Định lượng actinobacillus actinomycetemcomitans, porphyromonas gingivalis bằng realtime PCR và đánh giá hiệu quả của phương pháp điều trị không phẫu thuật bệnh viêm quanh răng

1 T VN Viờm quanh rng (VQR) l mt bnh nhim khun phỏ hy cỏc mụ nõng rng [1] Bnh din tin dai dng, kộo di, cú li nhng hu qu nng n nh rng lung lay hng lot phi nh b, lm mt chc nng n nhai, nh hng n sc khe v thm m VQR khỏ ph bin, nhiờn t l v mc bnh thay i tựy theo mi ni Ti M, t l ny l 47% 64,7 triu dõn tui trờn 30 [2] Ti n , t l VQR tng theo tui: 67,7% tui 12 ữ 15, 89,6% tui 35 ữ 44 [3] Vit Nam, theo kt qu iu tra ca Trn Vn Trng v c.s nm 2000 cho thy 36,5% nam, 27,5% n cú tỳi quanh rng v nhu cu iu tr bnh VQR cng rt cao [4] VQR u t mt mng bỏm sinh hc vi khun c gi l mng bỏm rng [5] Mng bỏm rng c to thnh t cỏc vi khun v cht nn (gm protein, polysaccarid v lipid) bỏm dớnh trờn b mt rng Trong mng bỏm rng mụ quanh rng bỡnh thng, hin din ch yu cỏc cu khun Gram (+) k khớ nh Streptococcus v Actinomyces nhng bnh nhõn VQR, mng bỏm rng cú s hin din cỏc loi vi khun Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Actinomyces viscosus, Tannerella forsythensis, Prevotella intermedia, Actinomyces naeslundii Streptococcus intermedia, Eikenella corrodens, Treponema denticola, ú vi khun Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.actinomycetemcomitans) v Porphyromonas gingivalis (P gingivalis) c xem l nguyờn nhõn gõy bnh VQR [5], [6], [7] Bỡnh thng cú s cõn bng h khun ming Bt k mt s thay i no phỏ v trng thỏi cõn bng ny, vi khun phỏt trin quỏ mc hay sc khe rng ming hay sc khe ton thõn b suy gim, s gõy bnh VQR Do ú, bnh VQR liờn quan n s tng tỏc gia cỏc yu t vi khun v c th, vi khun gi vai trũ quan trng bnh cn ca VQR, nhng ỏp ng dch ca c th cng l mt cỏc yu t quyt nh gõy VQR hay khụng [8] Thnh phn v s lng cỏc vi khun VQR khỏc gia cỏc dng VQR tớnhv VQR tin trin [8],[9], phng phỏp iu tr cng khỏc [8] Mt s khỏc bit vi khun ny cú ý ngha lõm sng, s gia tng s lng vi khun cú th l yu t ch tỡnh trng VQR ang tin trin Vic nh lng chớnh xỏc cỏc vi khun gõy VQR l yờu cu cn thit v cp bỏch ca cỏc bỏc s chuyờn v bnh quanh rng nhm giỳp la chn phỏc iu tr khỏng sinh, ỏnh giỏ ỏp ng iu tr v theo dừi din tin bnh, trỏnh tỡnh trng khỏng khỏng sinh hin [10] Trờn th gii cú rt nhiu nghiờn cu v vic chn oỏn xỏc nh, phng phỏp iu tr v theo dừi din tin ca bnh VQR trc v sau iu tr da vo cỏc triu chng lõm sng, cn lõm sng, nht l xỏc nh vi khun gõy bnh bng cỏc k thut nuụi cy, k thut sinh hc phõn t (phn ng chui polymerase/PCR, real-time PCR/qPCR), nh: nghiờn cu ca Salari M.H (2004) [5], nghiờn cu ca Mitsuo Sakamoto (2004) [6] v nghiờn cu ca Nguyn Th Hng Minh (2010) [11] Vit Nam, vic xột nghim vi khun trc v sau iu tr VQR cha ph bin vỡ k thut nuụi cy vi khun k khớ mt nhiu cụng sc v thi gian, thm mt s loi vi khun khụng mc hay khú mc; k thut sinh hc phõn t rt nhy v c hiu, cho phộp xỏc nh nhanh v chớnh xỏc DNA ca vi khun ch vi gi thỡ giỏ thnh li rt cao phi nhp b sinh phm t nc ngoi [6], [11] n nc ta, cha cú nghiờn cu no ng dng k thut realtime PCR nh lng vi khun Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis gõy bnh VQR, ng thi kt hp vi lõm sng theo dừi s thay i s lng v t l ca hai vi khun ny trc v sau iu tr VQR tớnh dng ton th bng phng phỏp khụng phu thut Cp nht cỏc k thut sinh hc phõn t hin i ó v ang c s dng trờn th gii v ti Vit Nam, da trờn iu kin sn cú v k thut realtime PCR nh lng vi khun A actinomycetemcomitans, P