trường nuôi cấy (có thể có nảp bông) Nhiệt khô tới 140-160 °c 2- Pipet có nút gói giấy hay đựng hộp nhôm 3- Hộp petri, que trang, phểu thủy tinh, 4- Hóa chất hay chất dinh dưỡng dạng bột (tùy theo khả chịu nhiệt) 5- Dầu có nhiệt hóa lớn nhiệt độ tiệt trùng Nhiệt khô 170- 220 °c Khí ethylene oxide, formaldehyde, methyl bromide 1- Dụng cụ thủy tinh nắp 2- Dụng cụ kim loại 1- Dụng cụ nhựa 2- Hộp petri hay ống nghiệm nhựa 3- Ống kính hay đồ điện tử 4- Bột hóa chất hay gia vị bền nhiệt 5- Ống ly tâm nhựa, bao bì nhựa Tia uv, tia X, tia gamma Lọc vô khuẩn 1- Dụng cụ nhựa bao kín bao polyethylene (PE) 2- Hộp petri nhựa bao kín bao PE 1- Không khí hay khí khác 2- Môi trường dinh dưỡng không chịu nhiệt 3- Dắu cỏ độ nhớt thấp ! MỒT SỐ KỸ THUẬ T BẦN CỦA VI SlNH VẬ T HOC B ài CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG NUÔI CAY VI SIN H VẬT N g u y ê n lý Môi trư ờng nuôi cấy cung cấp đầy dủ nhu cầu d in h dưỡng cần th iế t cho p h t triể n vi sin h vật P hân loại m ôi trường nuôi cấy: 1- Theo cấu trúc, môi trường nuôi cấy vi sin h v ậ t có th ể chia làm ba loại: môi trư ng lỏng, môi trường rắn môi trư ng b n rắn : - M ôi trường lỏng: thường sử dụng để n h â n giống, lên m en hay nghiên cứu m ột số đặc tín h vi sinh vật Môi trư ờng lỏng k h ô n g chứa c h ấ t làm đặc môi trư ờng ag ar, gelatin - M ôi trường rắn (m ôi trường đặc): thường dược tạo th n h b ằ n g cách cho m ột hàm lượng nhỏ a g a r hay gelatin vào môi trường lỏng để làm đặc môi trường Môi trư ờng rắ n thường sử dụng đế p h â n lập vi sin h v ật, để quan s t h ìn h th i k h u ẩn lạc để n ghiên cứu m ột số đặc tín h khác - M ôi trường bán rắn: có hàm lượng ch ất tạo độ đặc so với môi trường rắ n , có cấu trúc dạng dẻo Môi trường bán rắ n sử dụng tro n g m ột số trư ờng hợp, ví dụ để xác định k h ả n ă n g chuyển động cua m ột sô loài vi khuẩn 2- Theo th n h p h ầ n , môi trường nuôi cấy có th ế chia th n h môi trường tổng hợp môi trường tự nhiên: - Môi trường tổng hợp: có th àn h phần hóa học xác định m ột cách xác Môi trường tổ n g hợp thườn? dược chuẩn bi từ nhữ ng hơp c h ấ t hóa học tin h k h iế t có công thức hóa học xác định - Môi trường tự n hiên: thường bao gồm nhữ ng hợp c h ấ t chưa xác định rõ th n h p h ầ n , công thức hóa học rõ ràn g ; ví dụ pepton, cao th ịt Môi trư ng tổng hợp có độ lặp lạ i cao tro n g môi trường tự n h iên có độ lặp lại tù y thuộc vào nhà sản xuất - Môi trường hòa tan chuẩn bị sẩn: đế tiệ n lợi cho người sử dụng, ngày nhiều n h sả n xuất cung cấp nhiều môi trư ng p h a trộ n sẵ n dạng bột N hững môi trư ờng dạng có th ể sử dụng r ấ t đơn giản cách hòa ta n vào nước m ột hàm lượng n h ấ t định có đủ t ấ t th n h p h ần dinh dưỡng cần thiết Phương pháp chuẩn bị m ôi trường nuôi a- C h u ẩ n b ị m ô i tr n g lỏ n g - C ân ch ính xác riê n g b iệt th n h p h ầ n dinh dưỡng môi trường nuôi cấy theo h m lượng định - Hòa ta n từ ng th n h p h ần m ột lượng nước nhỏ Sau trộ n lẫn t ấ t th n h p h ầ n dinh dưỡng với làm đầy lên m ột th ể tích n h ấ t định 10 CHƯƠNG bằn g nước Có th ể sử dụng nước cất nước m áy tùy thuộc vào yêu cầu cua trường nuôi cấy - K iểm tra pH b ằ n g m áy đo pH b ằ n g giấy quỳ tím N ếu pH k h ô n g với yêu cầu, có th ể chỉnh pH b ằn g dung dịch N aOH h a y HC1 - Sau điều chỉnh pH giá trị th íc h hợp, p h â n phôi môi trư