khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà tàu vàng đối với vaccine gumboro của navetco

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG TRƢƠNG HÙNG CƢỜNG KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA GÀ TÀU VÀNG ĐỐI VỚI VACCINE GUMBORO CỦA NAVETCO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 12/2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Luận văn tốt nghiệp ngành: THÚ Y Tên đề tài: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA GÀ TÀU VÀNG ĐỐI VỚI VACCINE GUMBORO CỦA NAVETCO Cán bộ hướng dẫn: Huỳnh Ngọc Trang Sinh viên thực hiện: Trƣơng Hùng Cƣờng MSSV: LT11646 Lớp: CN1167L1 Cần Thơ, 12/2013 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP SINH HỌC & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà Tàu Vàng đối với vaccine Gumboro của Navetco”. Do sinh viên Trƣơng Hùng Cƣờng thực hiện tại trại thực nghiệm Ba Hoàng, phường Thới An Đông, quận Bình Thuỷ, thành phố Cần Thơ và phòng thí nghiệm bệnh truyền nhiễm, Bộ môn Thú y Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ, từ tháng 07 đến tháng 11 năm 2013. Cần Thơ, ngày… tháng…năm 2013 Cần Thơ, ngày… tháng…năm 2013 Duyệt bộ môn Duyệt giáo viên hướng dẫn Huỳnh Ngọc Trang Cần Thơ, ngày… tháng…năm 2013 Duyệt Khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn này là công trình nghiên cứu của bản thân tôi. Các số liệu trong đề tài hoàn toàn trung thực, nếu có vấn đề sai sót nào tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm. Tác giả luận văn Trƣơng Hùng Cƣờng ii LỜI CẢM ƠN Xin kính dâng lòng biết ơn sâu sắc đến Cha Mẹ tôi, người đã sinh ra và nuôi dưỡng tôi, luôn hy sinh tạo mọi điều kiện tốt nhất dành cho con và luôn theo dõi động viên con trong cuộc sống cũng như trong học tập. Cám ơn những người thân trong gia đình đã luôn động viên và nhắc nhở tôi. Xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: Cô Huỳnh Ngọc Trang, đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Thầy Trần Ngọc Bích, cố vấn học tập đã dìu dắt chúng tôi trong suốt quá trình học tập, cũng như đã tạo điều kiện thuận lợi để tôi có thể hoàn thành luận văn này. Quý Thầy, Cô Bộ môn Chăn nuôi và Bộ môn Thú y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ đã tận tình giảng dạy, đã cung cấp những kiến thức quý báu cho tôi trong suốt quá trình học tập tại trường. Tập thể các bạn lớp Thú y liên thông khoá 37 đã luôn động viên và giúp đỡ tôi trong 2 năm học vừa qua. Xin chúc các quý Thầy Cô, người thân và bạn bè tôi lời chúc sức khoẻ và thành công trong cuộc sống. Cuối lời, tôi xin gởi lời cám ơn đến Hội Đồng Ban Giám Khảo đã dành thời gian đọc, xem xét và đóng góp những ý kiến quý báo cho đề tài tốt nghiệp của tôi. Trƣơng Hùng Cƣờng iii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nguyên chữ AGP Agar Gel Precipitation CRD Chronic Respiratory Disease Ctv Cộng tác viên ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay IBD Infectious Bursal Disease IBDV Infectious Bursal Disease Virus OD Optical Density OIE Organisation for Animal Health TCID50 Tissue Culture Infective Dose 50 TMB Teramethyl benzidine iv DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 2.1 Gà tiêu chảy phân trắng 9 Hình 2.2 Gà bệnh suy nhược và lờ đờ 9 Hình 2.3 Bệnh tích trên túi Fabricius 10 Hình 2.4 Cơ đùi xuất huyết thành từng vệt 10 Hình 2.5 Túi Fabricius sưng to, niêm mạc sung huyết và xuất huyết 10 Hình 2.6 Biến đổi túi Fabricius trong bệnh Gumboro 11 Hình 2.7 Vaccine nhược độc đông khô Gumboro 17 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí huyết thanh cho xét nghiệm ELISA 23 v DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 2.1 Lịch phòng bệnh Gumboro 15 Bảng 3.1 Quy trình phòng bệnh chung 21 Bảng 3.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 21 Bảng 4.1 Kiểm tra kháng thể thụ động mẹ truyền 26 Bảng 4.2 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 35 ngày tuổi 27 Bảng 4.3 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 49 ngày tuổi 28 Bảng 4.4 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 80 ngày tuổi 28 Bảng 4.5 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi úm 29 (0-4 tuần tuổi) Bảng 4.6 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi thịt (5-12 tuần tuổi) vi 30 MỤC LỤC Trang duyệt…………………………………………………………...