nghiên cứu chế tạo kháng thể lòng đỏ trứng gà kháng đặc hiệu f4 pili của escherichia coli để phòng và trị bệnh tiêu chảy ở lợn sau cai sữa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - NGUYỄN THỊ HỒNG THẮM NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO KHÁNG THỂ LÒNG ðỎ TRỨNG GÀ KHÁNG ðẶC HIỆU F4 PILI CỦA ESCHERICHIA COLI ðỂ PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH TIÊU CHẢY Ở LỢN SAU CAI SỮA LUẬN VĂN THẠC SỸ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú Y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN HỮU NAM HÀ NỘI - 2010 Lời cam ñoan Tôi xin cam ñoan ñây công trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết thể luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tôi cam ñoan thông tin trích dẫn luận văn ñều ñược rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hồng Thắm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… i LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành luận văn tốt nghiệp cố gắng nỗ lực thân, ñã nhận ñược nhiều giúp ñỡ cá nhân tập thể Nhân dịp cho phép ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới: Thầy giáo PGS.TS Nguyễn Hữu Nam, TS Nguyễn Viết Không ñã cung cấp kiến thức chuyên môn bổ ích dẫn dắt suốt thời gian nghiên cứu viết luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới cán bộ, nhân viên - Bộ môn Hoá Sinh, Miễn dịch, Bệnh lý, Viện Thú y ñã tạo ñiều kiện, bảo giúp ñỡ thời gian học tập, nghiên cứu môn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy cô môn Bệnh lý, Khoa Thú Y- Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội - ñã dạy dỗ, giúp ñỡ ñộng viên suốt thời gian qua Tôi xin cảm ơn tới cán bộ, công nhân viên trại lợn Cầu Diễn ñã nhiệt tình giúp ñỡ thời gian thực thí nghiệm trại Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn ñến gia ñình, bạn bè, người ñã tạo ñiều kiện tốt cho hoàn thành luận văn Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hồng Thắm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… ii MỤC LỤC Lời cam ñoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ tắt ký hiệu Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ðẦU TỔNG QUAN 2.1 Vi khuẩn E.coli 2.1.1 ðặc ñiểm hình thái 2.1.2 ðặc tính nuôi cấy, sinh hóa 2.1.3 Kháng nguyên type huyết 2.2 Yếu tố ñộc lực 2.2.1 Yếu tố gây bệnh ETEC 2.2.2 Yếu tố bám dính (Adhesion) 2.2.3 ðộc tố ñường ruột 2.2.4 Yếu tố ñộc lực khác 2.3 Bệnh E.coli gây lợn theo mẹ 2.4 Bệnh tiêu chảy E.coli lợn sau cai sữa 2.4.1 Các chủng gây bệnh 2.4.2 Yếu tố ñộc lực 2.4.3 Sinh bệnh học 2.4.4 Triệu chứng 2.4.5 Bệnh tích 2.4.6 Chẩn ñoán 2.5 Bệnh phù ñầu lợn 2.6 Nhữngnghiên cứu chế phẩm phòng ñiều trị E.coli 2.6.1 Văc xin phòng bệnh lợn tiêu chảy E.coli 2.6.2 Chế phẩm lòng ñỏ trứng phòngtrị lợn tiêu chảy 2.7 Nghiên cứu nước phòng trị bệnh E.coli lợn 2.7.1 