ờng nuôi cấy vào ống n g h iệm hay bình nuôi cấy - Đóng n ắ p ống nghiệm b ằ n g n ú t k h ô n g th ấ m nước N ếu sử dụn g ống n g h iệm có n ắp có th ề v ặ n kín, k h ô n g v ặ n c h ặ t hoàn to àn n ắ p ống nghiệm để tiệ t trù n g có th ể th o t - Sau p h â n phối vào ống nghiệm h ay b ìn h nuôi cấy, môi trường d in h dưỡng cần p h ải tiệ t trù n g vi sin h v ậ t có th ể p h t triể n r ấ t n h a n h môi trường chưa tiệ t trù n g làm th a n h đổi th n h p h ầ n môi trường - Sau tiệ t trùng, làm nguội tới n h iệ t độ phòng, sau bảo quản tủ lạnh 6- C h u ẩ n b ị m ô i tr n g r ắ n b n r ắ n - Đôi với môi trường có chứa c h ấ t làm đặc n h ag ar, n ấu chảy ag ar tro n g 1/2 th ể tích nước dùng để p h a môi trường - C ân h ò a ta n th n h p h ần k h ác môi trư ờng tro n g 1/2 lượng nước lại - Khi a g a r ta n hoàn to àn , trộ n lẫ n th n h p h ần dinh dưỡng k h c với dung dịch có chứa ag ar - L àm đầy lên th ể tích cần th iế t b ằ n g nước, sau p h â n phối vào ống n ghiệm b ìn h nuôi cấy dung dịch nóng N ếu đế nguội, a g a r đặc lại k h ô n g th ế ró t vào ống n g h iệm - Đóng n ắ p ống nghiệm tiệ t trù n g n h môi trư ờng lỏng - Sau tiệ t trù n g , th ạc h ngh iên g , cần đ ặ t ống th c h n g h iên g có chứa môi trư ờng nóng vị trí n ằ m n g h iên g nguội - Bảo quản môi trường đông đặc tro n g tủ lạ n h vị tr í lậ t ngược B i KỶ THUẬT GIEO CAY VI SINH VẬT N g u y ê n lý Để có th ể nuôi cấy vi sin h v ật, cần p h ả i thường xuyên cấy vi sin h v ậ t từ môi trường sang môi trường khác phải đảm bảo cấy chuyền không làm nhiễm vi sinh v ậ t sử dụng với vi sin h v ậ t không mong m uốn từ môi trường xung quanh Vi sin h v ậ t thường cấy chuyền b ằ n g que cấy vòng h ay que nhọn Trong nhữ ng trư ờng hợp đặc b iệt, có th ế dùng nhữ ng dụng cụ khác để cấy chuyền vi sinh v ậ t nh pipet, que đầu có quấn bông, que tra n g hav ông tiêm NHỮNG MÔI TRƯỜNG sử DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIẼ M 139 T iệt trù n g môi trường với th n h p h ầ n nh tr ê n 121°c tro n g thời gian 15 phút Sau làm nguội 50°c để chuẩn bị phối trộ n với dung dịch có chứa ch ất ức ch ế sau: Cyclohexim ide : 400mg C olistin sulphate : 20mg Acriflavine : 5nig C eíbtetan : 2mg Fosfomycin : 10 nig H òa ta n th n h phần trê n vào 10m ỉ hỗn hợp eth an o l nước vô k h u ẩn (tỉ lệ eth an o l/ nước 1/1 v/v) Sau đó, bổ sung vào 1/ m ôi trường chuẩn bị trê n k h u p h ân phối vào hộp P etri vô khuẩn M 40 M ôi trư n g th c h tr y p tic soy có b ổ s u n g c h ấ t c h i ế t n ấ m m en 0,6% (Tryptic soy agar with yeast extract T S A -Y E ) T ryptone : 15g P eptone đậu n àn h : 5g N aCl : 5g C h ấ t c h iết nấm men : 6g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,3 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c th i gian 15 phút M 41 M ôi tr n g d ịc h t h ể LEB (Listeria enrichm ent broth) T ryptone đậu nành 30g C h ấ t c h iết nấm men 6g pH cuối 7,3 ± 0,2 N alidixic acid 40 mg Cycloheximide 50 mg A criflavine hydrochloride 15 mg H òa ta n try p to n đậu n n h chất c h iế t n ấ m m en tro n g 11 nước hiệu chỉnh pH T iệ t trù n g môi trường 121°C th i gian 15 phút Sau k h i làm nguội môi trư ng 50°c, bổ sung th àn h phần lạ i vào k h u c ầ n ý trìn h bổ sung cần thực điều k iện vô trù n g 140 PHỤ LỤC M42 M ô i tr n g th c h m a n n ito l, lò n g đ ỏ tr ứ n g