polyphenol tổng số của dịch chiết rong biển
Trong quá trình tiến hành thí nghiệm cần chú ý: Rong tránh tiếp xúc với ánh sáng mặt trời do polyphenol dễ bị phân hủy, thường xuyên kiểm tra nhiệt độ trong quá trình chiết và khi thời gian thực hiện quá dài thì cần thường xuyên kiểm tra các điều kiện còn lại để đảm bảo độ chính xác.
2.3.3.1. Thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nồng độ dung môi chiết
Trong quá trình chiết, việc lựa chọn ra loại dung môi chiết thích hợp nhất để hòa tan tốt chất tan cần xác định là một yếu tố rất quan trọng. Qua bản chất của một số loại dung môi và của chất tan, ta thấy dung môi có thể hòa tan tốt polyphenol là các dung
Sấy đến khối lượng không đổi
Làm nguội
Cân
Tính kết quả Rong biển
môi có tính phân cực. Thí nghiệm được mô tả ở Hình 2.3 sử dụng dung môi chiết là methanol ở các nồng độ khác nhau.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số của dịch chiết rong biển được mô tả ở Hình 2.4. Cân chính xác 1 g rong biển khô đã được chuẩn bị cho vào bình chiết 100 ml. Cố định ở nhiệt độ 60oC, thời gian 60 phút, tỷ lệ NL/DM là 1/25 (w/v). Tất cả các loài rong này được tiến hành chiết ở những điều kiện nồng độ dung môi chiết methanol được thay đổi lần lượt là: 100, 80, 50 25 và 0%. Quá trình chiết được thực hiện trong bể ổn nhiệt (Elma, S300H, Elmasonic, Germany). Sau đó đem đi lọc lấy phần dịch chiết. Đưa dịch chiết đi kiểm tra hàm lượng polyphenol tổng số. Xác định nồng độ dung môi chiết thích hợp.
100% 80% 50% 25%
Lọc
Dịch chiết Rong biển đã xay nhỏ
Chiết ở nồng độ methanol
Xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Lựa chọn tỷ lệ dung môi chiết thích hợp
0%
Hình 2.4. Bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nồng độ dung môi chiết methanol đến hàm lượng polyphenol tổng số
2.3.3.2. Thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nhiệt độ chiết
Nhiệt độ có ảnh hưởng đến khả năng hòa tan các chất trong nguyên liệu vào môi trường chiết. Nếu nhiệt độ quá cao thì có thể làm biến chứng một số hợp chất có hoạt tính sinh học hoặc làm hao hụt một lượng chất tan dễ bay hơi khác. Nếu nhiệt độ quá thấp, lượng chất tan khuếch tán ra môi trường hạn chế. Vì vậy cần phải chọn nhiệt độ hợp lý.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng của nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số của dịch chiết rong biển được mô tả ở Hình 2.5. Cân chính xác 1 g rong khô nguyên liệu cho vào bình chiết dung tích 100 ml. Trong thí nghiệm này, tỷ lệ NL/DM là 1/25 (w/v), rong nguyên liệu được chiết bằng 0% ethanol ở các nhiệt độ khác nhau bao gồm 50, 60, 70, 80 và 100oC, trong cùng khoảng thời gian là 30 phút. Quá trình chiết được thực hiện trong bể ổn nhiệt (Elma, S300H, Elmasonic, Germany). Sau
50oC 60 oC 70 oC 80 oC 100 oC
Lọc
Dịch chiết Rong biển đã xay nhỏ
Chiết ở nhiệt độ
Xác định hàm lượng polyphenol tổng số Lựa chọn nhiệt độ chiết thích hợp
Hình 2.5. Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng của nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số
khi kết thúc quá trình chiết, hỗn hợp được lọc bằng giấy lọc Whatman No.40. Sau đó, dịch chiết được xác định hàm lượng polyphenol tổng số.
2.3.3.3. Thí nghiệm xác định ảnh hưởng của thời gian chiết
Thời gian chiết phải hợp lý vì nếu kéo dài thời gian chiết thì lượng chất hòa tan dung môi hết đồng thời sẽ ảnh hưởng đến thời gian thực hiện và chi phí cho toàn bộ quá trình.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng của thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số của dịch chiết rong biển được mô tả ở Hình 2.6. Cân chính xác khoảng 1 g rong khô nguyên liệu cho vào bình chiết dung tích 100 ml.Trong thí nghiệm này, tỷ lệ NL/DM là 1/25 (w/v), rong nguyên liệu được chiết bằng 0% methanol ở các thời gian chiết khác nhau là 10, 30; 60; 90 và 120 phút, tại cùng nhiệt độ là 100C. Quá trình chiết được thực hiện trong bể ổn nhiệt (Elma, S300H, Elmasonic, Germany). Sau
120 (phút)
Lọc
Dịch chiết Rong biển đã xay nhỏ
Chiết ở thời gian
Xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Lựa chọn thời gian chiết thích hợp 90 (phút ) 60 (phút)
30 (phút) 10 (phút)
Hình 2.6. Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng của thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số
khi kết thúc quá trình chiết, hỗn hợp được lọc bằng giấy lọc Whatman No.40. Sau đó, dịch chiết được xác định hàm lượng polyphenol tổng số.