Báo cáo tiểu luận Phương pháp điện di trên gel SDS PASE

Điện di trên gel SDS PASE. Điện di là sự di chuyển của các cấu tử mang điện trong dung dịch về các điện cực trái dấu dưới tác dụng của điện trường. Ưu điểm phương pháp SDS – PAGE: Không bị nóng chảy trong quá trình điện di. Dung dịch đệm không bị tiêu hao. Các dạng các nhau của nucleic acid chạy ổn định. Nhược điểm phương pháp SDS – PAGE:Khó khăn trong quá trình rót gel. Có thể gây biến tính mẫu. Độ bền vững vật lí kém

PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – KHÁI NIỆM Điện di phương pháp sử dụng chủ yếu nghiên cứu sinh học phân tử Nó cho phép phân tách trọng lượng phân tử sinh học, từ ta xác định trọng lượng phân tử chúng Hoặc: Điện di di chuyển cấu tử mang điện dung dịch điện cực trái dấu tác dụng điện trường PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – CÁC PHƯƠNG PHÁP Điện di vùng (Zone electrophoresis – ZE) Điện di đẳng tốc (Isotachophoresis – ITP) Điện di đẳng điện (Isoelectric focusing – IEF) Điện di mao quản (Capillary electrophoresis – CE) Điện di gel PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Thực điện Năm 1959 Raymond Winstraub Năm 1969 di gel Phát triển Beber polyacrylamide phương pháp Osborn không liên tục SDS– PAGE Giới thiệu Thập niên 1930 Năm 1964 Ornstein Davis tác nhân gây biến tính protein sodium dodecyl sulfate Năm 1970 Laemmli PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Phân tích mẫu tinh protein Xác định khối lượng phân tử chuỗi polypeptid Tinh chế protein biến tính Thấm western PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Phương pháp SDS- PAGE gọi phương pháp điện di gel acrylamide không liên tục mẫu protein gây biến tính Trong kĩ thuật protein xử lý với chất tẩy SDS tác nhân khử cầu nối disulfite 2- mercaptoethanol dithiotheitol (DTT) Các phân tử tích điện âm di chuyển cực dương Phương pháp gồm lớp: Lớp gel gom Lớp gel phân tách Kĩ thuật SDS- PAGE xác định phân tử protein có trọng lượng phân tử từ 10.000 – 200.000 Daltons PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Nhuộm gel sau điện di Phương pháp nhuộm dựa trên: •Độ nhạy •Giải nhạy •Tiện dụng •Tính kinh tế •Thiết bị nhuộm •Thiết bị đọc sẵn có Có phương pháp: •Nhuộm Coomassie Brilliant Blue •Nhuộm bạc PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Các yếu tố cần quan tâm trình điện di: Hệ đệm điện di Điều kiện lượng Các tác nhân gây biến tính protein PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Ưu điểm phương pháp SDS – PAGE: •Không bị nóng chảy trình điện di •Dung dịch đệm không bị tiêu hao •Các dạng nucleic acid chạy ổn định Nhược điểm phương pháp SDS – PAGE: •Khó khăn trình rót gel •Có thể gây biến tính mẫu •Độ bền cững vật lí ...PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – CÁC PHƯƠNG PHÁP Điện di vùng (Zone electrophoresis – ZE) Điện di đẳng tốc (Isotachophoresis – ITP) Điện di đẳng điện (Isoelectric focusing – IEF) Điện di mao quản (Capillary... tử từ 10.000 – 200.000 Daltons PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Nhuộm gel sau điện di Phương pháp nhuộm dựa trên: •Độ nhạy •Giải nhạy... •Nhuộm bạc PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Các yếu tố cần quan tâm trình điện di: Hệ đệm điện di Điều kiện lượng Các tác nhân gây biến tính protein PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI – SDS PAGE Ưu điểm phương