thực hiện các thí nghiệm trong giáo trình thực tập hóa sinh học (tn364)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH SINH HỌC THỰC HIỆN CÁC THÍ NGHIỆM TRONG GIÁO TRÌNH THỰC TẬP HĨA SINH HỌC (TN364) Cán hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Ts ĐÁI THỊ XUÂN TRANG NGUYỄN NGỌC HUỲNH VÕ THỊ TÚ ANH MSSV: 3092341 Lớp: SINH HỌC K35 Cần Thơ, 2013 LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình thực luận văn, em nhận quan tâm, giúp đỡ tận tình q Thầy cơ, bạn bè từ gia đình Em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới cô Đái Thị Xuân Trang, thầy Trần Thanh Mến cô Võ Thị Tú Anh tận tình hướng dẫn, bổ sung kiến thức động viên em suốt thời gian học thời gian thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn quý Thầy Cô khoa Khoa Học Tự Nhiên quý thầy cô thuộc Bộ môn Sinh học giảng dạy truyền đạt kiến thức cho em suốt khóa học Xin gửi lời cảm ơn đến thầy Phạm Quốc Nhiên cán phòng thí nghiệm Hóa – Khoa Khoa Học Tự Nhiên – Trường Đại học Cần Thơ giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em trình thực đề tài Chân thành cảm ơn tập thể lớp Sinh Học K35 giúp đỡ em trình học tập hoàn thành luận văn Xin cảm ơn gia đình, đặc biệt mẹ, lo cho ăn học nguồn động lực động viên quý báu để vượt khó khăn học tập tốt Em xin chúc quý Thầy Cô bạn sinh viên thành công dồi sức khỏe công tác tốt Cần Thơ, ngày 20 tháng 05 năm 2013 Nguyễn Ngọc Huỳnh i LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết Luận văn hoàn thành dựa kết nghiên cứu thân tơi Các số liệu kết có luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố luận văn trước Cán hướng dẫn Sinh viên thực Nguyễn Ngọc Huỳnh ii MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ LỜI CAM KẾT ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT x PHẦN I: GIỚI THIỆU PHẦN II: NỘI DUNG xii Bài 1: Carbohydrate xii Cơ sở lí thuyết xii 1.1 Carbohydrate xii 1.2 Glycogen xii 1.3 Nguyên tắc thí nghiệm xiv Nội dung thực hành xiv 2.1 Phương tiện, phương pháp thí nghiệm xiv 2.1.1 Mẫu vật xiv 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị xiv 2.2 Tiến trình thí nghiệm xiv 2.2.1 Chiết xuất glycogen xiv 2.2.2 Kiểm tra dịch glycogen chiết xuất xác định thành phần cấu tạo xv iii Kết thảo luận xv Bài 2: Lipid xviii Cơ sở lý thuyết xviii 1.1 Sơ lược lipid xviii 1.2 Lecithin xviii 1.3 Nguyên tắc thí nghiệm xix Nội dung thực hành xx 2.1 Phương tiện, phương pháp xx 2.1.1 Mẫu vật xx 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị xx 2.2 Tiến trình thí nghiệm xx 2.2.1 Chiết xuất lecithin xx 2.2.2 Xác định thành phần cấu tạo xxi Kết thảo luận .xxi Bài 3: Xác định hoạt tính enzyme amylase xxv Cơ sở lý thuyết xxv 1.1 Sơ lược enzyme xxv 1.2 Enzyme amylase xxv 1.3 Nguyên tắc thí nghiệm xxvi Nội dung thực hành .xxvi 2.1 Phương tiện, phương pháp xxvi 2.1.1 Mẫu vật xxvi 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị xxvii 2.2 Tiến trình thí nghiệm xxvii 2.2.1 Trích amylase tinh khiết hóa xxvii 2.2.2 Xác định hoạt tính amylase xxvii Kết thảo luận xxviii iv Bài 4: Phản ứng oxy hóa – khử .xxix Cơ sở lý thuyết: .xxix 1.1Phản