Thử nghiệm sản xuất cá trê vàng (clarias macroephalus gunther, 1864) đa bội

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN HUỲNH TẤN HỒNG THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT GIỐNG CÁ TRÊ VÀNG ĐA BỘI (Clarias macrocephalus Gunther) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ts BÙI MINH TÂM 2009 Chương I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu Nhóm cá trơn nói chung cá trê nói riêng phân bố rộng rãi, đặc biệt vùng nhiệt đới Á nhiệt đới Chúng sống nhiều loại hình thủy vực khác kể môi trường giàu chất dinh dưỡng Trong loài cá trê nước ta cá trê vàng (Clarias macrocephalus) loài có giá trị kinh tế nhất, chất lượng thịt thơm ngon nên nhiều người ưa chuộng thịt cá có màu vàng nghệ trông hấp dẫn nên thu hút nhiều thực khách Do cá chậm lớn so với cá giống loài khác nên xu hướng người ta nuôi loại cá khác họ cá trê nhiều hơn, điều làm sản lượng cá trê vàng ngày cạn kiệt Với thực tế đó, để khắc phục nhược điểm cá trê vàng số biện pháp đặt cho lai tạo loài cá trê với Bên cạnh có vài nghiên cứu gây đa bội thể cá tiến hành chưa phổ biến rộng rãi Kết sản lượng cá trê tăng lên lại làm chất lượng thịt cá giảm làm cho nguy cá trê vàng bị tuyệt chủng phát triển lấn át loài cá khác Từ vấn đề nên đề tài “Thử nghiệm sản xuất cá trê vàng (Clarias macroephalus Gunther, 1864) đa bội” thực Trại Thực Nghiệm – Bộ môn kỹ thuật nuôi thủy sản nước – Khoa thủy sản – Trường Đại Học Cần Thơ cần thiết 1.2 Mục tiêu đề tài Nhằm tìm thời gian sốc nhiệt hợp lý cho tỷ lệ cá trê vàng đa bội cao 1.3 Nội dung đề tài Tiến hành sốc nhiệt trứng thụ tinh sau 15 phút oC 10, 20, 30 phút So sánh tiêu tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ nở tỷ lệ dị hình cá trê vàng bình thường cá trê vàng đa bội So sánh tỷ lệ sống, tốc độ tăng trưởng chiều dài khối lượng cá sốc nhiệt cá bình thường sau ương Xác định tỷ lệ cá trê vàng đa bội xuất nghiệm thức sốc nhiệt Theo dõi yếu tố môi trường nhiệt độ, pH, hàm lượng oxy hòa tan, NH3, NO2- Chương II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược đặc điểm sinh học cá trê vàng 2.1.1 Vị trí phân loại Cá trê vàng có tên khoa học Clarias macrocephalus Gunther (Nguyễn Bạch Loan, 2003) với vị trí phân loại sau: Ngành: Chordata Ngành phụ: Verebrata Lớp: Osteichthyes Bộ: Siluriformes Họ: Clariidae Giống: Clarias Loài: Clarias macrocephalus Gunther 2.1.2 Phân bố Cá phân bố rộng giới, đặc biệt vùng Á nhiệt đới nhiệt đới.Chúng có khả sống tốt vùng nước thiếu oxy giàu chất hữu cơ.Để nhận dạng cá trê vàng với loài cá trê khác ta dựa vào: cá trê vàng xương chẩm hình vòng cung, trê trắng xương hình chữ V, trê phi xương chẩm hình chữ M, trê đen xương chẩm tương tự cá trê trắng, gốc xương chẩm tù Cá trê vàng mấu xương chẩm có dạng hình vòng cung, chiều rộng gốc mấu xương chẩm lớn lần chiều cao (Trương Thủ Khoa Trần Thị Thu Hương, 1993) 2.1.3 Đặc điểm sinh sản Ngoài tự nhiên cá sinh sản quanh năm, cá thành thục lần đầu khoảng tháng tuổi Cá có hai mùa sinh sản tháng 3-6 tháng 7-8 hàng năm Sức sinh sản tương đối cá dao động từ 40.000 – 50.000 trứng/kg cá Trứng cá trê thuộc loại trứng dính có tập tính làm tổ đẻ dọc theo bờ ao, mực nước nông, nhiệt độ cho cá sinh sản tốt từ 28-30 o C Sau cá sinh sản xong ta nuôi vỗ tái thành thục khoảng 30 ngày cá tham gia sinh sản trở lại Phân biệt cá đực, cá cái: Cá cái: Bụng to, mềm đều, lỗ sinh dục hình vành khuyên phồng to thường có màu đỏ nhạt Lấy ngón tay vuốt nhẹ bụng cá từ xuống thấy có trứng chảy