gingivalis cú nhy v c hiu cao ca Trung tõm nghiờn cu Gen - Protein, Trng i hc Y H Ni, ngun bnh nhõn ca khoa Nha chu - bnh vin Rng Hm Mt H Chớ Minh, chỳng tụi thc hin ti nh lng Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis viờm quanh rng bng realtime PCR v ỏnh giỏ hiu qu ca phng phỏp iu tr viờm quanh rng khụng phu thut vi mc tiờu: Nhn xột c im v mi tng quan gia lõm sng, X-quang, s lng vi khun A actinomycetemcomitans v P gingivalis dch li trờn bnh nhõn viờm quanh rng tớnh dng ton th ỏnh giỏ hiu qu ca phng phỏp iu tr khụng phu thut i vi viờm quanh rng tớnhdng ton th da trờn lõm sng, X-quang v s lng, t l vi khun A actinomycetemcomitans v P gingivalis Chng TNG QUAN TAI LIấU 1.1 KHI NIấM VA PHN LOI VIấM QUANH RNG 1.1.1 Khỏi nim v viờm quanh rng: VQR l viờm cỏc mụ nõng quanh rng vi khun hay nhúm vi khun c hiu, lm phỏ hy dõy chng quanh rng v xng rng to thnh tỳi quanh rng hoc gõy tt li hay c hai triu chng trờn [1] 1.1.2 Phõn loai viờm quanh rng: Theo phõn loi ca Hi ngh quc t v bnh viờm quanh rng ti M nm 1999 [1], [8] I Cỏc bnh viờm li (do mng bỏm rng, khụng mng bỏm rng) II Viờm quanh rng th mn tớnh (khu trỳ, ton th) III Viờm quanh rng th tn cụng (khu trỳ, ton th) III Viờm quanh rng l biu hin ca bnh ton thõn (liờn quan ri lon v huyt hc, liờn quan vi ri lon di truyn, liờn quan vi cỏc ri lon bnh lý khỏc) V Bnh quanh rng hoi t (viờm li hoi t l loột, viờm quanh rng hoi t l loột) I VI p xe mụ quanh rng (ỏp xe li, ỏp xe quanh rng, ỏp xe quanh thõn rng) VII Viờm quanh rng liờn quan tn thng ni nha VIII Cỏc d dng mc phi (cỏc yu t to thun li s hỡnh thnh mng bỏm rng, cỏc bin dng li-niờm mc quanh rng, cỏc bin dng niờm mc súng hm, chn thng khp cn) Phõn loi mi ny ó s dng thut ng VQR mn tớnh thay th VQR ngi trng thnh, v ó hp nht tt c cỏc th nng ca VQR thnh mt nhúm l VQR tin trin m trc ú c gi l VQR thiu niờn, VQR phỏ hy tin trin, VQR sm (EOP), VQR tin trin nhanh (RPP) [1], [8] 1.1.2.1 Viờm quanh rng man tinh: Lõm sng [1],[8]: VQR tớnh l th thng gp nht bnh VQR a s bnh nhõn tui 35, nhng cng cú th xy ngi tr tui hn Cú s tớch t mng bỏm v vụi rng VQR tớnh cú c trng l bnh tin trin chm Tuy nhiờn, cú th cú nhng t ngn bnh tin trin nhanh yu t ti ch (hỳt thuc lỏ, ), yu t ton thõn (ỏi thỏo ng, HIV, stress, ) Do vy, khụng nờn ch da vo tc tin trin ca bnh loi b chn oỏn VQR mn tớnh cho nhng trng hp ny Phõn loi: Viờm VQR tớnh cú hai dng: - Dng khu trỳ: tn thng hin din 30% cỏc rng trờn cung hm - Dng ton th: tn thng hin din > 30% cỏc rng trờn cung hm Mc VQR c ỏnh giỏ da trờn mc mt bỏm dớnh lõm sng (CAL): - Mc nh: mt bỏm dớnh 1-2 mm - Mc trung bỡnh: mt bỏm dớnh 3-4 mm - Mc nng: mt bỏm dớnh 5mm 1.1.2.2 Viờm quanh rng tiờn triờn [1], [8] Lõm sng: L mt th c bit ca VQR vi cỏc c im lõm sng v cn lõm sng in hỡnh nh: mt bỏm dớnh v tiờu xng nhanh, bnh cú th cú tớnh cht gia ỡnh Phõn loi: Bnh chia lm dng: - Dng khu trỳ: bt u tui dy thỡ, ch rng ci ln th nht v rng ca, nh hng ớt nht rng, nng khỏng th khỏng vi khun gõy bnh cao huyt - Dng ton th: bnh nhõn thng di 30 tui (ụi ln tui hn), b phỏ hy mụ quanh rng ton hm, nh hng ớt nht rng (ngoi rng hm ln th nht, rng ca), tin trin tng t, nng khỏng th khỏng vi khun gõy bnh huyt thp 1.2 VI KHUN VA BấNH SINH CA VIấM QUANH RNG 1.2.1 H tap khun bỡnh thng ming 1.2.1.1 H tap khun ming H khun bỡnh thng vựng ming rt a dng, gm nhiu loi vi sinh vt (vi khun, vi nm, virus), ú vi khun tri hn hn [12],[13] Cú hn 700 loi vi khun cú th nuụi cy v khụng