ứng oxy hóa khử sinh học xxix 1.1.1 Gốc tự xxix 1.1.2 Chất chống oxy hóa xxx 1.2DPPH Trolox xxx 1.2.1 DPPH xxx 1.2.2 Trolox xxx 1.3Nguyên tắc thí nghiệm xxxi 2.Nội dung thực hành xxxii 2.1 Phương tiện phương pháp xxxii 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị xxxii 2.1.2 Tiến trình thí nghiệm xxxii 3.Kết thảo luận .xxxii Bài 5: Định lượng Vitamin C phương pháp Muri xxxv 1.Cơ sở lý thuyết .xxxv 1.1 Vitamin C xxxv 1.2 Nguyên tắc thí nghiệm xxxvi Nội dung thực hành xxxvii 2.1 Phương tiện, phương pháp xxxvii 2.1.1 Mẫu vật xxxvii 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị xxxvii 2.1.3 Tiến trình thí nghiệm xxxvii Kết thảo luận xxxix PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ xlii Kết luận xlii v Đề nghị xlii TÀI LIỆU THAM KHẢO xliii PHỤ LỤC .xlv vi DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Giá trị OD sau lần thực thí nghiệm xác định hoạt tính amylase 19 Bảng 2: Giá trị OD khả chống oxy hóa trung bình trolox 23 Bảng 3: Thể tích 2,6 diclorophenol indophenol (ml) sau lần định phân 29 Bảng 4: Khối lượng vitamin C có mẫu vật 29 vii DANH SÁCH HÌNH Hình Cấu trúc glycogen xiii Hình Cấu trúc glycogen amylopectin .xiii Hình 3: Phản ứng màu glycogen với iod xvi Hình 4: Màu phản ứng Fehling glycogen xvi Hình 5: Màu phản ứng Fehling dịch thủy phân glycogen xvii Hình 6: Công thức cấu tạo lecithin xix Hình 7: Phản ứng thủy phân lecithin xxii Hình 8: Giọt mỡ bề mặt dung dịch thủy phân lecithin xxii Hình 9: Tinh thể choline periodide kính hiển vi (vật kính E20) .xxiii Hình 10: Phản ứng tạo acrolein glycerol dịch thủy phân lecithin (bên trái), glycerol nguyên chất (bên phải) xxiv Hình 11: Phương trình phản ứng phosphoric acid xxiv Hình 12: Cấu trúc phân tử trolox (a) -tocopherol (b) xxxi Hình 13: Độ hấp thụ quang phổ thí nghiệm xxxiii Hình 14: Khả làm DPPH trolox nồng độ đo bước sóng 517nm xxxiv Hình 15: Dạng gốc tự (1) dạng sau phản ứng (2) DPPH xxxv Hình 16: Dạng khử oxy hóa vitamin C (acid ascorbic) xxxvi Hình 17: Phản ứng oxy hóa khử ascorbic acid 2,6 DCIP .xli viii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT OD: optical density ROS: reactive oxygen species RNS: reactive nitrogen species RSS: reactive sulfua species DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid DPPH: 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Trolox: 6-hydroxy- 2, 5, 7, 8-tetramethylchromane-2-carboxylic acid DPPH-H: diphenyl-picrylhydrazine DCIP: 2,6-diclorophenol indophenol ix Phản ứng thể Hình 15 (Z đại diện cho DPPH, AH đại diện cho chất cho điện tử) NO2 O2N NO2 N H N O2N N NO2 N NO2 1: Diphenylpicrylhydrazyl 2: Diphenylpicryhydrazine Hình 15: Dạng gốc tự (1) dạng sau phản ứng (2) DPPH Nguồn: Molyneux, 2004 Trong phản ứng với gốc tự DPPH, trolox cho điện tử, N gốc tự DPPH nhận điện tử làm chúng chuyển đổi thành DPPH-H (1,1diphenyl-2-picryl hydrazine); từ làm giảm gốc tự DPPH Khi chất chống oxy hóa làm gốc tự màu tím đặc trưng gốc tự DPPH dần xuất màu vàng DPPH-H Thí nghiệm thường sử dụng nghiên cứu khảo sát hiệu làm gốc tự chất chống oxy hóa, đặc biệt chất có nguồn gốc tự