………..i Lời cam đoan……………………………………………………………...…..ii Lời cảm ơn………………………………………………………………...….iii Danh mục chữ viết tắt……………………………………………………..….iv Danh sách hình………………………………………………………………...v Danh sách bảng………………………………………………….………........vi Mục lục……………………………………………………………………....vii Tóm lược…………………………………………………………………........x Chƣơng 1 ĐẶT VẤN ĐỀ ................................................................................. 1 Chƣơng 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN .......................................................................... 2 2.1 Khái quát về bệnh Gumboro và tình hình nghiên cứu ................................. 2 2.1.1 Khái quát về bệnh Gumboro .................................................................. 2 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trên thế giới ............................... 2 2.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong nước ................................. 3 2.2 Nguyên nhân gây bệnh Gumboro ................................................................ 5 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc của virus Gumboro ................................ 5 2.2.2 Sức đề kháng của virus đối với tác nhân lý hóa ................................... 5 2.3 Truyền nhiễm học ........................................................................................ 6 2.3.1 Loài mắc bệnh ........................................................................................ 6 2.3.2 Đường xâm nhập và sự lây lan .............................................................. 6 2.3.3 Cơ chế sinh bệnh Gumboro ................................................................... 7 2.3.4 Ảnh hưởng của tuổi gà và giới tính đối với bệnh Gumboro .................. 7 2.4 Miễn dịch học .............................................................................................. 7 2.4.1 Miễn dịch chủ động ................................................................................ 7 2.4.2 Miễn dịch thụ động ................................................................................ 8 2.5 Triệu chứng và bệnh tích ............................................................................. 8 2.5.1 Triệu chứng ............................................................................................ 8 2.5.2 Bệnh tích ................................................................................................ 9 2.6 Chẩn đoán .................................................................................................. 11 2.6.1 Chẩn đoán lâm sàng ............................................................................ 11 vii 2.6.2 Chẩn đoán phòng thí nghiệm ............................................................... 12 2.6.3 Chẩn đoán phân biệt ............................................................................ 13 2.7 Phòng bệnh và điều trị ............................................................................... 14 2.7.1 Phòng bệnh .......................................................................................... 14 2.7.2 Điều trị ................................................................................................. 16 2.8 Sơ lược về Vaccine .................................................................................... 16 2.9 Vaccine Gumboro nhược độc đông khô do công ty Navetco sản xuất ..... 16 Chƣơng 3 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM ........... 18 3.1 Nội dung nghiên cứu.................................................................................. 18 3.2 Phương tiện thí nghiệm .............................................................................. 18 3.2.1 Thời gian và địa điểm .......................................................................... 18 3.2.2 Đối tượng thí nghiệm ........................................................................... 18 3.3.3 Vật liệu thí nghiệm ............................................................................... 18 3.3 Phương pháp tiến hành thí nghiệm ............................................................ 19 3.3.1 Qui trình chăm sóc gà thí nghiệm ........................................................ 