ra, kích cở trứng đồng đều, căng tròn với màu sắc đặc trưng Cá đực: Có gai sinh dục dài, hình tam giác, phía đầu gai sinh dục nhọn nhỏ, gai sinh dục màu hồng nhạt 2.1.4 Đặc điểm dinh dưỡng Cá trê loài ăn tạp thiên động vật đáy, cá thích ăn xác động vật thối rữa Cá trê có đặc tính ăn tạp, thức ăn chủ yếu động vật Trong tự nhiên cá trê ăn côn trùng, giun ốc, tôm, cua, cá, điều kiện ao nuôi cá trê ăn phụ phẩm từ trại chăn nuôi, nhà máy chế biến thủy sản, chất thải từ lò mổ (Dương Nhật Long, 2003) Khả sử dụng thức ăn chế biến cá cao (Nguyễn Văn Kiểm, 2004) 2.1.5 Điều kiện nuôi Cá trê vàng loài dễ nuôi, sống phát triển tốt môi trường có hàm lượng hữu cao Vùng nước không bị nhiễm phèn hay nhiễm phèn nhẹ, yếu tố môi trường thích hợp cho phát triển cá Nhiệt độ thích hợp từ 26-32oC, chịu nhiệt độ thấp 15 oC 38-40oC pH thích hợp 6,5-7 sống vùng nhiễm phèn trung bình với pH = 5,5 Oxy ppm, đặc biệt cá có quan hô hấp phụ nên chịu đựng môi trường dưỡng khí thấp, ppm sống N-NH3 0,2 - ppm 2.1.6 Một số bệnh thường gặp Trong trình ương nuôi cá có số bệnh sau (Đào Hoàng Đẳng, 1992) Bệnh lỡ loét: Bệnh xuất sau mưa kéo dài Cá bị xay xát đánh bắt hay vận chuyển Môi trường nuôi bẩn Triệu chứng: Trên thể xuất vết loét lúc đầu nhỏ, to ăn sâu vào xương, bệnh nặng vết loét ăn sâu vào đầu, cá bỏ ăn chết hàng loạt Bệnh trắng da: Bệnh thường xuất nhiệt độ môi trường thấp, cá bị đánh bắt, lọc, vận chuyển làm cá xay xát làm bệnh dễ dàng xâm nhập Bệnh thường xảy cá giống Triệu chứng: Trên da cá xuất vài điểm trắng lớn nhỏ khác nhau, thân có màu trắng nhợt nhạt, gan có đốm trắng nhỏ li ti, cá nhớt, râu quéo lại bị ăn cụt, cá treo ngày nhiều sau chết hàng loạt thời gian ngắn Ngoài số bệnh khác bệnh nhiễm nấm thủy my, ký sinh trùng bám 2.2 Sơ lược đa bội thể Việc vận dụng kỷ thuật nhiễm sắc thể để sản xuất cá đa bội tiến hành nghiên cứu từ năm 1970 (Thorgaard 1983, 1986) 2.2.1 Khái niệm đa bội thể Đa bội thể dùng để cá thể có thừa nhiễm sắc thể Bình thường nhiễm sắc thể hoàn chỉnh lưỡng bội (2N) Và cá thể đa bội (3N) tứ bội (4N) Đa bội cá có khả sống sót thường bất thụ tuyến sinh dục không phát triển (Phạm Thanh Liêm & ctv, 2006) Đa bội thể thay đổi số lượng nhiễm sắc thể Sự thay đổi số lượng nhiễm sắc thể có nhiều kiểu gồm đa bội nguyên (euploidy), đa bội thể lai (alloploidy) đa bội thể lệch (aneuploidy) Đa bội thể nguyên: Sự tăng nguyên lần số nhiễm sắc thể đơn bội loài Các dạng gồm thể đơn bội (monoploid), thể đa bội (triploid) thể tứ bội (tetraploidy) Đa bội thể lai: Là kết hợp nhiễm sắc thể loài khác đứng chung tế bào Đa bội thể lệch: Là thay đổi số lượng nhiễm sắc thể cặp (Phạm Thành Hổ, 2000) 2.2.2 Đặc điểm cá thể đa bội Theo Phạm Thanh Liêm & ctv (2006), cá đa bội thường tăng trưởng nhanh so với cá lưỡng bội bình thường, gia tăng có là kết việc tuyến sinh dục không phát triển, tốc độ tăng trưởng loài cá thường chậm lại chúng thành thục sinh dục gia tăng kích thước tế bào 2.2.3 Thuận lợi việc nuôi cá đa bội Tăng trưởng nhanh, gia tăng sản lượng, chất lượng thịt tăng Sự bất thụ tính trạng mong muốn đạt được, đồng thời ngăn cản tạp lai trở lại với loài bố mẹ Hạn chế trình xác định loài ngoại nhập nuôi hay không, hạn chế phân bố chúng vùng địa lý khác Nâng cao hiệu sử dụng thức ăn thường áp dụng cho loài lớn chậm (Jeff C Dillon, 1988) 2.2.4 Nguyên lý tạo cá thể đa bội Phương pháp gây đa bội dựa nguyên lý kích thích mẫu sinh nhân tạo Tiến hành thụ tinh trứng bình thường, xử lý trứng để lưỡng bội hóa nhiễm sắc thể thời