xây dựng bộ tư liệu về động vật nguyên sinh (protozoa) phục vụ giảng dạy thực tập động vật không xương sống

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƢ PHẠM BỘ MÔN SƢ PHẠM SINH HỌC XÂY DỰNG BỘ TƢ LIỆU VỀ ĐỘNG VẬT NGUYÊN SINH (PROTOZOA) PHỤC VỤ GIẢNG DẠY THỰC TẬP ĐỘNG VẬT KHÔNG XƢƠNG SỐNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành SƢ PHẠM SINH HỌC Cán hướng dẫn Sinh viên thực TS NGUYỄN THANH TÙNG NGUYỄN THỊ BẢO NGỌC Lớp: Sƣ phạm Sinh học MSSV: 3112256 NĂM 2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƢ PHẠM BỘ MÔN SƢ PHẠM SINH HỌC XÂY DỰNG BỘ TƢ LIỆU VỀ ĐỘNG VẬT NGUYÊN SINH (PROTOZOA) PHỤC VỤ GIẢNG DẠY THỰC TẬP ĐỘNG VẬT KHÔNG XƢƠNG SỐNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành SƢ PHẠM SINH HỌC Cán hướng dẫn Sinh viên thực TS NGUYỄN THANH TÙNG NGUYỄN THỊ BẢO NGỌC Lớp: Sƣ phạm Sinh học MSSV: 3112256 NĂM 2015 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ CẢM TẠ Để hoàn thành đề tài nhận giúp đỡ tận tình từ phía nhà trường, q Thầy Cơ bạn sinh viên khóa Tơi chân thành gửi lời cám ơn sâu sắc đến: TS Nguyễn Thanh Tùng ln động viên, tận tình định hướng, dẫn truyền đạt kiến thức quí giá suốt thời gian tơi thực đề tài Q Thầy Cơ phịng thí nghiệm động vật phịng thí nghiệm sinh lý động vật tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài Cuối xin gửi cám ơn chân thành đến cha, mẹ, bạn bè ủng hộ động viên hoàn thành tốt luận văn Xin chân thành cảm ơn! Ngành Sư phạm Sinh học i Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ TÓM LƢỢC Đề tài “Xây dựng tư liệu động vật nguyên sinh (Protozoa) phục vụ giảng dạy thực tập động vật không xương sống” thực từ tháng 8/1014 đến tháng 5/2015 thực 25 tiêu hiển vi cố định hình dạng ngồi trùng đế giày (Paramecium caudatum) phương pháp nhuộm kép hematoxyline – eosin Y Qua kết thực tiêu đó, quan sát lơng bơi, nhân lớn bao chích trùng đế giày (Paramecium caudatum) Ngồi ra, quan sát sinh sản phân đôi Đồng thời, thống kê 385 tiêu với 75 loài động vật ngun sinh phịng thí nghiệm động vật, Bộ môn Sinh học, Khoa Sư Phạm, Trường Đại học Cần Thơ Trong đó, có 355 tiêu tốt 30 tiêu bị bể nên sử dụng thuộc ngành: ngành Trùng roi – chân giả (Sarcomastigophora), ngành Trùng bào tử (Sporozoa) ngành Trùng lông bơi (Ciliophora) Với 75 loài tiêu hiển vi cố định động vật nguyên sinh (Protozoa) xếp theo hệ thống phân loại Trong đó, 20 loài động vật nguyên sinh (Protozoa) tiêu hiển vi cố định chọn chụp hình mơ tả hình thái Ngành Sư phạm Sinh học ii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC CẢM TẠ i TÓM LƢỢC ii MỤC LỤC iii MỤC LỤC HÌNH vi CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Lý chọn đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Phạm vi nghiên cứu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm chung động vật nguyên sinh (Protozoa) 2.2 Khái quát hệ thống phân loại ngành động vật nguyên sinh (Protozoa) 2.2.1 Ngành Trùng lông bơi (Ciliophora) 2.2.2 Ngành Trùng roi - chân giả (Sarcomastigophora) 2.2.3 Ngành Trùng tổ hợp đỉnh (Apicomplexa) 11 2.2.4 Ngành vi bào tử (Microsporozoa) 12 2.2.5 Ngành Myxozoa 13 2.2.6 Ngành