Thử nghiệm nuôi cấy nấm men rhodotorula sp trong môi trường lỏng, trích ly β carotenoid từ sinh khối nấm men rhodotorula sp bằng dầu thực vật

V ng T KHOA HO HC & CễNG NGH THC PHM u TRNG I HC B RA-VNG TU a- INH TH BCH PHNG R TH NGHIM NUễI CY NM MEN RHODOTORULA SP TRONG MễI TRNG LNG, TRCH LY -CAROTENOID T SINH KHI B NM MEN RHODOTORULA SP BNG DU THC VT H TI KHOA HC Tr ng Ngnh CễNG NGH THC PHM Ngi hng dn CN PHM TH HU HNH Vng Tu, Nm 2012 T u LI M U ỏp ng nhu cu dinh dng ngy cng cao ca xó hi, ngnh Cụng ngh thc phm luụn n lc tỡm nhng ngun dng cht mi cú li vi c th ngi Do ú, V ng Cụng ngh thc phm ó tr thnh mt ngnh quan trng bi tớnh thit thc m nú em li S phỏt trin ngnh Cụng ngh thc phm cng kộo theo s phỏt trin ca ngnh sinh hc, mụi trng, y dc Carotenoid l tin sc t ca Vitamin A, Vitamin A cú vai trũ quan trng i vi sc khe ca ngi v vt nuụi Nhng khỏc vi thc vt, ngi v vt nuụi a- khụng th t tng hp c ngun sc t ny m phi c a vo bng ng thc n Do ú vic b sung carotenoid t thiờn nhiờn l rt cn thit R Trong cỏc ngun carotenoid c sn xut hin nay, carotenoid cú ngun gc t vi sinh vt c quan tõm hng u bi hiu qu kinh t m nú em li Trong s ú, cỏc nh khoa hc ó chng minh sinh nm men Rhodotorula sp cú cha carotenoid khỏ B cao, ngoi cũn cú th thu nhn c thờm protein, lipid ỏng k Nhm mc ớch kho sỏt, ỏnh giỏ kh nng thớch nghi ca nm men Rhodotorula sp mụi trng lng, kh nng thu nhn -carotenoid t sinh nm men H Rhodotorula sp nờn chỳng tụi tin hnh nghiờn cu ti Th nghim nuụi cy nm men Rhodotorula sp mụi trng lng, trớch ly -carotenoid t sinh nm men Rhodotorula sp bng du thc võt c t cỏc nhim v c th sau: - Nghiờn cu mụi trng thớch hp nuụi cy nm men Rhodotorula sp t ng c hiu sut cao - Nghiờn cu dung mụi trớch ly -carotenoid t nm men Rhodotorula sp Tr t hiu sut cao m khụng nh hng n tớnh cht ca -carotenoid T u LI CM N hon thnh ti nghiờn cu khoa hc ny, em xin chõn thnh cm n s h tr cu v phỏt trin ti V ng kinh phớ ca Ban giỏm hiu trng i hc B Ra-Vng Tu giỳp em cú iu kin nghiờn Em cng xin cm n Ban lónh o Khoa, quý Thy, Cụ ging dy ó quan tõm, giỳp , c cho em nhng kin thc chuyờn mụn Em xin chõn thnh cm n cụ Phm Th Hu Hnh ó to iu kin giỳp v nh hng cho em quỏ trỡnh tỡm hiu ti liu v hon thnh bi bỏo cỏo ny a- Em cng xin gi li cm n chõn thnh n thy Nguyn Minh Nht qun lớ phũng quỏ trỡnh thc hin ti R thớ nghim ca khoa Húa hc v Cụng ngh thc phm ó h tr, giỳp em rt nhiu Tuy nhiờn, quỏ trỡnh lm ti v hon thnh bỏo cỏo em khụng trỏnh nhng sai sút v khuyt im, kớnh mong s gúp ý ca quý thy cụ em hon thin B mỡnh hn Tr ng H Em xin chõn thnh cm n ., ngy thỏng nm 2012 Sinh viờn thc hin CNG HềA X HI CH NGHA VIT NAM c lp T Hnh phỳc o0o V ng NHIM V TI KHOA HC T KHOA HểA HC & CNTP u TRNG H B RA VNG TU H v tờn sinh viờn: inh Th Bớch Phng MSSV: 0852020075 Ngy, thỏng, nm sinh: 02/07/1987 Ni sinh: ng Thỏp Ngnh: Cụng ngh thc phm TấN TI: Th nghim nuụi cy nm men Rhodotorola sp mụi trng a- lng, trớch ly -carotenoid t sinh nm men Rhodotorula sp bng du thc vt NHIM V V NI DUNG: R Nghiờn cu mụi trng thớch hp nuụi cy nm men Rhodotorula sp t c hiu sut cao Nghiờn cu dung mụi trớch ly -carotenoid t nm men Rhodotorula sp t B hiu sut cao m khụng nh hng n tớnh cht ca -carotenoid NGY GIAO NHIM V N: 30/02/2012 NGY HON THNH NHIM V: 30/05/2012 B Ra Vng Tu, Ngy thỏng nm2012 SINH VIấN THC HIN (Ký v ghi rừ h tờn) (Ký v ghi rừ h tờn) TRNG B MễN TRNG KHOA Tr CN B HNG DN ng H H TấN CN