Nghiên cứu thu nhận polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa và ức chế enzyme α glucosidase của một số loài rong biển tại khánh hòa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - o0o - NGUYỄN THỊ MINH NGHIÊN CỨU THU NHẬN POLYPHENOL, HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA VÀ ỨC CHẾ ENZYME -GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ LỒI RONG BIỂN TẠI KHÁNH HỊA ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM GVHD: TS NGUYỄN THẾ HÂN KHÁNH HÒA -06/ 2015 i LỜI CẢM ƠN Đồ án tốt nghiệp thành năm học tập, trau dồi kiến thức Trường Đại học Nha Trang dấu ấn quan trọng đánh dấu bước chuyển tiếp từ sinh viên trở thành kỹ sư Để hoàn thành tốt Đồ án này, em nhận nhiều hỗ trợ, giúp đỡ bảo tận tình từ thầy cơ, bạn bè gia đình Lời em xin chân thành cảm ơn đến thầy giáo, T.S Nguyễn Thế Hân, người tận tình hướng dẫn, quan tâm bảo suốt trình thực Đồ án tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô khoa Công Nghệ Thực Phẩm giảng dạy trang bị cho em nhiều kiến thức sở chuyên môn suốt năm qua Em xin cảm ơn thầy quản lý phịng thí nghiệm tạo điều kiện để em hồn thành Đồ án Cuối em xin chân thành cảm ơn tới gia đình, bạn bè người bên cạnh động viên tạo động lực cho em suốt trình học tập, nghiên cứu Những kiến thức em học từ thầy cô với giúp đỡ động viên từ tất người giúp em nỗ lực hoàn thành tốt Đồ án hành trang vững giúp em vững bước tương lai Tuy có nhiều nỗ lực, cố gắng khơng tránh khỏi sai sót thực Đồ án Em mong nhận đóng góp từ thầy cơ, bạn bè để đề tài em hồn thiện với chất lượng tốt Nha Trang, tháng 06, năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Minh ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN I DANH MỤC HÌNH V DANH MỤC BẢNG VI DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VII LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nguồn nguyên liệu rong biển 1.1.1 Phân loại rong biển 1.1.2 Sự phân bố nguồn lợi rong biển 1.1.3 Thành phần hóa học rong biển 1.2 Các hợp chất có hoạt tính sinh học rong biển 1.2.1 Polyphenols 1.2.2 Flavonoids 1.2.3 Polysaccharide 10 1.2.4 Alkaloids 11 1.3 Bệnh đái tháo đường 11 1.3.1 Khái niệm bệnh đái tháo đường 11 1.3.2 Phân loại bệnh đái tháo đường 11 1.3.3 Biến chứng bệnh đái tháo đường 12 1.3.4 Tình hình bệnh đái tháo đường giới Việt Nam 13 1.4 Tổng quan enzyme -glucosidase chất ức chế enzyme -glucosidase 14 1.4.1 Tổng quan enzyme -glucosidase 14 1.4.2 Tác nhân ức chế enzyme α-glucosidase 15 1.4.2.1 Các hợp chất ức chế enzyme α-glucosidase tổng hợp 16 1.4.2.2 Các hợp chất ức chế enzym α-glucosidase cô lập tự nhiên 18 1.5 Tổng quan vể tình hình nghiên thuộc lĩnh vực đề tài nước 19 1.5.1 Ở Việt Nam 19 1.5.2 Trên giới 20 1.6 Các phương pháp chiết 21 1.6.1 Cơ sở trình tách chiết 21 1.6.2 Các phương pháp tách chiết dung môi 22 iii 1.6.3 Một số phương pháp tách chiết khác 23 1.6.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 24 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 28 2.2.1 Thiết bị 28 2.2.2 Dụng cụ 28 2.2.3 Hóa chất 28 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 28 2.3.