Trùng Mê lộ (Labyrinthomorpha) 13 2.2.7 Ngành Acetospora 14 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Phương tiện nghiên cứu 15 3.2 Phương pháp nghiên cứu 15 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Thống kê trạng tiêu phịng thí nghiệm 21 4.2 Mơ tả lồi động vật ngun sinh (Protozoa) tiêu cố định 24 4.2.1 Trùng đế giày (Paramecium caudatum) 24 4.2.2 Trùng biến hình (Amoeba proteus) 26 Ngành Sư phạm Sinh học iii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ 4.2.3 Arcella sp 27 4.2.4 Eudorina sp 28 4.2.5 Euglena viridis 29 4.2.6 Opalina ranarum 30 4.2.7 Pleodorina sp 31 4.2.8 Trùng phóng xạ 31 4.2.9 Volvox sp 33 4.2.10 Trùng hình chng (Vorticella sp.) 35 4.2.11 Noctiluca sp 36 4.2.12 Chaos chaos 38 4.2.13 Euplotes sp 38 4.2.14 Ceratium sp 40 4.2.15 Colpidium campylum 40 4.2.16 Didinium sp 41 4.2.17 Trùng ống hút (Ephelota sp.) 42 4.2.18 Trùng loa kèn (Stentor sp.) 43 4.2.19 Balantidium coli 44 4.2.20 Leptomonas sp 44 4.3 Thực tiêu hiển vi trùng đế giày (Paramecium caudatum) 45 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 5.2 Đề nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC I Ngành Sư phạm Sinh học iv Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC BẢNG Bảng 3.1: Qui trình thực tiêu hiển vi cố định Paramecium caudatum 17 Bảng 4.1: Thống kê số liệu trạng tiêu phịng thí nghiệm 21 Bảng 4.2: Danh sách loài động vật nguyên sinh chọn để chụp hình mơ tả 23 Bảng 4.3: Các nghiệm thức thực tiêu Paramecium caudatum 45 Bảng 4.4: Qui trình nhuộm Trùng đế giày Paramecium caudatum phương pháp nhuộm kép Hematoxyiln Eosin Y 51 Ngành Sư phạm Sinh học v Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC HÌNH Hình 2.1: Cấu tạo trùng đế giày Hình 2.2: Cấu trúc lông bơi Trùng lông bơi Hình 2.3: Sự sinh sản vơ tính Trùng đế giày Hình 2.4: Sự sinh sản hữu tính tiếp hợp Trùng đế giày Hình 2.5: Cấu tạo thể Trùng chân giả Hình 2.6: Sự hình thành chân giả Trùng biến hình Hình 2.7: Sinh sản vơ tính Trùng biến hình Hình 2.8: Cấu tạo thể trùng roi xanh Hình 2.9: Trùng roi giáp Hình 2.10: Sự sinh sản vơ tính Trùng roi 10 Hình 2.11: Sơ đồ cấu tạo Trypanosoma brucei 11 Hình 2.12: Cấu tạo trùng tổ hợp đỉnh 11 Hình 2.13: Bào tử Trùng vi bào tử 12 Hình 2.14: Bào tử Myxosoma cerebralis 13 Hình 15: Bào tử Labyrinthula sp 14 Hình 16: Haplosporidium nelsoni 14 Hình 3.1: Nước rơm ngâm tạo Paramecium caudatum gốc .16 Hình 3.2: Mơi trường ni Paramecium caudatum 16 Hình 3.3: Quá trình bắt mẫu lên lame 18 Hình 3.4: Định hình mẫu formal 40% 19 Hình 4.1: Cấu tạo Paramecium caudatum (Z1.313) 24 Hình 4.2: Paramecium caudatum dạng mẫu sống vật kính X40 25 Hình 4.3: Cấu tạo thể Amoeba proteus X10 (Z1.11) 27 Hình 4.4: Cấu tạo Arcella sp dạng nằm ngửa vật kính X100 (Z1.12) 28 Hình 4.5: Cấu tạo tập đồn Eudorina sp vật kính X40 (B1.216) 28 Hình 4.6: Cấu tạo Euglena viridis 29 Hình 4.7: Cấu tạo Opalinina ranarum vật kính X10 (P1.36) 30 Ngành Sư phạm Sinh học vi Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Hình 4.8: Tập đồn Pleodorina sp vật kính X40 (B1.217) 31 Hình 9: Các dạng Radiolaria vật kính X40 (P1.477) 