nuụi cy c hin din ming; s ny, hn 400 loi c nh danh t tỳi quanh rng v 300 loi t nhng v trớ khỏc ming [5],[8],[9], a s nhng vi khun ny sng cng sinh to thnh mng sinh hc trờn cỏc b mt rng v niờm mc Tuy nhiờn, ngi ta c tớnh khong 50% s loi vi khun h khun ming hin cũn cha bit c [8],[12-16] Trong iu kin sinh lý bỡnh thng, h khun ming cú s cõn bng n nh v khụng cú kh nng gõy bnh [17],[18] S tng sinh v xõm nhim ca mt hay mt nhúm vi khun l im ca VQR Hot ng vi khun gia tng cú th do: (a) cú s xỏo trn lm mt cõn bng s lng hoc cht lng khun ming lm cho vi khun tng sinh, vt quỏ ngng v gõy nhim khun c hi phỏ hy mụ quanh rng [19]; (b) phỏ hy hng ro ngn cn biu mụ quanh rng [15]; (c) xy bin c ngu nhiờn [8] 1.2.1.2 H tap khun mng bỏm rng VQR u t mt mng bỏm sinh hc vi khun c gi l mng bỏm rng [8] Mng bỏm rng l mt mng sinh hc, thng khụng mu, phỏt trin t nhiờn trờn b mt rng Mng bỏm rng c to thnh t cỏc vi khun v cht nn (gm cỏc protein, polysaccarid v lipid) bỏm dớnh trờn b mt rng Trong mng bỏm rng mụ quanh rng bỡnh thng, hin din ch yu cỏc cu khun Gram (+) k khớ tựy nghi nh Streptococcus v Actinomyces Cỏc cu khun hay trc khun Gram (-) cng thng thy nhng t l thp hn nhiu so vi vi khun Gram (+) [8] Mng bỏm rng bt u s khoỏng húa 48 gi Trong khong 10 ngy, mng bỏm rng s tr thnh vụi rng cng v khú ly i Mng bỏm di li phỏt trin t mng bỏm trờn li tin v phớa chúp chõn rng [7] Mng bỏm rng gõy sõu rng, viờm li, viờm quanh rng; cú th dn n tiờu xng v mt rng [8] 1.2.2 Vi khun bnh viờm quanh rng Nhiu bng chng cho thy tỏc nhõn gõy VQR l vi khun S loi vi khun gõy VQR tng i ớt, khong 10-20 loi cú th gi vai trũ chớnh bnh sinh ca VQR (bng 1.1) [5],[8] Bng 1.1 Cỏc vi khun thng gp viờm quanh rng Vi khun Gram (+) Vi khun Gram (-) Actinomyces viscosus A actinomycetemcomitans Hiờu v Actinomyces naeslundii Eikenella corrodens k tựy nghi Streptococcus intermedia Treponema denticola Peptostreptococcus Fusobacterium nucleatum anaerobius Porphyromonas gingivalis K tuyt i Peptostreptococcus micros Prevotella intermedia Tannerella forsythus Campylobacter rectus Eubacterium c im vi khun hc VQR: - Bnh cn a khun, khụng mt loi vi khun nht [18] Cỏc vi khun gõy VQR a dng: hiu khớ/k khớ, Gram (-)/Gram (+), trc khun/cu khun/xon khun Vi khun thng gp gõy VQR gm: P gingivalis, T forsythus, P intermedia, F nucleatum, A actinomycetemcomitans, T denticola, P micros [8],[14] - Mi mu bnh phm cú khong 2-6 loi vi khun [19],[20],[21] cú s kt hp vi khun hiu khớ v k khớ, cỏc vi khun phi hp tỏc ng [15] - Vi khun k khớ Gram (-) chim u th Cú s chuyn i vi khun mụ lnh chuyn sang viờm li v VQR, (bng 1.2) [22]: + Mụ quanh rng lnh: ch yu cú vi khun hiu khớ Gram (+) + Viờm li: tng sinh quỏ mc vi khun Gram (+) Tuy nhiờn, mt s nghiờn cu cho rng s tng cỏc vi khun Gram (-) mi l tỏc nhõn chớnh Nhng vi khun gõy viờm li trờn thc nghim l Actinomyces, Streptococcus, Veillonella, Fusobacterium, Treponema; ngoi ra, cú th gp Prevotella intermedia v Campylobacter viờm li mn tớnh + Viờm quanh rng: Nhúm vi khun k khớ Gram (-) ni tri, nht l P gingivalis, T forsythus, P intermedia, F nucleatum Bng 1.2 Vi khun mụ li lnh, viờm li v viờm quanh rng (%) [22] Vi khun Mụ li lnh Viờm li Viờm quanh rng Hiờu 75% 50% 10% K 25% 50% 90% Gram (+) 85% 56% 25% Gram (-) 15% 44% 75% - Vi khun khỏc tn ti mi loi bnh VQR khỏc [16] VQR mn tớnh liờn quan vi P gingivalis, P intermedia, T forsythensis, C Rectus [9],[17], VQR tin trin liờn quan ch yu vi A