Quy trình định tính vibrio cholerae

Quy trình định tính vibrio cholerae

Nhóm 9

3/5/2015

MỤC LỤC

Lời mở đầu

Vibrio cholerae (còn gọi là Kommabacillus) là một loài vi trùng gram âm gây

bệnh tả ở người

Vibrio cholerae được nhà giải phẫu học người Ý Filippo Pacini xác định gây ra

bệnh tả vào năm 1854, tuy vậy khám phá của ông không được công nhận rộng rãi đến khi Robert Koch nghiên cứu độc lập sau đó ba mươi năm và công bố thông tin về bệnh cũng như phương pháp phòng chống

Bệnh tả hầu hết có liên quan đến thực phẩm Một nghiên cứu bệnh chứng của Viện

Vệ sinh dịch tễ Trung ương cho thấy các yếu tố nguy cơ cao mắc tả là: ăn thịt chó, mắm tôm, rau sống, tiết canh Bệnh lây theo đường tiêu hoá thông qua nguồn nước, thực phẩm, rau quả đặc biệt là một số hải sản như sò, ốc, hến được bắt từ những nơi ô nhiễm hoặc tay bẩn, dụng cụ ăn uống bị ô nhiễm, qua ruồi, nhặng, chuột, dán làm lây lan mầm bệnh

Hàng năm trên thế giới có khoảng 3-5 triệu ca mắc tả, 100.000-120.000 trường

hợp tử vong Vì vậy, việc tìm hiểu quy trình, phương pháp phân tích vi khuẩn Vibrio cholerae là rất cần thiết để bảo vệ sức khỏe cho người tiêu dùng và cộng đồng, Vibrio cholerae có thể được phát hiện thông qua nhiều phương pháp truyền thống hoặc

phương pháp miễn dịch và sinh học phân tử khác nhau

1 Tình hình ngộ độc thực phẩm do vi khuẩn Vibrio cholerae

1.1. Tình hình dịch tả trên thế giới

Bệnh tả được nói đến từ thời Hippocrates và Sanskrit, được mô tả lần đầu tiên bởi Garcia del Huerto năm 1563 và được John Snow chứng minh được vai trò lây truyền của nước năm 1849 Trong vòng gần 200 năm qua loài người đã trải qua qua 7 vụ đại dịch tả:

- Đại dịch tả lần thứ nhất (1816-1826): Bắt đầu từ Bengal sau lan sang Ấn Độ, Trung Quốc và biển Caspian

- Đại dịch tả lần thứ hai (1829-1851): Năm 1831 dịch lan sang London (6.536 người chết), Paris (20.000 người chết trong tổng số 650.000 dân), tổng số chết toàn nước Pháp là 100.000 Sau dịch lan sang Liên Xô, Quebec, Ontario và New York

- Đại dịch tả lần thứ ba (1852-1860): Xảy ra ở nhiều vùng của Liên Xô, làm hàng triệu người chết Ở London, dịch làm 10.738 người chết Dịch xảy ra ở Chicago làm chết 5,5% dân số

- Đại dịch tả lần thứ bốn (1863-1875): Dịch xảy ra chủ yếu ở Châu Âu và Châu Phi Dịch xảy ra ở London làm chết 5.596 người

- Đại dịch tả lần thứ năm (1881-1896): Năm 1892 dịch xảy ra ở Hamburg làm 8.600 người chết Đây là vụ dịch nặng cuối cùng ở Châu Âu

- Đại dịch tả lần thứ sáu (1899-1923): Dịch ở Châu Âu giảm đi do các điều kiện vệ sinh tốt hơn nhưng dịch vẫn xảy ra nặng nề ở các thành phố của Liên Xô

- Đại dịch tả lần thứ bảy (1961 - những năm 70): Dịch bắt đầu ở Indonesia năm

1963, với chủng vi khuẩn El Tor, sau lan sang Bangladesh (1963), Ấn Độ (1964), Liên Xô (1966) Từ Bắc Phi dịch lan sang Italy năm 1973, Nhật Bản và Nam Thái Bình Dương Từ 1/1991 - 9/1994, dịch xảy ra ở Nam Mỹ, bắt đầu ở Peru với 1 triệu người mắc và 10.000 người chết, do chủng tả O1 - El Tor gây nên, có khác một chút với chủng tả của đại dịch lần thứ bảy là sự tái tổ hợp giữa chủng tả cổ điển và tả El Tor Từ đó đến nay, dịch thường xuyên xảy ra ở một nước Châu Phi, Châu Á và Mỹ La Tinh Tả vẫn là một đe doạ toàn cầu về y tế công cộng và là một trong các chỉ số về phát triển xã hội Năm 2006, số ca tả báo cáo trên thế giới tăng lên đáng kể, tăng 79% so với năm 2005 với tổng số là 236.896 được báo cáo từ 52 nước, 6.311 trường hợp tử vong Theo Tổ chức Y tế Thế giới con số này chỉ chiếm 10% tổng số ca bệnh xảy ra trên thực tế