B HNG DN: CN Phm Th Hu Hnh (Ký v ghi rừ h tờn) (Ký v ghi rừ h tờn) ng Tr H B R a- V ng u T u MC LC V ng T Nhim v ỏn Li m u Li cm n Mc lc Danh mc cỏc bng Danh mc s v hỡnh Danh mc cỏc ch vit tt Tr ng H B R a- CHNG I: TNG QUAN TI LIU 1.1 N m men Rhodotorula sp 1.1.1 Ph õn loi 1.1.2 c im hỡnh thỏi 1.1.3 c dim sinh lý 1.1.4 c im sinh húa 1.1.5 Kh nng sinh tng hp carotenoid ca Rhodotorula sp 1.2 c tớnh carotenoid 1.3 Cỏ c lý thuyt c bn 1.3.1 Trớ ch ly 1.3.1.1 Cỏc yu t nh hng ti quỏ trỡnh trớch ly 1.3.1.2 iu kin chn dung mụi 1.3.2 S y 1.3.3 Ly tõm 1.4 Cỏ c yu t nh hng n quỏ trỡnh nuụi cy nm men Rhodotorula sp 10 1.4.1 n h hng ca ngun ging 10 Tr ng H B R a- V ng T u 1.4.2 n h hng ca iu kin nuụi cy 10 CHNG II: VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 12 2.1 i tng nghiờn cu 12 2.1.1 i tng nghiờn cu 12 2.1.2 Dng c v húa cht 12 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 13 2.2.1 S nuụi cy nm men mụi trng lng 13 2.2.2 Thuyt minh quy trỡnh 13 2.2.2.1 Nm men Rhodotorula sp 13 2.2.2.2 Tng sinh 14 2.2.2.3 Chun b mụi trng 14 2.2.2.4 Hp 14 2.2.2.5 Cy ging 14 2.2.2.6 Sc Khớ 14 2.2.2.7 Ly tõm 14 2.2.2.8 Thu sinh nm men Rhodotorula sp 14 2.3 Ni dung thớ nghim 14 2.3.1 Thớ nghim Kho sỏt nh hng ca t l cy ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT1 15 2.3.2 Thớ nghim Kho sỏt nh hng ca t l cy ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT2 15 2.3.3 Thớ nghim Kho sỏt nh hng ca t l cy ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT3 16 2.3.4 Thớ nghim Kho sỏt lng sinh thu c ca nm men Rhodotorula sp c mụi trng 17 2.4 S quy trỡnh trớch ly -carotenoid 17 2.5 Thuyt minh quy tỡnh 18 2.5.1 Nguyờn liu 18 2.5.2 Sy 18 2.5.3 Trớch ly 18 2.5.4 Dch trớch 18 2.5.5 Ly tõm 18 2.6 Ni dung thớ nghim 18 2.6.1 Thớ nghim Kho sỏt t l dung mụi: mu, nhit v thi gian nh hng n quỏ trỡnh trớch ly ca dung mụi du u nnh tinh luyn 18 2.6.2 Thớ nghim Kho sỏt t l dung mụi: mu, nhit v thi gian nh hng n quỏ trỡnh trớch ly ca dung mụi du hng dng tinh luyn 19 CHNG III: KT QU V THO LUN 21 Tr ng H B R a- V ng T u 3.1.Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT1 21 3.2 Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT2 22 3.3 Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n s lng t bo ca nm men MT3 23 3.4 Thu nhn sinh nm men trờn cỏc mụi trng lng 25 3.5 Xỏc nh t l dung mụi: mu thớch hp cho quỏ tỡnh trớch ly -carotenoid 27 3.6 Xỏc nh thi gian v nhit thớch hp cho quỏ trỡnh trớch ly -carotenoid 29 3.6.1 Dung mụi du nnh 29 3.6.2 Dung mụi du hng dng 30 CHNG IV: KT LUN V NGH 31 4.1 Kt lun 31 4.2 ngh 34 TI LIU THAM KHO PH LC PH LC T u TểM LC ti Th nghim nuụi cy nm men Rhodotorula sp mụi trng lng, trớch ly -carotenoid t sinh nm men Rhodotorula sp bng du thc vt c V ng tin hnh v thu thp s liu ti phũng thớ nghim khoa Húa hc v Cụng ngh thc phm, trng i hc B Ra Vng Tu Vi mc ớch l kho sỏt cỏc sau: Quỏ trỡnh nuụi: Kho sỏt nh hng ca t l ging: 10%,15%, 20% v thi gian nuụi 24 gi, 36 gi, 48 gi, 60 gi, 72 gi, 78 gi, 84 gi n lng t bo ca nm men MT1, MT2, MT3 a- Kt qu cho lng t bo tt nht t l ging 15%, thi gian nuụi 72 gi vi c MT1, MT2, MT3 R Quỏ trỡnh trớch ly: Kho sỏt quỏ trỡnh trớch ly bng dung mụi du nnh v du hng dng tinh luyn: - T l dung mụi: mu l: 9:1, 10:1, 11:1 B - Kho sỏt Nhit l 70C, 80C, 90C - Thi gian trớch ly 90 phỳt, 120 phỳt 150 phỳt, 180 phỳt Kt qu thu hi -carotenoid tt nht