Actinomycetemcomitans, cú kt hp loi khỏc nh Eubacterium, VQR tin trin ton th thng gp nhng trc khun k khớ Gram (-) bao gm P gingivalis [8],[9] Mt s nghiờn cu cho thy s lng P gingivalis v T denticola VQR tin trin cao hn cú ý ngha so vi nhúm chng v cao nht VQR tin trin dng ton th [8],[9] Nguyờn nhõn gõy VQR l vi khun ó c chp nhn, nhng loi vi khun c trng mi loi bnh VQR cho n cha c nht trớ iu ny th hin hai gi thuyt mng bỏm rng khụng c hiu v mng bỏm rng c hiu [19] Theo gi thuyt mng bỏm rng khụng c hiu, nguyờn nhõn gõy bnh VQR l s tớch t ca vi khun mng bỏm rng, s lng mng bỏm rng cng nhiu thỡ bnh cng nng Bt k loi vi khun no cng cú kh 10 nng gõy bnh s tng sinh vt quỏ mc ngng bo v ca c th [8] Thnh phn mng bỏm rng ging tt c bnh nhõn v mi v trớ ca rng [16] Bng chng l nhng nghiờn cu viờm li thc nghim cho thy viờm li xut hin khụng v sinh rng ming, lm sch mng bỏm rng thỡ ht viờm li Cho n u nhng nm 1970, vic iu tr VQR da vo gi thuyt mng bỏm khụng c hiu nhm lm gim lng mng bỏm [16] Sau ny, thuyt mng bỏm rng c hiu cho rng s hin din ca mt s loi vi khun c hiu l nguyờn nhõn gõy VQR v mi loi vi khun khỏc gõy cỏc th VQR khỏc [9],[17],[18] Cú s khỏc v cỏc loi vi khun mng bỏm rng gia VQR, viờm li v mụ quanh rng lnh (bng 1.2) [23]; cng nh gia VQR mn tớnh vi VQR tin trin (bng 1.3) [22] Bng 1.3 Vi khun viờm quanh rng Viờm quanh rng man tớnh Viờm quanh rng tin trin Porphyromonas gingivalis Prevotella intermedia Tannerella forsythensis Porphyromonas gingivalis Treponema denticola Tannerella forsythensis Eikenella corrodens Actinobacillus Peptostreptococcus micros actinomycetemcomitans Campylobacter rectus Eikenella corrodens Actinobacillus Campylobacter rectus actinomycetemcomitans Fusobacterium spp Eubacterium spp Selenomonas spp - Ton th cỏc ng nghip, cỏc nghiờn cu viờn ca Trung Tõm nghiờn cu Gen-Protein, Trng i hc Y H Ni Xin cm n cỏc bn bố, ng nghip ó giỳp tụi quỏ trỡnh hc Cui cựng, tụi xin ghi nh cụng n sinh thnh, nuụi dng v tỡnh yờu thng ca b m tụi, cựng s ng h ng viờn ca chng v hai con, nhng ngi ó luụn bờn tụi, l ch da vng chc tụi yờn tõm hc v hon thnh lun ỏn H Ni, thỏng nm 2015 Nguyn Th Mai Phng LI CAM OAN Tụi l Nguyn Th Mai Phng, nghiờn cu sinh khúa 30 Trng i hc Y H Ni, chuyờn ngnh Rng - Hm - Mt, xin cam oan: õy l lun ỏn bn thõn tụi trc tip thc hin di s hng dn ca Cụ Nguyn Th H Cụng trỡnh ny khụng trựng lp vi bt k nghiờn cu no khỏc ó c cụng b ti Vit Nam Cỏc s liu v thụng tin nghiờn cu l hon ton chớnh xỏc, trung thc v khỏch quan, ó c xỏc nhn v chp thun ca c s ni nghiờn cu Tụi xin hon ton chu trỏch nhim trc phỏp lut v nhng cam kt ny H Ni, ngy 19 thỏng nm 2014 Ngi vit cam oan Nguyn Th Mai Phng MC LC T VN Chng 1: TNG QUAN TAI LIU 1.1 KHI NIM VA PHN LOI VIấM QUANH RNG 1.1.1 Khỏi nim v viờm quanh rng 1.1.2 Phõn loi viờm quanh rng 1.2 VI KHUN VA BNH SINH CA VIấM QUANH RNG 1.2.1 H khun bỡnh thng ming 1.2.2 Vi khun bnh viờm quanh rng 1.2.3 Bnh sinh ca viờm quanh rng 13 1.3 CC PHNG PHP IU TR BNH VIấM QUANH RNG 19 1.3.1 Phng phỏp iu tr khụng phu thut 20 1.3.2 Phng phỏp iu tr phu thut 21 1.3.3 Cỏc phng phỏp c hc h tr iu tr bnh viờm quanh rng 21 1.3.4 iu tr bng khỏng sinh 22 1.4 MT Sễ PHNG PHP PHT HIN VI KHUN TRONG VIấM QUANH RNG 25 1.4.1 K thut nuụi cy 25 1.4.2 K thut dch 25 1.4.3 Cỏc k thut sinh hc phõn t 25 Chng 2: PHNG PHP VA ễI TNG NGHIấN CU 28 2.1 i tng nghiờn cu 28 2.1.1 Tiờu chun chn mu 28 2.1.2 Tiờu chun loi tr 28 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 