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 28 2.3.2 Thí nghiệm xác định độ ẩm rong biển 31 2.3.3 Bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 31 2.3.4 Thí nghiệm xác định tổng lực khử, khả khử gốc tự DPPH khả ức chế enzyme α-glucosidase 35 2.4 Phương pháp phân tích 36 2.4.1 Phương pháp xác định độ ẩm 36 2.4.2 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng số 36 2.4.3 Phương pháp xác định khả khử gốc tự 1,1-Diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH) 36 2.4.4 Phương pháp xác định tổng lực khử 37 2.4.5 Phương pháp xác định khả ức chế enzyme α – glucosidase 37 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 39 3.1.1 Ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 39 3.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 41 3.1.2 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 44 iv 3.2 Khả chống oxy hóa khả ức chế enzyme α-glucosidase liên quan đến bệnh đái tháo đường tuýt dịch chiết rong biển 48 3.2.1 Khả chống oxy hóa 48 3.2.2 Khả ức chế enzyme α-glucosidase 51 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ chuyển hóa đường thể 15 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học Acarbose 16 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học Voglibose 17 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học Miglitol 17 Hình 2.1 Nguyên liệu rong biển, rong mơ S.microcystum (A), S.oligocystum (B), rong nho Caulerpa lentillifera (C) rong mứt Porphyta (D) 27 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình nghiên cứu tổng quát 29 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hàm lượng chất khô rong biển 31 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết methanol đến hàm lượng polyphenol tổng số 32 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số 33 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số 34 Hình 2.7 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tổng lực khử, khả khử gốc tự DPPH khả ức chế enzyme α-glucosidase 35 Hình 3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số rong mơ S.microcystum (A), rong mơ S.oligocystum (B), rong mứt Porphyta (C) rong nho Caulerpa lentillifera (D) 42 Hình 3.2 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số rong mơ S.microcystum (A), rong mơ S.oligocystum (B), rong mứt Porphyta (C) rong nho Caulerpa lentillifera (D) 47 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Nguồn lợi rong biển giới, sản lượng thu hoạch tiềm sản xuất Bảng 1.2 Diện tích vùng quy hoạch ni trồng rong biển số tỉnh duyên hải Việt Nam Bảng 1.3 Thành phần hóa học từ số loại rong vùng ven biển Madapam dọc theo bờ biển Đông Nam Ấn Độ Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết methanol đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển 39 Bảng 3.2 Khả khử gốc tự DPPH dịch chiết nước rong mơ S.microcystum S.oligocystum 48 Bảng 3.3 Tổng lực khử dịch chiết nước rong mơ S.microcystum S.oligocystum 49 Bảng 3.4 Khả ức chế enzyme α-glucosidase dịch chiết nước rong mơ S.microcystum S.oligocystum 51 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ĐTĐ Đái tháo đường WHO Tổ chức Y tế Thế giới NL/DM Nguyên liệu/dung môi DPPH 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl UV-VIS Ultraviolet-visible spectroscopy MEOH Methanol TPC Hàm lượng polyphenol tổng số FRAP Ferric reducing-antioxidant power LỜI MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Đái tháo đường (ĐTĐ) dạng nội tiết rối loạn chuyển hóa cacbohydrate hooc-mon insulin tụy bị thiếu hay giảm tác động thể, biểu mức