v p o ly m ix ỉn (M a n n ito l, eg$ Yolk, P o lym ixin agar MYP) M ôi trường Nước th ịt bò : 1g P e p to n e : lOg D -m an nitol : lOg N aC l : 10g P h en o l đỏ : 0,025g T hạch : 15g Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 7,2 ± 0,2 T iệ t trù n g m ôi trư ng 121°c thời gian 15 phút P o lym ixin Polym yxin B su lp h a te : ,lg Nước c ấ t vừa đủ : 100m l T iệ t trù n g dung dịch phương pháp vi lọc N h ủ tương lòng đỏ trứng Sử dụng trứ n g gà tươi nguyên vẹn Sử dụng b n chải để rửa vỏ trứng, sau ngâm chìm trứ n g dung dịch ethanol 95° tro n g 30 giây làm khô T rong điều k iện vô trù n g , đập vỡ trứ n g tác h bỏ lòng trắn g Cho p h ầ n lòng đỏ vào m ột ống đong vô khuẩn xác định th ể tích trứng Cho tiếp vào ống đong m ột th ể tích nước vô trùng lần th ể tích p h ầ n trứ n g ống đong Sau đó, chuyển h ỗ n hợp ông đong vào m ột b ìn h vô trù n g lắc m ạn h Cho b ìn h vào b ể điều n h iệ t 45°c tro n g thời gian T iếp theo, giữ h ỗ n hợ p 0-5°C tro n g th i g ian 18-24 để tạo th n h k ế t tủa Sau cùng, tác h lấy p h ầ n nhũ tương lê n tr ê n bề m ặt Bảo quản nhũ tương n h iệ t độ 0-5°C tro n g thờ i g ian đa 72 C h u ẩ n bị m ôi trường MYP: P h ô i trộ n m ôi trư n g bản, dung dịch polym ixin nhù tương lòng đỏ trứ n g theo tỉ lệ 90:1:10 (v/ư/v) Trước tiê n , cần làm chảy môi trường b ản , sau đ ặ t môi trư ờng vào bể điều n h iệ t 50°c T iếp theo, cho dung dịch polym ixin nhũ tương lòng đỏ trứ n g vào trộ n NHỮNG MÔI TRƯỜNG sứ DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIÊM M43 M ôi trư n g th c h g lu cose Glucose : 10# T ryptone : 10g C h ấ t c h iế t nấm men : l,5g NaCl : 5g Brom ocresol tím : 0,015g T hạch : 15g Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 7,0 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c th i gian 15 phút M44 M ôi trư n g d ịc h t h ể n itra te P eptone 50g Nước th ịt bò 30g kno3 10g Nước c ất vừa đủ 11 pH cuối 7,0 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c tro n g th i gian 15 p h ú t M ôi trư n g d ịc h th ế V o g e s-P ro sk n u e r Peptone 7g Glucose 5g K2H P0„ 5g NaCl 5g Nước c ất vừa đủ 11 pH cuôi 7,0 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trưừng 121°c th i gian 15 phút M46 M ôi trư n g th c h S la n e tz B a r tle y T ryptose : 20g C h ấ t c h iế t n ấm m en : 5g Glucose : 2g N a2H P : 4g Sodium azide : 0,4g T étrazolium chloride : 0,1g T hạch : 10g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,2 ± 0,2 141 PHỤ LỤC 142 Cho t ấ t th n h p h ần môi trường vào tro n g nước (trừ sodium azide tétrazo liu m chloride) đun sôi đế hòa tan , ch ỉn h pH t iệ t trù n g m ôi trường 121°c tro n g 15 ph ú t Để nguội đến 50°c cho dung dịch sodium azide tétrazo liu m chloride vào trộ n (hòa ta n sodium azide tétraz o liu m chloride tro n g nước c ấ t trước đem vi lọc), c ầ n tín h to n cho sau k h i phối trộ n , ta thu m ôi trư ờng th c h Slanetz B artley có th n h p h ầ n n h trê n M47 M ô i tr n g d ịc h th ể L its k y P ep to n e 20g Glucose 1% N aC l 5g k 2h p o 2,7g Sodium azide 0,4g E th y l violet azide 83 m g Nước c ấ t vừa đủ II pH cuối 7,2 ± 0,2 Môi trư ờng dịch th ể L itsky pha ch ế theo phương p h p tương tự m ôi trường S lan etz B artley M48 M ỗ i tr n g d ịc h th ể R o th e (Azide dextrose broth) P ep to n e 20g Glucose 5g N aC l 5g k 2h p o 