THỬ NGHIỆM NUÔI CẤY MÁU HEO TRONG BÌNH KÍN CÓ CHỨA 1,32 G MUỐI NaHCO NHẰM PHỤC VỤ CHO VIỆC NGHIÊN CỨU NHIỄM SẮC THỂ 3

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI - THÚ Y **************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP THỬ NGHIỆM NI CẤY MÁU HEO TRONG BÌNH KÍN CĨ CHỨA 1,32 G MUỐI NaHCO NHẰM PHỤC VỤ CHO VIỆC NGHIÊN CỨU NHIỄM SẮC THỂ Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ KIM THÙY Lớp: DH07TA Ngành: Chăn Ni Niên khóa: 2007 - 2011 Tháng 08/2011 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y **************** NGUYỄN THỊ KIM THÙY THỬ NGHIỆM NI CẤY MÁU HEO TRONG BÌNH KÍN CĨ CHỨA 1,32 G MUỐI NaHCO NHẰM PHỤC VỤ CHO VIỆC NGHIÊN CỨU NHIỄM SẮC THỂ Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư chăn nuôi chuyên ngành Thức ăn Giáo viên hướng dẫn ThS QUÁCH TUYẾT ANH ThS BÙI THỊ TRÀ MI Tháng 08/2011 i PHIẾU XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực tập: Nguyễn Thị Kim Thùy Tên đề tài: “Thử nghiệm ni cấy máu heo bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu nhiễm sắc thể” Đã hoàn thành luận văn theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét, đóng góp hội đồng chấm thi tốt nghiệp Khoa Chăn Nuôi Thú Y ngày … tháng…… năm …… Giáo viên hướng dẫn ThS Bùi Thị Trà Mi ii CẢM TẠ  Kính dâng lòng biết ơn đến Những người tận tình chăm sóc, dạy bảo, an ủi, động viên hi sinh suốt đời cho có ngày hơm  Chân thành cảm tạ Ban Giám Hiệu trường Đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh Ban chủ nhiệm khoa Chăn Ni Thú Y tồn thể q thầy tận tình giảng dạy tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập ThS Quách Tuyết Anh, ThS Bùi Thị Trà Mi tận tình giảng dạy, hướng dẫn, động viên, giúp đỡ, tạo điều thuận lợi cho suốt thời gian học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Thầy, cô anh chị trại heo khoa Chăn Nuôi Thú Y trường Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh giúp đỡ tơi hoàn thành tốt đề tài Thầy Đoàn Trần Vĩnh Khánh tạo điều kiện, giúp đỡ suốt thời gian làm đề tài  Cảm ơn Cảm ơn tất bạn bè lớp Thức ăn 33 giúp đỡ động viên vượt qua khó khăn Cảm ơn bạn Tú, Hưng, Hải lớp Chăn nuôi 33 Xin nhận lời cảm ơn chân thành sâu sắc Nguyễn Thị Kim Thùy iii TÓM TẮT Đề tài thực từ tháng 2/2011 đến tháng 7/2011 phòng thí nghiệm Bộ Mơn Di Truyền Giống Động Vật Phòng Ni Cấy Vi Sinh thuộc môn Vi Sinh - Truyền Nhiễm Khoa Chăn Nuôi - Thú Y Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh với mục tiêu nghiên cứu thử nghiệm ni cấy máu heo bình kín có chứa 1,32 g NaHCO nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu nhiễm sắc thể Đề tài thực qua giai đoạn: • Giai đoạn 1: Lấy mẫu máu ni cấy mẫu vòng 72h Máu ni cấy mơi trường RPMI 1640 có bổ sung chất giúp cho phát triển tế bào huyết phơi bò (FBS), phytohemaglutinin (PHA), kháng sinh penicillin - streptomycin (1X) Mẫu nuôi môi trường: mơi trường bình kín thể tích l có chứa 1,32 g muối NaHCO mơi trường chuẩn - tủ ấm CO với CO điều chỉnh tự động mức % Ở giai đoạn quan sát phát triển mẫu dựa vào mắt thường • Giai đoạn 2: Sau 72h nuôi cấy