29 2.2.1 Thit k nghiờn cu 29 2.2.2 C mu nghiờn cu 29 2.2.3 Cỏc bc tin hnh nghiờn cu 29 2.2.4 Phng phỏp thu thp d liu lõm sng 30 2.2.5 K thut ly bnh phm 36 2.2.6 Xỏc nh v nh lng vi khun A actinomycetemcomitan v P gingivalis bng k thut realtime PCR 37 2.2.7 Phỏc iu tr khụng phu thut ỏp dng i vi i tng nghiờn cu 44 2.3 VN O C TRONG NGHIấN CU 45 2.4 X Lí VA PHN TCH Sễ LIU: 46 Chng 3: KT QU 48 3.1 C IM TUI VA GII TNH CA NHểM NGHIấN CU 48 3.2 C IM LM SANG VA VI KHUN CA BNH NHN VIấM QUANH RNG TI NGAY KHM U TIấN (T0) 49 3.2.1 c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn (T0) 49 3.2.2 c im vi khun ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn (T0) 58 3.3 S THAY I V LM SANG VA VI KHUN CA BNH NHN VIấM QUANH RNG SAU IU TR TUN (T1) 62 3.3.1 S thay i v c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti thi im T1 so vi thi im T0 62 3.3.2 S thay i v vi khun trờn bnh nhõn VQR ti thi im T1 so vi thi im T0 64 3.4 S THAY I V C IM LM SANG CA BNH NHN VQR TI THI IM T1 SO VI THI IM T2 68 3.4.1 S thay i v c im lõm sng 68 3.4.1 S thay i v vi khun ti T1 v T2 69 3.5 S THAY I V C IM LM SANG VA VI KHUN CA BNH NHN VQR TI THI IM T2 SO VI THI IM T0 70 3.5.1 S thay i v c im lõm sng ti thi im T2 so vi T0 70 3.5.2 S thay i v vi khun ti T2 v T0 75 3.6 SO SNH C IM LM SANG VA VI KHUN TI CC THI IM T0, T1 V T2 77 3.6.1 So sỏnh c im lõm sng ti cỏc thi im T0, T1 v T2 77 3.6.2 So sỏnh s lng vi khun ti cỏc thi im T0, T1 v T2 78 Chng 4: BAN LUN 83 4.1 c im v tui v gii tớnh ca i tng nghiờn cu 83 4.2 Bin s nghiờn cu v k thut xỏc nh cỏc bin s nghiờn cu 84 4.3 Phng phỏp iu tr 90 4.4 c im lõm sng v vi khun a Actinomycetemcomitants, p Gingivalis ti ngy khỏm u tiờn (t0) 91 4.5 c im lõm sng v vi khun a Actinomycetemcomitants, p Gingivalis ti ngy khỏm u tiờn so vi sau iu tr tun 97 4.6 c im lõm sng v vi khun a Actinomycetemcomitants, p.gingivalis sau iu tr 12 tun so vi ngy khỏm u tiờn 98 KT LUN 105 KIN NGH 106 DANH MC CC CễNG TRèNH CễNG Bễ TAI LIU THAM K PH LC DANH MC BNG Bng 1.1 Cỏc vi khun thng gp viờm quanh rng Bng 1.2 Vi khun mụ li lnh, viờm li v viờm quanh rng Bng 1.3 Vi khun viờm quanh rng 10 Bng 1.4 T l cỏc loi vi khun VQR mn tớnh v VQR tin trin 12 Bng 1.5 T l vi khun VQR v mụ quanh rng lnh ca ngi bỡnh thng (nhúm chng) 14 Bng 2.1 Tiờu chun ch s mng bỏm 33 Bng 2.2 Tiờu chun ch s li 34 Bng 2.3 Mc lung lay ca rng 36 Bng 2.4 Trỡnh t ca mi v probe s dng cho k thut realtime PCR 41 Bng 3.1 c im tui v gii tớnh ca i tng nghiờn cu 48 Bng 3.2 c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn 49 Bng 3.3 Ch s li ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn 51 Bng 3.4 c im vi khun ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn 58 Bng 3.5 Tng quan gia sõu tỳi quanh rng v s lng vi khun trờn bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn 60 Bng 3.6 So sỏnh c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti T0 v T1 62 Bng 3.7 So sỏnh vi khun Aa v Pg trờn bnh nhõn VQR ti T1v T0 64 Bng 3.8 So sỏnh c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti T1 v T2 68 Bng 3.9 So sỏnh vi khun trờn bnh nhõn VQR ti T1 v T2 69 Bng 3.10 So sỏnh c im lõm sng ca bnh nhõn VQR ti T2 v T0 70 Bng 3.11 So sỏnh vi khun trờn bnh nhõn VQR ti T2 v T0 75 Bng 3.12 So sỏnh s lng vi khun ti cỏc thi im T0, T1 v T2 78 Bng 4.1 So sỏnh cỏc ch s lõm sng gia cỏc nghiờn cu 92 Bng 4.2 Thay i chiu cao ca mo xng rng 100 Bng 4.3 Kt qu iu tr bng phng phỏp khụng phu thut 