19 3.3.2 Bố trí thí nghiệm .................................................................................. 21 3.4 Các phương pháp thực hiện xét nghiệm .................................................... 22 3.5 Phương pháp theo dõi tốc độ tăng trưởng và tiêu tốn thức ăn ................... 24 3.6 Các chỉ tiêu theo dõi .................................................................................. 25 3.7 Phương pháp xử lý số liệu ......................................................................... 25 Chƣơng 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ..................................................... 26 4.1. Kết quả kiểm tra kháng thể ....................................................................... 26 4.1.1 Khảo sát kháng thể thụ động mẹ truyền .............................................. 26 4.1.2 Khảo sát mức độ bảo hộ của vaccine đối với virus gây bệnh Gumboro27 4.2 Kết quả khảo sát khả năng sinh trưởng và tăng trọng của gà thí nghiệm .. 29 4.2.1. Kết quả theo dõi tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi úm (0-4 tuần tuổi) .................................................................................... 29 4.2.2. Kết quả theo dõi tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi thịt (5-12 tuần tuổi) .................................................................................. 30 viii Chƣơng 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .......................................................... 32 5.1 Kết luận ...................................................................................................... 32 5.2 Đề nghị ....................................................................................................... 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................. 33 ix TÓM LƯỢC Đề tài “Khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà Tàu Vàng đối với vaccine Gumboro của Navetco” được thực hiện tại trại thực nghiệm Ba Hoàng, phường Thới An Đông, quận Bình Thuỷ, thành phố Cần Thơ và phòng thí nghiệm Bệnh truyền nhiễm Bộ Môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng 07/2013 đến tháng 11/2013. Qua thời gian nghiên cứu chúng tôi ghi nhận được một số kết quả sau: Kháng thể thụ động duy trì 100% ở gà thí nghiệm từ 3 ngày cho đến 10 ngày tuổi, với hiệu giá kháng thể lần lược là 1877±758, 930±108. Đến 17 ngày tuổi còn 60% gà có kháng thể và giảm hẳn ở 24 ngày tuổi (tỷ lệ 0%). Kiểm tra đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine vào thời điểm gà 35, 49 và 80 ngày tuổi. Kết quả thí nghiệm cho thấy gà sử dụng 2 lần vaccine Gumboro của Navetco vào lúc 7 và 21 ngày tuổi, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 80 ngày tuổi (5212±795) so với lần kiểm tra lúc 35 ngày tuổi (212±34) và 49 ngày tuổi (3536±1168). Khảo sát khả năng sinh trưởng và tăng trọng của gà Tàu Vàng qua 2 giai đoạn, giai đoạn nuôi úm 0-4 tuần tuổi và giai đoạn nuôi thịt 5-12 tuần tuổi, kết quả ghi nhận như sau: trọng lượng gà lúc 4 tuần tuổi đạt từ 254-257,4 gram/con, tăng trọng bình quân trong giai đoạn úm từ 7,727,84 gram/con/ngày với hệ số chuyển hóa thức ăn từ 2,36-2,39 gram thức ăn/gram tăng trọng. Kết thúc thí nghiệm trọng lượng gà lúc 12 tuần tuổi đạt từ 1289,5-1376,5 gram/con, tăng trọng bình quân trong giai đoạn nuôi thịt từ 18,49-19,98 gram/con/ngày, hệ số chuyển hóa thức ăn từ 2,94-3,14 kg thức ăn/kg tăng trọng. Qua kết quả khảo sát chưa thấy việc lấy máu kiểm tra kháng thể ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và tăng trọng của gà. x Chƣơng 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay chất lượng sản phẩm của các giống gà địa phương ngày càng được đánh giá cao và được thị trường chấp nhận với số lượng tiêu thụ ngày càng tăng. Trong đó gà Tàu Vàng là một trong những giống gà được nuôi khá phổ biến trong dân, đặc biệt ở các tỉnh miền Tây Nam Bộ. Do đặc tính quan trọng nhất của gà Tàu Vàng là ở chất lượng thịt thơn ngon do đó được người tiêu dùng rất ưa chuộng. Để đáp ứng nhu cầu trên, người chăn nuôi đã dần chuyển đổi phương phức chăn nuôi từ chăn nuôi truyền thống với số lượng nhỏ lẻ sang chăn nuôi tập trung với qui mô công nghiệp. Theo Lâm Minh Thuận (2001), gà Tàu Vàng có thể xuất chuồng lúc 12 tuần tuổi với trọng lượng