nhiên Khi nghiệm thức có trolox xem đối chứng dương, khả chống oxy hóa chất khảo sát nghiên cứu so sánh với đối chứng dương Bài 5: Định lượng Vitamin C phương pháp Muri Cơ sở lý thuyết 1.1 Vitamin C Tên IUPAC: 2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone-2,3-enediol (R)-3,4-dihydroxy-5-((S)- 1,2-dihydroxyethyl) furan-2(5H)-one Công thức phân tử: C6H8O6 Phân tử lượng: 176,12412 (g/mol) xxxv HO HO O O O HO H HO H HO O O OH Acid ascoric (dạng khử) O Acid dehydroascorbic (dạng oxy hóa) Hình 16: Dạng khử oxy hóa vitamin C (acid ascorbic) Vitamin C gọi acid ascorbic, vitamin tan nước Vitamin C tham gia nhiều trình sinh lý quan trọng thể: Quá trình hydroxyl hố hydroxylase xúc tác; trì cân dạng ion Fe2+/Fe3+, Cu1+/Cu2+; vận chuyển H2 chuỗi hơ hấp; làm tăng tính đề kháng thể điều kiện không thuận lợi môi trường, độc tố bệnh nhiễm trùng, làm giảm triệu chứng bệnh lý tác dụng phóng xạ (Đỗ Quý Hai, 2004) Vitamin C có nhiều loại rau tươi, loại có múi cam, chanh, bưởi Nhu cầu hàng ngày cần 70-80 mg/người Nếu thiếu Vitamin C dẫn đến bệnh hoại huyết, giảm sức đề kháng thể, bị bệnh chảy máu răng, lợi hay nội quan (bệnh scorbutus) (Đỗ Quý Hai, 2004) 1.2 Nguyên tắc thí nghiệm Vitamin C hịa tan nước, dễ bị phân hủy tác dụng chất oxy hóa bền mơi trường acid Vì vậy, vitamin C thường chiết dung dịch acid acid acetic, acid metaphosphoric (Nguyễn Văn Mùi, 2001) Acid ascorbic khử chất thị màu 2,6-diclorophenol indophenol (DCIP) có màu xanh thành dung dịch không màu Ở điểm trung hịa tất acid ascorbic thuốc thị màu dư thừa khơng bị khử có màu hồng dung dịch acid Ngoài 2,6-diclorophenol indophenol, iod thường dùng để định lượng acid ascorbic Nguyên tắc phương pháp acid ascorbic khử xxxvi dung dịch iod, dựa vào lượng iod bị khử có mẫu suy hàm lượng acid ascorbic Nội dung thực hành 2.1 Phương tiện, phương pháp 2.1.1 Mẫu vật Bưởi, chanh, hạnh, cam sành 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị Hóa chất: Dụng cụ, thiết bị: 2,6 diclorophenol indophenol (DCIP) Cối chày sứ Acid clohydric Dao inox Acid oxalic Microburet + giá đỡ Carmin indigo Ống nghiệm, giá ống nghiệm Xanh methylen Phễu lọc, giấy lọc 2.1.3 Tiến trình thí nghiệm g trái cân thái nhỏ, cho vào cối sứ, 20 ml HCl 1% sau cho vào ngâm khoảng 10 phút Dịch ngâm sau lọc giữ lại cốc; phần thịt nghiền mịn, chuyển sang bình định mức 100 ml với dung dịch HCl 1% vừa chiết Cối dụng cụ tráng lần với acid oxalic 1%, tất cho vào bình định mức Sau đó, dung dịch đưa lên thể tích 100 ml acid oxalic Tác dụng HCl acid oxalic thí nghiệm tạo môi trường ổn định cho vitamin C Sau lắc kỹ, hỗn hợp dung dịch để yên 15 phút lọc qua giấy lọc Chuẩn độ mẫu đối chứng: hỗn hợp ml acid oxalic 1% ml HCl 1% cho vào bình tam giác dung tích 100 ml, sau chuẩn độ cách dùng microburet với 2,6 diclorophenol indophenol 0,001M đến lúc xuất màu hồng bền sau phút Thể tích 2,6 diclorophenol indophenol dùng để chuẩn độ ghi lại sau lần lặp lại thí nghiệm để lấy kết trung bình Chuẩn độ mẫu thật: 10 ml dịch lọc cho vào bình tam giác dung tích 100 ml tiến hành chuẩn độ mẫu đối chứng xxxvii Số mg vitamin C 