điểm giảm phân II, kết hình thành phôi đa bội Ngoài ra, đa bội thể tạo cách lai thể tứ bội (4n) thể lưỡng bội (2n) (Nguyễn Tường Anh, 1999) Đa bội tạo trình thụ tinh bình thường, sau trình giữ lại thể cực thứ Nếu đồng hợp XX , tất hệ nhận nhiễm sắc thể X từ mẹ nhiễm sắc thể X Y từ bố Khi XXX cái, XXY đực Nếu đực đồng hợp ZZ, hệ đa bội có kiểu gen WWZ, WZZ ZZZ, giới tính không xác định Thể cực thứ giử lại cách sốc nhiệt (lạnh nóng), áp suất thủy tỉnh, sốc hóa chất thời gian ngắn sau thụ tinh Thời gian gây sốc khác tùy loài Gây sốc áp suất thủy tỉnh thường có tỷ lệ sống, tỷ lệ đa bội cao so với sốc nhiệt 2.3 Các phương pháp gây đa bội Theo Phan Cự Nhân ctv (2003), người ta sử dụng phương pháp để gây đa bội thể thực vật động vật (thực vật chủ yếu) 2.3.1 Phương pháp ly tâm Người ta đặt thể quan có tế bào phân chia vào ly tâm, để ngăn cản hình thành sợi thoi vô sắc, ngăn cản nhiễm sắc thể di chuyển cực tế bào 2.3.2 Phương pháp sốc nhiệt Nhiệt độ tăng giảm dần giới hạn ảnh hưởng tới tần số đột biến Sốc nhiệt làm thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ cao thấp mức trung bình đột ngột có hiệu gây đột biến Nguyên nhân thể sinh vật có chế nội cân bằng, giữ cho hoạt động sinh lý tế bào không bị thay đổi nhiệt độ thay đổi Khi sốc nhiệt, nhiệt độ tăng hay giảm cách bất bình thường chế bị phá vỡ, gây chấn thương máy di truyền tế bào Và cản trở dịch chuyển nhiễm sắc thể từ mặt phẳng xích đạo thoi vô sắc cực tế bào tạo nên đột biến 2.3.3 Phương pháp gây chấn thương Phương pháp hiệu họ cà Ở họ cà, chổ chấn thương cắt ghép dễ hình thành mô sẹo Từ mô sẹo, từ nách cắt ngang mộc chồi bất định có số lượng nhiễm sắc thể tế bào tăng gấp đôi 2.3.4 Phương pháp đa phôi Sau thụ tinh, số phôi đa bội hình thành từ hình thành thể đa bội 2.3.5 Phương pháp phóng xạ Khi tế bào phân chia tiến hành chiếu xạ xạ ion hóa ngăn cản làm đứt sợi thoi vô sắc Nhiễm sắc thể lại mặt phẳng xích đạo thoi vô sắc, tạo nên tế bào đa bội 2.3.6 Phương pháp xử lý tác nhân hóa học Một số chất Acenafen, Monoclobenzen, Paradiclorbenzen,… ngăn cản hình thành thoi vô sắc, gây đứt sợi thoi vô sắc cản trở hình thành màng ngăn tế bào phân cắt Kết tạo tế bào nhiều nhân, có số lượng nhiễm sắc thể tăng gấp bội Nguyên nhân, tác nhân gây đột biến có khả thẩm thấu qua màng tế bào màng nhân, đồng thời gây thay đổi trạng thái DNA nhiễm sắc thể (Khuất Hữu Thanh, 2005) 2.3.7 Xử lý Colchicine Đây phương pháp cho hiệu cao áp dụng phổ biến Colchicine có công thức hóa học C22H25NO6, loại kiềm thực vật, có độc tính cao chiết xuất từ Colchicum autumnale mọc Địa Trung Hải, dễ tan nước, rượu benzen Colchicine ngăn cản nhiễm sắc thể di chuyển từ mặt phẳng xích đạo cực tế bào, làm tăng gấp đôi số lượng nhiễm sắc thể tế bào Người ta sử dụng Colchicine nồng độ 0,1-0,2% để xử lý tế bào động vật nuôi cấy 2.4 Sơ lược hồng cầu 2.4.1 Hồng cầu Hồng cầu loại huyết cầu có số lượng nhiều tế bào máu Huyết cầu tế bào trưởng thành phần lớn hình bầu dục Hồng cầu cá có nhân, hai bên lồi Do có nhân nên hồng cầu cá có mức độ tiêu hao oxy lớn (Đỗ Thị Thanh Hương & ctv, 2000) Kích thước: Biến động lớn tùy theo loại cá, to cá sụn, cá miệng tròn đến cá xương Kích cở hồng cầu nhỏ số lượng hồng cầu đơn vị thể tích nhiều, mức độ tiến hóa loài cao Kích thước hồng cầu biểu thị a*b, đơn vị tính µm Trong đó, a: đường kính lớn, b: đường kính nhỏ 2.4.2 Số lượng hồng cầu Trong điều kiện bình thường số lượng hồng cầu loài cá ổn định, phản ánh tập tính sống cá, cá sống tầng mặt