mẫu xử lý nhuộm nhiễm sắc thể dung dịch Giemsa Sau quan sát kính hiển vi độ phóng 400X 1000X chụp hình nhiễm sắc thể Kết quả: • Ni cấy mẫu bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO cho kết khả quan phát triển tế bào lympho (80%) Điều giúp phòng thí nghiệm chủ động nghiên cứu NST quy trình ni cấy tế bào lympho khơng có tủ ấm có CO tự động • Điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng lớn đến kết quả, thí nghiệm cần ý đến vần đề • Trong q trình nghiên cứu ta loại bỏ mẫu vào biểu màu sắc, độ đơng vón nhiễm khuẩn iv MỤC LỤC TRANG Trang tựa i Phiếu xác nhận giáo viên hướng dẫn ii Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách bảng ix Danh sách hình x Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan heo 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Một số đặc điểm sinh lý 2.1.3 Đặc điểm máu heo 2.2 Nhiễm sắc thể 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Hình thái kích thước 2.2.3 Tính đặc trưng NST 2.2.4 Cấu trúc NST 2.2.4.1 Cấu trúc hiển vi NST 2.2.4.2 Cấu trúc siêu hiển vi NST 2.3 Chu kì sống tế bào 2.3.1 Gian kì (interphase) v 2.3.2 Nguyên phân 10 2.3.2.1 Kỳ đầu (prophase) 10 2.3.2.2 Kỳ (metaphase) 10 2.3.2.3 Kỳ sau (anaphase) 11 2.3.2.4 Kỳ cuối (telophase) 11 2.4 Nghiên cứu kiểu nhân heo 12 2.5 Kĩ thuật Splash 13 2.5.1 Các nguồn nguyên liệu nuôi cấy 14 2.5.2 Chất kích thích tế bào phân chia 15 2.5.3 Chất ức chế nguyên phân 15 2.5.4 Dung dịch xử lý tế bào 16 2.6 Vai trò khí CO phát triển tế bào nuôi cấy in vitro 17 2.6.1 Cacbon dioxit (CO ) 17 2.6.2 Các thuộc tính hóa lý 17 2.6.3 Đặc tính sinh học 18 2.5.4 Vai trò CO phát triển tế bào 19 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Thời gian địa điểm 20 3.2 Đối tượng 20 3.3 Nội dung nghiên cứu 20 3.4 Thiết bị hóa chất 20 3.4.1Thiết bị 20 3.4.2 Hóa chất 21 3.4.2.1 Môi trường nuôi cấy tế bào bạch cầu 21 3.4.2.2 Các dung dịch sử dụng trình nhược trương, lên tiêu nhuộm NST 22 3.5 Phương pháp nuôi cấy 22 3.5.1 Phương pháp lấy máu heo 22 3.5.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào 23 vi 3.6 Kĩ thuật xử lý nhược trương, lên tiêu nhuộm NST 26 3.6.1 Xử lí mẫu dung dịch nhược trương dung dịch cố định 26 3.6.2 Chuẩn bị lame nhuộm NST 27 3.6.3 Chụp hình kì làm karyotype 27 3.7 Các tiêu khảo sát 27 3.8 Xử lý số liệu hình ảnh 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Độ đông vón mẫu điều kiện ni cấy qua mốc thời gian 29 4.2 Tình trạng nhiễm khuẩn mẫu 32 4.3 Màu sắc mẫu điều kiện nuôi cấy qua mốc thời gian 33 4.4 Kết nhuộm NST điều kiện nuôi cấy 35 4.5 Tình trạng bạch cầu 37 4.6 Kiểu nhân heo 41 4.7 Một số nguyên nhân ảnh hưởng đến kết nuôi cấy nhuộm NST 42 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 5.1 Kết luận 48 5.2 Đề nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO .49 PHỤ LỤC 51 vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT NST Nhiễm sắc thể ADN Acid Deoxirybonucleic ARN Acid Ribonucleic IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry RPMI Roswell Park Memorial Institute FBS Fetal Bovine Serum PHA Phytohaemagglutinin