100 g mẫu vật tính sau:  (a  b)  0,0088  V  100 vm a: số ml 2,6 diclorophenol indophenol trung bình định chuẩn mẫu vật b: số ml 2,6 diclorophenol indophenol trung bình định chuẩn mẫu đối chứng 0,0088: số mg acid ascorbic tương đương với ml dung dịch chuẩn 2,6 diclorophenol indophenol V: thể tích dịch chiết ban đầu (100 ml) v: thể tích dịch chiết lấy để định chuẩn (10 ml) m: trọng lượng mẫu vật cân ban đầu (3 g) Việc chuẩn bị mẫu vật, cân mẫu vật, cắt mẫu vật (bằng dao inox) nghiền mẫu vật cần tiến hành nhanh chóng vitamin C dễ bị oxy hóa khơng khí, có diện ion kim loại (Fe, Cu) Sản phẩm có chứa Fe2+, Sn2+, Cu2+ cho kết khơng xác Có thể kiểm tra diện ion khử nồng độ đủ để làm sai kết thí nghiệm cách: Thêm giọt dung dịch xanh methylen 0,05% vào 10 ml hỗn hợp (gồm ml dịch chiết ml HCl 1%) Lắc đều, dung dịch xanh methylen bị màu 5-10 giây cho thấy có diện chất có tính khử Sn2+ khơng cho phản ứng với xanh methylen, thử nghiệm cách cho 12 ml dung dịch HCl: nước (tỉ lệ 1:3) vào 12 ml dung dịch chiết Thêm vào giọt dung dịch Carmin indigo 0,05% Khuấy đều, dung dịch bị màu 5-10 giây cho thấy diện Sn2+ hay chất có tính khử khác nói xxxviii Kết thảo luận Kết thí nghiệm định lượng vitamin C mẫu gồm cam sành, hạnh, bưởi chanh trình bày Bảng Bảng Bảng 3: Thể tích 2,6 diclorophenol indophenol (ml) sau lần định phân Mẫu Lần Lần Lần Trung bình Đối chứng 0,2 0,2 0,25 0,22 Cam sành 0,8 0,93 Hạnh 1,52 1,56 1,6 1,56 Bưởi 3,85 3,81 3,76 3,81 Chanh 2,7 2,35 2,5 2,52 Bảng 4: Khối lượng vitamin C có mẫu vật Khối lượng vitamin C Mẫu (mg/100g FW) Cam sành 20,83 Hạnh 39,31 Bưởi 105,3 Chanh 72,74 Ghi chú: mg/100 g FW: số mg vitamin C 100 g trọng lượng tươi Kết kiểm tra diện ion khử: dung dịch xanh methylen carmin indigo không bị màu 5-10 giây cho thấy khơng có diện chất có tính khử xxxix Chất thị DCIP có khả chuyển màu pH môi trường thay đổi từ kiềm sang acid, chất thị chuyển từ xanh sang hồng (DCIP có màu xanh mơi trường kiềm mơi trường acid yếu có màu tím khoảng pH từ đến có màu hồng pH < 4) Khi phản ứng vitamin C electron, electron có tác dụng khử DCIP có màu xanh thành DCIPH có màu hồng sau thành DCIPH2 khơng màu xl Q trình tóm tắt phản ứng sau chi tiết phản ứng trình bày Hình 17 DCIP (màu xanh) + H+ DCPIPH (màu hồng) DCPIPH (màu hồng) + Vitamin C HO CH2 C C H HO + CH HO C OH C C O C C Acid ascorbic (không màu) HO C C C C H O C Cl H 2,6 diclorophenol indophenol (màu hồng) CH2 H O O C + C H HO H Acid ascorbic (dạng oxy hóa, màu nâu) Cl C C C O H C C C O H C C CH HO N C H Cl C C C O H H H HO DCPIPH2 (không màu) C N C C C H H C H C Cl 2,6 diclorophenol indophenol (dạng khử, khơng màu) Hình 17: Phản ứng oxy hóa khử acid ascorbic DCIP xli OH PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Đề tài thực hoàn chỉnh thực hành cho mơn học Thực tập Hóa sinh học (TN364), bao gồm đơn vị bài: Carbohydrate, Lipid, Xác định hoạt tính enzyme amylase, Phản ứng oxy hóa - khử, Định lượng vitamin C phương pháp Muri Trong đó, Phản ứng oxy hóa - khử đưa vào giáo trình Đề nghị Đề nghị sử dụng kết đề tài trình dạy học thực hành Hóa sinh học (TN364) xlii TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Quý Hai (Chủ biên), Nguyễn Bá Lộc, Trần Thanh Phong, Cao Đăng Ngun (2004) Giáo trình Hóa sinh, NXB Đại học Huế Lâm Thị Kim Châu, Văn Đức Chính, Ngơ Đại Nghiệp (2004) Thực tập lớn Sinh hóa, NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ CHí Minh Nguyễn Đức lượng (2004) Công nghệ enzyme, NXB Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Hữu Chấn (chủ biên) (2000), Những vấn đề hóa sinh học đại, Tập I, NXB Khoa học kỹ thuật Nguyễn Nghiêm Luật (2003) Thực tập Hóa sinh, NXB Y Học Nguyễn Văn Mùi (2001) Thực hành Hóa sinh học, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Quang Vinh, Bùi Phương Thuận, Phan Tuấn Nghĩa (2007), Thực tập Hóa sinh học, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Thị Ánh Hồng, Nguyễn Thị Huyên, Trần Mỹ Quan (1999) Thực tập Sinh hóa sở, Tủ sách Đại học Khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh Phạm Thị Trân Châu, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Huỳnh Minh Quyên (2010) Hóa sinh học chất phân tử lớn hệ thống sống, NXB Giáo dục Việt Nam Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1997) Hóa sinh học, NXB Giáo dục Trần Tố, Cù Thị Thúy Nga (2008) Giáo trình Sinh hóa học động vật, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội xliii Tiếng Anh Ismail Hamad, Nazl Arda, Murat Pekmez, Semian Karaer, and Güler Temizkan (2010) Intracellular scavenging activity tetramethylchromane-2-carboxylic acid) of Trolox in the (6-hydroxy-2,5,7,8fission yeast, Schizosaccharomyces pombe, J Nat Sci Biol Med 2010 Jul-Dec; 1(1): 16–21 Jian-Ming Lu, a Peter H Lin, Qizhi Yao and Changyi Chena (2010) Chemicaland molecular machanisms of antioxidants: Experimental approaches and model systems, J Cell Mol Med 2010 April; 14(4): 840–860 Luz E Palacios, Tong Wang (2005) Egg-yolk Lecithin Fractionation and Characterization, Department of Food Science and Human Nutrition, Iowa State University, Ames, Iowa 50011-1061 L W Bennett, R W Keirs, E D Peebles, and P D Gerard, 2007, Poultry Science Association Inc Pauline E Nutter (1940) Depletion of Tissue Glycogen during Fasting and Fatigue and Partial Recovery without Food, Vepartnient of Vital Economics, University of Rochester, New York Phylip Molyneux (2004) The use of the stable free radical diphenylpicrhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity, Songklanakarin J Sci Technol., 2004, 26(2) : 211-219 Preetee P Aklujkar, Santosh N Sankh and Akalpita U Arvindekar, 2008 A Simplified Method for the Isolation and Estimation of Cell Wall Bound Glycogen in Saccharomyces cerevisiae, The Institute of Brewing & Distilling S Seifter, S Dayton, B Novic and E Muntwyler (1949) The Estimation of Glycogen with the Anthrone Reagent, Department of Biochemistry, Long Island College of Medicine, Brooklyn, New York Sagar B Kedare and R P Singh (2011) Genesis and development of DPPH method of antioxidant assay, J Food Sci Technol 2011 August; 48(4): 412–422 xliv PHỤ LỤC Chuẩn bị hóa chất, thuốc thử cho thí nghiệm Bài 1: Carbohydrate Hóa chất, Cách chuẩn