có số lượng hồng cầu thấp có đầy đủ oxy xuống sâu số lượng hồng cầu nhiều (Đỗ Thị Thanh Hương & ctv, 2000) 2.4.3 Chức hồng cầu Hồng cầu tế bào chuyên biệt có chức vận chuyển oxy CO2 Tham gia trì thành phần ion máu, điều hòa pH máu 2.5 Phương pháp xác định thể đa bội Theo Đặng Hữu Lanh ctv (1999), việc xác định thể đa bội có phương pháp sau: Những nghiên cứu cho thấy kích thước nhân tế bào phương tiện đáng tin cậy để phân biệt thể đa bội lưỡng bội Loại tế bào sử dụng phổ biến tế bào hồng cầu Việc xác định thể đa bội tế bào hồng cầu thực thuận lợi với người nghiên cứu Phương pháp đơn giản nhuộm tiểu hạch (nucleoli), số lượng chúng tỷ lệ thuận phản ánh số lượng nhiễm sắc thể tế bào Phương pháp đơn giản so sánh giải phẩu hình thái lai đa bội bố mẹ lưỡng bội cách đếm số lượng sắc tố ấu trùng Một cách trực tiếp kiểm tra số lượng nhiễm sắc thể Phương pháp xác, gặp khó khăn chuẩn bị tiêu Ngoài ra, dựa vào hàm lượng DNA, phức tạp ứng dụng thực tế ý nghiên cứu 10 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Biến động yếu tố tiêu môi trường Biến động NO2Ngày TN NTDC NTI NTII NTIII 0 0 15 0.2 0.3 0.4 0.5 30 0.5 0.5 1.5 45 TB 0.68 0.95 1.35 1.75 15 6 30 9 45 4 TB 5.75 6.25 5.75 6.00 0.05 0.05 0.05 0.05 15 0.2 0.3 0.2 0.4 30 0.4 0.5 0.3 0.5 45 0.2 0.3 0.1 0.4 TB 0.21 0.29 0.16 0.34 7.5 7.6 7.8 7.7 15 7.9 8.1 30 8.1 8.3 8.3 8.2 45 8.3 8.4 8.4 8.3 TB 7.95 8.08 8.15 8.05 Biến động NO3Ngày TN NTDC NTI NTII NTIII Biến động NH4+/NH3 Ngày TN NTDC NTI NTII NTIII Biến động pH Ngày TN NTDC NTI NTII NTIII 42 Biến động oxy hòa tan Ngày TN NTDC NTI NTII NTIII 6 6 15 30 5 45 TB 5.25 4.50 5.75 5.00 Phụ lục 2: Các tiêu sinh sản Nghiệm thức NTDC NTI NTII NTIII 40 25 30 Tỷ lệ thụ tinh (%) 45 60 65 30 28 29 Tỷ lệ nở (%) 54 0 45 0 Chiều dài cá bột (mm) 4.96 4.96 4.16 4.8 Chiều dài noãn (mm) 2.48 1.92 2.08 Tỷ lệ dị hình (%) Mật độ (con) 1300 1300 1300 250 Tỷ lệ sống (%) 40 68 90.3 68.8 Cá thu (con) 520 884 1174 172 Phụ lục 3: Chiều dài khối lượng cá thu kết thúc Chiều dài KT TB LC Khối lượng KT TB LC NTDC NTI 61.64 78.74 61,64±10,5a 78,74±9,2b NTDC 2.68 2,68±2,6a NTI 4.94 4,94±1,5b 43 NTII NTIII 68.63 97.73 68,63±12,9c 97,73±12,1d NTII 3.27 3,27±2,0a NTIII 10 10±2,9c Phụ lục 4: Thu mẫu lần (ngày thứ 15) 44 Stt 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 TB LC NTDC NTI NTII NTIII L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) 18 0.09 35 0.56 30 0.46 33 0.56 24 0.17 32 0.52 26 0.32 29 0.52 35 0.25 25 0.31 28 0.31 36 0.31 28 0.18 30 0.28 29 0.28 28 0.28 27 0.15 23 0.25 25 0.27 29 0.25 25 0.16 22 0.26 29 0.31 30 0.26 27 0.14 20 0.18 38 0.59 27 0.18 27 0.16 18 0.2 26 0.27 30 0.2 23 0.11 14 0.16 30 0.36 30 0.16 26 0.18 20 0.26 30 0.39 18 0.26 19 0.11 36 0.54 29 0.31 35 0.58 24 0.15 27 0.38 27 0.28 30 0.38 16 0.08 34 0.51 28 0.24 34 0.42 29 0.24 32 0.54 29 0.36 28 0.34 25 0.16 26 0.45 26 0.45 26 0.45 27 0.16 34 0.52 22 0.23 34 0.52 24 0.14 33 0.52 33 0.52 33 0.5 22 0.12 36 0.58 24 0.31 24 0.31 28 0.2 28 0.3 28 0.3 31 0.41 18 0.1 20 0.25 19 0.22 19 0.24 19 0.11 25 0.27 24 0.25 32 0.47 26 0.17 34 0.54 30 0.41 34 0.54 24 0.13 29 0.5 29 0.5 33 0.5 19 0.11 32 0.51 32 0.41 32 0.51 20 0.11 31 0.5 27 0.32 28 0.41 26 0.18 33 0.51 27 0.31 33 0.51 21 0.17 26 0.31 26 0.31 30 0.36 17 0.09 34 0.56 27 0.31 29 0.49 22 0.16 31 0.49 31 0.39 28 0.39 27 0.18 38 0.59 29 0.34 31 0.47 23.77 0.15 28.60 0.41 27.93 0.34 29.80 0.39 4.3 0.0 6.2 0.1 3.5 0.1 4.1 0.1 Phụ lục 5: Thu mẫu lần (ngày thứ 30) 45 NTDC NTI NTII NTIII