Năm 2014 dịch tả vẫn có diễn biến phức tạp tại Trung Mỹ và tại các quốc gia ở Tây và Trung Phi

1.2. Tình hình tả tại Việt Nam

Bệnh tả lần đầu tiên xuất hiện ở Việt Nam năm 1850 với 2 triệu trường hợp bệnh được thông báo Từ năm 1910-1938, hàng năm số bệnh nhân mắc tả được thông báo dao động từ 5.000 - 30.000 người Bệnh tả El Tor lần đầu tiên xuất hiện ở miền Nam

năm 1964 với 20.009 người mắc bệnh trong đó 821 người tử vong Từ đó đến năm

1975, ở miền Trung và miền Nam, bệnh tả xảy ra dưới dạng dịch lưu hành Hàng năm

có hàng trăm bệnh nhân bị bệnh tả được thông báo Năm 1994, bệnh tả xuất hiện ở khu vực Tây Nguyên với 1.459 bệnh nhân Sau năm 1975, do việc thông thương giữa hai miền Nam, Bắc, bệnh tả đã lây lan ra miền Bắc và gây ra những vụ dịch tả rải rác ở Hải Phòng Từ năm 1993 -2004, dịch xảy ra ở cả ba miền Bắc, Trung, Nam với khoảng vài nghìn ca bệnh được báo cáo hàng năm Tuy nhiên, bệnh không bùng phát thành dịch lớn, có rất ít trường hợp tử vong Các năm 2005-2006, cả nước không ghi nhận trường hợp nào Từ cuối năm 2007, dịch lại bùng phát ở 19 tỉnh/thành phố phía Bắc, hàng ngàn trường hợp mắc nhưng không có trường hợp nào tử vong

Năm 2009 đã có 930.496 ca mắc tiêu chảy, trong đó có 4 người chết Năm 2008

có 853 ca bệnh tả, không có người chết, năm 2009 có 479 người mắc tả, trong đó có một người chết, năm 2010 có 606 ca bệnh tả, không có người chết, và năm 2011 có ba

ca mắc tả, không có người chết

Cuối tháng 7/2014, tại huyện Bình Chánh (TP Hồ Chí Minh) đã bùng phát một ổ dịch tiêu chảy cấp khiến hơn 10 người mắc phải nhập viện điều trị , trong đó có 1 bệnh nhi tử vong Kết quả xét nghiệm nuôi cấy và PCR phát hiện mẫu ốc bươu dương tính V.cholera O1 tuýp huyết thanh Inaba Theo điều tra người bán ốc lấy ốc ở chợ đầu mối Bình Điền giáp ranh với huyện Bình Chánh

Việc phát hiện vi khuẩn tả trong ốc bươu vàng có nghĩa nguồn nước đã bị nhiễm

vi khuẩn này, có khả năng lây lan trong cộng đồng

2. Đặc điểm vi khuẩn Vibrio cholerae

Vibrio cholerae và các loài khác thuộc chi Vibrio thuộc về lớp gamma của ngành Proteobacteria Có hai chủng Vibrio cholerae chính, chủng cổ điển và chủng El Tor, và một số nhóm huyết thanh (serogroup) khác.

Hình 1: Vi khuẩn Vibrio cholerae

Vibrio cholerae thuộc họ Vibrionaceae, là vi khuẩn có hình cong như dấu phẩy,

bắt màu gram âm, không có vỏ, không sinh nha bào, di động được nhờ có lông Phẩy khuẩn tả dễ nuôi cấy trong môi trường nghèo dinh dưỡng, pH kiềm (pH từ 8,5-9,0) và mặn ở môi trường thích hợp như trong nước, thức ăn, trong các động vật biển (cá, cua,

sò biển ) v.v nhất là trong nhiệt độ lạnh, phẩy khuẩn tả có thể sống được vài ngày đến 2-3 tuần Dễ bị diệt bởi nhiệt độ (800C/5 phút), bởi hoá chất thông thường và môi trường axit