Văc xin 2.7.2 Kháng sinh chế phẩm sinh học thay 2.7.3 Kháng thể lòng ñỏ trứng PHẦN III NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ðối tượng nội dung nghiên cứu 3.2 ðịa ñiểm thời gian nghiên cứu 3.3 Nguyên vật liệu 3.3.1 ðộng vật thí nghiệm sinh phẩm 3.3.2 Môi trường, hóa chất 3.3.3 Máy móc, trang thiết bị Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… iii i ii iii v vi vii 3 8 10 12 14 15 15 15 16 16 17 17 18 19 19 19 20 20 21 22 23 23 23 24 24 24 25 3.4 Phương pháp nghiên cứu 26 3.4.1 Phương pháp phân lập giám ñịnh vi khuẩn E.coli 26 3.4.2 Phương pháp PCR xác ñịnh chủng F4 E.coli 27 3.4.3 Phương pháp gây miễn dịch cho gà 29 3.4.4 Chế tạo bột kháng thể lòng ñỏ công nghệ phun sấy khô 31 3.4.5 Phương pháp phối trộn chế phẩm kháng thể lòng ñỏ trứng 32 3.4.6 Phương pháp ELISA kháng thể (Ab-ELISA) 32 3.4.7 Bố trí thí nghiệm phân tích kháng thể F4 pili lợn 37 3.4.8 Bố trí thí nghiệm phân tích kháng thể F4 pili gà miễn dịch 38 3.4.9 Phương pháp xác ñịnh liều ñiều trị 41 3.4.10 Phương pháp ñiều trị theo dõi lợn ñiều trị 42 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Nghiên cứu chế tạo kháng thể lòng ñỏ trứng kháng F4-Pili 44 4.1.1 Kết gây miễn dịch cho gà, thu thập mẫu huyết trứng 44 4.1.2 ðáp ứng miễn dịch gà gây miễn dịch quy trình khác 46 4.1.3 Tương quan hiệu giá kháng thể kháng pili huyết trứng 47 4.1.4 Biến ñộng kháng thể huyết lòng ñỏ trứng gà lô 48 4.2 Nghiên cứu chế tạo chế phẩm lòng ñỏ trứng 50 4.2.1 Chế tạo bột trứng phun sấy khô 50 4.2.2 Phối chế chế phẩm bột lòng ñỏ trứng KT04 50 4.3 Kết xác ñịnh liều ñiều trị 53 4.3.1 Xác ñịnh lợn tiêu chảy E.coli F4 53 4.3.2 Kết xác ñịnh biến ñộng hiệu giá kháng thể lợn 54 4.3.3 Kết xác ñịnh liều ñiều trị lành bệnh 50% 56 4.3.4 Kết xác ñịnh liều ñiều trị 57 4.3.5 Kết kiểm chứng liều ñiều trị 58 4.3.6 ðánh giá ảnh hưởng chế phẩm ñến tăng trọng 59 4.4 Kết ứng dụng chế phẩm phòng trị lợn tiêu chảy 60 4.4.1 Kết ñiều trị lợn tiêu chảy sau cai sữa 60 4.4.2 ðiều trị dự phòng 61 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 63 5.1 Kết luận 63 5.2 Kiến nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 6.1 Tiếng Việt 64 6.2 Tiếng Anh 67 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… iv DANH MỤC CÁC CHỮ TẮT VÀ KÝ HIỆU Ab Antibody BHI Brain Heart Infusion bp Base Pair CFU Colony Forrming Unit E.coli Escherichia coli EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid ELISA Enzyme Linked Immunsorbent Assay EPEC Enteropathogenic Escherichia Coli ETEC Enterotoxigenic Escherichia coli kDal Kilo Dalton kg Kilogram µm Micro mét nm Nano mét O ðộ C OD Optical Density (Mật ñộ quang học) OPD Ortho-phenylenediamin PBS Phosphate Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction TBE Trisbase- Boric acid- EDTA VTEC Verotoxigenic Escherichia Coli C Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… v DANH MỤC CÁC BẢNG Số bảng Tên bảng Trang Bảng 03-01 Trình tự nucleotide cặp mồi sản phẩm nhân gene 28 Bảng 03-02 Thành phần phản ứng PCR 28 Bảng 03-03 Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR 29 Bảng 03-04 Thành phần ống nhũ kháng nguyên 30 Bảng 03-05 Liều kháng nguyên tiêm (mg F4 pili) theo quy trình 30 Bảng 03-06 Thành phần bước thực Ab-ELISA 35 Bảng 03-07 Sơ ñồ ELISA phát kháng thể F4 huyết lợn 38 Bảng 03-09 Sơ ñồ ELISA xác ñịnh ñộ chuẩn kháng thể F4 huyết 39 lòng ñỏ trứng (so sánh quy trình) Bảng 03-10 Sơ ñồ ELISA xác ñịnh ñộ chuẩn kháng thể F4 huyết 40 lòng ñỏ trứng Bảng 03-11 Thí nghiệm xác ñịnh liều ñiều trị 50% lợn tiêu chảy 44 Bảng 04-01 Thu thập mẫu huyết gà miễn dịch trứng gà 44 Bảng 04-02 Dương tính Ab-ELISA với F4-pili lợn 55 Bảng 04-03 Tỷ lệ lành bệnh KT04 ñiều trị lợn tiêu chảy 56 Bảng 04-04 Tỷ lệ lành bệnh KT04 liều cao ñiều trị lợn tiêu chảy 57 Bảng 04-05 Tỷ lệ lành bệnh KT04 theo liều lô thử nghiệm 58 Bảng 04-06 Kết theo dõi trọng lượng lợn ñiều trị KT04 59 Bảng 04-07 Kết theo dõi ñiều trị lợn tiêu chảy KT04 60 Bảng 04-08 Kết theo dõi ñiều trị dự phòng lợn tiêu chảy 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… vi DANH MỤC CÁC HÌNH Số hình Tên hình Trang Hình 03-01 Sơ ñồ phân lập giám ñịnh vi khuẩn E.coli 27 Hình 04-01 Kết ELISA gà ñược gây miễn dịch quy trình 46 Hình 04-02 Kết chuẩn ñộ huyết trứng lô gà thí nghiệm 47 Hình 04-03 Biến ñộng hiệu giá kháng thể huyết lòng ñỏ trứng 49 gà ñược gây miễn dịch quy trình 02 Hình 04-04 Kết chuẩn ñộ lòng ñỏ trứng sau sấy khô chế phẩm 51 Hình 04-05 Kết chuẩn ñộ kháng thể chế phẩm KT04 52 Hình 04-06 Kết PCR xác ñịnh yếu tố ñộc lực F4 E.coli 54 Hình 04-07 Tỷ lệ dương tính huyết học pili F4 lợn 55 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… vii MỞ ðẦU Theo thống kê Tổ chức Nông lương Thế giới (FAO), Việt Nam quốc gia có số ñầu lợn nhiều khu vực ðông Nam châu Á với tổng ñàn lợn 26,9 triệu năm 2006 Trong năm gần ñây, ngành chăn nuôi lợn Việt Nam phát triển mạnh mẽ, dự kiến tổng ñàn ñạt 35 triệu vào năm 2020 (Cục Chăn nuôi), ñóng góp 42% tỷ trọng chăn nuôi nông nghiệp Tiêu chảy lợn hội chứng ña nguyên nhân thức ăn chất lượng, ngoại cảnh thay ñổi, vi sinh vật gây bệnh Các loại vi khuẩn chủ yếu gây tiêu chảy lợn bao gồm: Escherichia Coli (E.coli), Salmonella Clostridium perfringens, ñó E.coli phổ biến Bệnh tiêu chảy E.coli ñã có từ lâu bệnh phổ biến gây chết lợn làm giảm tăng trọng, gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi lợn Vi khuẩn E.coli gây bệnh chủ yếu lợn sau cai sữa, thời ñiểm kháng thể thụ ñộng lại mức thấp chưa có kháng thể chủ ñộng lợn ñã tiếp xúc với mầm bệnh E.coli gây bệnh có yếu tố ñộc lực quan trọng yếu tố bám dính ñầu pili ñộc tố; yếu tố bám dính giúp bệnh bám vào thụ thể niêm mạc