đường máu cao Hiện nay, bệnh đái tháo đường ngày gia tăng khơng cịn vấn đề quốc gia mà vấn nạn đe dọa sức khỏe toàn cầu Theo số liệu thống kê Tổ chức Y tế Thế giới năm 1995 giới có 135 triệu người mắc bệnh chiếm 4% dân số giới Đến năm 2010 có 221 triệu người dự báo đến năm 2025 330 triệu người mắc bệnh (chiếm 5,4%) Cũng theo thống kê WHO, 30 giây lại có người mắc bệnh ĐTĐ bị cắt cụt chi Mỗi ngày có 5000 người khả nhìn biến chứng mắt, năm có 3,2 triệu người chết bệnh liên quan đến ĐTĐ Như ĐTĐ gánh nặng thực cho phát triển kinh tế, xã hội sức khỏe người toàn giới kỷ XXI [2] Tại Việt Nam, theo công bố Bệnh viện Nội tiết Trung ương, tỷ lệ người mắc bệnh đái tháo đường năm 2012 5,7% năm 2002 tỷ lệ khoảng 2,7% dân số Đây mức gia tăng đáng báo động vịng 10 năm, tỷ lệ người mắc bệnh tăng lên gấp đôi Nếu không điều trị tốt bệnh đái tháo đường gây nhiều biến chứng làm bệnh nhân bị tàn phế chí tử vong hạ đường huyết, tăng nguy nhồi máu tim, đột quỵ, tai biến mạch máu não mạch máu ngoại biên đến đoạn chi Bệnh đái tháo đường gây biến chứng thận, biến chứng mắt biến chứng thần kinh Trong thể, màng tế bào ruột non tiết enzyme -glucosidase thủy phân oligosaccharide (đường đa) thành glucose thẩm thấu vào máu qua ruột non để nuôi tế bào thể Khi thể rối loạn chuyển hóa carbohydrate lượng đường máu cao, nguyên nhân gây bệnh đái tháo đường Do vậy, nguyên tắc sử dụng để ngăn ngừa điều trị bệnh sử dụng chất có khả ức chế hoạt động enzyme chuyển hóa carbohydrate -glucosidase Nhiều loại thuốc nhóm bào chế sử dụng cho bệnh đái tháo đường Acarbose Voglibose Tuy nhiên, nhà khoa học chứng minh việc sử dụng loại thuốc gây nhiều tác dụng phụ cho thể tiêu chảy, đầy hơi, bệnh gan,… Do đó, nhiều nhà khoa học nghiên cứu để tìm kiếm chất có khả ức chế enzyme -glucosidase có nguồn gốc từ tự nhiên để thay hỗ trợ điều trị bệnh ĐTĐ loại thuốc đang sử dụng Rong biển nhóm thực vật bậc thấp sống biển, nguồn tài nguyên biển quan trọng Theo thống kê, Việt Nam có khoảng 794 lồi rong phân bố vùng biển miền Bắc 310 loài, miền Nam 484 loài 156 lồi tìm thấy miền Trong 90 lồi sử dụng, cho chế phẩm cơng nghiệp 24 loài, dược liệu 18 loài, thực phẩm 30 loài, thức ăn gia súc 10 lồi phân bón lồi Sản lượng tươi Khánh Hòa đạt khoảng 300 tấn/ngày [3] Tuy nhiên, rong biển chưa khai khác triệt để, chưa tương xứng với tiềm vốn có với suy giảm đất trồng nông nghiệp, rong biển xem nguồn thực phẩm tương lai lồi người Các hoạt tính xác định rong biển bao gồm khả chống oxy hóa, khả kháng tế bào ung thư, khả hạ huyết áp, khả kháng viêm ngăn ngừa bệnh đái tháo đường Nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học tìm thấy rong biển như: alkaloids, anthraquinones, carbohydrates, flavonoids, glycosides, saponins, steroids, phenols, terpenoids tannins 49 Một số nghiên cứu giới dịch chiết rong biển số hợp chất thu nhận từ rong biển có khả ức chế enzyme glucosidase Lordan cộng (2013) chiết xuất chất giàu phenolic từ nguồn rong biển ăn được, tảo nâu (Ascophyllum nodosum) vùng biển Iceland, có khả ức chế enzyme -glucosidase enzyme - amylase [35] Kumar cộng (2012) nghiên cứu khả ức chế -glucosidase enzyme - amylase từ loài rong biển G edulis, S polycystum, U lactuca G.corticata vịnh Mannar Tất loại rong cho khả ức chế enzyme mạnh [33] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu đánh