Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương 77 BÀI 8 : PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG TẠO SẢN PHẨM BẬC HAI Ở VI SINH VẬT I. Xác định khả năng sinh kháng sinh của vi sinh vật 1.1. Phân lập giống vi sinh vật - Cân 1g đất - Nghiền đất trong cối sứ - Hoà đất với 10ml nước vô khuẩn - Cho vào bình tam giác dung tích 200ml với 90ml nước vô khuẩn - Tiến hành pha loãng cho tới khi tách được từng tế bào riêng biệt. - Tách tế bào trên môi trường thạch đĩa bằng phương pháp cấy gạt - Ủ thạch đĩa ở 37 0 C trong 1-2 ngày - Khi khuẩn lạc nhỏ hình thành, phân lập và nuôi trên môi trường thạch nghiêng. - Dùng các giống đã phân lập, nuôi chúng trong môi trường lỏng ở máy lắc, nhiệt độ phòng. - Xác định hoạt tính chất kháng sinh - Xác định hoạt tính chất kháng sinh được tạo ra trong dung dịch lên men như trình bày dưới đây. 1.2. Xác định hoạt tính chất kháng sinh a/ Phương pháp kiểm tra sơ bộ (phương pháp Kolmen và Boerner) - Trên môi trường thạch đĩa , cấy vi sinh vật kiểm tra theo một đường thẳng. - Ủ trong điều kiện nhiệt độ bình thường - Sau đó cấy vi khuẩn có khả năng bị ức chế bởi kháng sinh nghiên cứu - Đem ủ ở nhiệt độ tương tự như trên - Sau 3-4 ngày, nhận xét và ghi kết quả. Nếu vi sinh vật có khả năng ức chế thì sẽ xuất hiện vùng vô khuẩn – vùng không có sự phát triển của vi sinh vật. b/ Phương pháp thỏi thạch - Nuôi cấy vi sinh vật vào thạ ch đĩa - Dùng cái đột nút cao su, ấn nhẹ lên thỏi thạch và lấy thỏi thạch ra. - Dùng kẹp vô khuẩn ấn thỏi thạch vào đĩa thạch đã nuôi vi sinh vật kiểm định và đặt thỏi thạch vào chỗ cũ. Nuôi chúng trong điều kiện phòng thí nghiệm, sau đó lấy ra đo vòng vô khuẩn xung quanh lỗ đục. c/ Phương pháp dùng ống thép không gỉ Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương 78 - Cấy vi sinh vật kiểm định vào đĩa petri với môi trường thạch dinh dưỡng theo phương pháp đổ đĩa - Khi thạch đông, dùng kẹp vô khuẩn gắp 6 ống thép không gỉ đặt nhẹ nhàng vào 6 vị trí đều nhau trên mặt thạch. Ôúng thép không gỉ có chiều caoĠ0,1mm, đường kính bên ngoài 8mm, đường kính trong 6mm. Nếu không có ống thép không gỉ có thể sử dụng ống bằng sứ hoặc thuỷ tinh. - Dùng một ống nhỏ giọt có chứa chất kháng sinh cho vào ố ng thép. - Đặt các đĩa thạch vào tủ ấm trong thời gian 3-4 giờ. - Xác định độ lớn vòng vô khuẩn. d/ Phương pháp dùng khoanh giấy lọc - Dùng giấy lọc và cắt chúng ra thành những hình tròn có đường kính 6mm - Khử trùng giấy lọc (bằng nhiệt khô) - Tẩm dung dịch chứa chất kháng sinh cần nghiên cứu - Sấy miếng giấy này ở 40 0 C trong 1 giờ. - Dùng kẹp vô trùng đặt miếng giấy này vào đĩa petri đã nuôi sẵn vi sinh vật kiểm định sao cho những miếng giấy này có một khoảng cách đều nhau. - Đặt đĩa petri có những miếng giấy trên vào tủ ấm 37 0 C trong thời gian 16- 18 giờ. - Lấy ra đo vòng vô khuẩn. . Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương 77 BÀI 8 : PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG TẠO SẢN PHẨM BẬC HAI Ở VI SINH VẬT I. Xác định khả năng sinh kháng sinh của vi sinh vật 1.1 bình thường - Sau đó cấy vi khuẩn có khả năng bị ức chế bởi kháng sinh nghiên cứu - Đem ủ ở nhiệt độ tương tự như trên - Sau 3-4 ngày, nhận xét và ghi kết quả. Nếu vi sinh vật có khả năng ức chế. ống thép không gỉ Thí nghiệm vi sinh vật học ThS.Lê Xuân Phương 78 - Cấy vi sinh vật kiểm định vào đĩa petri với môi trường thạch dinh dưỡng theo phương pháp đổ đĩa - Khi thạch đông, dùng