L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) 44 1.2 61 3.24 56 2.21 95 8.12 67 2.32 77 5.07 60 2.47 90 6.25 59 2.07 75 4.12 70 3.01 96 8.75 52 1.19 87 6.31 80 3.99 87 6.99 60 2.27 86 6.43 80 4.01 85 6.01 55 1.31 63 2.99 58 2.32 104 11.62 55 1.49 81 5.72 57 2.21 60 3.99 60 2.21 76 4.81 75 4.37 90 7.42 52 1.87 80 5.07 8.5 4.99 111 13.07 51 1.71 90 7.78 65 2.47 95 8.42 59 2.09 81 5.27 55 2.01 95 10.07 55 1.22 82 4.39 61 2.12 75 9.06 49 1.28 76 4.11 65 2.19 93 9.41 52 1.41 86 7.12 60 2.21 65 3.07 65 2.36 81 5.72 55 1.41 98 10.41 45 1.17 76 5.07 72 3.21 63 10.27 61 3.02 86 6.32 45 1.27 75 4.01 60 2.11 75 3.81 55 1.42 87 7.03 65 2.37 82 5.97 65 2.01 90 9.01 44 0.89 76 4.11 71 3.25 80 6.42 65 2.19 72 2.87 72 2.47 95 9.31 65 2.47 82 7.01 51 1.12 90 8.41 63 2.29 78 4.37 73 3.22 96 10.07 60 2.41 72 3.09 54 1.88 105 11.49 50 1.12 75 4.13 57 1.15 86 6.42 57 2.09 58 2.47 72 3.01 109 12.43 53 2.14 70 3.03 75 4.21 103 11.21 56 2.21 77 4.21 45 1.12 76 5.55 58 2.07 81 4.02 57 1.49 102 11.24 56 2.29 78 5.19 55 1.41 64 2.99 56.43 1.90 77.33 4.79 60.82 2.47 88.67 8.28 6.4 0.5 7.4 1.4 13.8 1.1 13.7 2.7 Phụ lục 6: Thu mẫu lần (Ngày thứ 45) 46 NTDC NTI NTII NTIII L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) L (mm) KL (g) 86 7.18 93 7.48 93 7.96 112 13.35 91 6.57 100 10.14 91 7.11 116 13.97 71 3.7 91 7.09 99 8.76 113 13.39 83 4.3 92 7.1 104 10.21 115 15.17 84 5.83 96 7.67 79 4.55 100 12.31 102 10.14 113 13.17 90 6.12 108 12.25 75 4.02 94 7.43 91 7.43 113 13.34 77 4.52 89 6.56 92 7.85 110 12.49 93 7.15 94 7.35 96 9.74 114 14.15 79 4.83 87 5.65 98 9.5 122 17.45 86 89 6.26 103 11.28 119 16.6 87 6.85 90 6.3 95 8.62 113 12.6 85 6.01 97 8.15 106 11.31 115 14.35 80 5.01 95 8.09 96 9.56 125 18.98 84 5.26 93 8.15 88 6.82 105 11.67 103 11.28 102 9.86 88 6.22 123 16.32 86 6.71 91 8.04 101 10.76 131 20.57 93 7.45 96 8.26 99 9.97 103 11.14 90 7.42 100 9.06 93 7.39 123 16.44 79 5.42 92 7.07 101 11.44 113 14.17 92 7.79 91 6.96 94 8.52 102 11 89 7.53 86 5.3 103 11.32 137 27 94 8.08 90 6.87 100 10.25 107 12.56 93 7.51 102 9.78 85 6.63 110 12.58 85 7.12 94 7.8 100 10.02 129 19.32 84 5.73 94 8.46 96 9.04 112 14.87 92 7.72 94 8.44 90 6.37 119 14.7 84 6.07 93 7.79 97 9.2 106 11.82 95 8.84 89 6.88 86 7.15 122 17.87 87 6.96 91 7.28 86 5.73 119 16.34 86.97 6.63 93.93 7.81 94.67 8.56 115.20 14.96 7.2 1.7 5.4 1.5 6.5 1.9 8.8 3.4 47 Phụ lục 7: Đường kính lớn đường kính nhỏ hồng cầu nghiệm thức Đường kính lớn (µ m) NTDC NTI NTII NTIII 9.438 13.022 13.54 10.73 8.605 13.543 14.48 11.563 8.292 11.563 15 12.918 8.292 15.626 14.9 13.543 9.438 11.772 15.94 13.439 8.292 15.001 12.81 13.959 10.376 13.439 15.11 14.793 8.501 13.126 13.33 13.543 8.084 11.459 13.23 11.459 8.396 12.188 9.792 14.064 8.396 12.501 14.17 15.314 8.396 11.772 13.44 13.126 8.709 16.46 14.06 11.355 9.438 17.71 14.38 11.98 7.355 14.48 13.44 12.084 8.813 16.043 10.63 13.022 9.334 17.606 9.897 12.501 8.084 14.689 12.19 15.21 8.292 16.772 15.84 12.501 9.334 15.418 14.59 14.793 8.188 10.626 15.31 13.959 9.438 14.272 14.38 13.543 8.084 14.376 10.94 13.543 10.376 14.793 16.25 13.543 7.563 15.001 13.96 13.855 8.396 15.001 13.23 10.938 10.376 15.314 15.84 10.834 8.084 14.064 16.36 11.98 9.438 17.293 13.96 13.022 12.855 16.147 10.73 12.084 48 Đường kính nhỏ (µ m) NTDC NTI NTII NTIII 7.521 10.626 11.563 8.334 7.73 10.626 11.459 8.021 7.209 10.834 11.147 7.917 7.417 12.605 10.834 11.668 11.668 7.813 7.417 9.167 7.73 12.814 10.626 12.293 11.98 10.938 7.105 11.355 