từ 1,5-1,7 kg ở gà trống và 1,21,4 kg ở gà mái. Tuy nhiên, trong chăn nuôi tập trung qui mô công nghiệp lại là điều kiện thuận lợi cho nhiều bệnh truyền nhiễm phát sinh và lây lan. Trong đó bệnh Gumboro, là một trong những bệnh gây thiệt hại nặng nề cho ngành chăn nuôi gà tập trung, khi bệnh Gumboro nổ ra thì 100% số đàn gà bệnh bị kế phát bởi những bệnh khác, tạo thành những bệnh ghép phức tạp, đây chính là nguyên nhân chủ yếu gây chết với tỷ lệ cao đối với những đàn gà bị bệnh Gumboro (Lê Văn Năm, 1996). Do đó để khống chế bệnh Gumboro ngoài công tác vệ sinh an toàn sinh học thì phòng bệnh bằng vaccine là biện pháp tích cực và hiệu quả nhất. Do trên thị trường nước ta hiện nay có khá nhiều loại vaccine phòng bệnh Gumboro khác nhau, được sản xuất từ nhiều nước khác nhau và có cả vaccine trong nước, gây khó khăn cho người chăn nuôi khi muốn lựa chọn vaccine. Song song đó người chăn nuôi còn e ngại khi tiến hành lấy máu kiểm tra hiệu quả phòng bệnh của vaccine, không những đối với bệnh Gumboro mà còn nhiều bệnh khác trên gà như Newcastle, CRD (Chronic Respiratory Disease), cúm gia cầm… gây không ít khó khăn cho các cán bộ Thú y cơ sở khi tiến hành lấy máu kiểm tra. Chính vì những lý do trên cùng sự đồng ý của Bộ môn Thú y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà Tàu Vàng đối với vaccine Gumboro của Navetco” Mục tiêu đề tài: Kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro bằng phương pháp ELISA sau khi tiêm phòng vaccine Gumboro do công ty Navetco sản xuất. Khảo sát tác động của việc lấy máu kiểm tra có ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và tăng trọng của gà. 1 Chƣơng 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Khái quát về bệnh Gumboro và tình hình nghiên cứu 2.1.1 Khái quát về bệnh Gumboro Bệnh Gumboro hay còn gọi là bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (Infectious bursal disease-viết tắt là IBD, virus gây bệnh viết tắt là IBDV, hay được gọi đơn giản là virus Gumboro), là một bệnh cấp tính, có khả năng lây lan rất cao ở gà con, nhất là gà từ 3-6 tuần tuổi, tỷ lệ gà bị bệnh tới 100%. Gà lớn, gà sinh sản nhiễm bệnh thường ở thể mang trùng. Virus Gumboro cường độc tấn công vào túi Fabricius và các cơ quan miễn dịch, phá hủy tế bào lympho B và các đại thực bào gây hiện tượng suy giảm miễn dịch ở gà. Tác hại của virus Gumboro đối với gà không chỉ đơn thuần gây bệnh lý cho những cơ quan như: hệ tiêu hóa, hệ tuần hoàn mà còn làm suy giảm hệ thống miễn dịch, từ đó mở đường cho các mầm bệnh khác dễ dàng xâm nhập vào cơ thể gà (Đái Duy Ban và Phạm Công Hoạt, 2004). 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trên thế giới Bệnh Gumboro được Cosgrove phát hiện vào năm 1962 tại làng Gumboro thuộc bang Delaware (Hoa Kỳ). Đầu tiên người ta gọi bệnh là Avian Nephrosis do có bệnh tích nghiêm trọng ở thận (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997). Năm 1962, Winterfield và Hitchner tiến hành một thí nghiệm sàng lọc khẳng định đây là tác nhân gây bệnh mới, bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm, được Cosgrove mô tả và đã phân lập được virus này trên phôi trứng từ 9 đến 10 ngày tuổi. Năm 1970, Hichner đề nghị chính thức gọi bệnh do Cosgrove phát hiện là bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (Infectious Bursal Disease-IBD) hay còn gọi là bệnh Gumboro. Virus gây bệnh được gọi là virus gây viêm túi Fabricius truyền nhiễm (Infectious Bursal Disease Virus). Năm 1972, Allan et al., đã công bố đặc tính gây suy giảm miễn dịch ở gà con của virus Gumboro. Mc Ferran et al., (1980), thông báo về sự tồn tại của serotype 2 và việc phát hiện các biến chủng của serotype 1 ở vùng chăn nuôi gà công nghiệp Delmarva làm cho việc khống chế bệnh trở nên phức tạp hơn. Các biến chủng này đã gây bệnh cho đàn gà đã có kháng thể thụ động kháng virus Gumboro chuẩn (Rosenberger et al., 1985). 