c loi dung mụi l t l 10:1, nhit H 80C vi thi gian l 120 phỳt T nhng yu t trờn mc ớch cui cựng l nghiờn cu mụi trng thớch hp nuụi cy nm men Rhodotorula sp., nghiờn cu dung mụi trớch ly -carotenoid t nm men Rhodotorula sp t hiu sut cao m khụng nh hng n tớnh cht ca - Tr ng carotenoid T u DANH MC CC BNG Bng 1.1 Gii hn nhit ca mt s loi Rhodotorula sp Bng 1.2 Kh nng ng húa carbon ca Rhodotorula sp V ng Bng 1.3 Cỏc nghiờn cu v kh nng tng hp carotenoid v CR ca nm men Rhodotorula sp theo phng phỏp nuụi cy chỡm Bng 1.4 Sc t carotenoid Rho glutinis DBVPG 3853 tng hp c sau 120 gi trờn mụi trng nc ộp nho cỏc nhit khỏc 10 Bng 3.1 S lng t bo Rhodotorula sp thu c cỏc thi gian khỏc ca MT1 21 a- Bng 3.2 S lng t bo Rhodotorula sp thu c cỏc thi gian khỏc ca MT2 22 R Bng 3.3 S lng t bo Rhodotorula sp thu c cỏc thi gian khỏc ca MT3 23 Bng 3.4 Lng sinh nm men Rhodotorula sp trờn cỏc mụi trng lng 26 B Bng 3.5 Hm lng CR thu c ca du nnh 27 Tr ng H Bng 3.6 Hm lng CR thu c ca du hng dng 27 ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT Dung dch sau trớch ly s c tin hnh o OD u V c tớnh theo cụng thc ca phng phỏp o quang cú c kt qu sau T cựng (phn ph lc 1) Lu ý: ta tin hnh trớch ly b iu nhit Tr ng H B R a- V ng Ghi nhn kt qu: Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 20 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT u CHNG KT QU V THO LUN T 3.1 Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n lng t bo ca nm men MT1 Bng 3.1 S lng t bo Rhodotorula sp.thu c cỏc thi gian khỏc ca MT1 V ng (CFU/ml) T l ging i vi mụi trng nuụi cy Thi gian 10% 15% 20% 24h 0,0044.1015 0,0862.1015 0,059.1015 36h 0,08225.1015 0,1727.1015 48h 9,98.1015 17,6.1015 60h 19,97.1015 35,2.1015 26,73.1015 72h 69,3.1015 162,5.1015 82,4.1015 78h 34,7.1015 81,25.1015 41,2.1015 84h 0,0376.1015 0,09.1015 0,0455.1015 0,118.1015 B R a- 13,4.1015 H 180 160 140 120 100 80 60 40 20 Tr 10% 15% ng S lng t bo nm men (ì 105 CFU/ml) Mụi trng 20% 20 40 60 80 100 Thi gian (gi) Biu ng cong sinh trng ca nm men Rhodotorula sp mụi trng Da vo bng 3.1 v biu 1, chỳng tụi nhn thy rng MT1 t l 10% s lng t bo cao nht l 72 gi (69,3.1015 CFU/ml), 15% s lng t bo cao nht l 72 gi Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 21 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT (162,5.1015 CFU/ml) v 20% t bo cao nht 72 gi (82,4.1015 CFU/ml) S lng t u bo nm men thp nht ca c t l l 24h T Khi t l nm men 10% thỡ thi gian nm men phỏt trin cc i s di hn so vi t l ging cao Nhng lng nm men thp nờn kt thỳc quỏ trỡnh nuụi thỡ lng dinh dng mụi trng cũn cha c tn thu trit Cũn chn t l V ng 20% thỡ t l quỏ cao lm cho quỏ trỡnh sinh trng ca nm men mụi trng s rt mnh nờn thi gian sinh trng ca nm men s b rỳt ngn li (tc l rỳt ngn pha log), iu ny cú nh hng khụng tt n quỏ trỡnh hỡnh thnh sc t CR Chớnh vỡ vy m ta thy vi t l 15% l t l va nm men hp thu ht dng cht mụi trng m thi gian hỡnh thnh CR cng va a- 3.2 Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n lng t bo ca nm men MT2 Bng 3.2 S lng t bo Rhodotorula sp thu c cỏc thi gian khỏc ca MT2 R (CFU/ml) T l ging i vi mụi trng nuụi cy Thigian 10% 15% 20% 0,00567.1015 0,0532.1015 0,0169.1015 36h 0,1135.1015 0.106.1015 0,0339.1015 48h 9,9.1015 12,6.1015 11,8.1015 60h 19,8.1015 75,3.1015 23,5.1015 16,8.1015 107.1015 76.1015 8,42.1015 53,5.1015 34,8.1015 0,00925.1015 0,0593.1015 0,0384.1015 78h Tr ng 