giá tiềm ức chế enzyme liên quan đến bệnh đái tháo đường số loài rong khai thác, ni trồng vùng biển Khánh Hịa, vùng biển khác Việt Nam Xuất phát từ thực trạng trên, chọn đề tài “Nghiên cứu thu nhận polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa ức chế enzyme -glucosidase số loài rong biển Khánh Hịa” 57 12 Hà Thị Bích Ngọc(2012), Điều tra nghiên cứu số thực vật Việt Nam có tác dụng hỗ trợ điều hịa lượng đường máu để ứng dụng cho bệnh nhân đái tháo đường tuýt 2, Luận văn Tiến sĩ-Trường Đại học Khoa học tự nhiên 13 Huỳnh Ngọc Nghiêm Thụy (2011), Nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase số thuốc An Giang thành phần hoạt chất thân Núc Nác Oroxylum indicum (L.) kurz, Luận văn thạc sĩ hóa học – Trường Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, tr 21- 25  Tài liệu tiếng anh 14 Anurakkun NJ, Bhandari MR, Kawabata J (2007), α-Glucosidase inhibitors from Devil tree Alstonia scholaris, Food Chem, 103:1319–23 15 Blosi M.S (1958), Antioxidant determinations by the use of a stable free radical, 18(1), 1990-2000 16 Benmeziane F, Djamai R, Cadot Y and Seridi R (2014), Optimization parameters extraction of phenolic compounds from Algeria table grapes (Vitis Vinifera), Food Research International Journal, 21(3), pp.1025-1029 17 Chew K K, Ng S Y, Thoo Y Y, Khoo M Z, Wan Aida W M and Ho C.W (2011), Effect of ethanol concentration, extraction time and extraction temperature on the recovery of phenolic compounds and antioxidant capacity of Centella asiatica extracts, International Food Research Journal 18, pp 571-578 18 Chakraborty K.C, Praveen N.K, Vijayan K.K, Gonugontla and Syda Rao, S (2013), Evaluation of phenolic contents and antioxidant activities of brown seaweeds belonging to Turbinaria spp Phaeophyta, Sargassaceae collected from Gulf of Mannar, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 3(1), pp 8-16 19 Chao-Yan Zhang, Wen-Hui Wu, Jue Wang, Min-Bo Lan, (2012), Antioxidant Properties of Polysaccharide from the Brown Seaweed Sargassum graminifolium (Turn.), and Its Effects on Calcium Oxalate Crystallization, 10 (1), 119-130 20 De A.N, Mazzafera P (2005), Effect of water and temperature stress on the content of active constituents of Hypericum brasilienne Choisy, 43, pp 241–248 21 Dent M, Verica D.U, Marija P, Penic M.B, Tomislav B and Branka L (2013), The Effect of Extraction Solvents, Temperature and Time on the Composition and Mass Fraction of Polyphenols in Dalmatian Wild Sage (Salvia officinalis L.) extracts, Food Technology Biotechnology, 51(1), pp 84–91 58 22 Farasat M, Khavari-Nejad K, Bagher Nabavi S.M, Namjooyanc F (2014) Antioxidant Activity, Total Phenolics and Flavonoid Contents of some Edible Green Seaweeds from Northern Coasts of the Persian Gulf, 163-170 23 Farideh N, Rosfarizan M, Javad B, Saeedeh Z B, Fahimeh F and Heshu S R (2013), Antioxidant, Antiproliferative, and Antiangiogenesis Effects of Polyphenol - Rich Seaweed Sargassum muticum, BioMed Research International, page 24 Galvez C.J, Martin C.P, Houghton A.M (2005), Antioxidant Activity of methanol extracts obtained from Plantago species J Agric, Food Chem, 5(3), pp 1927-1933 25 Guven K.C, Percot A, Sezik E (2010), Alkaloids in Marine Algae, (2): 269-284 26 Han N and Sang M K (2012), Antioxidative, anticholinesterase