ñường ruột, vi khuẩn tăng sinh sản sinh ñộc tố gây bệnh Có thể bệnh E.coli lợn, (1) bệnh phù ñầu E.coli có pili F18, sản sinh ñộc tố vero (VT) gây bệnh phù ñầu, (2) Bệnh tiêu chảy E.coli có kháng nguyên bám dính pili F4, sản sinh ñộc tố ñường ruột chịu nhiệt (ST) không chịu nhiệt (LT) gây tiêu chảy lợn sau cai sữa Các chủng E.coli F5, F6 F18cd ñôi gây bệnh ñường ruột lợn Mỗi tế bào E.coli ñược phủ lớp lông khoảng 3.000 ñơn vị pili, chúng thường xuyên thải pili nguyên dạng, có ñủ kháng nguyên tính gây miễn dịch Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… lợn Vắc xin vô hoạt tác dụng vi khuẩn chết không thải pili Trong phòng thí nghiệm, chiết tách pili cách làm lỏng kết cấu màng vi khuẩn làm giảm áp lực thẩm thấu, shock nhiệt Gây miễn dịch cho gà, chế tạo kháng thể lòng ñỏ trứng ñã trở thành phương pháp phổ biến chế tạo sinh phẩm ñiều trị (kháng thể dị loài) Các sinh phẩm kháng thể lòng ñỏ trứng dùng ñiều trị lợn tiêu chảy Việt Nam (nội ñịa ngoại nhập) có tỷ lệ kháng thể ñặc hiệu kháng pili thấp nguồn kháng nguyên gây miễn dịch toàn khuẩn Gây miễn dịch gà pili tinh chế từ chủng E.coli gây bệnh Việt Nam có ưu thế: (1) nâng cao tỷ lệ kháng thể ñặc hiệu kháng pili (2) phù hợp chủng gây bệnh ñang lưu hành (vốn sản phẩm nhập ngoại) Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn sản xuất, cập nhật công nghệ tiên tiến, nhằm sản xuất chế phẩm sinh học phù hợp phòng trị bệnh tiêu chảy lợn E.coli, tiến hành ñề tài: “Nghiên cứu chế tạo kháng thể lòng ñỏ trứng gà kháng ñặc hiệu F4 pili Escherichia coli ñể phòng trị bệnh tiêu chảy lợn sau cai sữa” Mục tiêu ñề tài là: Sản xuất ñược kháng thể khác loài sử dụng kháng nguyên F4 pili E.coli, ứng dụng ñiều trị ñiều trị dự phòng bệnh tiêu chảy E.coli lợn sau cai sữa Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… ñộng Tuy nhiên, số lợn ñã phơi nhiễm F4 E.coli, tỷ lệ dương tính huyết học với F4 bắt ñầu tăng lên, lợn 35 ngày tuổi, dương tính 12,5% (3) Tại thời ñiểm cai sữa, lợn kháng thể qua sữa mẹ, ñồng thời lượng kháng thể ñặc hiệu huyết thấp nhất, sức kháng lợn cai sữa thấp với F4 E.coli Có thể ñây nguyên nhân lợn mắc tiêu chảy F4 E.coli 4.3.3 Kết xác ñịnh liều ñiều trị lành bệnh 50% Trong thí nghiệm xác ñịnh liều ñiều trị lành bệnh 50% lợn tiêu chảy sau cai sữa, dãy liều tăng gấp ñôi từ 0,125 ñến gam/kgP ñã ñược sử dụng Thí nghiệm lợn cho lô, lặp lại lần, tổng hợp kết tỷ lệ lành bệnh ñược ghi nhận bảng 04-03 Bảng 04-03 Tỷ lệ lành bệnh KT04 ñiều trị lợn tiêu chảy TT Liều (gam/kgP) Số ñiều trị Số lành bệnh % tích lũy 1 10 84,21 0,5 10 52,94 0,25 10 21,05 0,125 10 4,00 Nhận xét: (1) ðối tượng ñiều trị lợn sau cai sữa, giống lai kinh tế ðại Bạch- Yorshire- Móng Cái, cai sữa 28 ngày tuổi, mắc tiêu chảy từ ngày 29 ñến 35, ñiều kiện thực ñịa với có mặt 36,67% F4+E.coli mang gene mã hóa ñộc tố