101 Bng 4.4 S thay i cỏc triu chng lõm sng ca nhúm v 102 DANH MC BIU Biu 3.1 Phõn b v tui ca i tng nghiờn cu 48 Biu 3.2 Ch s mng bỏm rng ca bnh nhõn VQR ti ngy khỏm u tiờn 50 Biu 3.3 Liờn quan gia tui v dng tiờu xng trờn bnh nhõn VQR 54 Biu 3.4 sõu tỳi v mt bỏm dớnh lõm sng trờn bnh nhõn VQR 55 Biu 3.5 sõu tỳi, mt bỏm dớnh v rng lung lay trờn bnh nhõn VQR 56 Biu 3.6 Tng quan gia sõu v tỳi dng tiờu xng trờn bnh nhõn VQR 57 Biu 3.7 Tng quan gia sõu tỳi v s lng vi khun A actinomycetemcomitan 61 Biu 3.8 PPD v CAL trờn bnh nhõn VQR ti thi im T0 v T1 63 Biu 3.9 S lng vi khun Aa v Pg trờn bnh nhõn VQR ti T0 v T1 65 Biu 3.10 So sỏnh ch s mng bỏm rng ca bnh nhõn VQR gia T1 v T2 69 Biu 3.11 So sỏnh PLI ca bnh nhõn VQR ti T2v T0 71 Biu 3.12 So sỏnh ch s li (GI) ti T2 v T0 72 Biu 3.13 So sỏnh cỏc c im lõm sng ti cỏc thi im T0, T1 v T2 77 DANH MC HèNH Hỡnh 1.1 Vi khun A actinomycetemcomitans 17 Hỡnh 1.2 Vi Khun Porphyromonas gingivalis 18 Hỡnh 1.3 Vụi rng trờn v di li 20 Hỡnh 1.4 Cỏch x lý mt chõn rng 21 Hỡnh 2.1 Cõy o tỳi William 35 Hỡnh 2.2 Cỏch ly mu bnh phm dch li 37 Hỡnh 2.3 Kit QIAamp DNA Mini tỏch chit DNA 38 Hỡnh 2.4 Nguyờn tc hot ng ca TaqMan Realtime-PCR 40 Hỡnh 2.5 Hỡnh nh realtime PCR phỏt hin Aa (A) v Pg (B) 44 Hỡnh 2.6 Mụ t cỏch x lý mt chõn rng 45 Hỡnh 3.1 Hỡnh nh lõm sng viờm quanh rng ca BN mó s 05 50 Hỡnh 3.2 T l bnh nhõn VQR vi sõu tỳi khỏc (PPD,%) 52 Hỡnh 3.3 S bnh nhõn VQR vi tỡnh trng mt bỏm dớnh khỏc 52 Hỡnh 3.4 Hỡnh nh lõm sng v X quang ca BN mó s 09 53 Hỡnh 3.5 Cỏc dng tiờu xng trờn phim Panorex k thut s ca bnh nhõn VQR mó s 15 55 Hỡnh 3.6 Kt qu nh lng Aa ti T0 ca bnh nhõn mó s 01 59 Hỡnh 3.7 Kt qu nh lng Pg ti T0 bnh nhõn mó s 01 59 Hỡnh 3.8 Kt qu nh lng Aa ti T1 bnh nhõn mó s 01 66 Hỡnh 3.9 Kt qu nh lng Pg ti T1 bnh nhõn mó s 01 67 Hỡnh 3.10 Dng tiờu xng trờn phim Panorex k thut s ca bnh nhõn mó s 16 trc iu tr (T0) 74 Hỡnh 3.11 Dng tiờu xng trờn phim Panorex k thut s ca bnh nhõn mó s 16 sau iu tr 12 tun 74 Hỡnh 3.12 Kt qu nh lng Aa ti T2 bnh nhõn mó s 01 76 Hỡnh 3.13 Kt qu nh lng Pg ti T2 bnh nhõn mó s 01 76 Hỡnh 3.14 Kt qu nh lng Aa mu bnh phm ca bnh nhõn mó s 02 cỏc thi im T0 (A), T1(B), T2(C) 80 Hỡnh 3.15 Kt qu nh lng Pg mu bnh phm ca bnh nhõn mó s 02 cỏc thi im T0 (A), T1(B), T2(C) 82 DANH MC CC CH VIT TT Aa (A actinomycetemcomitans) Actinobacillus actinomycetemcomitans AAP American Academy of Periodontology CAL Clinical attachment loss C rectus Campylobacter rectus DNA Deoxyribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside 5'-triphosphate EBV Epstein-Barr virus ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay E corrodens Eikenella corrodens F nucleatum Fusobacterium nucleatum GI Gingival index IL-1 Interleukin-1 LPS Lipopolysaccharide PBS Phosphate buffered saline Pg (P gingivalis) Porphyromonas gingivalis PCR Polymerase chain reaction PPD Periodontal probing depth PI Plaque index PGE-2 Prostaglandin E2 P micros Peptostreptococcus micros P intermedia Prevotella intermedia qPCR Quantitative PCR 16S rDNA 16S ribosomal DNA RFU Relative fluorescence unit T forsythensis Tannerella forsythensis T denticola Treponema denticola VQR Viờm quanh rng Cs Cng s BNG I CHIU THUT NG VIấT ANH Ting Vit Ting Anh p xe quanh rng Periodontal abscess p xe quanh thõn rng Pericoronal abscess Cht hp ph hunh quang Quencher Cht phỏt hunh quang Fluoresence Ch s mng bỏm Plaque index (PI) Ch s li Gingival index (GI) Chng Strain