and antityrosinase activitives of the red alga Grateloupia lancifolia extracts, African Journal of Biotechnology, 1, p 9457- 9467 27 Hyun T.K, Kim H.C, Ko Y.K, Kim J.S (2015), Antioxidant, α-glucosidase inhibitory and anti-inflammatory effects of aerial parts extract from Korean crowberry Empetrum nigrum var japonicum, Saudi Journal of Biological Sciences 28 Indu H and Seenivasan R (2013), In vitro antioxidant activity of selected seaweeds from southeast coast of India, 5(2), pp 474-484 29 Ismail A, Hong T.S (2002)Antioxidant Activity of Selected Commercial Seaweeds, Department of Nutrition and Health Sciences, Faculty of Medicine and Health Sciences, 8(2): 167-177 30 Kelman D, Posner E K, Karla J, Dermid J, Tabandera N.K, Patrick R.W and Anthony D.W (2012), Antioxidant Activity of Hawaiian Marine Algae, 10(1), pp 403416 31 Kneifel H, Meinicke M, Soeder J (1977), Analysis of amines in algal by high performance liquid chromatography, J Phycol, 13:36 32 Kumar S, Narwal S, Kumar V, Prakash O (2011), α-Glucosidase inhibitors from plants: A natural approach to treat diabetes, Pharmacognosy Review, 5, 19-29 33 Kumar S, Sudha S, Diagnosis M, Laboratory D (2012), Evaluation of α-Glucosidase and α-Amylase inhibitory properties of selectef seaweed from Gulf of Mannar, Department of Biotechology, 128-130 59 34 Lalopua V, Purnomo H, Sukoso, Aulani (2011), Red seaweed Kappaphycus alvarezii DOTY from Mollucas island water as potential flavonoid resource of natural antioxidant 35 Lordan j.S, Vila, Stanton R, Paul Ross (2013), the α- amylase and α-glucosidase inhibitory effects of Irish seaweed extracts, food chemistry, 141, 2170- 2176 36 Manivannan K, Thirumaran G, Karthikai Devi G, Hemalatha A and Anantharaman P (2008), Biochemical Composition of Seaweeds from Mandapam Coastal Regions along Southeast Coast of India, American-Eurasian Journal of Botany; (2); p 32-37 37 Mahesh B N (2011), Inhibition of α- amylase and α- glucosidase activities of polyherbal extract, 3(8), pp.97-103 38 Meenakshi S, Manicka G D, Tamil mozhi S, Arumugam M and Balasubramanian T(2009), Total Flavanoid and in vitro Antioxidant Activity of Two Seaweeds of Rameshwaram Coast, Global Journal of Pharmacology, (2): 59-62) 39 Miki Y, Aoki Y, Miyatake H, Minematsu T, Hibino H (2006), Synthesis of caulersin and its isomers by reaction of indole-2,3-dicarboxylic anhydrides with methyl indoleacetates, 47:5215–5218 40 Nguyen Thi Y Nhi, Tran Kim Qui, Tran Le Quan (2011), Alpha-glucosidase inhibitory limonoids from the leaves of Azadirachtaindica A.Juss grown in Ninh Thuan province, Science and Technology Development, 14, 36-42 41 Pantidos, Boath, Lund, Conner, J McDougall (2014), Phenolic –rich extracts from the edible seaweed, Ascophyllum odosum, inhibit α- amylase and α-glucosidase: Potential anti-hyperglycemic effects, journal of functional foods, 10, 201-209 42 Ragan M.A, and Glombitza K.W, (1986), Prog Phycol Res,4,129-241] 43 Singleton V.L, Orthofer R and Lamuela R.M.M (1999), Analysis of total phenol and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent, Method Enzymol, 29(9), pp 152–78 44 Spigno G, Tramelli L, Faveri D M (2007), Effects of extraction time, temperature and solvent on concentration and antioxidant activity of grape marc phenolics, Journal of Food