2 Tại châu Âu, người ta phát hiện bệnh Gumboro khá sớm, ở nước Anh vào năm 1962. Năm 1966, bệnh Gumboro lần đầu tiên bùng phát ở Ý. Năm 1967, Landgraf phát hiện bệnh ở Đức. Năm 1969, Maire et al., cho biết ổ dịch Gumboro đang lan tràn ở Pháp và Tây Ban Nha. Đến năm 1987 phát hiện bệnh này ở Bỉ. Năm 1988 trường đại học Georgia (Mỹ) đã phân lập được 2 chủng mới của serotype 1 ở gà thịt mà tính kháng nguyên khác với serotype điển hình (Standard IBD virus). Hai chủng mới phân lập này gây teo túi Fabricius trong vòng 3 ngày và gây ức chế miễn dịch mà không có triệu chứng lâm sàng rõ ràng (Nguyễn Bá Thành, 2006). Tại châu Á, năm 1966 bệnh Gumboro được phát hiện ở Israel, năm 1973 tại Thái Lan, bệnh Gumboro bắt đầu xuất hiện trên đàn gà nuôi công nghiệp. Trong thời gian này tại Đài Loan, Trung Quốc dịch bệnh xảy ra liên tiếp, tỷ lệ chết từ 40-50% (Nguyễn Bá Thành, 2006). Theo Hirai (1979), ở Nhật Bản khi kiểm tra huyết thanh đàn gà không chủng ngừa vaccine Gumboro có đến 60% có kháng thể kháng virus Gumboro. Theo Chaisingha et al., (1992), ở Thái Lan từ năm 1990, bệnh Gumboro đã gây tổn thất đáng kể cho chăn nuôi gà công nghiệp. Năm 1992 phát hiện bệnh Gumboro ở Hungary, các nhà nghiên cứu cũng đã đưa ra kết luận virus gây bệnh phân lập được từ gà bệnh ở Hungary có cấu trúc kháng nguyên giống với các chủng virus độc lực cao đã được phát hiện ở châu Âu. Năm 1989, Adewuyi et al., kiểm tra huyết thanh của gà nhập từ Nhật được bán tại các thị trường Nigeria có 44,3% số mẫu có phản ứng dương tính với virus Gumboro. Châu Mỹ là nơi đầu tiên phát hiện bệnh nhưng theo thông báo của tổ chức thú y thế giới (OIE: Organisation for Animal Healthy), tình hình dịch bệnh ở châu lục này không dữ dội chỉ rất ít nước báo cáo phát hiện thấy bệnh Gumboro. Năm 1992, (OIE) đã công bố chính thức tên bệnh, mầm bệnh, triệu chứng lâm sàng, bệnh tích, các phương pháp chẩn đoán và phòng chống bệnh Gumboro (Nguyễn Bá Thành, 2006). 2.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong nước Tại Việt Nam, bệnh Gumboro được chuyên gia Hungary và đồng nghiệp Việt Nam chính thức phát hiện từ năm 1981 dựa vào triệu chứng, bệnh tích, dịch tễ học của bệnh (Lê Thanh Hòa, 1992). 3 Nhiều tác giả cho rằng, bệnh Gumboro đã xuất hiện ở Việt Nam từ những năm 70, nhưng lúc đó ta chưa chú ý đến. Theo Nguyễn Tiến Dũng (1989), thì vào những năm của thập kỷ 70 rất có thể bệnh Gumboro đã xuất hiện ở nước ta, đã gây nhiều tổn thất cho chăn nuôi gia cầm, nhưng do hiểu biết còn hạn chế nên hầu hết các cán bộ thú y điều cho rằng do tiêm phòng không đầy đủ bệnh Newcastle. Năm 1982, Viện Thú Y Quốc gia chính thức công bố bệnh Gumboro ở Việt Nam (Trần Minh Châu và ctv, 1982). Từ năm 1986, bệnh Gumboro xảy ra ồ ạt tại các trại gà công nghiệp. Năm 1987, bệnh Gumboro xảy ra tại trại gà Phúc Thịnh (Hà Nội) làm chết 55.407 con. Đầu tiên, người ta nghi đó là Newcastle nhưng qua dấu hiệu lâm sàng, bệnh tích đại thể và những chẩn đoán phân biệt khác, người ta đã xác định là bệnh Gumboro (Lê Văn Hùng, 1996). Năm 1987, ở Việt Nam có nhiều ổ dịch Gumboro. Bệnh phát ra nghiêm trọng ở xí nghiệp gà Cầu Diễn thuộc liên hiệp gia cầm Hà Nội, xí nghiệp gà giống Tam Đảo và một số xí nghiệp gà giống thương phẩm (Nguyễn Đăng Khải, 1988). Theo Nguyễn Tiến Dũng (1996), ở Việt Nam giai đoạn từ 1986-1990 là thời kỳ bỏ ngỏ đối với bệnh Gumboro do chưa có vaccine phòng bệnh, thiếu kinh nghiệm phòng bệnh nên đã gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gà công nghiệp, tỷ lệ gà bị bệnh từ 80-90%, tỷ lệ chết 30-40%. Từ năm 1989-1995, tình hình bệnh Gumboro không ngừng gia tăng, các giống gà công nghiệp nuôi ở Việt Nam đều có thể mắc bệnh. Năm 1989 tỷ lệ đàn gà nhiễm bệnh 19,23% thì đến năm 1995 tăng lên 90,31% trong tổng số đàn được kiểm tra (Lê Hồng Mận và Phương Song Liên, 1999). Từ năm 1990 đến nay, bệnh Gumboro đã gây thiệt hại nặng nề cho nhiều trại gà trong cả nước (Nguyễn Bá Thành, 2006). Kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hồng Minh và ctv (2011), gà được tiêm một lần vaccine Gumboro, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 28 ngày tuổi (914,23±13,78 với vaccine đơn giá và 823,25±15,56 với vaccine đa giá). Gà sử dụng hai lần vaccine Gumboro vào lúc 7 và 14 ngày tuổi, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 42 ngày tuổi (2289,79±18,26 với vaccine đơn giá và 1995,01±24,28 với vaccine đa giá). Công cường độc vào lúc 42 ngày tuổi, toàn bộ gà được sử dụng vaccine đều không bị tiêu chảy và không có bệnh tích ở túi Fabricius. Một tỷ lệ nhất định gà sử dụng một lần vaccine có bệnh tích xuất huyết cơ đùi, cơ ngực (13,33% vaccine đơn giá, 20% vaccine đa giá). 