32 Hình 4.10: Tập đồn Volvox sp vật kính X10 34 Hình 4.11: Cấu tạo Vorticella sp vật kính X10 36 Hình 4.12: Noctiluca sp 37 Hình 4.13: Cấu tạo Chaos chaos vật kính X10 38 Hình 4.14: Eulotes sp vật kính X10 39 Hình 4.15: Cấu tạo Trùng roi giáp (Ceratium sp.) vật kính X40 40 Hình 4.16: Colpidium campylum vật kính X10 41 Hình 4.17: A1 - Cấu tạo thể Didinium sp vật kính X40; 42 Hình 4.18: Ephelote sp 42 Hình 4.19: Cấu tạo Stentor sp vật kính X10 43 Hình 4.20: Balantidium coli dạng u nang vật kính X40 44 Hình 4.21: Leptomonas sp vật kính X60 45 Hình 4.22: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) 47 Hình 4.23: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) 47 Hình 4.24: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) 48 Hình 4.25: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) 48 Hình 4.26: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) 49 Hình 4.27: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) 49 Hình 4.28: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10); 50 Hình 4.29: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) 50 Hình 4.30: Cấu tạo Paramecium caudatum vật kính X10 52 Hình 4.31: Paramecium caudatum có bao chích vật kính X40 52 Hình 4.32: Dạng phân đơi Paramecium caudatum vật kính X10 53 Ngành Sư phạm Sinh học vii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Lý chọn đề tài Động vật nguyên sinh nhóm động vật nhân chuẩn xuất sớm giới động vật người biết đến muộn Theo hội nhà động vật nguyên sinh học (1980) động vật nguyên sinh phân giới giới Động vật chia thành ngành: ngành Trùng roi – chân giả (Sarcomastigophora), ngành Trùng mê lộ (Labyrinthomorpha), ngành Trùng tổ hợp đỉnh (Apicomplexa), ngành Trùng vi bào tử (Microspora), ngành Ascetospora, ngành Myxozoa ngành Trùng lông bơi (Ciliophora) (Thái Trần Bái, 2010) Động vật nguyên sinh phân bố rộng thủy vực nước mặn, nước ngọt, ao hồ, cống, rãnh, vùng nước nhỏ, đất ẩm ký sinh thể sinh vật khác, giữ vai trò quan trọng hệ sinh thái người Trong môi trường nước, động vật nguyên sinh thị độ nước nguồn thức ăn động vật thủy sinh (Thái Trần Bái, 1978) Với phong phú lồi, đa dạng mơi trường sống động vật ngun sinh nhóm sinh vật không đề cập tới môn học sinh học đại cương, động vật học động vật không xương sống Một số sách hướng dẫn thực tập động vật không xương sống tác giả Thái Trần Bái ctv (1967); Đặng Ngọc Thanh (1989); Dương Ngọc Dũng ctv (1999); Nguyễn Mỹ Tín (2000); Đặng Ngọc Thanh ctv (2001) mơ tả hình dạng, cấu tạo thể động vật nguyên sinh Dựa vào kết mơ tả đó, tiến hành thực tiêu hiển vi để quan sát mô tả lại đặc điểm thể động vật nguyên sinh đối tượng trùng đế giày (Paramecium caudatum) Ngoài ra, số lượng tiêu động vật nguyên sinh phịng thí nghiệm động vật Bộ mơn sinh học, Khoa Sư Phạm, Đại học Cần Thơ phong phú lâu bị mờ nên khó quan sát rõ chi tiết bên tiêu Chính vậy, đề tài “Xây dựng tư liệu động vật nguyên sinh (Protozoa) phục vụ giảng dạy thực tập động vật không xương sống” đề xuất nhằm thực qui trình Ngành Sư phạm Sinh học Bộ mơn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Rửa mẫu Nước