Engineering, 8(1), pp 200-208 45 Siobhan Ryan (2010), An investigation into the biochemical effects of heavy metal exposure on seaweed 46 Stefan Kraan (2012), Algal Polysaccharides, Novel Applications and Outlook, 490 60 47 Vera J, Castro J, Gonzalez A, Moenne A (2011), Seaweed Polysaccharides and Derived Oligosaccharides Stimulate Defense Responses and Protection Against Pathogens in Plants, 9(12): 2514–2525 48 Tadera K, Minami Y, Takamastu K, Matsuoka T (2006), Inhibition of αGlucosidase and α-Amylase by Flavonoids, Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 52, 149-53 49 Thoudam T, Kirithika T, Kamala S K and Usha D K (2011), Phytochemical screening and antioxidant activity of various extracts of Sargassum muticum, pp 25-30 50 Wang Y, Xu B (2014),Distribution of antioxidant activities and total phenolic contents in acetone, ethanol, water and hot water extracts from 20 edible mushrooms via sequential extraction, Austin Journal of Nutrition and Food Science; 2(1), pp 1- PHỤ LỤC Phụ lục 1: phương pháp xác định độ ẩm Độ ẩm rong biển xác định phương pháp sấy khô đến khối lượng không đổi Cách tiến hành: Sấy cốc đến khối lượng không đổi Cốc rửa đem sấy khơ sau lấy làm nguội bình hút ẩm đem cân Cân g rong biển khô cho vào cốc sấy khô đến khối lượng không đổi cho cốc vào tủ sấy Sấy nhiệt độ 105oC- 120 oC vòng 4-6 Lấy cốc sấy ra, làm nguội bình hút ẩm sau đem cân đến khối lượng khơng đổi  Tính kết Hàm lượng ẩm rong tính theo cơng thức 𝑋= G1−G2 G1−G * 100% Trong đó: X: hàm lượng ẩm (%) G: khối lượng cốc sấy (g) G1: khối lượng cốc sấy mẫu trước sấy (g) G2: khối lượng cốc sấy mẫu sau sấy(g) Bảng PL 1.1 Kết xác định độ ẩm rong biển Tên tiêu Hàm ẩm Loài rong Khối lượng cốc mẫu trước sấy (g) Khối lượng cốc mẫu sau sấy (g) Khối lượng cốc sấy đến khối lượng không đổi (g) Hàm lượng ẩm (%) rong mơ S microcystum 24,4408 24,2952 23,4355 14,48 27,6425 27,5423 26,6311 9,91 24,8636 24,7394 23,7621 11,28 24,5233 24,3221 23,5203 20,06 rong mơ S oligocystum rong mứt porphyta rong nho Caulerpa lentillifera Bảng PL 1.2 Kết xác định hàm lượng chất khô dịch chiết rong biển Rong biển Rong mơ S.microcystum Rong mơ S.oligocystum Rong mứt porphyta Rong nho Caulerpa lentillifera Khối lượng cốc sấy đến khối lượng không đổi (g) Khối lượng cốc mẫu trước sấy (g) Khối lượng cốc mẫu sau sấy (g) Hàm lượng ẩm (%) Khối lượng chất khô (g) 23,5090 26,5090 23,5730 97,87 0,021 21,8401 24,8309 21,9043 97,85 0,021 21,8433 24,7907 21,9034 97,96 0,02 23,5090 26,4890 23,6088 96,65 0,033 Phụ lục 2: Đường chuẩn galic 1.6 y = 0,891x + 0,069 R² = 0,992 Độ hập thụ bước sóng 760 nm 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 1.5 Nồng độ gallic acid (mg/ml) Phụ lục Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong biển Bảng PL 3.1 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.microcystum nồng độ dung môi chiết (methanol) khác Nồng độ methanol Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,2245 0,2387 4,36 4,76 4,56 ± 0,28d 25 0,1879 0,1387 3,34 1,84 2,59  1,06c 50 0,1356 0,1344 1,87 1,84 1,85  0,02bc 80 0,0897 0,093 0,58 0,67 0,63  0,07ab 100 0,0735 0,0702 0,13 0,03 0,08  0,07a Bảng PL 3.2 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.oligocystum nồng độ dung môi chiết (methanol) khác Nồng độ methanol Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,2206 0,2229 4,25 4,32 4,29 ± 0,05d 25 0,1714 0,1786 2,83 3,08 2,97  0,14c 50 0,0932 0,0900 0,68 0,59 0,63  0,06b 80 0,0699 0,0695 0,03 0,01 0,02  0,01a 100 0,0698 0,07 0,02 0,03 0,025  0,00a Bảng PL 3.3 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mứt porphyta nồng độ dung môi chiết (methanol) khác Nồng độ methanol Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,2213 0,2125 4,27 4,03 4,15 ± 0,18b 25 0,2273 0,2452 4,44 4,94 4,69  0,36b 50 0,2144 0,2444 4,08 4,92 4,50  0,60b 80 0,2200 0,2407 4,24 4,82 4,53  0,41b 100 0,0704 0,0692 0,04 0,01 0,02  0,02a Bảng PL 3.4 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong nho Caulerpa lentillifera nồng độ dung môi chiết (methanol) khác Nồng độ methanol Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,0811 0,0915 0,34 0,63 0,49 ± 0,21bc 25 0,0824 0,0727 0,38 0,1 0,24  0,19a 50 0,0985 0,0985 0,83 0,83 0,83  0,00b 80 0,1488 0,1549 2,24 2,41 2,32  0,12c 100 0,0909 0,0958 0,61 0,75 0,68  0,09b Bảng PL3.5 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.microcystum nhiệt độ chiết khác Nhiệt độ (C) Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) Lần Lần Lần Lần Trung bình 50 0,1812 0,1894 3,15 3,38 3,26  0,16a 60 0,2245 0,2387 4,36 4,76 4,56  0,28b 70 0,1992 0,2320 3,65 4,57 4,11  0,65ab 80 0,2874 0,3034 6,13 6,58 6,35  0,32c 100 0,5387 0,5077 13,18 12,31 12,74  0,62d Bảng PL 3.6 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.oligocystum nhiệt độ chiết khác Độ hấp thụ bước sóng Hàm lượng polyphenol tổng số 760 nm (mg GAE/g rong khô) Nhiệt độ (C) Lần Lần Lần Lần Trung bình 50 0,2060 0,2092 3,84 3,93 3,89  0,06a 60 0,2206 0,2229 4,25 4,32 4,28  0,05a 70 0,2290 0,2403 4,49 4,80 4,65  0,22a 80 0,3448 0,3325 7,74 7,39 7,57  0,24b 100 0,5097 0,4398 12,37 10,38 11,37  1,40c Bảng PL 3.7 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mứt Porphyta nhiệt độ chiết khác Nhiệt độ (C) Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) Lần Lần Lần Lần Trung bình 50 0,1747 0,1769 2,97 3,02 2,99 0,04a 60 0,1905 0,2091 3,41 3,93 3,67  0,37b 70 0,2132 0,2182 4,05 4,19 4,12  0,10b 80 0,2213 0,2125 4,27 4,03 4,15  0,17b 100 0,2396 0,2469 4,78 4,99 4,89  0,14c Bảng PL 3.8 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong nho Caulerpa lentillifera J.A.g nhiệt độ chiết khác Độ hấp thụ bước sóng Hàm lượng polyphenol tổng số 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) Nhiệt độ (C) Lần Lần Lần Lần Trung bình 50 0,0865 0,0839 0,49 0,42 0,45  0,05a 60 0,0987 0,0883 0,83 0,54 0,69  0,21ab 70 0,0975 0,915 0,79 0,63 0,71  0,12ab 80 0,0989 0,1017 0,84 0,92 0,88  0,06b 100 0,1157 0,1274 1,31 1,63 1,47  1,40c Bảng PL 3.9 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.microcystum thời gian chiết khác Thời gian Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khô) (phút) Lần Lần Lần Lần Trung bình 10 0,3668 0,4045 8,36 9,41 8,88  0,75a 30 0,4825 0,4889 11,60 11,78 11,69  0,13b 60 0,5725 0,5623 14,13 13,84 13,98  0,20c 90 0,5398 0,5303 13,21 12,94 13,08  0,19bc 120 0,5103 0,5228 12,38 13,73 12,56  0,25bc Bảng PL 3.10 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S.oligocystum thời gian chiết khác Thời Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số gian sóng 760 nm (mg GAE/g rong khô) (phút) Lần Lần Lần Lần Trung bình 10 