4 Theo Trần Ngọc Bích và ctv (2012), khảo sát kiểm tra 24 ổ dịch có 9 đàn cho kết quả dương tính với virus Gumboro chiếm tỷ lệ 33,33%. Bệnh Gumboro xảy ra chủ yếu ở lứa tuổi 19-42 ngày chiếm (57,14 %), gà ở lứa tuổi > 42 ngày có tỷ lệ mắc bệnh thấp hơn (11,11%). Gà nuôi theo phương thức thả hoàn toàn có tỷ lệ mắc bệnh Gumboro (25,00%) thấp hơn so với gà nuôi nhốt hoàn toàn (60,00%) và bán chăn thả (33,33%). Kết quả nghiên cứu của Hồ Thị Việt Thu (2012), về tình hình bệnh Gumboro trên các giống gà thả vườn cho thấy có 18 đàn gà mắc bệnh Gumboro từ 22 đàn nghi ngờ. Tỷ lệ chết do gà mắc bệnh Gumboro là 22,30% so với gà mắc bệnh khác (18,62%). Tỷ lệ đàn nhiễm bệnh Gumboro cao nhất được ghi nhận ở những đàn gà nhỏ hơn 30 ngày tuổi (62,5%), kế đến là gà từ 30-45 ngày tuổi (53,85%) và thấp nhất là ở những đàn gà lớn hơn 45 ngày tuổi (23,08%). Bệnh thường xảy ra nhất ở các đàn không được tiêm vaccine (70,0%), kế đến là các gà chỉ được tiêm vaccine một lần (62,5%) và gà được tiêm vaccine 2 lần (28,57%). 2.2 Nguyên nhân gây bệnh Gumboro 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc của virus Gumboro Virus Gumboro được xếp vào giống Avibirnavirus họ Birnaviridae, có 20 mặt trần với đường kính 55-60 nm, có dạng khối với nhiều góc cạnh. Dưới kính hiển vi điện tử có thể quan sát thấy tập hợp virus Gumboro giống như tổ ong trong nguyên sinh chất tế bào bị nhiễm, xếp đều đặn cạnh nhau. Theo Nguyễn Như Thanh và ctv (1997), virus Gumboro là loại virus chứa ARN 2 sợi cuộn tròn, phân làm 2 đoạn riêng biệt, vì vậy có tên là Birnavirus (Bi: hai; ARN: acid ribonucleic) nghĩa là virus có 2 đoạn ARN. Cấu tạo virus bao gồm acid ribonucleic bên trong, bao quanh nó là lớp capsid cấu tạo bằng protein. Ngoài phần capsid virus không có vỏ bọc bằng lipid. Do vậy, IBDV (Infectious bursal disease virus) có sức đề kháng cao khi tồn tại ngoài thiên nhiên. Do không có vỏ bọc ngoài nên IBDV không mẫn cảm với ether và chloroform, trái lại chúng rất mẫn cảm với formalin (Lê Văn Hùng, 1996). 2.2.2 Sức đề kháng của virus đối với tác nhân lý hóa Virus Gumboro có sức đề kháng rất cao, tồn tại lâu dài trong phân, chất độn chuồng. Virus tồn tại lâu dài trong ấu trùng Alphitobus disperinus có trong thức ăn, virus có khả năng đề kháng với ether, chloroform, nhưng bị vô hoạt ở pH=12 và không bị ảnh hưởng ở pH=2 trong 30 phút. Virus có thể sống ở 560C trong 5 giờ, virus dễ bị tiêu diệt bởi phenol 0,5%, có nhiều bằng chứng cho thấy virus 5 không gây bệnh khi tiếp xúc với formol 0,5% trong 6 giờ, virus cũng bị vô hoạt với 3 chất sát trùng với các nồng độ khác nhau (iod, dẫn xuất phenolic và hợp chất ammonium) trong 2 phút ở 230C. Trong điều kiện tự nhiên, những nơi xảy ra dịch bệnh Gumboro thì virus tồn tại rất lâu: trong chuồng nuôi từ 54-122 ngày, trong nước, chất độn chuồng, dụng cụ chăn nuôi và chất thải virus vẫn giữ đặc tính gây nhiễm và gây bệnh ít nhất 52 ngày, thậm chí đến 168 ngày vẫn còn khả năng gây bệnh. Điều đặc biệt nghiêm trọng là virus Gumboro có khả năng truyền ngang rất lớn, do đó từ một ổ dịch dễ dàng trở thành vùng nguy cơ bùng phát dịch. Những khả năng đề kháng tốt của virus Gumboro đã làm cho tình hình bệnh Gumboro trở nên khó khăn. Như vậy, muốn tiêu diệt được virus Gumboro phải dùng các loại hóa chất mạnh, thích hợp, liều cao và sử dụng một cách triệt để (Đái Duy Ban và Phạm Công Hoạt, 2004). 2.3 Truyền nhiễm học 2.3.1 Loài vật mắc bệnh Gà được coi là ký chủ tự nhiên của virus Gumboro. Ngoài ra virus này cũng được phân lập từ chim trĩ, gà gô, chim cánh cụt, cút, gà sao, gà lôi, đà điểu. Tuy nhiên trên các loài vật này không có những biến đổi bệnh lý. Trong nhiều năm gà được coi như là động vật nhiễm bệnh duy nhất. Tất cả mọi giống đều mắc bệnh, đặc biệt là gà Leghorn trắng cảm nhiễm nhất và tỷ lệ chết cao nhất. Bệnh cũng được ghi nhận ở gà tây và vịt. Gà mắc bệnh cao nhất ở 3-6 tuần tuổi, gà nhỏ tuổi hơn có thể mắc bệnh ở thể mãn tính, không có biểu hiện triệu chứng nhưng ảnh hưởng rất quan trọng, nó làm ức chế khả năng miễn dịch của gà (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 2.3.2 Đường xâm nhập và sự lây lan Sự xâm nhập của virus vào cơ thể gà chủ yếu qua đường tiêu hóa, ngoài ra còn qua đường hô hấp. Sự lây lan bệnh giữa những gà trong đàn chủ yếu theo phương thức truyền ngang có thể trực tiếp hoặc gián tiếp qua thức ăn, nước uống hoặc do tiếp xúc với môi trường truyền nhiễm bệnh. Benton et al., (1967), cho rằng chuồng nuôi của những gà đã bị bệnh có thể truyền bệnh cho những gà khác từ 54-122 ngày sau. Nước uống, thức ăn, phân lấy đi từ chuồng gà bệnh là nguồn lây bệnh tới 52 ngày sau. Bọ gà (Alphitobius disperinus) có thể bị nhiễm virus Gumboro. Hầu hết các tác giả đều cho rằng sự truyền lây theo chiều dọc là không xảy ra. Nếu gà con mới nở đã bị nhiễm thì đó là do virus dính ở vỏ trứng xâm nhập vào (Lê Văn Hùng, 1996). 