Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 34 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Cấu trúc
PowerPoint Presentation
DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM
NỘI DUNG
TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC DO SALMONELLA
Slide 5
Slide 6
ĐẶC ĐIỂM SALMONELLA
Slide 8
Slide 9
QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA
Slide 11
Slide 12
Slide 13
Slide 14
Slide 15
Slide 16
Slide 17
Slide 18
Slide 19
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
Slide 24
Slide 25
Slide 26
Slide 27
Slide 28
Slide 29
Slide 30
Slide 31
Slide 32
Slide 33
Slide 34
Nội dung
TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN NHÓM: 05 TP. HCM, THÁNG 4 NĂM 2014 DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM ĐOÀN NGỌC TÂM THIỆN NGUYỄN THỊ ÁI LY PHAN THỊ KIM NGÂN NGUYỄN TIẾN PHƯỚC NỘI DUNG TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN QUY TRÌNHĐỊNH TÍNH TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC DO SALMONELLA Trên thế giới, mỗi năm nhiễm khuẩn salmonella từ thực phẩm xảy ra ở 1.4 triệu người với 95% các trường hợp có triệu chứng ngộ độc. Các nguồn gốc chung của ngộ độc thực phẩm salmonella là các thực phẩm sống hoặc chưa nấu chín như trứng sống, trứng húp, sữa chưa được tiệt trùng, nước chưa được đun sôi kỹ, các sản phẩm từ thịt và từ gia cầm chưa chín kỹ. Salmonella xâm nhập vào cơ thể???? • Bất cứ thực phẩm sống hay chưa nấu chín. • Sản phẩm từ gia cầm( kể cả các sản phẩm bơ sữa bảo quản không tốt) • Thịt gà và trứng: thực phẩm có nguy cơ nhiễm cao. • Khi tiếp xúc với người bị nhiễm salmonella hoặc phân người và súc vật có nhiễm salmonella. • Có thể bị “nhiễm khuẩn chéo” • Bất cứ thực phẩm sống hay chưa nấu chín. • Sản phẩm từ gia cầm( kể cả các sản phẩm bơ sữa bảo quản không tốt) • Thịt gà và trứng: thực phẩm có nguy cơ nhiễm cao. • Khi tiếp xúc với người bị nhiễm salmonella hoặc phân người và súc vật có nhiễm salmonella. • Có thể bị “nhiễm khuẩn chéo” TRIỆU TRIỆU CHỨNG CHỨNG Tiêu chảy, đau bụng, buồn ói và ói, sốt, đau đầu, … Thường xảy ra khoảng 12-36h sau khi ăn. Các triệu chứng có thể kéo dài từ 2 ngày đến 1 tuần TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC DO SALMONELLA Biện pháp ngăn chặn nhiễm khuẩn do Salmonella: • Hạn chế ăn trứng sống và chưa nấu chín. Hạn chế hoặc tránh món ăn có chứa trứng sống. • Luộc chín kỹ thịt gà (tới khi thịt không còn đỏ hoặc màu hồng).Tách biệt giữa thực phẩm nấu chín và chưa nấu. • Sau khi chế biến những món sống làm sạch các dụng cụ chế biến, bếp… bằng xà bông và nước hoặc dung dịch tẩy rửa. NỘI DUNG TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN QUY TRÌNHĐỊNH TÍNH ĐẶC ĐIỂM SALMONELLA Đặc điểm chung và đặc điểm nuôi cấy: • Salmonella là trực khuẩn Gram(-), hiếu khí và kỵ khí tùy ý, có khả năng di động(trừ S.gallimarum và S.pullorum), không tạo bào tử. • Phát triển tốt ở 5-45 độ C, thích hợp nhất từ 37 độ C. pH thích hợp 6.8-7,2. • Phát triển được trong các môi trường nuôi cấy thông thường. Trên môi trường thích hợp sẽ phát triển sau 24h. • Có thể mọc trên các môi trường có chất ức chế chọn lọc như DCA và XLD. • Khuẩn lạc đặc trưng của Salmonella trên môi trường là tròn, lồi, trong suốt, có tâm đen, 1 Lên men glucose và mannitol sinh acid 2 không lên men saccharose và lactose, không sinh indol, không phân giải ure,… 3 Có thể tiết ra 2 loại độc tố: • Ngoại độc tố. • Nội độc tố. ĐẶC ĐIỂM SALMONELLA NỘI DUNG TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHQUYTRÌNHĐỊNHTÍNH SALMONELLA Salmonella có thể được phát hiện bằng quytrình gồm 4 bước Tăng sinh Tăng sinh Tăng sinh chọn lọc Tăng sinh chọn lọc Phân lập Phân lập Khẳng định Khẳng định [...]... QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA KẾT QUẢ KẾT QUẢ Quytrình kiểm nghiệm này chỉ cho phép phân tích địnhtính Salmonella, giúp kết luận có hay không có sự hiện diện của Salmonella trong mẫu Để khẳng định được tên chủng phân lập được cần gửi chúng đến các phòng thí nghiệm chuyên định danh vi sinh vật Salmonella chứa dòng bệnh rất nguy hiểm nên cần các biện pháp an toàn khi làm việc QUYTRÌNHĐỊNHTÍNH SALMONELLA. .. đêm QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA BƯỚC 1: TĂNG SINH Đây là khâu quan trọng không thể thiếu trong quytrình kiểm nghiệm Là môi trường tăng sinh không chọn lọc, giàu dinh dưỡng, không chứa các chất ức chế Tùy theo đặc tính thành phần hóa học của mẫu, chọn quytrình tăng sinh phù hợp Tỷ lệ thông thường giữa mẫu và môi trường là 1:9, trong nhiều trường hợp có thể thay đổi QUYTRÌNHĐỊNHTÍNH SALMONELLA. .. lactose QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA BƯỚC 1: TĂNG SINH 22 5m lB PW 25g mẫu Đồng nhất mẫu bằng máy Stomacher 15 hoặc 30 giây Ủ ở 37 độ C trong 18-24h 25g mẫu + 225ml BPW QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA BƯỚC 2: TĂNG SINH CHỌN LỌC 25g mẫu + 225ml BPW Lấy 0,1ml 10ml môi 10ml môi trường tăng trường tăng sinh RV đã sinh RV đã được ủ ấm được ủ ấm đến độ 42 đến độ 42 Ủ ở 42 ± 0,20C trong 18-24h QUYTRÌNHĐỊNH TÍNH... hoặc chậm nhất 4 giờ Salmonella cho phản ứng âm tính với thử nghiệm VP có hiện tượng không đổi màu trên bề mặt môi trường Thử nghiệm VP (+) khi có màu đỏ trên bề mặt môi trường QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Lên men mannitol (+) Salmonella có khả năng lên men đường mannitol sinh acid Khi có mặt thuốc thử Phenol Red sẽ làm môi trường chuyển từ đỏ sang vàng QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Lên men LDC... Base) Canh Tryptone Thuốc thử Kovac’s QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT VAI TRÒ BPW Tăng sinh Canh RV, RV cải tiến, TT Tăng sinh chọn lọc XLD, HE, BS, BPLS Phân lập, nhận diện Sal TSI, canh urea, canh tryptone,… Khẳng định lại sự hiện diện của Sal trong mẫu Thuốc thử kovac Thuốc thử methyl red Phenol red Thuốc thử: QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Đồng nhất 25g mẫu trong 225ml môi... QUY TRÌNHĐỊNH TÍNH SALMONELLA BƯỚC 3: PHÂN LẬP VÀ NHẬN DIỆN Dùng que cấy vòng thực hiện kỹ thuật cấy phân lập khuẩn lạc đơn với giống từ dịch tăng sinh chọn lọc lên đĩa môi trường chọn lọc phân biệt đặc trưng của Salmonella Môi trường XLD: khuẩn lạc có màu hồng trong suốt, có hay không có tâm đen Một số dòng Salmonella có thể có tâm đen bóng rất lớn có thể chiếm gần hết khuẩn lạc QUY TRÌNHĐỊNH TÍNH... màu như ban đầu QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Thử nghiệm khả năng sinh indol (-) • Môi trường thử nghiệm là nước tryptone, trong thành phần có chứa tryptophan • Nhỏ vài giọt ether để kéo indol lên bề mặt môi trường, thêm vài giọt thuốc thử Kovac’s Quan sát sau vài phút - Thử nghiệm (+): trên bề mặt môi trường xuất hiện vòng màu đỏ cánh sen QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Thử... lục, có hay không có tâm đen QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Môi trường Thành phần Proteose Peptone: 12.0g Yeast Extract: 3.0g Bile Salts No 3: 9.0g Lactose: 12.0g Saccharose: 12.0g Salicin: 2.0g HE Sodium Chloride: 5.0g (Hektoen Entric Agar) Sodium Thiosulfate: 5.0g Ferric Ammonium Citrate : 1.5g Agar: 14.0g Bromthymol Blue: 65.0mg Acid Fuchsin : 0.1g QUYTRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA BƯỚC 3: PHÂN LẬP... -Disodium phosphate: tạo tính đệm cho môi trường -Dextrose: cung cấp năng lượng cho VSV -… Khuẩn lạc có màu nâu xám hay màu đen, thỉnh thoảng có xuất hiện ánh kim tím QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Từ mỗi môi trường chọn lọc phân biệt chọn và cấy Thử nghiệm sinhchuyền ít nhất 5 khuẩn lạc nghi ngờ sang môi H2S trên môi BƯỚC 4: trường trường không chọn lọc TSA Ủ ở 37 0C, 18-24 giờ KIA KHẲNG ĐỊNH Các khuẩn lạc... khuẩn lạc của chủng thuần vào ống chứa 3ml môi trường vô trùng, lắc nhẹ ống để trộn đều vi khuẩn và ủ ở 370C trong 48 giờ Salmonella không phân giải urea thành NH3 nên không làm thay đổi pH môi trường; sau khi nuôi cấy môi trường vẫn giữ nguyên màu vàng cam QUY TRÌNHĐỊNHTÍNHSALMONELLA Thử nghiệm VP(-) môi trường được sử dụng là môi trường lỏng Clark-Lubs (môi trường MR-VP), pH 6.9 Dùng que cấy . 1: TĂNG SINH 25g mẫu 2 2 5 m l B P W Đồng nhất mẫu bằng máy Stomacher 15 hoặc 30 giây 25g mẫu + 225ml BPW Ủ ở 37 độ C trong 18-24h QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA 25g mẫu + 225ml BPW Lấy 0,1ml 10ml. SALMONELLA Salmonella có thể được phát hiện bằng quy trình gồm 4 bước Tăng sinh Tăng sinh Tăng sinh chọn lọc Tăng sinh chọn lọc Phân lập Phân lập Khẳng định Khẳng định QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA. thể tiết ra 2 loại độc tố: • Ngoại độc tố. • Nội độc tố. ĐẶC ĐIỂM SALMONELLA NỘI DUNG TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SALMONELLA