máy I phút phút phút phút Nước máy II phút phút phút phút Cồn 60 phút phút phút phút Cồn 70 phút phút phút phút Cồn 80 phút phút phút phút Cồn 85 phút phút phút phút Cồn 90 phút phút phút phút Cồn 95 phút phút phút phút Cồn tuyệt đối phút phút phút phút Eosin Y phút phút 30 giây 30 giây Cồn tuyệt đối I 10 giây 30 giây phút phút Cồn tuyệt đối II 20 giây 30 giây phút phút 30 giây phút 30 giây phút 30 giây phút 30 giây Nhỏ Nhỏ 1giọt 1giọt Nhỏ 1giọt Nhỏ 1giọt phút 30 giây phút 30 giây phút 30 giây Khử nước Nhuộm Eosin Y Khử nước Trường Đại học Cần Thơ Xylene I Làm mẫu n - butanol Xylene II phút phút 30giây Dán mẫu Các giai đoạn nghiệm thức xây dựng dựa theo qui trình thực tiêu hiển vi cố định trùng đế giày (Paramecium caudatum) Nguyễn Thị Kim Xuân (2000) thời gian cho giai đoạn điều chỉnh lại nghiệm thức khác Qua kết thực nghiệm thức nghiệm thức cho tiêu có tương phản màu nhân tế bào chất rõ Chính vậy, chọn nghiệm thức để tiến hành nhuộm mẫu trùng đế giày (Paramecium caudatum) 4.3.1 Kết nghiệm thức Nghiệm thức Ngành Sư phạm Sinh học 46 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Ở nghiệm thức tiến hành lần nhuộm mẫu hematoxylin eosin Y kết nhận nhân bắt màu tím nhạt với phẩm nhuộm hematoxylin tế bào chất bắt màu hồng đậm với phẩm nhuộm eosin Y A1 A2 A3 Hình 4.22: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) A1 – Lần 1; A2 – Lần 2; A3 – Lần Với kết lần nhuộm mẫu trên, quan sát tiêu kính hiển vi vật kính X10 mẫu khơng có tương phản rõ màu tím nhân màu hồng tế chất, nhân bắt màu nhạt với Hematoxylin tế bào chất bắt màu hồng đậm với eosin Y Chính vậy, cần tăng thời gian nhuộm Hematoxylin từ phút lên đến 11 phút đồng thời giảm thời gian nhuộm Eosin Y từ phút xuống phút để có tương phản rõ nhân tế bào chất Tuy nhiên, nghiệm thức quan sát lông bơi vật bắt màu với phẩm nhuộm Hematoxylin Lông bơi Nhân lớn Tế bào chất Hình 4.23: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) Ngành Sư phạm Sinh học 47 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Nghiệm thức Với thời gian nhuộm Hematoxylin eosin Y điều chỉnh từ kết nghiệm thức tiến hành nhuộm mẫu nghiệm thức Kết qua lần nhuộm mẫu nghiệm thức cho thấy bắt màu nhân đậm thời gian 11 phút so với nghiệm thức Tuy nhiên, tế bào chất bắt màu hồng đậm với Eosin Y Cho nên cần giảm thời gian nhuộm tế bào chất với phẩm nhuộm eosin Y để có bắt màu nhạt A1 A2 A3 Hình 4.24: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) A1 – Lần 1; A2 – Lần 2; A3 – Lần Nhân lớn Tế bào chất Lơng bơi Hình 4.25: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) Qua kết lần nhuộm mẫu quan sát kính hiển vi chưa có tương phản rõ rệt nhân tế bào chất nhiên bắt màu nhân với Hematoxylin đậm nghiệm thức Chính vậy, cần tiếp tục giảm thời gian nhuộm Eosin Y từ phút xuống 30 giây giữ nguyên thời gian nhuộm Ngành Sư phạm Sinh học 48 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Hematoxylin Đồng thời, nghiệm thức sau cần tăng thời gian khử nước sau nhuộm với Eosin Y lên phút Mặc khác nghiệm thức quan sát lơng bơi vật Nghiệm thức Ở nghiệm thức 3, với điều chỉnh thời gian nhuộm