6 2.3.3 Cơ chế sinh bệnh Gumboro Virus xâm nhập qua đường tiêu hóa của gà, xuyên qua màng ruột đến các đại thực bào và cơ quan Lympho của ống tiêu hóa, từ đây virus theo tĩnh mạch cửa vào gan rồi lan tỏa khắp cơ thể, đến ngày thứ 4 virus có mặt ở các cơ quan sinh bạch cầu, tập trung nhiều nhất ở túi Fabricius. Nếu gà nhiễm bệnh từ 1 ngày đến 2 tuần tuổi, do trong máu của gà chưa có các bổ thể virus không tấn công được hệ thống mạch máu và thận, chỉ phá hại túi Fabricius, làm túi này hư hại rồi teo nhỏ, quá trình nuôi dưỡng và thành thục của tế bào Lympho B bị đình trệ, dẫn đến hậu quả làm suy giảm việc tạo kháng thể của cơ thể gà, đây là nguyên nhân chính của việc gà không tạo được miễn dịch mặc dù đã tiêm phòng đầy đủ các bệnh. Trường hợp nhiễm bệnh sau 2 tuần tuổi, lúc đó trong máu đã có đầy đủ lượng bổ thể virus sẽ phát huy tác dụng gây nên triệu chứng vỡ mạch máu gây xuất huyết nhiều nơi, virus đến thận phá hoại ống thận làm gà không thể tái hấp thu được nước, hậu quả nước từ thận tràn vào trực tràng, gà tiêu chảy rất nặng, gà chết chủ yếu là do mất nước. 2.3.4 Ảnh hưởng của tuổi gà và giới tính đối với bệnh Gumboro Ngày nay, do căn nguyên gây bệnh Gumboro thay đổi dễ thích nghi và tồn tại nên đã sinh ra khá nhiều biến chủng và lưu hành rộng khắp, khiến nguy cơ gà bị nhiễm mầm bệnh ngày một dễ dàng hơn và phụ thuộc vào độc lực của virus gây bệnh cũng như tuổi gà bị nhiễm mầm bệnh. Nếu như trước đây gà bị bệnh thường ở thể lâm sàng là chủ yếu và gà thường bị bệnh ở lứa tuổi từ 3-6 tuần, thì ngày nay thể lâm sàng có thể bị sớm dưới 3 tuần và trên 6 tuần, nói cách khác giao động độ tuổi gà bị bệnh có biên độ lớn. Ngoài thể lâm sàng ra, bệnh ngày nay khá phổ biến ở thể ẩn và gà thường bị bệnh ở dưới 3 tuần tuổi. Theo nhận định của Lê Văn Năm (2004), cho rằng độ mẫn cảm đối với mầm bệnh, tỷ lệ mắc bệnh cũng như tỷ lệ chết ở bệnh Gumboro giữa gà trống và gà mái không có sự khác biệt. 2.4 Miễn dịch học 2.4.1 Miễn dịch chủ động Đối với miễn dịch chống bệnh Gumboro, quá trình miễn dịch dịch thể là quan trọng. Gà ở lứa tuổi nhỏ hơn 3-4 tuần tuổi chỉ cần tiếp xúc virus Gumboro 7 (cường độc hay vaccine) qua đường tiêu hóa là đủ để hình thành miễn dịch tốt, do đó vaccine Gumboro có thể được sử dụng bằng đường uống. Gà ở độ tuổi lớn hơn hoặc gà mẹ, việc đưa vaccine bằng đường tiêu hóa không có hiệu quả cao, mà nên dùng phương pháp tiêm bắp hay tiêm dưới da (Lukert và Saif, 1991). Do virus chủ yếu nhiễm qua đường tiêu hóa, do đó việc tạo miễn dịch tại chỗ trên đường tiêu hóa bằng cách cho uống vaccine là rất quan trọng. Tuy nhiên do thời gian tồn tại của kháng thể sẽ giảm dần theo thời gian, do đó phải chủng ngừa lặp lại. Đồng thời phải lưu ý đến sự trung hòa vaccine do kháng thể thụ động và loại vaccin sử dụng. Cần lưu ý điều này trong việc thực hiện một chương trình vaccine toàn diện phòng chống bệnh Gumboro (Nguyễn Bá Thành, 2006). 2.4.2 Miễn dịch thụ động Kháng thể truyền từ mẹ sang con (qua lòng đỏ trứng) có thể bảo vệ gà con chống lại sự nhiễm virus trong thời gian đầu. Skeeles et al., (1979), đã xác định kháng thể kháng virus Gumboro thụ động trong máu gà con giảm đi 1/2 sau 3-5 ngày. Khi hiệu giá kháng thể trung hòa nhỏ hơn 100 thì gà hoàn toàn mẫn cảm với virus Gumboro và phát bệnh khi bị nhiễm (Lucio và Hitchner, 1979). Kháng thể trung hòa thụ động có vai trò tích cực trong việc bảo hộ đàn gà con nhưng lại ức chế việc tạo ra miễn dịch chủ động bằng vaccine nhất là vaccine sống nhược độc. Hiện nay, quan điểm chung của tất cả các chuyên gia trên thế giới cho rằng việc tiêm phòng cho gà con bằng vaccine nhược độc đang gặp trở ngại lớn nhất là kháng thể thụ động của gà mẹ truyền sang nên nhiều khi vaccine không có tác dụng và việc tiêm phòng không đem lại hiệu quả như mong muốn. Qui trình tiêm phòng bằng vaccine cho gà con không có lịch rõ ràng và cũng không thể có lịch áp dụng chung cho tất cả mọi nơi (Nguyễn Xuân Bình và ctv, 2000). 