Hb Hemogobin BC Bạch cầu viii DANH SÁCH CÁC BẢNG TRANG Bảng 2.1 Số lượng NST số loài Bảng 3.1 Môi trường nuôi cấy ml máu 22 Bảng 4.1 Độ đơng vón mẫu điều kiện nuôi cấy qua mốc thời gian 29 Bảng 4.2 Số lượng mẫu bị nhiễm khuẩn 32 Bảng 4.3 Màu sắc mẫu điều kiện nuôi cấy qua mốc thời gian 34 Bảng 4.4 Tỉ lệ thành công điều kiện nuôi cấy 35 Bảng 4.5 Tỉ lệ tình trạng bạch cầu hai điều kiện ni cấy 39 ix Hình 4.9 Bốn loại bạch cầu bình kín chứa 1,32 g muối NaHCO (400X) Hình 4.10: Các dạng nhiễm sắc thể (1000X) Do số lượng bạch cầu nhiều nên chúng tơi quan sát 300 bạch cầu/lame kính thay quan sát tồn diện tích lame kính Kết tình trạng bạch cầu (BC) quan sát điều kiện ni cấy trình bày bảng 4.5 38 Bảng 4.5 Tỉ lệ tình trạng bạch cầu hai điều kiện nuôi cấy Điều kiện Tủ ấm CO Bình kín có chứa 1,32 g ni cấy X ± SD muối NaHCO F X ± SD Loại BC (%) BC màng tế bào 28,50 ± 1,80 30,60 ± 3,15 ns BC vỡ màng tế bào 58,81± 3,20 46,51 ± 4,36 * BC vỡ màng nhân 1,98 ± 0,16 1,55 ± 0,16 ns NST tách rời 1,93 ± 0,15 1,34 ± 0,15 *  Tỷ lệ tình trạng bạch cầu màng tế bào: Tỷ lệ tình trạng bạch cầu màng tế bào điều kiện ni cấy bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO 30,60 % cao so với điều kiện nuôi cấy tủ ấm CO (28,50 %) Qua xử lý thống kê cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa với P > 0,05 So sánh với kết khảo sát Nguyễn Thị Xuân Diệu (2008) mức ml FBS 100 µl PHA ni cấy tủ ấm CO tự động (30,30 %) kết chúng tơi thấp  Tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng tế bào Tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng tế bào điều kiện nuôi cấy bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO 46,51 % thấp so với điều kiện nuôi cấy tủ ấm CO (58,81 %) Qua xử lý thống kê cho thấy khác biệt điều kiện ni cấy tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng tế bào có ý nghĩa với P < 0,05 So sánh với kết Nguyễn Thị Xuân Diệu (2008) 65,3 % kết chúng tơi thấp  Tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng nhân: Tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng nhân điều kiện ni cấy bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO 1,548 % thấp so với điều kiện nuôi cấy tủ ấm CO (1,976 %) Qua xử lý thống kê cho thấy khác biệt điều kiện ni cấy tỷ lệ tình trạng bạch cầu vỡ màng nhân khơng có ý nghĩa với P > 39 0,05 So sánh với kết Nguyễn Thị Xuân Diệu (2008) 0,6 % kết chúng tơi cao  Tỷ lệ tình trạng NST tách rời: Tỷ lệ tình trạng NST tách rời điều kiện ni cấy bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO 1,343 % thấp so với điều kiện nuôi cấy tủ ấm CO (1,929 %) Qua xử lý số liệu thống kê cho thấy khác biệt tỷ lệ tình trạng NST tách rời có ý nghĩa với P < 0,05 So sánh với kết Nguyễn Thị Xuân Diệu (2008) 3,8 % kết chúng tơi thấp Sở dĩ có khác biệt số liệu với tác giả Nguyễn Thị Xuân Diệu (2008) loại tỉ lệ tình trạng bạch cầu nuôi cấy tủ ấm CO tự động thao tác kĩ thuật viên q trình ni cấy xử lý mẫu, nồng độ tế bào dung dịch cố định yếu tố ảnh hưởng lớn đến kết Khi nồng độ tế bào lympho dung dịch cố định cao tỷ lệ loại tình