2,7g k h 2p o 2,7g Sodium azide 0,2g Nước c ấ t vừa đủ II pH cuối 6,8 ± 0,2 T iệ t trù n g m ôi trường 121°c thời gian 15 phút M49 M ôi trư ờng th c h Pseudom onas (Pseudomonas agar with C N selective supplement) G e latin peptone 16g C asein hydrolysate 10g P o tassiu m su lp h ate 10g M agnesium chloride 1,4g T h ạc h Nước c ấ t vừa đủ llể ll pH cuối 7,1 ± 0,2 C etrim id e 200771g Sodium n alid ix ate 15mg NHỮNG MỎI TRƯỜNG sử DỤNG TRONG CÁC BÀI THI NGHIỆ M 143 H òa ta n tấ t th àn h phán t r cetrim ide sodium n alid ix ate T iệt trù n g m ôi trường 121°c thời gian 15 phút Sau đó, làm nguội 50°c Hòa ta n cetrim id e sodium nalidixate vào 4m ỉ hỗn hợp nước vô k h u ẩ n e th a n o l (tỷ lệ 1/1, u/u) Sau đó, bổ sung hỗn hợp vàio môi trường 50°c k h u ấ y đem đổ hộp Petri M50 M ôi trư n g th c h K in g A có sử a đ ổ i P ep to n e : 2Qg Glycerol : lOg K2S : lOg M gCl2 : \Ạ g T h ạch : 12g Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 7,2 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c th i gian 15 phút M 51 N c đ ệ m p e p to n e (Buffered peptone water) P ep to n e : 10g N aC l : 5g N a2H P : 3,5g K H 2P : l,5 g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,2 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c th i gian 15 phút M 52 M ôi tr n g d ịc h t h ể p e p to n e k iề m (Alcaline peptone broth) P ep to n e : 10g N aC l : 10g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 8,6 ±0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c th i gian 10 phút M 53 M ôi tr n g th c h T h io su lp h a te C itr a te B ile s a lts S u c r o se a g a r (TCB S) C h ấ t ch iết nấm m en 5g P eptone 10g Sucrose 20g Sodium thiosulpahte 20g PHỤ LUC 144 Sodium c itra te : 10g Sodium cholate : 3g Oxgall : 5g NaCl : 10ể F erric c itra te : lể X anh brom othym ol : 0,04ể X anh thym ol : 0,04ể T hạch : 15g Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 8,6 ± 0,2 Gia n h iệ t n h ẹ hòa tan th n h phần trê n vào nước Để th a n h trù n g môi trường, ta sử dụng phương pháp vi lọc đun sôi tro n g thời gian 1-2 phút K hông h ấ p tiệ t trù n g môi trường M54 M ôi tr n g th c h T1N1 T ryptone : 10ể T hạch : 20g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,2 ±0,2 T iệ t trù n g môi trư ờng 121°c thời gian 15 p h ú t M55 M ô i tr n g th c h K lig e r Ir o n A g a r (KIA) B ột “Lab-Lem co” : 3g C h ấ t c h iế t n ấ m m en : 3g P eptone : 20g N aC l : 5g Lactose : 10ể Glucose : lể F erric c itra te : 0,3ể Sodium th io su lp h ate : 0,3g Đỏ phenol : 0,05ể T hạch : 12g Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 7,4 ± 0,2 Tiệt trùng môi trường 121°c thời gian 15 phút NHŨNG MỒI TRƯỜNG sử DUNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIỆM 145 M56 M ôi trư ờng d ịch th ể H ugh-Leifson glucose H LG B (Hugh-Leifson glucose broth) Peptone : 2g NaCl co cễf C h ấ t chiết nấm m en : 0,5g D extrose 10ể Brom cresol tía 0,015g T hạch 3g Nước c ất vừa đủ 11 pH cuối 7,2 ± 0,2 T iệt trù n g môi trường 121°c thời gian 15 phút M 57 M ôi trư n g d ịc h th ể p u r p le c a r b o h y d r a te (Purple carbohydrate broth) Proteose peptone : lOg C h ấ t ch iết th ịt bò 1g NaCl 5g Bromocresol tía 0,015g Nước c ấ t vừa đủ 11 pH cuối 6,8 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trườn«* 121°C th i gian 10 phút M 58 M ôi trư n