Dch li Gingival crevicular fluid mt bỏm dớnh lõm sng Clinical attachment loss (CAL) sõu tỳi quanh rng Periodontal probing depth (PPD) c t Virulence factor Gen khỏng khỏng sinh Antibiotic resistance gene Ging Genus H vi khun di li Subgingival microflora H vi khun ming Oral flora Khỏng sinh Antibiogram Lai phõn t Molecular hybridization Loi Species Ly trớch DNA DNA extraction Mng bỏm di li Subgingival plaque Mng bỏm rng Dental plaque Mng sinh hc Biofim Min dch hunh quang Immunofluorescence Min dch liờn kt enzym (ELISA) Enzyme-linked immunosorbent assay Nuụi cy Culture Phõn lp Isolation Trc khun Gram (-) Gram-negative rod Tua (Nhung mao) Fimbria Vi khun hiu khớ Aerobic bacteria Vi khun k khớ Anaerobic bacteria Vi khun k khớ tuyt i Strict anaerobic bacteria Vi khun k khớ tựy nghi Facultative anaerobic bacteria V trớ viờm quanh rng Disease site V trớ lnh Healthy site Viờm nha chu Periodontitis Viờm quanh rng tớnh Chronic periodontitis (CP) Viờm quanh rng ngi trng thnh Adult periodontitis Viờm quanh rng phỏ hy tin trin Advanced destructive periodontitis Viờm quanh rng sm Early-onset periodontitis (EOP) Viờm quanh rng tin trin Aggressive periodontitis (AP) Viờm quanh rng thiu niờn Juvenile periodontitis (JP) Viờm quanh rng tin trin nhanh Rapidly progressive periodontitis (RPP) Viờm li Gingivitis Xột nghim dch Immunoessay B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI NGUYN TH MAI PHNG Định l-ợng Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis viêm quanh realtime PCR đánh giá hiệu ph-ơng pháp điều trị viêm quanh không phẫu thuật LUN N TIN S Y HC H NI - 2015 B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI NGUYN TH MAI PHNG Định l-ợng Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis viêm quanh realtime PCR đánh giá hiệu ph-ơng pháp điều trị viêm quanh không phẫu thuật Chuyờn ngnh : Rng Hm Mt Mó s : 62720601 LUN N TIN S Y HC Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS Nguyn Th H H NI - 2015 17,18,20,21,35,37,38,40,43,44,45,47,48,50,52,53,54,55,56,57,59,61 ,63,65,66,67,69,71,72,74,76,77,79,80,81,82 1-16,19,22-34,36,39,41,42,46,49,51,58,60,62,64,68,70,73,75,78,83133 [...]... điều trị không phẫu thuật và điều trị phẫu thuật [10],[31],[40],[41],[42] 1.3.1 Phương pháp điều trị không phẫu thuật  Điều trị không phẫu thuật: là một phức hợp điều trị bao gồm cạo vôi răng, xử lý mặt chân răng Ngoài ra phải loại bỏ mảng bám răng và yếu tố lưu giữ mảng bám răng, nẹp tạm các răng lung lay hay phục hình tạm, nhổ răng bị lung lay nhiều, điều trị nội nha, mài chỉnh khớp cắn và sử dụng... loại bỏ các tổ chức viêm bám vào bề mặt chân răng, làm giảm độ sâu của túi quanh răng, bảo tồn các mô nâng đỡ răng - Chỉ định:  Điều trị bệnh VQR bằng phương pháp không phẫu thuật không có hiệu quả  Độ sâu của túi quanh răng ≥ 5mm  Tiêu xương ổ răng dạng hình chêm, tiêu xương chéo hay ngang nhiều,  Mất bám dính Phẫu thuật túi lợi theo mục đích: (i) Điều trị là chủ yếu: phẫu thuật vạt lợi, ghép... lấy vôi răng sâu dưới chân răng và làm nhẵn mặt chân răng [40],[41] 21 Hình 1.4 Cách xử lý mặt chân răng [41] Trong những năm gần đây trên thế giới, nhiều tác giả đã nghiên cứu về phương pháp điều trị bệnh VQR bằng phương pháp không phẫu thuật 42 Cho thấy kết quả rất khả quan, đã hạn chế được tiến triển và biến chứng của bệnh 1.3.2 Phương pháp điều trị phẫu thuật  Phẫu thuật túi lợi [42],[43]: -... hình lợi; (ii) Điều trị dự phòng: cắt phanh