trạng bạch cầu cao ngược lại Qua kết mục 4.1, 4.2, 4.3, 4.4 4.5 cho thấy tạo điều kiện tốt điều kiện hạn chế sở vật chất (thiếu tủ ấm CO ) cách ni cấy mẫu bình kín có chứa muối NaHCO nhằm tạo khí CO thơng qua nhiệt phân Ở thí nghiệm sử dụng 1,32 g NaHCO , dự kiến hiệu suất phản ứng 50 %, kết thành công cao, đạt 80 % NaHCO bắt đầu nhiệt phân 70 oC để nhiệt phân hoàn toàn (hiệu suất 100 %), phải cung cấp nhiệt độ 200 oC Với điều kiện ni cấy 37 oC điều khó thực Tuy nhiên vào kết khả quan thí nghiệm, chúng tơi đề nghị việc sử dụng muối NaHCO quy trình nuôi cấy tế bào Và để kết tốt tiếp tục thử nghiệm ni cấy tế bào lympho sử dụng muối NaHCO với mức khối lượng khác Ngồi ra, chúng tơi dự đốn thành cơng q trình ni cấy quan sát mắt thường thời gian ni cấy Điều giúp chủ động xử lý mẫu giai đoạn nuôi cấy (loại bỏ hay giữ lại) 40 4.6 Kiểu nhân heo Căn vào hình ảnh chụp kính hiển vi, chúng tơi sử dụng phần mềm Adobe photoshop 7.0 để thiết lập NST heo (hình 4.11), heo đực (hình 4.12) Hình 4.11 Bộ NST heo Hình 4.12 Bộ NST heo đực 41 4.7 Một số nguyên nhân ảnh hưởng đến kết ni cấy nhuộm • Cơ sở vật chất Do điều kiện trang thiết bị môn Di truyền giống động vật - Khoa Chăn Nuôi Thú Y lĩnh vực nhiều hạn chế: máy móc, dụng cụ khơng đầy đủ nên chúng tơi phải di chuyển nhiều nơi để làm thí nghiệm khiến việc đảm bảo chất lượng mẫu bị ảnh hưởng • Thao tác lấy máu Việc lấy máu ảnh hưởng lớn đến kết nuôi cấy Thao tác lấy máu cần nhanh xác Nếu để máu bên ngồi mơi trường lâu gây tượng đơng máu sau lấy mẫu Khi mẫu bị đông làm ảnh hưởng đến kết sau ni cấy Bên cạnh đó, vấn đề nhiễm khuẩn mẫu ảnh hưởng quan trọng đến kết nuôi cấy Máu bên ngồi mơi trường khó bảo đảm vô trùng (trong chuồng nuôi) Mặt khác máu mang khơng thể lọc hay hấp được, máu dễ bị nhiễm khuẩn thao tác lấy máu • Chất kháng đơng Hàm lượng chất kháng đơng ảnh hưởng đến mẫu sau lấy Khi thực việc lấy mẫu, sử dụng ống nghiệm loại ml có chứa sẵn lượng heparin nhận thấy cho 1,5 - ml máu vào ống tỉ lệ mẫu bị đơng nhiều Khi cho ml máu vào ống nghiệm máu giữ trạng thái kháng đơng tốt • Thao tác cấy mẫu Thao tác cấy mẫu quan trọng việc thành cơng mẫu Thứ phòng ni cấy cần vô trùng tốt (chiếu tia UV trước 30 phút tắt sau khoảng 30 phút vào cấy) Thứ 2, thao tác đưa máu vào bình ni cấy phải nhanh chuẩn xác phải lắc kĩ mẫu tránh tượng máu bị đơng khơng hòa trộn vào môi trường nuôi cấy Thao tác quan trọng kết sau 42 • Thời gian ủ concemid Concemid có tác dụng ức chế thoi vơ sắc làm cho kì phân bào NST phân ly cực tế bào Việc ủ lâu hay nhanh ảnh hưởng đến chất lượng mẫu Nếu ủ nhanh mẫu kì giữa, ủ q lâu mẫu nhiều kì NST bị co ngắn lại (hình 4.13, 4.14) Khi quan sát kính hiển vi khó phân biệt NST đồng dạng Đối với thí nghiệm này, thời gian ủ colcemid tủ ấm cho 45 phút tốt Hình 4.13 NST bung đều, bị co ngắn nuôi cấy bình kín (1000X) Hình 4.14 NST bị co ngắn ủ colcemid lâu nuôi cấy tủ ấm CO (1000X) 43 • Thời gian ủ dung dịch nhược trương Thời gian ủ dung dịch nhược trương có tác dụng phá hủy màng nhân làm NST bung Thời gian xử lý KCl thí nghiệm cho tốt phút xử lý