g d ịc h t h ể M oeller (để kiểm tra decarboxylase) Peptone : 5g C h ấ t c h iế t th ịt bò 5g D extrose 0,5g Brom ocresol tía 0,01g Cresol đỏ 0,005g Pyridoxal 0,005g Nước c ấ t vừa đủ 11 pH cuối 6,0 ± 0,2 H òa ta n th n h p h â n trê n tro n g \ l nước Sau đó, bổ sung lOg Llysine.2H C l 10ể L -arginine.H C l lOg L -o rn ith in e.2 H C l vào m ôi trường P h â n phối m ôi trường vào ống nghiệm T iệ t trù n g m ôi trư ng 121°c tro n g thờ i g ian 10 phút PHỤ LỤC 146 M59 Môi trư ng th ạch Tryptose-Sulphite-Cycloserin TSC khôn g chứa lòn g đỏ trứng T ry p to se : 15g P ep to n e đậu n n h : 5g B ột ‘L ab-L em co” : 5g C h ấ t c h iế t n ấ m m en : 5g NaHSC >3 : lể F erric am m onium citrate : l ể T h ạch : 14g Nước c ấ t vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,6 ± 0,2 D -cycloserine : 400m g H òa ta n t ấ t th n h p h ầ n nói tr ê n vào 1/ nước (trừ D-cycloserine) T iệt trù n g m ôi trư n g 121°c tro n g thời gian 15 p hút Sau đó, làm nguội 50°c bổ sung D -cycloserine vào khuấy hỗn hợp M 60 M ô i tr n g d ịc h t h ể th io g ly c o lla te (Thioglycollate broth) C h ấ t c h iế t n ấ m m en 5g T ry p to ne 15g Glucose 5,5.g Sodium thioglycollate 0,5g NaCl 2,5g L -cystine 0,5g R esazurin 0,001g T h ạch 0,75g Nước c ấ t vừa đủ II pH cuối 7,1 ± 0,2 T iệ t trù n g m ôi trư ng 121°c thờ i gian 15 p hút M 61, M ô i tr n g t o b o tử (Sporulation broth) P o lypeptone : 15g C h ấ t c h iế t n ấ m m en : 3g T in h b ộ t h ò a ta n : 3g M gS04 khan : ,lg Sodium thioglycollate : lg N a 2H P :llg Nước c ấ t vừa đủ : 11 pH cuối : 7,8 ± 0,2 Tiệt trùng môi trường 121°c thời gian 15 phút NHỮNG MÔI TRƯỜNG s DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIỆM 147 M62 M ôi trư n g Iro n -M ilk c ả i tiến Sữa tươi : 11 S ulphate s ắ t : lg Nước cất : 50m l H òa ta n muối sắ t 50 m ỉ nước c ấ t cho từ từ dung dịch muối vào 1/ sữa, vừa cho vừa khuấy máy khuâV từ P h â n bố m ôi trư n g vào ống nghiệm T iệ t trù n g môi trường 118°c tro n g thời g ian 15 p hút Sau k h i p h a ch ế xong môi trư ờng n ên đem sử dụng M63 M ôi trư n g th c h n itr a te P eptone 5g C h ấ t ch iết th ịt 3g G alactose % KNOg lể N a2H P 2,5g T hạch 3g Glycerol 5m l Nưởc c ất vừa đủ 11 pH cuối 7,3 ± 0,2 T iệ t trù n g môi trường 121°c thờ i gian 15 p h ú t N ếu k h ô n g sứ dụng môi trư ờng tro n g khoảng thời gian sau chuẩn bị xong th ì đem bảo qu ản n h iệ t độ 4°c Trước sử dụng, đ ặt ống nghiệm chứa môi trư n g vào bể điều n h iệ t để th c h chảy lỏng trở lại làm nguội n h an h M64 M ôi trư n g la c to se g e la tin T ryptose : 15g C h ấ t ch iết n ấm m en : 10g Lactose : lOg Đỏ phenol : 0,05g G elatin : 120g Nước c ất vừa đủ : 1/ pH cuối : 7,5 ± 0,2 Tiệt trùng môi trường 121°c thời gian 15 phút 148 PHỤ LỤC M 65 Môi trư ờng d ịch th ể g a n hăm (C hipped liv er broth) Gan bò tươi 500g Peptone 10g k 2h p o 2g T inh b ột ta n 1g Nước cất 11 pH cuối 7,0 ± 0,2 Xay nh uyễn 500g gan cho vào 800m l nước Đun đến sôi n in nhỏ lửa tro n g thờ i gian L àm nguội hỗn hợp, ch ỉn h pH 7,0 tiế p tục đun sôi tro n g 10 phút Lọc hỗn hợp qua lớp vải thô v ắ t bã đ ể tậ n th u h ế t p h ầ n dịch lỏng BỔ sung th n h p h ầ n lại vào dịch lọc, th ê m nước vào để tổ n g th ể tích th u 11 C hỉn h pH lầ n cuối giá trị 7,0 P h â n phối m ôi trư n g vào ông n g h iệm tiệ t trù n g 121°c tro n g