môi và phanh niêm mạc dự phòng; (iii) Điều trị thẩm mỹ: che cổ chân răng bị hở [41],[43] Phẫu thuật theo tổ chức: (i) Phẫu thuật lợi – lợi – niêm mạc; (ii) Phẫu thuật lợi – niêm mạc – mảng xương; (iii) Phẫu thuật tái sinh mô có hướng dẫn [41] 1.3.3 Các phương pháp cơ học hỗ trợ điều trị bệnh viêm quanh răng - Các phương pháp cơ học như chải răng, dùng chỉ... việc xác định số copies của DNA đích có trong mẫu bệnh phẩm dựa vào hệ số pha loãng mẫu hay hệ số tách chiết DNA của kỹ thuật chuẩn bị mẫu trước khi thực hiện realtime PCR - Định lượng tương đối: kỹ thuật định lượng này không đòi hỏi phải biết rõ về thể tích hay trọng lượng của mẫu bệnh phẩm, thông số định lượng là chu kỳ ngưỡng (Ct) [60] Ví dụ: kỹ thuật realtime PCR định lượng tương đối cho kết quả tỉ... - Khám răng và lấy vôi răng định kỳ 06 tháng/lần [41],[42] 1.3.4 Điều trị bằng kháng sinh Nên kết hợp điều trị kháng khuẩn với phương pháp điều trị không phẫu thuật hoặc phẫu thuật [41],[42]  Kháng sinh dùng tại chỗ: được đặt vào túi quanh răng sau khi lấy vôi răng và làm nhẵn mặt gốc răng, có tác dụng làm giảm độ sâu túi quanh răng và diệt vi khuẩn - Arestin: là thuốc được sản xuất theo công nghệ... GI và chỉ số PLI - Độ sâu túi lợi (PPD) - Tình trạng xương ổ răng sau điều trị - Kết quả xét nghiệm realtime PCR định lượng vi khuẩn A.actinomycetemcomitans và P .gingivalis âm tính hoặc có số lượng rất ít (chuẩn định lượng âm tính hoặc < 100 copy/mẫu)  Đánh giá kết quả sau điều trị được chia làm 3 mức độ: tốt, khá, trung bình Đánh giá kết quả sau 2 tuần (Thời điểm T1): - Mức độ tốt: lợi hết viêm, ... bệnh VQR, giúp bác sĩ đưa ra kế hoạch điều trị phù hợp nhất 26 để giảm chi phí và thời gian điều trị, giảm những biến chứng của bệnh VQR PCR là một kỹ thuật rất nhanh, nhạy và đặc hiệu cho phép xác định nhanh và chính xác DNA của vi khuẩn trong vài giờ Trên thế giới hiện nay, chẩn đoán xác định bệnh VQR bằng các kỹ thuật sinh học phân tử để phát hiện sự có mặt của vi khuẩn A actinomycetemcomitans và. .. Khám, đánh giá các chỉ số lâm sàng: - Viêm lợi (GI) - Độ sâu túi quanh răng (PPD) 30 - Độ mất bám dính lâm sàng (CAL) - Răng lung lay - Đánh giá mức độ và dạng tiêu xương ổ răng: chụp phim toàn cảnh kỹ thuật số (Panorex) (2) Lấy mẫu bệnh phẩm làm xét nghiệm realtime PCR định lượng vi khuẩn A.actinomycetemcomitans và P .gingivalis lần 1 (3) Hướng dẫn bệnh nhân cách vệ sinh răng miệng: chải răng theo kỹ thuật. .. bệnh phẩm, song song bằng kỹ thuật nuôi cấy P gingivalis dương tính trên 1 mẫu bệnh phẩm [61] Kỹ thuật real-time PCR là kỹ thuật PCR mà sản phẩm khuếch đại DNA đích hiển thị cùng lúc mỗi chu kỳ nhiệt của phản ứng, nên được gọi là PCR thời gian thực [59],[60] Realtime PCR định lượng được DNA đích nên còn gọi là PCR định lượng (qPCR) Verner và c.s (2006) nhận định qPCR nhạy hơn kỹ thuật nuôi cấy [62] ... hai phương pháp điều trị VQR điều trị không phẫu thuật điều trị phẫu thuật [10],[31],[40],[41],[42] 1.3.1 Phương pháp điều trị không phẫu thuật  Điều trị không phẫu thuật: phức hợp điều trị. .. Kỹ thuật realtime- PCR Kỹ thuật realtime PCR sử dụng để định lượng vi khuẩn A actinomycetemcomitans, P gingivalis trước điều trị, sau điều trị tuần sau điều trị 12 tuần • Nguyên lý Realtime PCR: ... nguồn bệnh nhân khoa Nha chu - bệnh viện Răng Hàm Mặt Hồ Chí Minh, thực đề tài Định lượng Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis viêm quanh realtime PCR đánh giá hiệu phương