Pasteur pipette (hút nhả tế bào ống nghiệm 15 ml) 20 phút ủ waterbath Khi thời gian xử lý ủ KCl chưa đủ màng nhân chưa bị phá hủy, NST nằm màng tế bào (hình 4.15) Hình 4.15 NST chưa bung màng nhân (1000X) Khi mẫu bị bị xử lý ủ KCl lâu dẫn đến tượng NST bị tách rời (hình 4.16 ), NST thấy vết rạn hay vết nứt (hình 4.17) Hình 4.16 NST bị xử lý KCl mức nên bị tách rời (1000X) 44 Hình 4.17 NST bị rạn, nứt ủ KCl lâu (1000X) • Thao tác thực kĩ thuật viên Trong quy trình ni cấy, thao tác kĩ thuật viên quan trọng ảnh hưởng lớn đến chất lượng mẫu Một thao tác không cẩn thận làm ảnh hưởng đến kết sau Độ cao nhỏ dung dịch lên lame kính định đến chất lượng NST Khi độ cao khơng đủ NST khơng bung NST bị chồng lên gây khó khăn việc quan sát NST (hình 4.18) Khi nhỏ dung dịch độ cao lớn NST bị văng xa, khó nhận biết tồn bộ NST (hình 4.19) Chúng tơi nhận thấy độ cao 50 - 60 cm NST bung đẹp (hình 4.20) 45 Hình 4.18 Hai NST nằm cạnh nhau, chưa bung (1000X) Hình 4.19 NST bị văng xa, khó phân biệt tồn bộ NST (1000X) 46 Hình 4.20 NST bung đều, đẹp (1000X) • Sức khỏe thú Sức khỏe thú ảnh hưởng đến thành công mẫu Những thú bị bệnh hay máu có chứa mầm bệnh gây ảnh hưởng đến phát triển tế bào lympho Ở thú bị bệnh, số lượng tế bào lympho thu sau q trình ni cấy Những thú có sức khỏe tốt số lượng tế bào lympho thu sau q trình ni cấy nhiều • Điều kiện khí hậu Việt Nam Quy trình chuẩn ni cấy NST chuẩn hóa số nước ôn đới giới Canada, Thụy Điển, Pháp…, tỷ lệ thành công mẫu nuôi cấy cao có tới 99 % Nhưng Việt Nam nước nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm, vi khuẩn có điều kiện phát triển nhanh nên tỷ lệ thành công mẫu nuôi cấy chưa cao Việc chuẩn hóa quy trình chuẩn cần có thời gian nghiên cứu 47 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận • Ni cấy mẫu bình kín có chứa 1,32 g muối NaHCO cho kết khả quan phát triển tế bào lympho Tỷ lệ quan sát NST nuôi cấy điều kiện đạt cao 80 % Điều giúp phòng thí nghiệm chủ động nghiên cứu NST quy trình ni cấy tế bào lympho khơng có tủ ấm có CO tự động mà đạt kết thành công cao • Điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng lớn đến kết quả, thí nghiệm cần ý đến vần đề Điều kiện lấy mẫu máu chuồng ni phòng ni cấy mẫu ảnh hưởng lớn đến kết ni cấy • Trong q trình nghiên cứu ta loại bỏ mẫu vào biểu màu sắc, độ đông vón nhiễm khuẩn Những mẫu thường khơng quan sát hình ảnh NST kính hiển vi mẫu khơng phát triển bị chết q trình ni cấy 5.2 Đề nghị • Tiếp tục có đề tài nghiên cứu thử nghiệm mức khối lượng NaHCO cho cung cấp lượng CO phù hợp với phát triển tế bào • Phòng thí nghiệm cần phải trang bị thêm trang thiết bị tủ ấm CO , buồng cấy vô trùng,… nhằm nâng cao tỷ lệ thành công ni cấy tế bào • Thử nghiệm ni cấy tế bào máu số động vật (ví dụ: thỏ, gà, dê…) bình kín có chứa muối NaHCO 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Mai Minh Mẫn, 2007 Bước đầu xây dựng quy trình nhuộm nhiễm sắc thể tế bào máu thỏ Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư cơng nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm TP HCM Nguyễn Thị