mẫu Eosin Y xuống 30 giây thời gian khử nước sau nhuộm Eosin Y màu hồng tế bào chất nhạt so với nghiệm thức tạo nên tương phản tương đối rõ nhân tế bào chất A1 A2 A3 Hình 4.26: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10) A1 – Lần 1; A2 – Lần 2; A3 – Lần Nhân lớn Tế bào chất Lơng bơi Hình 4.27: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) Ngành Sư phạm Sinh học 49 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Tuy nhiên, quan sát kính hiển vi tương phản nhân tế bào chất chưa bật Chính vậy, cần tăng thời gian khử nước sau nhuộm Eosin Y lên phút để màu tế bào chất nhạt tạo nên tương phản rõ ràng nhân tế bào chất Ở nghiệm thức này, quan sát thấy lông bơi vật nằm phủ xung quanh thể vật Nghiệm thức Ở nghiệm thức 4, tăng thời gian khử nước sau nhuộm Eosin Y lên phút tế bào chất bắt màu hồng nhạt vừa phải Eosin Y tan bớt cồn tuyệt đối Cho nên quan sát kính hiển vi, màu hồng nhạt vừa phải tế bào chất màu tím đậm nhân tương phản với rõ Chính vậy, chọn nghiệm thức làm qui trình nhuộm Paramecium caudatum với hai phẩm nhuộm Hematoxylin Eosin Y A3 A2 A1 Hình 4.28: Paramecium caudatum qua lần nhuộm (X10); A1 – Lần 1; A2 – Lần 2; A3 – Lần Tế bào chất Lơng bơi Nhân lớn Hình 4.29: Kết Paramecium caudatum nghiệm thức (X10) Ngành Sư phạm Sinh học 50 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Từ kết nghiệm thức trên, điều chỉnh qui trình thích hợp để nhuộm trùng đế giày (Paramecium caudatum) phương pháp nhuộm kép Hematoxyiln – Eosin Y sau: Bảng 4.4: Qui trình nhuộm Trùng đế giày Paramecium caudatum phương pháp nhuộm kép Hematoxyiln Eosin Y STT Giai đoạn Định hình Nhuộm hematoxylin Rửa mẫu Khử nước Hóa chất Thời gian Dung dịch sinh lý 0,9 % 45 phút Hơi formal 40% phút Hematoxylin 11 phút Nước máy I phút Nước máy II phút Cồn 60 Cồn 70 Cồn 80 Cồn 85 Cồn 900 Cồn 95 Cồn tuyệt đối Nhuộm Eosin Y Khử nước Làm mẫu Mẫu nằm yên phút phút phút phút Cồn tuyệt đối I phút Cồn tuyệt đối II phút Xylene I phút 30 giây Nhỏ 1giọt phút 30 giây Cẩn thận bọt Dán mẫu Ngành Sư phạm Sinh học yếu dần phút Eosin Y Xylene II Mẫu bơi lội phút phút 30 giây n - butanol Ghi khí 51 Bộ mơn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ 4.3.2 Kết thực tiêu Lơng bơi Nhân Tế bào chất Hình 4.30: Cấu tạo Paramecium caudatum vật kính X10 Khi sử dụng biện pháp nhuộm kép Hematoxylin – Eosin Y, quan sát tiêu Paramecium caudatum nhận biết nhân lớn lông bơi bao phủ bề mặt thể vật Nhân lớn bắt màu tím đậm với phẩm nhuộm Hematoxylin bật tế bào chất có màu hồng nhạt, bao phủ bên thể vật lông bơi bắt màu với phẩm nhuộm Hematoxylin Tế bào chất Nhân Sơi tơ bao chích Hình 4.31: Paramecium caudatum có bao chích vật kính X40 Với qui trình nhuộm Paramecium caudatum phương pháp nhuộm kép Hematoxylin – Eosin Y, bên cạnh việc quan sát nhân lớn lơng bơi phủ bên ngồi thể vật quan sát thấy sợi bao chích trơng giống lơng bơi có kích thước dài tỏa xung quanh thể vật Thực Ngành Sư phạm Sinh học 52 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ tiêu quan sát bao chích thời gian định hình mẫu dung dịch sinh lý 0,9% 50 phút để kích thích vật phóng bao