10.626 11.147 8.042 8.959 8.146 10.313 11.772 7.813 9.792 8.542 12.084 10.313 12.501 14.064 7.73 9.897 10.938 10.73 7.521 8.563 13.439 12.501 9.167 6.688 14.064 13.959 9.688 10.938 7.917 7.313 11.98 12.188 7.501 9.272 7.834 8.021 8.542 7.417 14.48 9.897 12.293 7.625 9.792 6.48 12.605 10.834 10.313 7.938 12.293 11.668 11.043 11.876 11.876 7.417 7.709 9.48 7.313 11.876 13.959 9.897 9.063 10.418 7.73 6.375 11.355 12.814 9.584 10.73 11.355 9.376 9.48 11.251 8.021 7.209 11.251 7.396 8.355 9.272 13.959 9.063 7.417 9.897 14.064 11.563 11.563 6.584 9.792 8.751 8.647 7.668 Phụ lục 8: Diện tích số lượng hồng cầu nghiệm thức Diện tích hồng cầu (µ m2) NTDC NTI NTII NTIII 55.722 112.112 124.039 71.561 52.216 114.838 133.58 72.924 46.925 100.185 131.877 81.443 48.279 156.412 128.81 128.81 54.951 87.236 148.233 82.466 50.316 151.641 108.705 137.67 57.871 121.654 144.485 127.787 53.667 95.074 111.771 121.654 51.694 95.415 124.039 70.539 46.136 94.392 67.472 139.033 50.947 101.548 141.759 175.495 49.570 93.37 116.201 112.453 58.542 175.494 141.077 84.169 49.550 193.555 163.568 95.755 42.223 140.055 117.224 77.695 54.197 154.367 63.383 95.074 54.346 199.689 63.042 84.851 48.388 110.749 96.096 149.937 42.180 166.294 135.284 102.23 58.163 148.574 134.943 129.491 47.673 65.768 143.803 131.877 54.181 131.877 163.568 102.571 49.054 111.771 80.762 114.497 51.925 132.558 164.249 103.252 41.559 127.106 128.469 103.593 47.514 110.068 119.609 69.516 68.053 110.408 139.714 63.042 47.068 107.682 179.924 86.555 48.780 191.851 128.81 123.357 77.379 121.654 74.969 82.806 49 Số lượng hồng cầu (tb/mL) NTDC NTI NTII NTIII 2265000 1035000 1615000 1615000 1885000 955000 1180000 1585000 1780000 1145000 1105000 1530000 1835000 1250000 990000 1605000 2115000 1330000 1360000 1495000 1870000 1010000 1410000 1755000 1775000 1080000 1315000 1710000 1640000 1015000 1515000 1495000 1735000 915000 1285000 1310000 1455000 1085000 1425000 1325000 1580000 1210000 1265000 1515000 1490000 1015000 1300000 1400000 2040000 1345000 1005000 1200000 1745000 1205000 1410000 1565000 1675000 1265000 1265000 1300000 1760000 1125000 1535000 1580000 1425000 1170000 1505000 1485000 1685000 1420000 1505000 1205000 2040000 1395000 960000 1535000 1450000 1380000 1390000 1240000 1760000 1505000 1120000 1380000 1480000 930000 1640000 1540000 1640000 1060000 1745000 1405000 2010000 1350000 1650000 1540000 2440000 1065000 1455000 1335000 1700000 1180000 1430000 1295000 1745000 1575000 1550000 1325000 2360000 1535000 1115000 1485000 2390000 1310000 1525000 1535000 2100000 1520000 1350000 1495000 Phụ lục 9: Tỷ lệ cá thể đa bội nghiệm thức sốc nhiệt NTDC 12.084 14.793 13.543 10.834 10.73 13.439 11.98 13.543 13.022 12.501 14.793 13.022 11.355 11.563 13.543 14.064 15.314 13.126 10.938 12.918 13.543 13.959 12.501 13.959 11.459 15.21 13.543 11.98 13.855 12.084 CTDB TLDB (%) Cá thể đa bội NTI NTII 16.147 13.439 15.105 14.793 16.251 15.314 15.835 13.022 13.543 15.939 17.71 14.376 14.272 14.376 17.293 13.959 17.606 15.418 14.585 16.043 16.46 14.064 13.543 14.48 13.126 13.334 0 14.168 13.439 15.001 13.23 15.001 15.626 14.897 15.001 16.772 15.835 15.314 13.23 14.689 14.376 14.064 16.355 15.001 13.959 14.48 13.439 23/30 23/30 76.67 76.67 50 NTIII 14.793 13.543 0 13.439 13.543 13.022 14.793 13.022 0 13.543 14.064 15.314 13.126 12.918 13.543 13.959 13.959 15.21 13.543 13.855 18/30 60 Phụ lục 10: Theo dõi nhiệt độ sáng chiều 15 ngày đầu thí nghiệm Ngày Đốc chứng Sốc 10 