ñường ruột STa, STb LT, xác nhận PCR (như ñã trình bày phần trên) (2) Lợn lành bệnh/không khỏi bệnh ñược ghi nhận sau: lợn tiêu chảy ñược ñiều trị theo liệu trình ñịnh liều /ngày, không can thiệp thêm kháng sinh chất ñiện giải khác, sau liều triệu chứng bệnh không giảm, chuyển phác ñồ khác, ñược tính không lành bệnh, triệu Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… 56 chứng thuyên giảm, ñiều trị tiếp ñến liều thứ 6, không lành bệnh, chuyển phác ñồ khác, ñược tính không lành bệnh; ngược lại lợn ngưng tiêu chảy ñược tính số lành bệnh (3) Kết trình bày bảng 04-03 cho biết, số lợn lành bệnh tăng dần theo liều không ñạt 100%, (4) Liều ñiều trị 50% số lợn tiêu chảy ñược tính toán 0,47 gam/kgP (làm tròn 0,5 gam cho kg thể trọng) 4.3.4 Kết xác ñịnh liều ñiều trị Căn vào liều ñiều trị lành bệnh 50% lợn tiêu chảy thực ñịa, ñể xác ñịnh liều ñiều trị có hiệu thực tế, sử dụng liều tăng gấp lần nghĩa gam gam cho kg thể trọng Phác ñồ ñiều trị theo dõi can thiệp, nguyên tắc tính tỷ lệ lành bệnh tương tự thí nghiệm xác ñịnh liều 50% Kết ñiều trị lành bệnh lợn tiêu chảy KT04 tăng liều ñược trình bày bảng 04-04 Bảng 04-04 Tỷ lệ lành bệnh KT04 liều cao ñiều trị lợn tiêu chảy Lô Số ñiều trị Số lành bệnh Tỷ lệ Ghi 1g/1 kg P 32 23 71,88 tái phát sau ngày 2g/1 kg P 30 21 70,00 Nhận xét: (1) Tỷ lệ lành bệnh ñối với liều 1g/1 kg P 71,88% liều 2g/1 kg P 70%, ñược coi tương ñương (sai khác nhỏ ý nghĩa thống kê) (2) Chế phẩm KT4 không ñiều trị khỏi 100% tiêu chảy sau cai sữa Việc tăng liều ñiều trị không làm tăng tỷ lệ lành bệnh, tỷ lệ lành bệnh ngưỡng chế phẩm KT04, sử dụng phối hợp với thuốc khác ñạt mức 70-71% Việc tăng liều, xét hiệu (nếu có) liều thấp (1 gam/ kg P) có trường hợp tái phát sau ngày lành bệnh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… 57 (3) Từ kết thí nghiệm bảng 04-03 04-04 phân tích, kết luận liều ñiều trị có hiệu lợn tiêu chảy thực ñịa chế phẩm KT04 theo phác ñồ thí nghiệm gam cho kg thể trọng (4) Những lợn tiêu chảy không lành bệnh sau ñiều trị ñều ñược can thiệp kháng sinh liều cao tiêm bắp chất ñiện giải hỗ trợ ða số lợn tiêu chảy lành bệnh sau 2-3 lần tiêm Theo số thống kê trại chăn nuôi Cầu Diễn, tỷ lệ lợn tiêu chảy ñiều trị không khỏi chết khoảng 1-2% Kết can thiệp kháng sinh tỷ lệ ñiều trị không khỏi chứng tỏ nguyên nhân E coli gây tiêu chảy có nguyên nhân khác (vi khuẩn khác, vi khuẩn kháng thuốc, vi rút ) 4.3.5 Kết kiểm chứng liều ñiều trị Trong ñiều kiện thực ñịa, trước ñánh giá chế phẩm ñiều trị mức rộng hơn, tiến hành lập lại thí nghiệm với liều ñiều trị ñã xác ñịnh trình bày phần trên: liều ñiều trị lành bệnh 50% liều ñiều trị ñịnh cho phác ñồ KT04, nghĩa liều 0,5 gam/kgP liều gam/kgP Mỗi liều ñược áp dụng cho 10 lợn tiêu chảy, lặp lại lần ñể ñánh giá ổn ñịnh liệu trình Kết theo dõi lợn lành bệnh theo lô ñược