chích ngồi Quan sát tiêu sinh sản vơ tính dạng phân đơi Paramecium caudatum nhận thấy nhân lớn vật bắt đầu kéo dài thể bắt đầu thắt eo để chuẩn bị cho phân đôi tạo thành cá thể Lông bơi Nhân lớn Tế bào chất Hình 4.32: Dạng phân đơi Paramecium caudatum vật kính X40 Ngành Sư phạm Sinh học 53 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Trải qua thời gian từ tháng 8/2014 đến tháng 5/2015 thống kê 385 tiêu với 75 loài động vật nguyên sinh phịng thí nghiệm động vật, Bộ mơn Sinh học, Khoa Sư Phạm, Trường Đại học Cần Thơ Trong đó, có 355 tiêu tốt 30 tiêu bị bể nên sử dụng thuộc ngành: ngành Trùng roi – chân giả (Sarcomastigophora), ngành Trùng bào tử ( Sporozoa) ngành Trùng lông bơi (Ciliophora) Với 75 loài tiêu hiển vi cố định động vật nguyên sinh (Protozoa) xếp theo hệ thống phân loại Trong đó, 20 lồi động vật ngun sinh (Protozoa) tiêu hiển vi cố định chọn chụp hình mơ tả hình thái Đồng thời, thực 25 tiêu hình thái ngồi dạng phân đơi Trùng đế giày (Paramecium caudatum) phương pháp nhuộm tương phản Hematoxylin – Eosin Y 5.2 Đề nghị Nếu đề tài tiếp tục thực hiện, xin đề nghị thực nhuộm Paramecium caudatum nhiều phương pháp đồng thời xác định phương pháp nhuộm để thấy nhân nhỏ Paramecium caudatum Ngành Sư phạm Sinh học 54 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO Baker, G David 2007 Flynn’s parasites of laboratory animals American College of Laboratory, Blackwell Publishing, (15 – 27) Đặng Ngọc Thanh Trương Quang Học 2001 Phần giới động vật nguyên sinh (Protozoa) Hướng dẫn thực tập động vật không xương sống NXB Đại học quốc gia Hà Nội, Hà Nội, (18 – 40) Đặng Ngọc Thanh 1989 Ngành động vật nguyên sinh (Protozoa) Thực tập động vật không xương sống NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội, (41 – 66) Đặng Thị Nhung 2000 Thực tiêu cố định số mẫu thuộc ngành động vật nguyên sinh (Protozoa) Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Cần Thơ Dương Ngọc Dũng Trần Phi Hùng 1999 Thực tập động vật không xương sống NXB Khoa học Tự nhiên, Hà Nội Frederick, L S and L R Avila 2008 Clinical Microbiology Reviews Clin Microbiol Rev, 21 (4), (628 – 638) Hickman, C P and L S Kats 1997 Laboratory studies in intergrated principles of zoology McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (77 – 105) Hickman, C P., L S Roberts, A Larson, S L Keen, I’Anson and D J Eisenhour 2008 Integrated principles of zoology McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (218 – 245) Hickman, C P., L S Roberts, S L Keen, A Larson and D J Eisenhour 2007 Animal diversity McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (88 – 109) Lê Thị Bình Đặng Thị Mỹ Châu 2007 Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy sinh khối Paramecium Khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp, (2), (138 – 142) Lytle, F Charles 2000 General zoology laboratory guide McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (73 – 93) Ngành Sư phạm Sinh học 55 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Miller, M S and John Harley 2002 Zoolozy McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (106 – 118) Nguyễn Mỹ Tín 2000 Bài giảng động vật khơng xương sống Tủ sách Đại học Cần Thơ, Cần Thơ, (7 – 22) Nguyễn Thị Kim Xuân 2000 Xác định môi trường nuôi Paramecium caudatum Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Thanh Tú 2001 Thực tiêu phương pháp dán vài đại diện trung roi (lớp phụ: Phytomastigina) trùng tiêm mao (lớp: cilliata) Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Cần Thơ Pechemick, J A 2005 Biology of the invertabrates McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (34 – 74) Phạm Trọng Cung, Đỗ Văn Chừng, Phạm Thế Nghiệp, Lê Văn Sắc, Lê Quốc Thái, Nguyễn Thị Ngọc Thanh, Nguyễn Xuân Tịnh Lê Văn Tưởng 1979 Động vật đơn bào Động vật học NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội, (71 – 110) Phạm Văn Thân, Phạm Hoàng Thế, Hoàng Tân Dân, Trương Thị Kim Phượng, Phan Thị Hương Liên 2007 Ký sinh trùng NXB Giáo dục, Hà Nội, (45 – 46) Ricchard, G C., M D Charistiansen and M D Marshall 1965 A stuty of phagocytosis in the ameba chaos chaos The journal of cell biology, The Rockefeller University Press, 25 (3), (443 – 457) Ruppert, E E., R S Fox and R D Barnes 2003 Integrated principles of zoology McGraw – Hill Higher Education, London and New York, (22 – 57) Thái Trần Bái Hoàng Đức Nhuận 1967 Ngành nguyên sinh động vật (Protozoa) Thực tập động vật không xương sống NXB Đại học Sư phạm Hà Nội, Hà Nội, (13 – 30) Thái Trần Bái Hoàng Đức Nhuận 1988 Ngành động vật nguyên sinh (Protozoa) Động vật học NXB Giáo dục Việt Nam, Hà Nội, (16 – 47) Ngành Sư phạm Sinh học 56 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ Thái Trần Bái 1978 Động vật đơn bào (Protozoa) Động vật không xương sống NXB Giáo dục Việt Nam, Hà Nội, (8 – 49) Thái Trần Bái 2010 Động vật đơn bào ngành động vật nguyên sinh (Protozoa) Giáo trình động vật học NXB Giáo dục Việt Nam, Hà Nội, (10 – 29) http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoPreview.jsp?ID=2370 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2570149/ http://www.mycologia.org/content/97/1/185/F1.expansion.html http://bvi.rusf.ru/taksa/s0005/s0005986.htm http://www.slideshare.net/LuisMeraCabezas/hickman-zoology-14th-ed http://www.horton.ednet.ns.ca/staff/jfuller/selig/bio11/activities/protista/paramima ges.htm http://research.amnh.org/~siddall/haplosporidia/morph.htm Ngành Sư phạm Sinh học 57 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC Dung dịch cần pha 1.1 Dung dịch hematoxylin - Chuẩn bị + Nước cất: 100 ml + Glycerin: 100 ml + Cồn: 100 ml + Amonium alumsulfat: g + Glacial acid acetic: g - Tiến hành: hòa tan hematoxylin cồn amonium alumsulfat nước cất, trộn hai dung dịch lại Sau thêm lúc glycerin glacial acid acetic vào Để chín từ – tuần Bảo quản chai màu sậm (Humason, 1962) 1.2 Dung dịch eosin Y - Chuẩn bị + Eosin Y: g + Cồn 700: 1000 ml + Glacial acid acetic: ml - Tiến hành: hòa tan eosin Y cồn 700, đậy kín tránh bay Khi sử dụng nhỏ vào – giọt glacial acid acetic (Humason, 1962) 1.3 Baume canada - Chuẩn bị + Baume canada: 25 ml + Xylene: 25 ml - Tiến hành: hòa tan baume canada xylene với nhau, chứa lọ đậy