Vibrio cholerae có mặt trong nước, sữa, thực phẩm, côn trùng, thủy sản,… sinh

độc tố ruột và nội độc tố trong đường tiêu hóa Độc tố ruột gắn vào niêm mạc ruột non, hoạt hoá enzyme adenylcyclase dẫn đến tăng AMP vòng, làm giảm hấp thu Na+, tăng tiết Cl- và nước gây tiêu chảy cấp tính Phẩy khuẩn tả có thể chuyển hóa trong thiên nhiên, thay đổi tính di truyền do đột biến từ chủng không gây dịch có thể thành chủng gây dịch và kháng nhiều loại kháng sinh Là vi khuẩn phổ biến trong tự nhiên, gây dịch

tả, dịch bệnh dễ phát sinh nơi nước bẩn và thực phẩm bị nhiễm trùng

V cholerae có khoảng 140 nhóm huyết thanh và được chia thành V cholerae-O1

và V.cholerae non-O1(Vibrio cholerae không ngưng kết với O1 còn được gọi là chủng NAG)

V cholerae O1 được phân thành 2 typ sinh học (biotyp) dựa theo đặc điểm kiểu hình là V cholerae classica và V cholerae eltor Dựa vào đặc điểm các quyết định kháng nguyên A, B, C của kháng nguyên thân O, V.cholerae được phân thành 3 typ

huyết thanh (serotyp) sau:

•Serotyp Ogawa (có quyết định kháng nguyên A, B)

•Serotyp Inaba (có quyết định kháng nguyên A, C)

•Serotyp Hikojima (có cả ba quyết định kháng nguyênA, B, C)

V cholerae-non O1 nhóm huyết thanh O139 là thủ phạm gây dịch tả ở ấn Độ và

một số nước châu á từ năm 1992 đến nay

Phẩy khuẩn tả gây bệnh nhờ độc tố tả (choleragen) Đây là nội độc tố có cấu trúc gồm hai đơn nguyên: đơn nguyên A (trọng lượng phân tử là 27 000 dalton, mang độc tính cao) và đơn nguyên B có tính kháng nguyên đặc hiệu và một cầu nối A2 có tác dụng kích thích tăng AMP vòng (Adenosin 3,5-cyclic mono phosphat

3. Các phương pháp phân tích vi khuẩn Vibrio cholerae

3.1. Phương pháp truyền thống

• Môi trường nuôi cấy:

Các phương pháp truyền thống xác định các loài Vibrio trong thực phẩm theo tiêu

chuẩn hiện nay (ISO) cũng đã được phổ biến, ISO/TS 21872-1:2007 dùng để xác định

V cholerae

Phương pháp truyền thống thường dùng môi trường chứa muối với pH khoản 8,6 như môi trường tăng sinh nước peptone kiềm (alkaline saline peptone water) Môi

trường phân lập thường dùng là TCBS, các khuẩn lạc của V.cholerae trên môi trường

này có đặc điểm là tròn, bóng và có màu vàng Tuy nhiên những phát hiện gần đây cho

thấy môi trường TCBS có hạn chế là không phát hiện được các chủng V.cholerae lên

men saccharose chậm dẫn đến sai sót trong phát hiện Một môi trường đặc hiệu hơn cần quan tâm là môi trường tạo màu (Chromogenic agar media) theo cơ chế enzyme như chromID™ Vibrio agar (bioMérieux) hay CHROMagar™ Vibrio có thể phát hiện cả chủng lên men saccharose chậm

• Nguyên tắc

Một lượng mẫu xác định (10g hoặc 25g) được tăng sinh trong môi trường chọn lọc đặc trưng Cấy phân lập từ môi trường tăng sinh sang môi trường phân biệt chọn lọc đặc trưng Cấy khuẩn lạc nghi ngờ trên môi trường phân lập được khẳng đỉnh bằng các

phản ứng sinh hóa và huyết thanh học Môi trường tăng sinh chọn lọc cho V cholerae

là nước peptone kiềm Môi trường thường dùng để phân lập Vibrio là TCBS

(Thiosalphate Citrate Bile Sucrose Agar) Các vi sinh vật len men được sucrose trong môi trường này sẽ cho khuẩn lạc màu vàng và làm acid hóa môi trường bên dưới khuẩn lạc Nếu vi sinh vật không len men được đường sucrose sẽ cho khuẩn lạc màu xanh

3.2. Phương pháp phân tích hiện đại

3.2.1 Phương pháp miễn dịch học – ELISA (Enzyme Linked

mmunosorbent Assays)

ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) hay EIA (Enzyme ImmunoAssay) là một kỹ thuật sinh hóa để phát hiện kháng thể hay kháng nguyên trong mẫu xét nghiệm Kỹ thuật ELISA có thể được sử dụng để phát hiện bệnh phát

sáng do V.harveyi trên tôm, mẫu nước và có thể xác định tất cả các dòng Vibrio spp.

Phương pháp này được thực hiện dựa trên nguyên tắc bắt dính đặc hiệu của kháng nguyên và kháng thể và gồm các bước cơ bản sau:

- Kháng nguyên chưa biết được gắn trên một bề mặt

- Kháng thể biết trước được "rửa" qua bề mặt đó Kháng thể này được gắn kết với enzyme

- Thêm vào một cơ chất (substance): enzyme sẽ biến đổi cơ chất này và tạo tín hiệu có thể xác định được Đối với các ELISA phát quang, ánh sáng sẽ được phát ra từ mẫu chứa kháng nguyên – kháng thể Sự hiện diện của phức hợp kháng nguyên – kháng thể sẽ quyết định cường độ sáng phát ra Với nguyên lý trên, ELISA giúp xác định sự có mặt hay không có mặt cũng như lượng kháng nguyên trong mẫu nghiên cứu

Để tiến hành ELISA cần phải có ít nhất một kháng thể đặc hiệu cho kháng nguyên chưa biết Thông thường kháng nguyên được cố định tại các giếng của vi phiếm (polystyrene microtiter plate) Phương thức cố định không đặc hiệu: kháng nguyên gắn trực tiếp vào bề mặt của đĩa

Phương thức gắn đặc hiệu ("sandwich" ELISA):kháng nguyên được gắn với một kháng thể đặc hiệu cho cùng kháng nguyên cần kiểm tra

Kháng thể đặc hiệu sẽ được thêm vào, phản ứng tạo phức hợp kháng nguyên – kháng thể có thể sảy ra Nếu kháng thể được gắn trực tiếp với enzyme, tín hiệu quang học do enzyme làm biến đổi cơ chất sẽ giúp phát hiện kháng nguyên cần kiểm tra Trong trường hợp sử dụng kháng thể thứ cấp (secondary antibody) được gắn với enzyme thông qua các liên kết cộng hóa trị giữa các phân tử sinh học (bioconjugation), kháng nguyên cần xác định sẽ được nhận biết qua kháng thể thứ cấp này

Giữa các bước của ELISA, các protein và các kháng thể không đặc hiệu, kháng thể không gắn với kháng nguyên sẽ được lấy đi nhờ các loại dịch có tác dụng "rửa" Sau bước "rửa" cuối cùng, chỉ còn kháng thể liên kết với kháng nguyên được giữ lại Sau khi được thêm vào, cơ chất sẽ chịu tác dụng của enzyme liên kết với kháng thể trong phức hợp kháng nguyên – kháng thể Phản ứng phát quang (biến đổi cơ chất) sẽ sảy ra Trước đây các cơ chất tạo màu sắc được sử dụng trong ELISA nhưng ngày nay các chất phát quang được dùng rộng rãi làm tăng tính đặc hiệu và độ chính xác của ELISA Có những phương pháp ELISA như sau: ELISA gián tiếp (indirect ELISA),Sandwich ELISA,ELISA cạnh tranh (Competitive ELISA)

Hình 2: Phương pháp miễn dịch học – ELISA

3.2.2. Kỹ thuật PCR chuẩn (Polymerase Chain Reaction)

Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) được Karl Mullis và cộng sự (Mỹ) phát minh năm 1985 và kể từ đó đã tạo nên một tác động to lớn đối với các nghiên cứu sinh học trên toàn thế giới Ðây là phương pháp in vitro sử dụng các cặp mồi để tổng hợp số lượng lớn các bản sao từ một trình tự DNA đặc biệt dựa trên hoạt động của các dNTP tự do là enzyme polymerase, sau 20-35 chu kì có thể nhân được số

bả sao rất lớn của đoạn DNA cần khuếch đại Kỹ thuật PCR chuẩn chỉ thực hiện được khi biết rõ các trình đặc hiệu ở 2 đầu DNA cần nhân gen (đoạn khuôn) để có thể thiết kế các cặp mồi đặc hiệu

Hiện nay có thể sử dụng kỹ thuật khuếch đại DNA để chuẩn đoán nhanh bệnh do Vibrio spp trong vài giờ mà không mất nhiều thời gian để phân lập vi khuẩn

Nguyên tắc

Nguyên tắc của phương pháp này là phát hiện một đoạn DNA đặc hiệu cho Vibrio spp Phương pháp PCR dựa trên hoạt động của DNA polymerase trong quá trình tổng

hợp DNA mới từ mạch khuôn Tất cả các DNA polymerase đều cần những mồi, là những đoạn DNA ngắn có khả năng bắt cặp bổ sung với một đầu của mạch khuôn

Ðoạn mồi này sau đó sẽ được nối dài ra nhờ hoạt động của DNA polymerase để hình thành một mạch mới hoàn chỉnh Trong một phản ứng PCR để khuyếch đại một trình tự đặc biệt nào đó, ta cần phải có những thông tin tối thiểu về trình tự đó để thiết kế các mồi bổ sung ở hai đầu mạch bao gồm một mồi xuôi (sense primer) và một mồi ngược (antisense primer) so với chiều phiên mã của gene Một khi được cung cấp hai mồi bổ sung ở hai đầu, phản ứng sẽ cho ra hàng loạt bản sao của đoạn DNA nằm giữa hai mồi đó

Các giai đoạn của phản ứng PCR

Một phản ứng PCR là một chuỗi nhiều chu kỳ nối tiếp nhau, mỗi chu kỳ gồm ba giai đoạn:

- Giai đoạn biến tính: trong một dung dịch phản ứng bao gồm các thành phần cần thiết cho sự sao chép, phân tử DNA được biến tính ở nhiệt độ cao trong vòng 30 giây – 1phút, thường là ở 940C

- Giai đoạn bắt cặp: ở giai đoạn này, nhiệt độ được hạ thấp cho phép các mồi bắt cặp với khuôn Trong thực nghiệm, nhiệt độ này dao động trong khoảng từ 30° – 70°C khoảng 40 giây – 1 phút - Giai đoạn tổng hợp: nhiệt độ được tăng lên đến 720C cho DNA polymerase sử dụng vốn là polymerase chịu nhiệt hoạt động tổng hợp tốt nhất Thời gian tùy thuộc độ dài của trình tự DNA cần khuếch đại, thưòng kéo dài từ 20 giây đến nhiều phút

Trong phản ứng PCR, chu kỳ ba giai đoạn sẽ được lặp lại nhiều lần, mỗi lần làm tăng số lượng bản sao lên gấp đôi Sự khuếch đại của phản ứng là theo cấp số nhân và theo tính toán, sau 30 chu kỳ, sự khuếch đại sẽ là 106 so với số lượng bản mẫu ban đầu Sau phản ứng PCR, các DNA được nhuộm bởi ethidium bromide và có thể quan sát thấy thông qua điện di sản phẩm trong agarose và quan sát dưới tia UV

3.2.3. Phương pháp lai phân tử (Hybridization)

Phương pháp này sử dụng mẫu dò để phát hiện vi sinh vật trong thực phẩm dựa trên sự phát hiện một đoạn gen đăc trưng của vi sinh vật Cơ sở của việc sử dụng mẫu

dò là lai phân tử

Quá trình bao gồm sự tách rời hai mạch đôi của chuỗi xoán kép DNAkhi nhiệt độ vượt quá nhiệt độ nóng chảy của DNA (T m) và sự tái bắt cặp của các đoạn DNA có trình tự nucleotide bổ sung khi nhiệt độ trở lại bình thường Một trong 2 mạch DNA bổ sung được cố định trên giá thể rắn và nằm nằm ngay trên tế bào hay mô Sự lai phân tử sảy ra khi đoạn mồi có trình tự nucleotide bổ sung với một vùng trình tự trên DNA mục

tiêu gặp nhau do chuyển động của nhiệt độ và khi nhiệt độ môi trường thấp hơn T m ít nhất vài độ

4. Quy trình định tính Vibrio cholera

4.1. Phạm vi áp dụng

Phương pháp này tham chiếu theo TCVN 7905-1:2008 (ISO 21872-1:2007) dùng

để phát hiện Vibrio cholerae trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi.

4.2. Nguyên tắc

Phát hiện V.cholerae trong thực phẩm được thực hiện bằng cách cân một lượng mẫu xác

định và nuôi ủ trong môi trường lỏng chọn lọc Từ đây dịch khuẩn được cấy chuyển sang

môi trường rắn chọn lọc những khuẩn lạc giống V.cholerae sẽ được thử nghiệm các phản

ứng sinh hóa

Yêu cầu chung

Việc phát hiện Vibrio cholerae cần đến bốn giai đoạn liên tiếp

4.3. Thiết bị và dụng cụ

5. 6 Thiết bị và dụng cụ thủy tinh

6 CHÚ THÍCH: Có thể dùng dụng cụ sử dụng một lần thay thế cho các dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần nếu đáp ứng được các yêu cầu tương tự.

7 Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm vi sinh thông thường [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] và cụ thể như sau:

8. 6.1 Tủ ấm, có thể duy trì nhiệt độ ở 37 0 C ± 1 0 C.

9. 6.2 Tủ ấm hoặc nồi cách thủy, có thể duy trì nhiệt độ ở 41,5 0 C ± 1 0 C.

10. 6.3 Nồi cách thủy, có thể duy trì nhiệt độ từ 44 0 C đến 47 0 C.

11. 6.4 Nồi cách thủy, có thể duy trì nhiệt độ ở 37 0 C ± 1 0 C.

12 Nên sử dụng các nồi cách thủy (6.2, 6.3 và 6.4) có chứa chất kháng khuẩn.

13. 7 Lấy mẫu

14 Điều quan trọng là mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải đúng là mẫu đại diện và không bị hư hỏng hoặc bị thay đổi trong suốt quá trình vận chuyển và bảo quản.

15 Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn này Nên lấy mẫu theo tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm Nếu không có tiêu chuẩn riêng về lấy mẫu sản phẩm có liên quan thì các bên tự thỏa thuận về vấn đề này.

16. 8 Chuẩn bị mẫu thử

17 Chuẩn bị mẫu thử theo phần tương ứng của TCVN 6507 (ISO 6887) và/hoặc TCVN 6263 (ISO 8261)

và tiêu chuẩn có liên quan đến sản phẩm Nếu không tiêu chuẩn riêng đó thì các bên tự thỏa thuận

về vấn đề này.

17.1. Môi trường và hóa chất, mục đích sử dụng

Bảng 1: Môi trường và hóa chất, mục đích sử dụng

Môi trường và

APW Tăng sinh chọn lọc: phục hồi sức sống của các vi sinh vật bị

tổn thương và nhằm gia tăng tăng mật độ tương đối của vi sinh vật cần phát hiện, ức chế sự phát triển của các vi sinh vật không mong muốn

TCBS

(Thiosulphate

citrate bile salt

sucrose)

Phân lập: Môi trường thạch Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose là môi trường chọn lọc dùng để phân lập các loài

Vibrio từ mẫu xét nghiệm phân có lẫn với vi khuẩn khác Các loài Vibrio được phân biệt bằng đặc điểm do khuẩn lạc sinh

ra trên môi trường Các kiểu khuẩn lạc khác nhau được sinh

ra từ các loài Vibrio khác nhau, thể hiện qua sự lên men của

sucrose Khi dùng thạch TCBS, chúng ta nên dùng chất nuôi cấy đặc, những loài Vibrio dễ chết đột ngột và môi trường này có để ngăn chặn được điều đó Mẫu xét nghiệm tươi là tốt nhất, vì vi sinh vật này nhạy cảm với điều kiện khô, ánh sáng và pH acid

TSI/KIA Khẳng đinh sơ bộ: Môi trường thạch Kligler Iron Agar được

sử dụng để nuôi cấy trực tiếp cho trực khuẩn gram âm lên men đường glucose, đây là đặc điểm cơ bản trong phân loại bước đầu của các trực khuẩn gram âm Môi trường này cũng đồng thời thử tính lên men đường lactose, sinh hơi trong quá trình lên men carbohydrat và sinh H2S Tất cả những đặc điểm đó đã được sử dụng cho các trực khuẩn gram âm thuộc

họ vi khuẩn đường ruột Đĩa giấy Oxidase Khẳng định sơ bộ: dùng để thử nghiêm Oxidase

Dung dịch NaCl Khẳng định sơ bộ: môi trường để thử nghiệm tính chịu mặn KOH 3% Thử Strinrg test để khẳng định sơ bộ

Arginine

dehydrolase

Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định

Ornithine

decarboxylase

Lysine

decarboxylase

TW (Tryptone

Water)

ONPG