phút Sốc 20 phút Sốc 30 phút Sáng Chiều Sáng Chiều Sáng Chiều Sáng Chiều 08/03/2009 29 29.5 29 29 28 29 28 29.5 09/03/2003 28 29 27.5 28 27 28 27.5 28.5 10/03/2009 26 28 26.5 28 26 27.5 26 27.5 11/03/2009 26.5 28 26.5 27.5 26 27.5 26 28 12/03/2009 26.5 28 26 27.5 26 28 26 28 13/03/2009 27 28 26.5 27.5 26.5 27.5 26.5 28 14/03/2009 26 27 26 27 26 27.5 26.5 27.5 15/03/2009 26 27 26 27 26 27 26 27 16/03/2009 26.5 27 26 27 26 26.5 26.5 27 17/03/2009 26.5 27 26 27 26 26.5 26.5 27 18/03/2009 27 28 26.5 28 26.5 27.5 27 28 19/03/2009 27.5 28 27 28 27 28 27.5 28 20/03/2009 27.5 28.5 27 27.5 27.5 28 27 27.5 21/03/2009 27 28 26.5 28 26.5 28 27.5 28 22/03/2009 27 27.5 26.5 27 26.5 27 26.5 27 Phụ lục 11: Theo dõi nhiệt độ sau 30 thí nghiệm 23/03/2009 26.5 27.5 26 27 26 27 26.5 27.5 24/03/2009 27 28 26.5 27 26.5 27.5 27 27.5 25/03/2009 26.5 27.5 26 27 26 27 27 28 26/03/2009 28 29 27.5 29 27.5 28.5 28 29 27/03/2009 27 28 27 28 26.5 27.5 27 28 28/03/2009 28 29 27.5 28.5 27.5 28.5 28 29 29/03/2009 27 28 27 28 27 28 27 28 30/03/2009 27 28 27 28 26.5 27.5 27 28 31/03/2009 29 30 28.5 29 29 30 29 30 01/04/2009 29 30 29 30 29 30 29 30 02/04/2009 28 29 28 29 28 29 27.8 29 03/04/2009 29 30 28.5 30 29.5 29 29 30 04/04/2009 29 30 29 30 29 30 29 30 05/04/2009 29 30 29 30 28 29 29 30 06/04/2009 30 30 30 30 30 30 30 31 07/04/2009 30 31 29 30 29 30 30 31 51 Phụ lục 12: Theo dõi nhiệt độ sau 45 thí nghiệm Ngày Đốc chứng Sốc 10 phút Sốc 20 phút Sốc 30 phút Sáng Chiều Sáng Chiều Sáng Chiều Sáng Chiều 08/04/2009 30 31 30 30 30 30 30 31 09/04/2009 29 30 28.5 30 29 30 29 30 10/04/2009 29 30 28.5 29 28.5 29 29 30 11/04/2009 29 29.5 29 29 29 29.5 29 30 12/04/2009 29 30 29 30 29 30 29 30 13/04/2009 29 30 29 30 29 30 29 30 14/04/2009 29 29.5 28.5 29 28.5 29 28.5 29 15/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 16/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 17/04/2009 29 30 30 31 30 31 30 31 18/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 19/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 20/04/2009 28 29.5 30 31 30 31 30 31 21/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 22/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 23/04/2009 29.5 30.5 30 31 30 31 30 31 Phụ lục 13: Tỷ lệ thụ tinh TLTT NTHUC N Subset for alpha = 05 Tukey HSDNTIII 2.666667 NTI 11.33333 NTII 11.66667 ntdc 62 Sig 0.704931 Duncan NTIII 2.666667 NTI 11.33333 NTII 11.66667 ntdc 62 Sig 0.326176 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 52 Phụ lục 14: Tỷ lệ nở TLN NTHUC N Subset for alpha = 05 Tukey HSDNTII 9.333333 NTIII 9.666667 NTI 10 ntdc 54.66667 Sig 0.999941 Duncan NTII 9.333333 NTIII 9.666667 NTI 10 ntdc 54.66667 Sig 0.960513 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ lục 15: Đường kính lớn DKL NT N Subset for alpha = 05 Tukey HSDdc 8.888767 soc 30 12.97327 soc 20 13.7233 soc 10 14.36923 Sig 0.115667 Tukey B dc 8.888767 soc 30 12.97327 soc 20 13.7233 soc 10 14.36923 Duncan dc 8.888767 soc 30 12.97327 soc 20 13.7233 13.7233 soc 10 14.36923 Sig 0.198791 0.26207 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 53 Phụ lục 16: Đường kính nhỏ DKN NT N Subset for alpha = 05 7.4498 9.8827 11.0738 11.16056667 0.071299688 7.4498 9.8827 11.0738 11.16056667 7.4498 9.8827 Tukey HSDdc soc 30 soc 10 soc 20 Sig Tukey B dc soc 30 soc 10 soc 20 Duncan dc soc 30 soc 10 11.0738 soc 20 11.16056667 Sig 1 0.846198792 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 54 Phụ lục 17: Diện tích hồng