kín nắp tránh bay bơi, đặt lọ baume canada tủ sấy nhiệt độ 600C, đợi xylene tan hết dùng giấy lọc lọc bỏ tạp chất dung dịch Những biến cố thƣờng gặp biện pháp khắc phục Ngành Sư phạm Sinh học I Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2015 Trường Đại học Cần Thơ 2.1 Biến cố biện pháp khắc phục nuôi mẫu Paramecium caudatum Biến cố Khắc phục Nguyên nhân - Sử dụng rơm rạ khác - Keo nhựa nuôi không - Rơm khô bào thấy xuất mẫu xác Paramecium caudatum - Mẫu nuôi bị lẫn số - Rơm khô có chứa bào lồi khác xác lồi khác - Mẫu bị nhỏ dần chết - Thức ăn không đủ - Thay rơm khô khác - Cần bổ sung thêm thức ăn 2.2 Biến cố biện pháp khắc phục nhuộm mẫu Biến cố - Mẫu chưa dán chặt vào lame nên bị rôi - Mẫu bị teo, co rúm có vết rạn nứt - Mẫu bị cặn - Mẫu ăn màu tím Khắc phục Nguyên nhân - Chưa khô dung dịch sinh - Để dung dịch sinh lý lý 0,9% khô - Để dung dịch sinh lý bốc - Để dung dịch sinh lý khô vừa khô - Phẩm nhuộm - Lắc lọc hematoxylin hematoxylin bị kết tủa, có qua giấy lọc nhiều bụi chất bẩn nơi - Vệ sinh nơi thực thực tiêu tiêu - Thời gian nhuộm chưa - Điều chỉnh lại thời gian phù hợp nhuộm cho hợp lý - Baume canada đặc - Thêm xylene vào lọ hematoxylin đậm không ăn màu eosin Y - Tiêu xuất nhiều bọt khí Ngành Sư phạm Sinh học baume canada II Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 Trường Đại học Cần Thơ Qui trình ni Trùng đế giày (Paramecium caudatum) Sử dụng rơm khô thu môi trường bên ngồi làm vật liệu để tạo mơi trường gốc Paramecium caudatum Rơm khô sau thu cắt thành đoạn ngắn khoảng cm cho vào keo nhựa, đổ đầy nước thu non nước máy để lâu đậy nắp để tránh xâm nhập muỗi cá vi khuẩn độc Sau dán nhãn ghi rõ thời gian bắt đầu ni mẫu Paramecium caudatum Khoảng sau ngày quan sát môi trường ni mẫu kính hiển vi vật kính X4 quan sát có xuất Paramecium caudatum Sau ngày ngâm rơm khô, tiến hành quan sát nước rơm ngâm kính hiển vi, ta nhận thấy có xuất Paramecium caudatum Chiết nước rơm ngâm có chứa Paramecium caudatum sang keo nhựa khác để tiến hành nuôi mẫu Sử dụng rau cải xà lách rửa sạch, cắt thành đoạn nhỏ cho vào keo nhựa để bổ sung thức ăn cho Paramecium caudatum, sau ngày bổ sung thức ăn vào keo nhựa mật độ Paramecium caudatum tăng dần lên Để tiếp tục ni mẫu cách khoảng ngày ta tiếp tục cho cải xà lách vào nuôi mẫu đồng thời thay nước lấy chất bã từ rau cải xà lách tiến hành nhân mẫu sang keo nhựa khác Ngành Sư phạm Sinh học III Bộ môn Sư phạm Sinh học ... PHẠM BỘ MÔN SƢ PHẠM SINH HỌC XÂY DỰNG BỘ TƢ LIỆU VỀ ĐỘNG VẬT NGUYÊN SINH (PROTOZOA) PHỤC VỤ GIẢNG DẠY THỰC TẬP ĐỘNG VẬT KHÔNG XƢƠNG SỐNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành SƢ PHẠM SINH HỌC Cán hướng dẫn Sinh. .. dựng tư liệu động vật nguyên sinh (Protozoa) phục vụ giảng dạy thực tập động vật không xương sống? ?? thực với mục tiêu: (1) Thống kê số lượng trạng tiêu động vật ngun sinh phịng thí nghiệm động vật, ... ? ?Xây dựng tư liệu động vật nguyên sinh (Protozoa) phục vụ giảng dạy thực tập động vật không xương sống? ?? đề xuất nhằm thực qui trình Ngành Sư phạm Sinh học Bộ mơn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt