Nghiênc cứu chiết xuất acid shikimic từ đại hồi

NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT ACID SHIKIMIC TỪ ĐẠI HÒI Phùng Thi Mỹ Hanh’, Lưu Thị Quyên^ HDKH: TS Nguyễn Văn Hân^ ‘ Tạp chí Dược học ^Trường Đại học Dược Hà Nội Từ khoá: acid shikimic, chiết xuất, đại hồi, Illỉcium verum Hook.f., tinh chế Tóm tắt Nghiên cứu thực nhằm tìm phương pháp đơn giản, hiệu quả, giảm giả thành acid shikimic Việt Nam sản xuất Các nội dung khảo sát gồm có: dung môi tinh chế, tác động hàm ẩm cao; từ đề xuất quy trình chiết xuất (cỡ mẻ 100 g nguyên liệu) Sản phẩm quy trình xác định: t„c, M d , I R , MS, ‘H-NMR, ‘^C-NMR, hàm lượng hoạt chất (HPLC) Nghiên cứu với cỡ mẻ kg nguyên liệu để đảnh giả khả ứng dụng phương pháp nâng cấp quy mô Nội dung nghiên cứu kết thu giải mục tiêu đề ra: Xây dựng phương pháp tinh chế acỉd shikimic từ dịch chiết nước Đặt vấn đề Cây hồi (còn gọi đại hồi, hồi hưong ) - Illicium verum Hook f loài phân bố chủ yếu Trung Quốc khu vực Đông Bắc Việt Nam [1], Trong Đông y, chín phơi khô hồi (đại hồi) chủ trị đau bụng, sôi bụng, nôn mửa, ỉa chảy, đau nhức - khóp lạnh [2] Đại hồi biết đến nguồn nguyên liệu sản xuất acid shikimic (AS), thành phần quan trọng bán tổng họp sản xuất thuốc chống virus điều trị cúm gia cầm typ A typ B oseltamivir (Tamiílu) Chiết xuất AS từ đại hồi phương pháp hiệu tính đến thời điểm để thu AS Trên thực tế, AS Việt Nam sản xuất có giá thành cao AS Ân Độ sản xuất - quốc gia phải nhập đại hồi Đề tài thực với mục tiêu: Khảo sát lựa chọn phương pháp chiết xuất AS kết hợp thu tinh dầu từ đại hồi với dung môi nước; Xây dựng phương pháp tinh chế từ dịch chiết nước nhằm mục đích tìm phương pháp đơn giản, hiệu quả, đồng thời tận dụng dư phẩm trình sản xuất tinh dầu hồi nước ta để sản xuất nguồn nguyên liệu AS, từ giảm giá thành nguyên liệu Việt Nam sản xuất Nội dung thực nghiệm giải mục tiêu kết nhóm tác giả công bố [5], Báo cáo trình bày nội dung thực nghiệm giải mục tiêu kết đạt Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu Đại hồi thu mua từ tỉnh Lạng Sơn vào tháng 01 năm 2012 Đặc điểm nguyên liệu phù hợp với mô tả Dược điển Việt Nam IV [2] Nguyên liệu loại bỏ tạp, sấy khô 50°c, xay, rây qua cỡ rây mm Hóa chất, thiết bị, dụng cụ Hóa chất, dung môi Acid shikimic chuẩn (99,2% - Merck), aceton (P, Trung Quốc), ethanol 96% (Việt Nam), H 2SO4 (P, Trung Quốc), isopropanol (P, Trung Quốc), methanol (P, Trung Quốc), methanol (HPLC, Merck), nước cất Thiết bị, dụng cụ - Máy HPLC Shimadzu (Nhật Bản) bao gồm: phân loại khí DGU - 14A, bơm cao áp LC - lOADVP, buồng chứa cột CTO - lOAVP, điều khiển SCL lOAVP, detector dãy diod quang SPD - MIOAVP phần mềm Class vp 6.14 - Máy đo nhiệt độ nóng chảy EZ-Melt (Mỹ), phân cực kế KRỬSS (Đức) (thiết bị có Bộ môn Công nghiệp Dược - Trưòng Đại học Dược Hà Nội); Thiết bị xác định phổ hồng ngoại (IR) Perkin Elmer, thiết bị xác định phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) Bruker AM500 FT-NMR Specừometer, thiết bị xác định phổ khối lượng Varian 320 Ms (thiết bị cỏ Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) - Dụng cụ thuỷ tinh: sũứi hàn hồi lưu, cốc có mỏ 100 ml, bình gạn 500 m l, Phương pháp nghiên cứu Phương pháp định lượng AS Định lượng AS phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Tham khảo tài liệu [6 ] qua thực nghiệm, điều kiện sắc ký xác định sau: - Cột: Supelco C8 (150 X mm, Ịim) - Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút - Pha động: dung dịch acid sulfuric 0,01% - Thể tích mẫu tiêm: nL - Bước sóng phát hiện: 210 nm Nhiệt độ buồng cột; 30°c Phương pháp tỉnh chế - Dịch chiết nước để lắng, lọc loại tạp học, cô đến cao đặc - Loại bớt tạp chất giảm hàm ẩm cao tinh chế ethanol 96% - Sử dụng loại dung môi sau: methanol, hỗn hợp methanol - isopropanol, hỗn hợp methanol - aceton isopropanol để kết tàa hoạt chất thu sản phẩm thô - Sử dụng than hoạt kết tinh lại isopropanol thu sản phẩm Kiểm tra chất lượng sản phẩm Tiến hành đo nhiệt độ nóng chảy, đo suất quay cực, đo phổ IR (vùng bước sóng 4000 - 400 cm’'), đo phổ MS (nguồn ion hoá ESI), đo phổ 'H-NMR (500 MHz, DMSO) '^C-NMR (125 MHz, DMSO) Kết nghiên cứu Tinh chế acid shikimic Khảo sát lựa chọn dung môi tinh chế Kết thu từ trình tinh chế thể bảng Bảng Ket trình tinh chế sử dụng dung môi tinh chế khác m sp MeOH/Aceton MeOH/IPA (1:3) (1:3) 7,05 ±0,16 8,05 ± 0,06 7,58 ±0,10 7,83 ± 0,09 80,20 90,60 83,51 88,5 5,23 ± 0,07 6,89 ± 0,03 6,00 ± 0,03 6,54 ±0,02 95,16 99,51 98,05 99,18 51,31 70,68 60,65 66,87 MeOH Dung môi tinh chế thô ( g ) % AS SP thô m sp sau tinh chế (g) % AS SP Hiệu suât tinh chê ... lượng acid shikimic tủa thô cao Đề xuất phương pháp chiết xuất acid shikimic Sau tiến hành khảo sát nhiều thí nghiệm, đề xuất phương pháp chiết xuất acid shikimic từ đại hồi nước vừa thu acid shikimic. .. Nghiên cứu phát triển hồi làm nguyên liệu sản xuất acid shikimic khai thác tinh dầu, Đề tài Khoa học Công nghệ cấp Bộ, Viện Dược liệu Nguyễn Đình Luyện (2006), Chiết xuất acid shikimic từ hoa hồi. .. Hạnh, Nguyễn Văn Hân, Lưu Thị Quyên (2013), Nghiên cứu chiết xuất acid shikimic từ đại hồi nước kết hợp chưng cất tinh dầu Phần 1; Giai đoạn chiết xuất, Tạp chí Dược học, số 448, tr 45-50 LI Wei,