84h H 72h B 24h Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 22 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT u 120 T 100 80 60 10% 40 15% 20 V ng S lng t bo nm men (ì 105 CFU/ml) Mụi trng 20% 0 20 40 60 Thi gian (gi) 80 100 a- Biu ng cong sinh trng ca nm men Rhodotorula sp mụi trng Da vo bng 3.2 v biu 2, chỳng tụi nhn thy rng MT2 cú s lng t bo nm men cao nht l 60h i vi t l ging 10% (19,8.1015 CFU/ml), cũn 72 gi 15% R (107.1015 CFU/ml) v 20% (76.1015CFU/ml) MT2 s phỏt trin ca nm men t l khụng ng u T l 10 % khụng n B nh t l ny phỏt trin nhanh 60 gi nhng li gim nhanh yu t ny cú th l thnh phn mụi trng, mụi trng cú ng glucose m ng glucose c nm men hp th trc tip nờn thi gian phỏt trin s nhanh hn H 3.3 Xỏc nh t l ging, thi gian nuụi n lng t bo ca nm men MT3 Bng 3.3 S lng t bo Rhodotorula sp.thu c cỏc thi gian khỏc ca MT3 (CFU/ml) ng Thi Tr gian T l ging i vi mụi trng nuụi cy 10% 15% 20% 24h 0,0227.1015 0,0268.1015 0,0214.1015 36h 0,045.1015 0,0536.1015 0,0428.1015 48h 9,67.1015 22,5.1015 7,5.1015 60h 37,7.1015 78,3.1015 29,6.1015 72h 51,1.1015 104.1015 59,3.1015 Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 23 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm Trng HBRVT 11,7.1015 47,7.1015 31,3.1015 84h 0,0272.1015 0,0449.1015 0,0239.1015 T 78h V ng Mụi trng 120 100 80 60 10% 40 15% 20 20 40 60 a- 20% 80 100 Thi gian (gi) R S lng t bo nm men (ì 10 CFU/ml) u ti nghiờn cu khoa hc Biu ng cong sinh trng ca nm men Rhodotorula sp mụi trng B Da vo bng 3.3 v biu 3, chỳng tụi nhn thy rng MT3 cú s lng t bo nm men cao nht l 72h vi t l ging 10% (51,1.1015 CFU/ml), 15% (104.1015 CFU/ml) v 20% (59,3.1015CFU/ml) H Trong t l ging thỡ t l 15% l cho lng t bo nm men cao nht Tuy cựng iu kin nuụi cy, thnh phn mụi trng v thi gian nuụi nhng t l 15% thỡ giai on phỏt trin din t t khụng nhanh nhng cng khụng quỏ chm chớnh iu ny rt Tr ng cú li cho quỏ trỡnh sinh tng hp sc t CR Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 24 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm Trng HBRVT V ng T u ti nghiờn cu khoa hc a- Biu So sỏnh ng cong sinh trng ca nm men Rhodotorula sp mụi trng R vi iu kin tt nht Da vo bng 3.1, 3.2, 3.3 v biu 4, c mụi trng u t l 15% thỡ khong thi gian thu c lng t bo nm men l 72 gi MT1 l 1,625.1017 CFU/ml, B MT2 l 1,07.1017, MT3 l 1,04.1017 Mụi trng cho lng t bo cao nht So sỏnh gia MT1 v MT2 ta thy rng MT1 lng nm men nhiu hn vỡ c cht chớnh MT1 l saccharose m nm men phi qua quỏ trỡnh thy phõn saccharose mi H s dng c lỳc ny nm men s hp th t t dn n quỏ tỡnh phỏt trin chm s kộo di pha log giỳp lng sinh s tng lờn Trong c cht MT2 l glucose s c hp th trc tip nú s giỳp nm men phỏt trin tt nhng chớnh vỡ phỏt trin tt nú s rỳt ngn pha log m iu ny li khụng tt cho quỏ trỡnh hỡnh thnh sc t CR vỡ chớnh t ng bo nm men s c ch ln mụi trng khụng cũn cht dinh dng Cũn gia MT1 v MT3 mt dự ging v thnh phn v c cht chớnh l saccharose nhng ch cú iu MT3 li thiu vi khoỏng hn MT1 M c th l thiu MgSO4.7H2O khoỏng cht ny tham gia vo cỏc phn ng sinh húa t bo nm men 3.4 Thu nhn sinh Rhodotorula sp trờn cỏc mụi trng lng Tr Kt qu c ghi nhn bng 3.4 Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 25 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT Bng 3.4 Lng sinh Rhodotorula sp trờn cỏc mụi trng lng Lng sinh u Mụi trng lng 19,56 MT2 17,85 MT3 14,17 V ng MT1 T Rhodotorula sp (g/l) T bng 3.4 ta cú c biu biu din lng sinh Rhodotorula sp trờn H B R a- cỏc mụi trng lng Biu Lng sinh Rhodotorula sp trờn cỏc mụi trng lng ng Qua bng 3.4 v biu 5, chỳng tụi nhn thy mụi trng lng cho lng sinh tt: MT1 thu c 19,56 g/lớt, MT2 thu c 17,85 g/lớt, MT3 thu c 14,17 g/lớt Da vo kt qu bng 3.4 chng t c mụi trng u cú th lm mụi trng nhõn sinh Rhodotorula sp Tuy nhiờn, mụi trng cho lng sinh ln nht Tr (19,56 g/l), iu ny cỏc thnh phn mụi trng y dng cht cn thit v iu c bn l c cht Saccharose d dng ng húa, to iu kin cho nm men Rhodotorula sp sinh trng v phỏt trin nhanh chúng Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 26 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT 3.5 Xỏc nh t l dung mụi: mu thớch hp cho quỏ trỡnh trớch ly -carotene u Kt qu trớch ly CR bng du nnh c th hin bng 3.5 v du hng Bng 3.5 Hm lng CR thu c ca du u nnh (àg/g) (C) DM:Mu 90C 120 phỳt 150 phỳt 180 phỳt 9:1 97,7 0,1 101,73 0,34 94,45 0,71 93,15 0,34 10:1 98,1 0,1 103,47 0,61 100,73 0,06 96,65 0,02 11:1 96,35 0,3 101,1 0,36 96,51 0,26 92,71 0,06 9:1 97,09 0,12 109,43 0,29 99,83 0,3 96,37 0,33 10:1 105,13 0,4 119,6 1,2 105,17 0,39 98,9 0,35 11:1 100,1 0,11 106,71 0,3 98, 78 0,16 94, 53 0,36 9:1 101,7 0,6 101,49 0,4 96,26 0,23 92,87 0,37 10:1 110,27 0,23 103,05 0,17 97,71 0,31 94,09 0,8 11:1 106,01 0,5 103,82 0,19 95,28 0,44 92,41 0,63 a- 80C 90 phỳt R 70C Thi gian (phỳt) V ng T l B Nhit T dng bng 3.6 Bng 3.6 Hm lng CR thu c ca du hng dng (àg/g) T l DM:Mu 90 phỳt 120 phỳt 9:1 104,19 0,01 107,25 0,06 104,54 0,6 97,5 0,45 10:1 107,34 0,07 109,28 0,1 115,98 0,25 100,78 0,51 11:1 101,88 0,01 105,97 0,03 101,86 0,4 96,46 0,8 9:1 104,15 0,5 110,44 0,02 107,5 0,21 98,5 0,05 10:1 108,2 0.05 123,54 0,01 115,2 0,1 108,23 0,18 11:1 106,9 0,05 111,94 0,5 107,89 0,6 101,19 0,65 9:1 106,07 0,02 110,38 0,4 102,13 0,49 97,02 0,24 10:1 109,08 0,01 113,96 0,5 106,88 0,7 99,57 0,96 11:1 107,65 0,1 109,19 0,08 101,66 0,01 96,17 0,3 ng 70C H Nhit Tr 80C 90C Ngnh Cụng ngh thc phm Thi gian Trang 27 150 phỳt 180 phỳt Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm Trng HBRVT u ti nghiờn cu khoa hc T 120 115 110 V ng Hm lng CR (g/g) 125 Du N Du HD 105 100 95 9:01 10:01 11:01 a- T l dung mụi:mu Biu Biu biu din s nh hng ca t l dung mụi: mu n hiu sut thu hi CR R bng du nnh v du hng dng Da vo bng 3.5, bng 3.6 v biu cho thy: du u nnh thu hi CR cao B nht t l 10:1 (119,6àg/g), k n l t l 9:1 (109,43 àg/g) v cui cựng l t l 11:1 (106,71 àg/g) Cũn i vi du hng dng thỡ t l cao nht l 10:1 (123,54 àg/g), tip theo l t l 11:1 (111,94 àg/g) v cui cựng l 9:1 (110,44 àg/g) H Ta thy rng t l dung mụi: mu tng t 9:1 n 10:1 thỡ hiu sut thu hi CR tng Do t l dung mụi thp thỡ lng dung mụi khụng ngp hũa tan hon ton carotenoid nguyờn liu nờn hiu s trớch ly thp Nhng lng dung mụi va trớch ly thỡ s thu c ton b CR sinh nm men Tip tc tng t l dung ng mụi: mu thỡ hiu sut thu hi -carotenoid gim xung lng dung mụi nhiu s lm cho dch trớch loóng nờn hiu sut thu hi thp Mu tt nht ca du u nnh v du hng dng c chn gi i phõn tớch ti Tr trung tõm phõn tớch Húa sinh Case (phn mc lc 1) Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 28 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT 3.6 Xỏc nh thi gian v nhit thớch hp cho quỏ trỡnh trớch ly CR a- V ng T u 3.6.1 Dung mụi du nnh Biu Biu biu din s nh hng ca thi gian v nhit n hiu sut thu hi CR R ca dung mụi du u nnh Da vo bng 3.5 v biu cho ta thy hiu sut thu hi cao nht 70C vi B 120 phỳt (103,47 àg/g), 80C vi 120 phỳt (119,6 àg/g), 90C vi 90 phỳt (110,27àg/g) Khi t l dung mụi: mu l 10:1 thỡ nhit khỏc nhau, thi gian khỏc s cho hiu sut thu hi CR cng khỏc Khi nhit tng t 70C n 80C thỡ nng H v hiu sut CR tng nhit cao lm tng hũa tan -carotenoid t nguyờn liu vo dung mụi, lm gim nht nờn tng h s khuyt tỏn v tng tc quỏ trỡnh trớch ly Tuy nhiờn, vi sn phm cú nhiu ni ụi nh -carotenoid thỡ nhit tng lờn ng 90C thỡ hiu sut thu hi -carotenoid gim nhanh vỡ nhit cng thờm s kộo di ca thi gian l tỏc nhõn thỳc y quỏ trỡnh oxy húa hp cht -carotenoid, ú lm gim Tr hiu sut thu hi -carotenoid Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 29 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT u 3.6.2 Dung mụi du hng dng T Du Hng Dng 125 120 115 V ng Hm lng CR (g/g) 130 110 70C 105 80C 100 90C 95 90 150 180 120 90 a- Thi gian (phỳt) Biu Biu biu din s nh hng ca thi gian v nhit n hiu sut thu hi CR R ca dung mụi du hng dng Da vo bng 3.6 v biu cho ta thy hiu sut thu hi cao nht 70C vi B 150 phỳt (115,98 àg/g), 80C vi 120 phỳt (123,54 àg/g), 90C vi 120 phỳt (113,96 àg/g) Khi t l dung mụi: mu l 10:1 thỡ nhit khỏc nhau, thi gian khỏc s H cho hiu sut thu hi CR cng khỏc Khi nhit tng t 70C n 80C thỡ nng v hiu sut CR tng nhit cao lm tng hũa tan -carotenoid t nguyờn liu vo dung mụi, lm gim nht nờn tng h s khuyt tỏn v tng tc quỏ trỡnh trớch ly Khi nhit cng thp thỡ thi gian trớch ly cng di Nhit cao thỡ thi gian trớch ly ng s rỳt ngn li Tuy nhiờn, vi sn phm cú nhiu ni ụi nh -carotenoid thỡ nhit tng lờn 90C thỡ hiu sut thu hi -carotenoid gim nhanh vỡ nhit cng thờm s kộo di ca thi gian l tỏc nhõn thỳc y quỏ trỡnh oxy húa hp cht -carotenoid, ú lm Tr gim hiu sut thu hi -carotenoid Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 30 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT u CHNG KT LUN V NGH T 4.1 Kt lun T kt qu nghiờn cu thc t, chỳng tụi rỳt mt s kt lun nh sau: MT 1: + Lng sinh khụ: 19,56 g/l + S lng t bo 72h: 1,625 ì 1017 CFU/ml MT 2: + Lng sinh khụ: 17,85 g/l a- + S lng t bo 72h: 1,07 ì 1017CFU/ml V ng Giai on nuụi cy: MT 3: + Lng sinh khụ: 14,17 g/l R + S lng t bo 72h: 1,04 ì 1017 CFU/ml C mụi trng cựng cú t l ging t mt t bo cao nht l 15% vỡ vi lng B ging phự hp giỳp cho t bo mụi trng phỏt trin tt m khụng s lng ging quỏ nhiu hoc quỏ ớt m bo vi lng dng cht mụi trng Trong cựng iu kin nuụi cy thỡ mụi trng cho t bo nm men cao nht H (162,5.1015CFU/ml) so vi mụi trng v Thi gian nuụi s lng t bo t giỏ tr cc i l 72h Trong giai on u ca quỏ trỡnh nuụi thỡ lng t bo tng nhanh Nhng nuụi c 72h thỡ lng t bo li gim xung ng Hm lng dinh dng ca mụi trng nuụi cy nh hng ln n quỏ trỡnh sinh trng v phỏt trin ca nm men Trong quỏ trỡnh nuụi phi m bo cỏc iu kin cn thit v cn trỏnh s lõy Tr nhim cỏc vi sinh vt t bờn ngoi Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 31 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT Mụi trng T Nm men Rhodotorula sp u S nuụi cy chớnh thc ca nm men Rhodotorula sp mụi trng lng l: Hp V ng Nhõn ging Cy ging (15%) a- Sc khớ (72h) 3000vũng/phỳt(15ữ20phỳt) R Ly tõm Thu sinh nm men Rhodotorula sp B S 4.1: S nuụi cy chớnh ca nm men mụi trng lng Giai on trớch ly: - Khi trớch ly CR bng cỏc loi dung mụi khỏc thỡ thụng s cho quỏ trỡnh trớch ly l khỏc H i vi dung mụi l du u nnh thụng s thớch hp cho quỏ trỡnh trớch ly CR - nh sau: t l dung mụi: mu l 10:1, nhit 80C v thi gian 120 phỳt (119,6 g/g) hoc t l 10:1 nhit 90C vũng 90 phỳt (110,27 g/g) i vi dung mụi l du hng dng thụng s thớch hp cho quỏ trỡnh trớch ly ng - CR nh sau: t l dung mụi: mu l 10:1, nhit 80C v thi gian 120 phỳt (123,54 g/g) hoc t l 9:1 nhit 70C vũng 150 phỳt (115,98g/g) Da vo biu ta thy rng hiu sut trớch ly ca du hng dng cao hn du - nnh cỏc t l dung mụi: mu 9:1, 10:1, 11:1 iu ny chng t rng dung mụi du Tr hng dng tt hn dung mụi du nnh i vi quỏ trỡnh trớch ly CR t nm men Rhodotorula sp Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 32 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT Hiu sut thu hi CR khụng nhng ph thuc vo t l dung mụi: mu m cũn - u ph thuc vo thi gian v nhit trớch ly Khi tng nhit v thi gian chit thỡ hiu T sut thu hi tng nhiờn tng nhit quỏ cao thỡ hm lng CR gim vỡ CR b phõn hy nhanh nhit cao Hiu sut ca quỏ trỡnh trớch ly CR t sinh nm men Rhodotorula sp bng - V ng dung mụi du thc vt cú s tng tỏc qua li gia t l dung mụi: mu, thi gian v nhit trớch ly Khi thi gian trớch ly cng tng thỡ cỏc phõn t CR khuyt tỏn cng nhiu vỡ th - hiu sut trớch ly s tng Khi nhit v thi gian tng n mt giỏ tr nht nh thỡ sau ú nu tip tc tng - a- thỡ hm lng CR s gim chỳng b phỏ hy nhit cao Ngoi nhng yu t trờn, hiu sut ca quỏ trỡnh chit CR cũn ph thuc vo bn - Quy trỡnh trớch ly xut nh sau: B Nguyờn liu R cht ca dung mụi trớch ly Sy ( m 6%) H Trớch ly T l DM: Mu l 10:1 Thi gian: 120 phỳt Tr ng Dch trớch Ly tõm -Carotenoid -Carotenoid du du S 4.2: S chớnh ca quỏ trỡnh trớch ly -carotenoid Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 33 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm ti nghiờn cu khoa hc Trng HBRVT 4.2 ngh: u Thụng qua kt qu nghiờn cu thc t ca ti bc u ó thu c nhng kt T qu tt õy cú th l mt tin nghiờn cu cú ớch cho cỏc bn sinh viờn khúa sau cú nhu cu tỡm hiu, nghiờn cu ti ngy mt sõu rng hn Di õy, l mt s hng cú th nghiờn cu v phỏt trin ca ti: Nghiờn cu s dng Rhodotorula sp lm cht mu b sung trc tip hay giỏn tip V ng - vo thc phm v dc phm cho ngi Kho sỏt nh hng cỏc loi dung mụi khỏc n hiu sut trớch ly carotenoid - t sinh nm men Rhodotorula sp - So sỏnh hiu sut khỏc (trớch ly carotenoid bng cỏch s dng enzyme thy phõn a- hoc phng phỏp HPLC) Cn nghiờn cu ti u húa cỏc thụng s cho quỏ trỡnh trớch ly -carotenoid tỡm - thụng s ti u cho quỏ trỡnh ny Nghiờn cu cỏc thụng s k thut cn thit v thit b sn xut theo quy mụ ln R - Tr ng H B a sn phm t phũng thớ nghim vo sn xut cụng nghip Ngnh Cụng ngh thc phm Trang 34 Khoa Húa hc Cụng Ngh thc phm [...]... Sơ đồ nuôi cấy nấm men ở môi trường lỏng 13 Vũ ng Sơ đồ 2.2 Sơ đồ trích ly βCR 17 Sơ đồ 4.1 Sơ đồ nuôi cấy chính của nấm men ở môi trường lỏng 32 Sơ đồ 4.2 Sơ đồ chính của quá trình trích ly βCR 33 Biểu đồ Biểu đồ 1 Đường cong sinh trưởng của nấm men Rhodotorula sp ở MT1 21 a- Biểu đồ 2 Đường cong sinh trưởng của nấm men Rhodotorula sp ở MT2 23 Biểu đồ 3 Đường cong sinh. .. Hỉnh i.5 Nuôi nấm men Rhodotorula sp trong các môi trường lỏng u Hình i.6 Môi trường lỏng chứa nấm men sau thời gian nuôi 72 giờ Hình i.8 Sinh khối sau khi sấy Hình i.9 : Mẫu dầu hướng dương chứa βCR sau khi trích ly Tr ườ ng ĐH Bà Rị a- Vũ ng Hình i.10 : Mẫu dầu hướng dương chứa βCR sau khi trích ly Tà Hình i.7 Sinh khối sau khi ly tâm DM : dung môi Dầu HD : dầu