th i gian 15 p h ú t M 66 Môi trư ng d ịc h th ể th ịt nấu (Cooked m eat broth) Tim bò 454g Proteose peptone 20g D extrose 2g N aCl 5g Nước c ấ t vừa đủ 11 pH cuối 7,2 ± 0,2 C ách chuẩn bị tương tự n h m ôi trường dịch th ể gan b ăm đ ã trìn h bày trê n T iệ t trù n g m ôi trư n g 121°c tro n g thời gian 15 p h ú t M 67 Môi trường d ịch th ể trip tica se p ep to n e glucose c h ấ t c h iế t nấm men vời trypsin (Trypticase Peptone Glucose Yeast extract broth w ith trypsin TP G YT) T rypticase 50g P eptone 5g C h ấ t ch iế t n ấ m m en 20g D extrose 4g Sodium thioglycollate 1ẽ Nước c ấ t vừa đủ 11 pH cuối 7,0 ± 0,2 NHŨNG MÕI TRƯỞNG s DỤNG TRONG CÁC ÓÀI THÍ NGHIÊM 149 H òa ta n th ả n h phân 11 nước c ấ t p h â n phối môi trường vào tro n g ống nghiệm T iệt trùng môi trưởng 121°c tro n g th i gian 10 phút Nếu không sử dụng ngay, cần bảo quản môi trường 4°c Trước k h i sử dụng, cần tiến h n h đun cách th ủ y môi trường thời gian 10-15 p h ú t để đuổi oxy bổ sung dung dịch try p sin vào môi trường theo tỉ lệ 1/15 (v/u) Chuẩn bị dung dịch trypsin: hòa tan 1,5g trypsin 100m ỉ nước, tiệ t trùng dung dịch phương pháp vi lọc, sử dụng m em brane với đường k ín h lỗ lọc 0,45pm M 68 M ô i t r n g th c h lò n g đ ỏ tr ứ n g k ỵ k h í (Anaerobic egg yolk agar) C h ấ t c h iết n ấ m men % T ryptone 5g P roteose peptone 20g NaCl 5g T hạch 20g Nước c ấ t vừa đủ 11 pH cuôi 7.0 ± 0.2 Hòa ta n th n h phần 1/ nước, chình pH tiệ t trù n g môi trường erlen 121°c thời gian 20 phút Làm nguội môi trường 45-50°C đ ặ t erlen vào bể điều n h iệt nhiệt độ 50ỮC Cho th êm 80m / hỗn hợp lòng đỏ trứng tro n g nước muối vào 11 môi trường điều kiện vô trùng K huấy phân phối vào hộp petri vô khuẩn C ách chuẩn bị hỗn hợp lòng đỏ trứng tro n g nước muối: rửa trứ ng để tá c h bụi bám bên Ngâm trứng tro n g dung dịch 0,1% H gC l2 tro n g V ớt trứ n g để phần dung dịch H gCl2 T iếp theo, cho trứ n g vào dung dịch cồn 70° n g âm 30 phút Sau đó, vớt trứ n g đ ập bỏ p h ầ n vỏ tro n g điều k iệ n vô trù n g D ùng ống tiêm vô khuẩn đế’ thu lấy p h ầ n lòng đỏ cho vào erlen vô trù n g Cho tiế p vào erlen m ột th ể tích dung dịch N aC l 0,85% b ằ n g với th ể tích lòng đỏ trứ ng K huấy hỗn hợp đem bổ sung vào p h ầ n m ôi trư ờng chuẩn bị trê n 150 PHỤ LỤC PHỤ LỤC NHỮNG THUỐC NHUỘM, THUỐC THỬ VÀ DUNG DỊCH ĐỆM SỬ DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIỆM 1- T h u ố c n h u ộ m 51 X a n h m e th y le n e Dung dịch A: 0,3ể xanh m ethylene + 30m l dung dịch e th a n o l 95% Dung dịch B: 0,01g KOH + 100m í nước c ấ t T rộn h dung dịch A B lại với 52 T ím tin h t h ể Dung dịch A: 2g tím tin h th ể + 20m ỉ dung dịch e th a n o l 95% Dung dịch B: ,0 % am m onium oxalate + 80m ỉ nước c ấ t T rộn hai dung dịch A B lạ i với 53 L u gol H òa ta n 2g KI lg 12 tro n g 300mZ nước cất S4» S a fr a n in Cho 10mZ dung dịch S afran in o (nồng độ 2,5% tro n g dung m ôi ethanol) v 100/nZ nước c ấ t trộ n 5 M a la c h ite g r e e n H òa ta n 5g m alach ite g reen oxalate vào 100mZ nước cất Đ ỏ C o n go H òa ta n lg đỏ Congo tro n g 100mZ nước cất C a rb o fu c h sin Dung dịch A: 0,3g fuchsin basic + 10m l dung dịch e th a n o l 95% Dung dịch B: 5g phenol + 95m ỉ nước cất T rộn h dung dịch A B lại với 2- T h u ố c th R l D u n g d ịc h a c ỉd - a lc o h o l T rộn 3m l dung dịch HC1 đậm đặc tro n g 100mZ e th a n o l 95% NHỮNG THUỐC NHUỘM, THUỐC THỬ VÀ DUNG DỊCH ĐÊM sử DỤNG TRONG CÁC BÀI THÍ NGHIỆM 151 R2 T h u ố c t h K o w a c s p-dim ethylam inobenzaldehyde : 5g Rượu isoam ylic : 75m l HC1 đậm đặc : 25m l H òa ta n p-dim ethylam inobenzaldehyde tro n g rượu, sau nhỏ giọt acid vào hỗ n hợp Bảo quản tro n g lọ thủy tinh 4°c R3 T h u ố c t h V o g e s-P ro sk a u er - Dung dịch alpha napthol cồn: cho 5g a lp h a n a p th o l vào eth an o l 95% - Dung dịch KOH: hòa ta n 40g KOH tro n g lOOm/ nước cất R4 C h ấ t c h ỉ th ị m e th y l r e d M ethyl red : 0,2g E th an o l 95% : 600m l Nước c ấ t vừa đủ : 11 Hòa tan m ethyl red ethanol 95% Thêm nước cất vào th ể tích quy định R5 T h u ố c t h n itr ite - Dung dịch 5-am in-2-naphtalen sulfonic acid: hòa ta n ,lể 5-am in-2-naphtalen sulfonic acid 100m l dung dịch acetic acid 15%u Lọc h ỗ n hợp qua giấy lọc bảo quản dịch lọc bình th ủ y tin h m àu sậ m 4°c - Dung dịch sulfanilic acid: hòa tan 0,4jg sulfanilic acid tro n g 100m l dung dịch acetic acid 15%v Lọc hỗn hợp qua giấy lọc Trước k h i sử dung, irô n hai dung địch trê n với n h au theo tỉ lệ 1/1 {v/o) 3- D u n g d ịc h đ ệ m B l D u n g d ịc h m u ố i đ ệ m g ly c e ro l (Buffered Glycerol S a lt solution) Glycerol : 100m/ K2HPO4 : 12,4g K H 2P : 4g NaCl : 4,2g Nước c ấ t : 900m l H òa ta n N aC l tro n g 900ml nước cất, sau cho p h o sp h a te glycerol vào C h ỉn h pH 7,2 T iệ t trù n g dung dịch 121°c tro n g th i g ian 15 phút B Đ ệ m g e l p h o s p h a te G elatine 2g N a2H P 4g Nước c ấ t vừa đủ 1L pH cuối Tiệt trùng 6,2 ±0,2 121°c thời gian 20 phút 152 TÀI LIỆU THAM KHẢO AOAC O fficial m ethods o f A n a ly sis o f AO A C 15th E dition, AOAC In te rn a tio n a l, M aryland, 1990, 1298p M arrio t N.G P rinciples o f food sanitaion 4th edition, A spen P u b lish ers, G aithersburg, 1999 M cLandsborough L Food m icrobiology laboratory CRC P re ss, Boca R aton, 2005, 179p Bourgeois C.M., Leveau J.Y Techniques d ’analyse et de contrôle dans les in d u stries agro-alim entaires V olum e 3: L e contrôle m icrobiologique L avoisier Tec & Doc, P a ris, 1991, 454p Jouve J.L L a qualité m icrobiologique des alim ents: M aîtrise et critères 2è édition, P olytechnica, P a ris, 1996, 563p Leclerc H., M eyer A., D eiana J Cours de m icrobiologie générale Doin é d iteu rs, P a ris, 1994, 388p Tennep E.3., LÜHJibHHKOBa B.K., riepeBep3eBa T.H JJpaKmuKy.M no m ui[...]... Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật trong canh trường lên men Phương pháp X ó c định - Phương pháp đo độ đục sinh khối - Phương pháp xác định hàm lượng chất - Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật trong canh trường lên men khồ của sinh khối Phương pháp xác định - Hàm lượng A T P nội bào hàm lượng các chất nội - Định lượng vi sinh vật trong thực phẩm - Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật bào... trường lên men - Hàm lượng NAD, NADH - Hàm lượng nitơ tổng Phương pháp xác định - Động học quá trình sử dụng cơ chất hoạt tính của sinh khối - Động học quá trình tạo sản phẩm - Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật trong canh trường lên men - Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật trong canh trường lên men Bài 7 PHƯƠNG PHÁP ĐÊM s ố TẾ BÀO VI SINH VẬT BANG BUồNG ĐEM 1 G iới t h iệ u c h u n g Nếu vi sinh. .. n 18 CHƯƠNG 2 B ả n g 2.1 Các phương pháp định lượng vi sinh vật hoặc đảnh giá sự sinh trưởng của chúng Nhóm phương pháp Tên phương pháp Phạm vi áp dụng Phương pháp xác định - Kỹ thuật đếm tế bào trên buồng đếm - Khảo sát sự sinh trưởng của vi sinh vật số lượng tế bào - Kỹ thuật Breed - Phương pháp nuôi cấy trên môi trường đặc trong canh trường lên men - Định lượng vi sinh vật trong thực phẩm - Khảo... Chương PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT MỞ ĐẨU Vi c đ ịn h lượng vi sin h v ật trong thực phẩm là r ấ t cần th iế t Điều đó cho phép chúng ta đ án h giá ch ất lượng vệ sinh an toàn của sả n phẩm Các chỉ tiêu vi sin h của thực phẩm thường liên quan đến hàm lượng của m ộ t sô" loài vi sin h v ậ t hoại sin h hoặc vi sin h v ậ t gây bệnh trong thực phẩm N goài ra, dựa vào các chỉ tiêu vi sin h của thực. .. PHÂN LẬP VI SIN H VẬT T rong tự n h iê n , p h ầ n lớn vi sinh v ật tồn tại lẫn với nhau tro n g m ột tậ p hợp bao gồm nhiều sin h v ậ t hay vi sinh vật khác nhau Đề có th ế n g h iên cứu tín h ch ất hoặc ứng dụng của vi sin h v ậ t thường phải p h â n lập chúng ra nhữ ng vi sinh v ậ t riên g rẽ H iện nay, có ba phương pháp hay được sử dụng đế p h â n lập vi sinh v ậ t là phương p h áp đổ đĩa, phương... ảo sá t Phương pháp n ày được sử dụng đế theo dõi sự sinh trưởng của vi sinh v ật trong các quá trìn h lên m en ở cả quy mô phòng th í nghiệm lẫn quy mô sản xuất Để định lượng vi sinh v ậ t tro n g thực phẩm , người ta không sử dụng phương p háp nảy T rong bài th í nghiệm này, chúng ta sẽ định lượng n ấ m m en tro n g quá trìn h lên m en rượu 24 CH ƯƠN ì 2 Hóa chất: - Dung dịch nước muôi sinh lý nồng... chỉ tiêu vi sin h của thực phẩm , chúng ta có th ể đ án h giá k h á i q u á t về tìn h trạ n g vệ sin h tro n g quy trìn h sả n xuất của các cơ sở chế biến T rong công nghệ lên m en thực phẩm và công nghệ vi sin h nói chung, khi thực h iệ n các quá trìn h nuôi cấy vi sinh v ậ t ở quy mô phòng th í nghiệm cũng như quy mô công nghiệp, vi c theo dõi sự sinh trưửng của giống vi sinh v ậ t tro n g canh trư... d của hộp p e tri như h ìn h 1.1 - L ậ t ngược hộp p e tri có chứa vi sinh v ậ t và để vào tủ ấm ở 35°c tro n g 48 giờ - Sau đó tác h rời các k h u ẩn lạc mọc lên tr ê n bề m ặ t môi trường đặc H ìn h 1.1 Phương p h á p cấy ria MỘT SỐ KỸ THUẬT cơ BẦN CỦA VI SINH VẬT HỌC B ài 6 15 CÁC PHƯƠNG PHÁP GIỮ G IốN G VI SIN H VẬT Các ch ủ n g vi sin h v ậ t th u ần k h iết sau khi p h â n lập được cần p h ải... cho những quá trìn h nuôi cấy dài hơn 3 Nuôi cây vi sinh vật vi h iếu khí Vi sin h v ậ t vi hiếu khí là nhóm vi sinh vật p h á t tr iể n tố t n h ẩ t tro n g môi trường có h à m lượng CƠ 2 lớn (7-10%) và hàm lượng O2 nhỏ hơn so với tro n g khí quyển Để nuôi cấy nhóm vi sinh v ậ t n à y trong phòng th í n g h iệm hay sử dụng phương p h á p nuôi cấy vi sin h v ậ t tro n g m ột bình kín có đôt n ê n để loại... động học của quá trìn h lên m en, từ đó đề xuất các giải p h áp kỹ th u ậ t để điều k h iển quá trìn h lên m en tạo ra các sả n phẩm như ý muôn H iện n ay có r ấ t n hiều phương pháp vừa để định lượng vi sin h v ậ t trong m ẫu thực p h ẩm n h ằ m mục đích kiểm tra chỉ tiêu vi sin h sả n p hẩm , vừa để định lượng vi sin h v ậ t tro n g các canh trường lên men nhằm mục đích theo dõi sự sín h trưởng của vi