0,3935 0,3809 9,10 8,75 8,92  0,25a 30 0,4136 0,4544 11,06 10,82 10,94  0,17b 60 0,5424 0,5368 13,28 13,13 13,20  0,11d 90 0,4882 0,4980 11,76 12,03 11,89  0,19c 120 0,4590 0,5267 11,95 12,84 12,39  0,63cd Bảng PL 3.11 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mứt Porphyta thời gian chiết khác Thời gian Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g nguyên liệu khô) (phút) Lần Lần Lần Lần Trung bình 10 0,2629 0,2755 5,44 5,79 5,62 0,25a 30 0,2529 0,2686 5,16 5,60 5,38  0,31a 60 0,2621 0,2551 5,95 6,41 6,18  0,33a 90 0,2811 0,2975 6,13 6,58 6,35  0,32a 120 0,4204 0,4500 9,86 10,69 10,27  0,49b Bảng PL 3.12 Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong nho Caulerpa lentillifera thời gian chiết khác Thời gian Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g ngun liệu khơ) (phút) Lần Lần Lần Lần Trung bình 10 0,1193 0,1128 1,41 1,23 1,32 0,13a 30 0,1098 0,1194 1,14 1,41 1,28  0,19a 60 0,1310 0,1407 1,74 2.01 1,88  0,19b 90 0,1187 0,1162 1,39 1,32 1,35  0,05a 120 0,1131 0,1154 1,24 1,30 1,26  0,05a Phụ lục Kết đánh giá khả chống oxy hóa rong mơ S microcystum S oligocystum Bảng PL 4.1 Kết xác định tổng lực khử Rong mơ S.oligocystum S.microcystum Năng lực khử nồng độ (mg/ml) Lần Lần Trung bình 0,29 0,4854 0,4807 0,48  0,00a 0,57 0,6422 0,6603 0,65  0,01b 0,86 0,8385 0,8890 0,84  0,00c 1,14 0,9245 0,9189 0,92  0,00d 0,29 0,3846 0,4002 0,39  0,01a 0,57 0,5021 0,5004 0,50  0,00b 0,86 0,5776 0,5798 0,58  0,00c 1,14 0,6921 0,7007 0,69  0,01d Bảng PL 4.2 Kết xác định khả khử gốc tự DPPH Rong nồng độ mơ (mg/ml) S.oligoc ystum S.microc ystum Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Contro Contro l1 l2 0,0914 0,1853 0,0709 0,0803 0,13 0,0566 0,175 Mẫu Mẫu 0,004 0,0815 0,086 Khả khử gốc tự DPPH (%) Lần Lần 0,1798 56,02 49,17 0,1883 0,1798 61,73 55,34 0,0634 0,1853 0,1798 69,45 64,74 0,0432 0,0339 0,1853 0,1798 76,69 81,15 0,04 0,1116 0,1082 0,1951 0,1851 42,79 41,55 0,086 0,1027 0,0966 0,1951 0,1851 47,36 47,81 0,13 0,0788 0,0843 0,1951 0,1851 59,61 54,45 0,175 0,0742 0,0674 0,1951 0,1851 61,97 63,59 Trung bình 52,59 ± 4,84a 58,54 ± 4,52ab 67,09 ± 3,34b 78,92 ± 3,15c 42,17 ± 0,89a 47,59 ± 0,32a 57.03 ± 3,64b 62,78 ± 1,15c Phụ lục Kết đánh giá khả ức chế enzyme α-glucosidase dịch chiết rong mơ S.oligocystum S.microcystum Bảng PL Kết xác định khả ức chế enzyme α-glucosidase dịch chiết rong mơ Khả khử Rong mơ S.oligocystum S.microcystum nồng độ Độ hấp thụ bước sóng 405 nm (mg/ml) gốc tự DPPH (%) Mẫu Control 0,4 0,3077 0,2113 49,29 0,6 0,3823 0,3122 56,55 1,0 0,4898 0,4114 64,02 0,4 0,5499 0,4032 66,67 0,6 0,7353 0,6096 75,78 1,0 0,9063 0,8022 81,36 ... từ số lồi rong biển Khánh Hịa - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chiết chiết đến hiệu thu nhận polyphenol từ số loài rong biển Khánh Hòa - Nghiên cứu khả chống oxy hóa ức chế enzyme  -glucosidase. .. để thu nhận polyphenol từ số loài rong vùng biển Khánh Hòa - Xác định khả chống oxy hóa ức chế enzyme  -glucosidase dịch chiết từ 02 loài rong cho hàm lượng polyphenol cao Nội dung nghiên cứu. .. Xuất phát từ thực trạng trên, chọn đề tài ? ?Nghiên cứu thu nhận polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa ức chế enzyme  -glucosidase số lồi rong biển Khánh Hòa? ?? 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn - Thành