Xuân Diệu, 2008 Khảo sát lượng Fetal Bovine Serum Phytohemaglutinin quy trình nhuộm nhiễm sắc thể tế bào máu thỏ máu heo Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm, TP.HCM Nguyễn Như Hiền, 2005 Chương 2, Chương Di truyền tế bào NXB Đại học quốc gia Hà Nội Phan Cự Nhân, 2001 Di truyền học động vật Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Phạm Trọng Nghĩa, 2008 Giống đại cương Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Đại học Nông Lâm TP HCM Trần Thị Dân Dương Nguyên Khang, 2006 Sinh lý vật nuôi Nhà xuất nông nhiệp TP.HCM TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI A Ducos, T Revay, A Kovacs, A Hidas, A.Pinton, A Bonnet-Garnier, L.Molteni, E Slota, M.Switonski, M.V Arruga, W.A van Haeringen, I Nicolae, R Chaves, H Guedes-Pinto, M Andersson, L.Iannuzzi, 2008 In Cytogenetic screening of livestock populations in Europe: an overview Cytogenet Genome Res 120: 26-41 Alain Ducos*, Hélène-Marie Berland, Nathalie Bonnet, Anne Calgaro, Sébastien Billoux, Nicolas Mary, Amélie Garnier Bonnet, roland Darre, Alain Pinton, 2007 Chromosomal control of pig populations in France: 2002-2006 survey pp 584-597 Gustavsson I , Hagel Iorn M, Johansson, C and Zech, L 1972 Identification of the pig chroinosomes by the quinacrine mustard fluorescence technique – Exp Cell Res 70: 471 – 474 49 10 Herbert C Macgregor, Jenifer M Varley, Gereth Jones, Thomas Haaf and Micheael Schmid, Claus Pelling, Aimee Bakken, R Stephen Hill, 1980 Working with Animal Chromosomes:13 - 22 11 HANSEN K M 1972 The karyotype of the pig (Sus scrofa dometicac), Identified by quinacrine mustard staining and fluorescence microscopy Cytogenics II: 286 - 294 12 Hsu T.C 1952 Mammalian chromosomes in vitro I the karyotype of Man.J.Heredity 43, 167-172 13 Ingemar Gustavsson (Co-ordinator), 1964 Standard karyotype of the domestic pig Committee for the Standardized Karyotype of the Domestic Pig Department of Animal Breeding and Genetics, Swedish University of Agricultural Sciences, S-7.50 07 Uppsala 7, Sweden Hereditas 109 page: 151-157 14 P.K Basrur G Stranzinger, 10 January 2008 Veterinary cytogenetics: past and perspective Department of Biomedical Sciences, Ontario Veterinary College, University of Guelph, Guelph, on (Canada) Ethz and University Zürich, Vetsuisse Faculty, Zurich (Switzerland) Cytogenet Genome Res 120 pp11-25 15 Wodsedalek, J E 1913 Spermatogenesk of the pig with specia1 reference the accessory chromosomes - Biod Bull 25: 8-32 TÀI LIỆU TRÊN MẠNG 16 http://vi.wikipedia.org/wiki/Cacbon_ %C4 %91i %C3 %B4x %C3 %Adt 17 http://vi.wikipedia.org/wiki/T %E1 %BA %BF_b %C3 %A0o 18 http://en.wikipedia.org/wiki/HEPES 19 http://thuviensinhhoc.com/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-hoc-nst/1853-cau truc sieu-vi-cua-the-nhiem-sac 20 http://tienfnc.wordpress.com/2011/02/03/nuoi-c%E1%BA%A5y t%E1%BA%BF-bao-g%E1%BB%91c-trung-mo-mesenchymal-stem-cells msc-mau-cu%E1%BB%91ng-r%E1%BB%91n-l%E1%BB%9Bp d%C6%A1n-in-vitro/ 50 to PHỤ LỤC Phụ lục 1: Bảng Anova tình trạng bạch cầu màng tế bào