cầu DT NT Subset for alpha = 05 35.4171 104.0701 123.9822 127.4466 0.10826 35.4171 104.0701 123.9822 127.4466 35.4171 104.0701 123.9822 123.9822 127.4466 0.053614 0.704279 N Tukey HSD dc soc 30 soc 20 soc 10 Sig Tukey B dc soc 30 soc 20 soc 10 Duncan dc soc 30 soc 20 soc 10 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 55 Phụ lục 18: Số lượng hồng cầu DL NT N Subset for alpha = 05 Tukey HSDsoc 10 1212666.667 soc 20 1364000 soc 30 1459500 dc 1829000 Sig 0.079286414 Tukey B soc 10 1212666.667 soc 20 1364000 soc 30 1459500 dc 1829000 Duncan soc 10 1212666.667 soc 20 1364000 1364000 soc 30 1459500 dc Sig 0.115902086 0.298191042 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 56 1829000 [...]... vào kích cỡ và mật độ tế bào hồng cầu để xác định tỷ lệ cá thể đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt Phương pháp kiểm tra đa bội Do cá thể đa bội lớn nhanh hơn cá thể lưỡng bội, nên một cách đơn giản là so sánh tốc độ tăng trưởng giữa cá thể lưỡng bội và cá thể đa bội từ đó ta có thể xác định được tỷ lệ đa bội xuất hiện trong từng nghiệm thức sốc nhiệt (Thorgaard, 1983) Nhuộm tế bào máu... (µm) 19 Công thức tính tỷ lệ cá đa bội Tỷ lệ đa bội (%) = Số cá thể đa bội * 100 Số cá thể quan sát 3.3 Xử lý số liệu Số liệu về kích thích sinh sản, biến động môi trường và đa bội được xử lý bằng phần mềm Excel 2007 và SPSS để kiểm định sự khác biệt về tăng trưởng và tỷ lệ sống giữa cá trê vàng đa bội (3n) và cá trê vàng bình thường (2n) 20 Chương IV KẾT QUẢ-THẢO LUẬN 4.1 Các yếu tố môi trường 4.1.1... tỷ lệ thụ tinh và tỷ lệ nở, và tỷ lệ dị hình và các kết quả về tăng trưởng thì ở nghiệm thức NTI và NTII cho kết quả tốt nhất A B Hình 20: Hồng cầu cá lưỡng bội (A) và cá đa bội (B) Tóm lại, kết quả nghiên cứu về thử nghiệm sản xuất giống cá trê vàng đa bội cũng phù hợp với các nghiên cứu trước đây Theo A.A GHEYAS et al (2002), thì khi tiến hành đa bội cá Heteropneustes fossilis bằng sốc lạnh ở 4oC... của cá sau 45 ngày ương thì nghiệm thức sốc nhiệt trong 20 phút (NTII) là cao nhất (90,3%) và thấp nhất là nghiệm thức đối chứng (NTDC) (40%) Tỷ lệ cá trê vàng đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt, thì nghiệm thức sốc nhiệt trong 30 phút (NTIII) là thấp nhất (60%), và nghiệm thức sốc nhiệt trong 20 phút (NTI) và 30 phút (NTII) là (76,67%) Đề xuất Tiếp tục nghiên cứu sản xuất giống cá trê vàng. .. bội 34 Bảng 16: Số lượng hồng cầu của cá ở các nghiệm thức NTDC NTI NTII a bc 1829000±285136 1212667±191454 1364000±205671cd NTIII 1459500±143114de Các giá tri của mỗi chỉ số trong cùng một hàng có chữ cái giống nhau thì khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 4.5 Tỷ lệ đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt Bảng 17: Tỷ lệ đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt NTDC 8,9±1,1a... ở nghiệm thức NTDC khác biệt có ý nghĩa thống kê (p ... át loài cá khác Từ vấn đề nên đề tài Thử nghiệm sản xuất cá trê vàng (Clarias macroephalus Gunther, 1864) đa bội thực Trại Thực Nghiệm – Bộ môn kỹ thuật nuôi thủy sản nước – Khoa thủy sản – Trường... cá lưỡng bội (A) cá đa bội (B) Tóm lại, kết nghiên cứu thử nghiệm sản xuất giống cá trê vàng đa bội phù hợp với nghiên cứu trước Theo A.A GHEYAS et al (2002), tiến hành đa bội cá Heteropneustes... kiểm tra đa bội Do cá thể đa bội lớn nhanh cá thể lưỡng bội, nên cách đơn giản so sánh tốc độ tăng trưởng cá thể lưỡng bội cá thể đa bội từ ta xác định tỷ lệ đa bội xuất nghiệm thức sốc nhiệt (Thorgaard,