trình bày bảng 04-05 Bảng 04-05 Tỷ lệ lành bệnh KT04 theo liều lô thử nghiệm TT Liều Lô (n=10) Lô (n=10) Lô (n=10) Tổng (N=30) (gam/kgP) Lành bệnh % Lành bệnh % Lành bệnh % Lành bệnh Tỷ lệ % 0,5 50 40 60 15 50 1,0 70 70 70 21 70 Nhận xét: (1) Kết bảng 04-05 cho biết liều 0,5gam/kgP theo phác ñồ ñịnh cho tỷ lệ lành bệnh 50%, biến ñộng lô không ñáng kể (2) Ở liều ñiều trị 1gam/kgP, kết ñiều trị ba lô ñều 7/10 (70%) (3) ðiều trị thử nghiệm lặp lại lần với liều 0,5 gam/kg P cho kết Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… 58 lành bệnh 15/30 (50%) kết ñiều trị liều gam/ kg P cho kết lành bệnh 21/30 (70%), với sai số lô không ñáng kể, hoàn toàn phù hợp với kết thí nghiệm xác ñịnh liều trình bày phần Kết tái xác nhận hiệu ñiều trị chế phẩm KT04 theo liều lượng phác ñồ ñịnh ổn ñịnh áp dụng thực tiễn 4.3.6 ðánh giá ảnh hưởng chế phẩm ñến tăng trọng Trong trình theo dõi ñiều trị, ñể ñánh giá ảnh hưởng chế phẩm KT04 ñến sinh trưởng phát triển lợn sau lành bệnh, trọng lượng lợn tiêu chảy cai sữa ñược hồi cứu tiến hành cân trọng lượng lợn xuất chuồng (60 ngày tuổi) Căn vào theo dõi tổng ñàn, cân 10 lợn tiền sử tiêu chảy sau cai sữa ñể so sánh Trọng lượng 96 lợn theo dõi ñiều trị lành bệnh ñược thống kê theo liều ñiều trị so sánh với 10 lợn khỏe mạnh ñược trình bày bảng 04-06 Bảng 04-06 Kết theo dõi trọng lượng lợn ñiều trị KT04 TT ðã ñiều trị với liều (gam/kg P) Số lợn lành bệnh P cai sữa (kg) P 60 ngày (kg) Ghi [...]... chảy, - Lợn con bị tiêu chảy do E .coli tại thời ñiểm cai sữa và ngay sau cai sữa Nội dung nghiên cứu: 1 Nghiên cứu chế tạo kháng thể lòng ñỏ trứng kháng Pili F4 (1) Nghiên cứu quy trình gây miễn dịch cho gà (2) Nghiên cứu chế tạo chế phẩm lòng ñỏ trứng 2 Nghiên cứu xác ñịnh liều ñiều trị bệnh lợn con tiêu chảy của chế phẩm lòng ñỏ trứng kháng pili F4 (1) Xác ñịnh nguyên nhân E .coli gây tiêu chảy ở lợn. .. con cai sữa (2) Xác ñịnh biến ñộng kháng thể kháng F4 pili ở lợn con - Thu thập mẫu huyết thanh lợn con, - Ab-ELISA xác ñịnh hiệu giá kháng thể kháng F4- pili (3) Nghiên cứu xác ñịnh liều ñiều trị bệnh lợn con tiêu chảy của chế phẩm lòng ñỏ trứng kháng F4- pili (4) Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm trong phòng trị lợn con tiêu chảy - Hiệu quả ñiều trị lợn con tiêu chảy sau cai sữa - Hiệu quả ñiều trị dự phòng. .. lệ chết [45] Nhật Bản ñược coi là một trong những cường quốc kháng thể lòng ñỏ trứng, chế phẩm kháng thể lòng ñỏ trứng dùng ñiều trị lợn con tiêu chảy bắt ñầu từ năm 1992, với tỷ lệ ñiều trị khỏi bệnh cao [68] Akita và cs (1993) ñã sử dụng E .coli toàn khuẩn sản xuất kháng thể ñặc hiệu lòng ñỏ trứng gà dùng trong phòng và trị bệnh tiêu chảy cho lợn con Marquardt và cs (1999) ñã sử dụng kháng thể lòng. .. hóa chế phẩm (bột uống, thuốc tiêm), ñiều trị lành bệnh lợn con tiêu chảy sau 3 ngày [24] Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp …………… 22 3 PHẦN III NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ðối tượng và nội dung nghiên cứu ðối tượng: - Gà ñược gây miễn dịch bằng kháng nguyên F4 pili, - Kháng thể lòng ñỏ trứng và chế phẩm kháng thể lòng ñỏ trứng, - E .coli gây bệnh lợn con tiêu chảy, ... tỷ lệ chết cao tập trung vào lợn con từ 4 tuần tuổi ñến sau cai sữa 1 tháng ðặc ñiểm: Bệnh thường xảy ra ở lợn sau cai sữa 3-10 ngày với triệu chứng tiêu chảy, ñôi khi có lợn chết ñột ngột ở ngày thứ 4 - 5 sau cai sữa Bệnh lây lan trong ñàn rất nhanh, trong vòng 1-3 ngày tỷ lệ ốm có thể lên tới 80-90% Ở trại chăn nuôi tập trung, trong thời gian ngắn bệnh sẽ lây sang các ñàn khác Bệnh cũng có thể tồn... mạc ruột của lợn con sơ sinh và có xu hướng giảm nhẹ ở lợn con sau cai sữa Ngoại cảnh: Có rất nhiều yếu tố liên quan ñến quá trình gây bệnh của vi khuẩn E .coli ở lợn sau cai sữa như: lợn con bị stress khi tách mẹ, nhập chung với ñàn khác, thay ñổi thức ăn, mất nguồn kháng thể bị ñộng truyền qua sữa mẹ, chuồng ẩm Cơ thể lợn: pH trong ñường ruột của lợn sau cai sữa cao hơn so với trước cai sữa, yếu tố... chảy do E .coli Công ty Hanvet chế tạo thành công kháng thể KTE kháng 11 chủng E .coli ñộc Chế phẩm bột kháng thể YP-99, kháng các chủng E .coli cùng nguồn với E.Rnl, E.Rn2 và E.Ma (mang yếu tố bám dính F5 và F6, vô hoạt bằng formol) có tác dụng ñiều trị lành bệnh 80,7% lợn con theo mẹ bị tiêu chảy [2] Các nghiên cứu ñều nhằm nâng cao hiệu quả của chế phẩm lòng ñỏ trứng, hoàn thiện phương pháp chế kháng nguyên... ñiển hình Bệnh xảy ra quanh năm, cao nhất vào mùa hè Bệnh lẻ tẻ, rời rạc, không lan từ ñàn này sang ñàn khác Tỷ lệ lợn bệnh thấp nhưng tỷ lệ chết cao [5] 2.6 Những nghiên cứu về chế phẩm phòng và ñiều trị E .coli Tiêu chảy ở lợn con do E .coli không phải chỉ là vấn ñề của Việt Nam mà là vấn ñề nan giải của thế giới Những nghiên cứu về văc xin và sinh phẩm phòng trị bệnh do E .coli là mối quan tâm của nhiều... xin phòng bệnh lợn con tiêu chảy do E .coli Văc xin phòng bệnh lợn con tiêu chảy nói chung ít có hiệu quả Hiện có một số văc xin dùng cho nái, phòng bệnh cho lợn con Các văc xin này bao gồm các yếu tố bám dính, phổ biến là F4, F5, F6, F18ab,… và ñộc tố ñường ruột ST hay LT [47, 67] 2.6.2 Chế phẩm lòng ñỏ trứng trong phòng trị lợn con tiêu chảy Hiện nay, trên thế giới ñã có nhiều công trình nghiên cứu. .. ñỏ trứng gà miễn dịch kháng pili F4 ETEC ñể ñiều trị tiêu chảy cho lợn sơ sinh và cai sữa Kết quả cho thấy lợn uống kháng thể lòng ñỏ trứng có khả năng kháng lại sự lây nhiễm ETEC [46] Chế phẩm lòng ñỏ trứng ñược ñánh giá hiệu quả cao trong ñiều trị (ñánh giá thông qua gây bệnh thực nghiệm) Tuy nhiên phương pháp này tốn kém và chỉ có 81% lợn bị nhiễm (xác ñịnh yếu tố bám dính K88 bằng PCR) [55] 2.7 Nghiên