One-way ANOVA: BCCN versus DKNC Analysis of Variance for BCCN Source DF SS MS DKNC 77 77 Error 68 15689 231 Total 69 15766 Level N 35 35 Pooled StDev = Mean 28.50 30.60 StDev 10.64 18.66 15.19 F 0.33 P 0.566 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+-24.5 28.0 31.5 35.0 Descriptive Statistics: BCCN by DKNC Variable BCCN DKNC N 35 35 Mean 28.50 30.60 Median 30.33 33.33 TrMean 29.20 30.43 StDev 10.64 18.66 Variable BCCN DKNC SE Mean 1.80 3.15 Minimum 0.00 0.00 Maximum 48.17 70.17 Q1 25.50 23.17 Q3 32.50 42.50 Phụ lục 2: Bảng Anova tình trạng bạch cầu vỡ màng tế bào One-way ANOVA: BCVM versus DKNC Analysis of Variance for BCVM Source DF SS MS DKNC 2650 2650 Error 68 34857 513 Total 69 37506 Level N 35 35 Pooled StDev = F 5.17 P 0.026 Mean 58.81 46.51 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ -18.96 ( -* ) 25.81 ( * -) + -+ -+ -+ -40.0 48.0 56.0 64.0 22.64 Descriptive Statistics: BCVM by DKNC Variable BCVM DKNC N 35 35 Mean 58.81 46.51 Median 65.00 59.00 TrMean 61.77 47.70 StDev 18.96 25.81 Variable BCVM DKNC SE Mean 3.20 4.36 Minimum 0.00 0.00 Maximum 73.50 75.17 Q1 60.67 38.17 Q3 67.33 65.17 51 Phụ lục 3: Bảng Anova tình trạng bạch cầu vỡ màng nhân One-way ANOVA: BCVN versus DKNC Analysis of Variance for BCVN Source DF SS MS DKNC 3.079 3.079 Error 68 61.531 0.905 Total 69 64.609 Level N 35 35 Pooled StDev = Mean 1.9671 1.5477 StDev 0.9482 0.9543 0.9512 F 3.40 P 0.069 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -( * -) ( * -) + -+ -+ -1.50 1.80 2.10 Descriptive Statistics: BCVN by DKNC Variable BCVN DKNC N 35 35 Mean 1.967 1.548 Median 2.000 1.670 TrMean 1.990 1.559 StDev 0.948 0.954 Variable BCVN DKNC SE Mean 0.160 0.161 Minimum 0.000 0.000 Maximum 4.000 3.000 Q1 1.330 1.000 Q3 2.670 2.330 Phụ lục 4: Bảng Anova tình trạng NST tách rời One-way ANOVA: NST versus DKNC Analysis of Variance for NST Source DF SS MS DKNC 6.004 6.004 Error 68 54.769 0.805 Total 69 60.772 Level N 35 35 Pooled StDev = F 7.45 P 0.008 Mean 1.9289 1.3431 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 0.8873 ( * ) 0.9075 ( -* ) -+ -+ -+ -+ 1.05 1.40 1.75 2.10 0.8975 Descriptive Statistics: NST by DKNC Variable NST DKNC N 35 35 Mean 1.929 1.343 Median 2.000 1.330 TrMean 1.952 1.291 StDev 0.887 0.907 Variable NST DKNC SE Mean 0.150 0.153 Minimum 0.000 0.000 Maximum 3.500 3.830 Q1 1.170 1.000 Q3 2.500 1.670 52 ... rộng phương pháp nuôi cấy tế bào, phục vụ cho việc nghiên cứu NST điều kiện khác 1.2 Mục tiêu Thử nghiệm nuôi cấy máu heo bình kín có chứa 1 ,32 g muối NaHCO nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu nhiễm. .. Khoa Chăn Nuôi - Thú Y Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh với mục tiêu nghiên cứu thử nghiệm ni cấy máu heo bình kín có chứa 1 ,32 g NaHCO nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu nhiễm sắc thể Đề tài... hướng dẫn ThS Quách Tuyết Anh ThS Bùi Thị Trà Mi thực đề tài: Thử nghiệm ni cấy máu heo bình kín có chứa 1 ,32 g muối NaHCO nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu nhiễm sắc thể Nhằm định hướng, mở