hướng dương Dầu ĐN : dầu đậu nành NĐT... 1.3.1 Trích ly: Trích ly là quá trình hòa tan chọn lọc một hay nhiều cấu tử có trong mẫu nguyên liệu bằng cách cho nguyên liệu tiếp xúc với dung môi Động lực của quá trình trích ly là a- sự chênh lệch nồng độ của cấu tử ở trong dung môi Đây là quá trình truyền khối Quá trình trích ly β- carotenoid từ nấm men Rhodotorula sp. sẽ được sử dụng dung môi là dầu thực vật không làm ảnh hưởng đến hoạt tính của β- carotenoid. .. inositol, đây là nét đặc trưng cơ bản nhất của Rhodotorula Bà Rị - sp khác với các giống nấm men Cryptococus, Candida Khả năng sinh tổng hợp sắc tố β- carotenoid - Có khả năng tích lũy lipid từ 40-80% sinh khối khô ĐH - Giống nấm men Rhodotorula sp còn được gọi là vi sinh vật sắc tố carotenoid (carotengensis) Các sắc tố carotenoid chính trong nấm men Rhodotorula sp là: β- ng carotene, torulahodin và torulene... về khả năng sinh tổng hợp sắc tố carotenoid trên từ nhiều các nguồn cơ chất khác nhau với các phương pháp nuôi cấy khác nhau như: nuôi cấy gián đoạn, bán liên tục, lên men dịch thể, lên men ườ bán rắn,… chỉ từ giống Rhodotorula sp hay nuôi cấy kết hợp với một chủng vi sinh vật khác như: nấm men, nấm mốc, vi khuẩn Tr Khả năng đồng hóa các hợp chất carbon của Rhodotorula sp được trình bày trong bảng 1.2... Hình i.7: Sinh khối sau khi ly tâm Hình i.8: Sinh khối sau khi sấy u Tà Hình i.10 : Mẫu dầu hướng dương chứa βCR sau khi trích ly Tr ườ ng ĐH Bà Rị a- βCR sau khi trích ly Vũ ng Hình i.9: Mẫu dầu hướng dương chứa Đề tài nghiên cứu khoa học Trường ĐHBRVT 1.1 Nấm men Rhodotorula sp. : [3, 6, 7] 1.1.1 Phân loại : Fungi Ngành Basidiomycota Lớp Urediniomycetes Bộ Sporidiales Họ Sporidiobolaceae Giống Rhodotorula. .. Đường cong sinh trưởng của nấm men Rhodotorula sp ở MT3 24 Rị Biểu đồ 4 So sánh 3 đường cong sinh trưởng của nấm men Rhodotorula sp ở cả 3 môi trường đối với điều kiện tốt nhất 25 Biểu đồ 5 Lượng sinh khối Rhodotorula sp trên các môi trường lỏng 26 Bà Biểu đồ 6 Biểu đồ biểu diễn sự ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi: mẫu đến hiệu suất thu hồi βCR bang dầu nành và dầu hướng dương 28... dung môi tương ứng: dầu đậu nành và dầu hướng dương) u Tà Vũ ng aRị Bà PHỤ LỤC 2  Tr ườ ng ĐH Thiết bị sử dụng trong thí nghiệm: u Tà Vũ ng Hình i.2: Máy ly tâm ĐH Bà Rị a- Hình i.1:Máy lắc ngang Thành phẩm: Tr ườ  ng Hình i.3: Bể điều nhiệt Hình i.4: Máy đo quang u Tà Vũ ng Hình i.5: Nuôi nấm men Rhodotorula sp Hình i.6: Môi trường lỏng chứa nấm men sau thời gian nuôi 72h ĐH Bà Rị a- trong môi trường. .. 1 1 Các môi trường lỏng nghiên cứu: [3]  Vũ ng Nấm men Rhodotorula sp được nhân giống trong 3 môi trường lỏng 30g Cao nấm men 1g Urea 0,1g (NH4)2SO4 0,5g KH2PO4 2g Rị Saccharose a- Môi trường 1: MnSO4 0,02g ĐH CuSO4.5H2O 0,01g Bà MgSO4.7H2O 0,2g Thêm nước dừa cho đủ 1 lít, chỉnh pH 5,0 - Thêm vài giọt dầu chống bọt - Hấp khử trùng ở 121°C trong 20-30 phút ườ ng - 45g Cao nấm men 1,5g  Môi trường 2:... khoáng: nấm men rất cần các chất khoáng vì chất khoáng tham gia xúc u tác cho các phản ứng sinh học xảy ra trong tế bào Ngoài nguồn phospho, nấm men còn Tà cần các loại khoáng như Mg2+, Mn2+, Na+,… Vitamin: một số loài vi sinh vật cần được bổ sung các vitamin, cung cấp coenzyme cho các phản ứng sinh hóa trong tế bào Thường vitamin được đưa vào môi trường nuôi Vũ ng cấy dưới dạng cao nấm men hoặc nấm men