bị thuốc thử KOH 30% Cân 30 g KOH cho vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Na2SO4 Cho Na2SO4 vào lượng nước định đến khơng cịn bão hòa tan H2SO4 5N NaOH 5N Dung dịch Lugol Cho 46 ml H2SO4 đậm đặc (98%, d = 1,84 g/ml) vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa lên thể tích đến vạch Cân 20 g NaOH cho vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Hịa tan 0,25 g KI ml nước cất, cho tiếp 0,1 g I2 vào, khuấy Dùng nước đưa lên thể tích 10 ml Bảo quản tối Dung dịch A: g CuSO4 + 100 ml H2O Thuốc thử Fehling Dung dịch B: g KNaC4O6.4H2O + 1,5 g NaOH + 10 ml H2O Khi sử dụng lấy dung dịch A trộn với dung dịch B theo tỉ lệ 1:1 xlv Bài Lipid Hóa chất, Cách chuẩn bị thuốc thử NaOH Cân 10 g NaOH cho vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất 10% đưa thể tích đến vạch H2SO4 Cho 5,55 ml H2SO4 đậm đặc (98%, d =1,84 g/ml) vào bình 10% định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Dung dịch Hỗn hợp gồm 7,5 g amoni molypdate, 40 ml nước cất, 50 ml molypden acid nitric đặc Bài Xác định hoạt tính enzyme amylase Hóa chất Cách chuẩn bị Thuốc thử Hồ tinh bột 1% HCl 0,1N I2 gốc I2 phân tích Cân 1g tinh bột hịa tan vào nước cất, thêm 10 ml nước nóng, đun sôi khuấy cho tan hết, lọc thêm NaCl bão hòa 100 ml Cho 8,2 ml HCl đặc (37%, d = 1,19 g/ml) vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Hòa tan 0,5 g I2 g KI lượng nhỏ nước, lắc nhẹ Cho nước cất lên đến 200 ml Pha loãng ml I2 gốc dd HCl 0,1N bình định xlvi mức 100 ml Đo OD 453 nm 0,16 Nếu sai lệch hiệu chỉnh cách thêm vài giọt dung dịch I2 gốc xlvii Bài Phản ứng oxy hóa - khử Hóa chất Cách chuẩn bị Thuốc thử Trolox 40 mM Cân 0,01 g trolox, hòa tan với ml ethanol tuyệt đối, (10 mg/ml) trữ 4C DPPH 6.10-2 M Cân 0,024 g DPPH, hòa tan với ml ethanol tuyệt đối, trữ tối nhiệt độ phòng Bài Định lượng vitamin C theo phương pháp Muri Hóa chất, Cách chuẩn bị thuốc thử HCl 1% Acid oxalic 1% 2,6 diclorophenol indophenol 0,001 M Dung dịch xanh methylen 0,05% Dung dịch carmin indigo 0,05% Cho 2,3 ml HCl đậm đặc (37%, d =1,19 g/ml) vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích lên vạch Cho 1,4 g acid oxalic vào bình định mức 100 ml, dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Cho 0,168 g 2,6 diclorophenol indophenol vào bình định mức 500 ml dùng nước cất đưa thể tích đến vạch Cân 0,005 g xanh methylen hòa tan với 10 ml nước cất Cân 0,005 g carmin indigo hòa tan với 10 ml nước cất xlviii xlix ... luyện cho sinh viên kỹ thực hành hướng đến nghiên cứu khoa học sau Đề tài tập trung thực thí nghiệm giáo trình thực tập hóa sinh học (TN364) nhằm hồn thiện giáo trình Có thí nghiệm thực hiện, thuộc... học, nhiên giáo trình chưa hồn chỉnh Do đó, việc ? ?Thực thí nghiệm giáo trình thực tập hóa sinh học (TN364)? ?? để hồn thiện giáo trình cần thiết nhằm đạt chất lượng tốt giảng dạy Nội dung giáo trình. .. phòng thí nghiệm Hóa – Khoa Khoa Học Tự Nhiên – Trường Đại học Cần Thơ giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em trình thực đề tài Chân thành cảm ơn tập thể lớp Sinh Học K35 giúp đỡ em trình học tập hoàn