2.5 Triệu chứng và bệnh tích 2.5.1 Triệu chứng Thể không có biểu hiện lâm sàng (thể ẩn tính) Đối với những gà nhiễm bệnh dưới 2-3 tuần tuổi thường không có triệu chứng, nhưng những gà này bị suy giảm miễn dịch nặng, rất dễ mắc những bệnh truyền nhiễm khác và khi tiêm phòng sẽ không có đáp ứng miễn dịch hoặc có đáp ứng rất kém (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 8 Thể lâm sàng Thời gian nung bệnh rất ngắn, trong 24 giờ sau khi nhiễm mầm bệnh đã có biến đổi vi thể ở túi Fabricius và chỉ sau 2-3 ngày đã xuất hiện triệu chứng lâm sàng (Helmooldt et al., 1964). Gà bị bệnh thường ở lứa tuổi 3-6 tuần, có trường hợp sau 6 tuần. Ngay sau khi virus vừa mới xâm nhập túi Fabricius gà đã có biểu hiện: cơ vùng hậu môn co bóp nhanh, mạnh không bình thường, gà có phản xạ như muốn đi ngoài nhưng không thực hiện được. Đây là triệu chứng đặc trưng đầu tiên giúp chúng ta phát hiện sớm bệnh Gumboro. Sau đó không lâu gà sốt rất cao, đó là lúc virus gây bệnh đã nhập vào đường huyết, đường lympho đến các tế bào B. Tại thời điểm này chúng sinh sản rất nhanh và tăng gấp nhiều lần về số lượng, các biểu hiện của nhiễm trùng huyết thể hiện khá rõ. Do sốt cao, nên gà uống nhiều nước sinh ra rối loạn tiêu hóa, mất cân bằng sinh thái đường ruột, dẫn đến gà đi tiêu chảy, viêm ruột, bội nhiễm kế phát. Phân trắng lúc này trở nên loãng, lúc đầu có màu trắng ngà sau chuyển sang trắng vàng, vàng xanh nhớt, đôi khi lẫn máu. Phân nhớt vàng xanh là đặc điểm đặc trưng của bệnh Gumboro. Gà bệnh Gumboro có thể bị chết do sốt cao, thiếu nước nếu không được chăm sóc chu đáo như nhốt riêng, bơm thuốc giải nhiệt và trừ bệnh kế phát thì tỷ lệ chết rất cao (Lê Văn Năm, 2004). Hình 2.1 Gà tiêu chảy phân trắng Hình 2.2 Gà bệnh suy nhƣợc và lờ đờ (Nguồn: Tập ảnh màu về bệnh gia súc, 2001) 2.5.2 Bệnh tích Bệnh tích đại thể Ở thể không có biểu hiện lâm sàng (thể ẩn), bệnh tích có thể quan sát được là teo tuyến ức và túi Fabricius (Lê Văn Năm, 1996). 9 Hình 2.3 Bệnh tích trên túi Fabricius (http://www.vemedim.vn/benhvadieutri.php?id=3&b=38) Lúc mới phát bệnh khi mổ khám thấy túi Fabricius sưng to và có dịch nhầy trắng. Nếu mổ ngày thứ 2 sau khi phát hiện bệnh thấy túi Fabricius sưng đỏ, thận nhạt màu, ruột sưng có nhiều dịch nhầy bên trong. Đến ngày thứ 3, 4 thấy túi Fabricius xuất huyết lấm tấm hoặc từng vệt, phần giáp ranh giữa dạ dày cơ và dạ dày tuyến xuất huyết thành vệt, cơ đùi và ngực xuất huyết vệt đỏ hoặc đen (Nguyễn Xuân Bình và ctv, 2000). Hình 2.4 Cơ đùi xuất huyết thành từng vệt (http://www.anova.com.vn/contents/article.asp?id=285&detail=16&ucat=44 ) Hình 2.5 Túi Fabricius sƣng to, niêm mạc sung huyết và xuất huyết (http://marphavet.com/modules.php?name=News&opcase=detailsnews&mid=29&mcid=330) 10 Túi Fabricius ở gà bình thường Túi Fabricius bị xuất huyết khi gà bị nhiễm Gumboro lúc 5 ngày tuổi Túi Fabricius gà bị nhiễm Gumboro lúc 8 ngày tuổi, kích thước giảm 1/8 so với bình thường Hình 2.6 Biến đổi túi Fabricius trong bệnh Gumboro (http://www.ebook.edu.vn/?page=1.1&view=7250) Ngoài bệnh tích điển hình ở túi Fabricius và hệ cơ, virus Gumboro còn gây bệnh tích ở một số cơ quan khác như: lách sưng nhẹ và đôi khi xuất hiện những nốt màu xám nhỏ trên bề mặt. Gan bị sưng nhẹ bề mặt và có thể có hoại tử rìa gan. Thận bị sưng nặng, trên bề mặt có những điểm xuất huyết, đôi khi có hoại tử phân bố đều khắp và các ống niệu chứa đầy muối urat (Nguyễn Bá Thành, 2006). Bệnh tích vi thể Túi Fabricius là nơi xảy ra những biến đổi vi thể nhiều nhất và đặc trưng nhất. Ngay 24 giờ sau khi nhiễm, phần lớn tế bào lympho trong túi đã bị thoái hóa. Ở giai đoạn 48-96 giờ sau khi nhiễm, các tế bào biểu mô bề mặt niêm mạc túi Fabricius tăng sinh, các tế bào hình trụ tiết mucin đổ vào lòng túi làm trong túi có nhiều bọt màu vàng. Từ 72-96 giờ sau khi nhiễm hầu như 100% các nang lympho của túi Fabricius đều có bệnh tích như trên (Lê Văn Hùng, 1996). 2.6 Chẩn đoán 2.6.1 Chẩn đoán lâm sàng Dựa vào đặc điểm dịch tễ là bệnh xảy ra thình lình, tỷ lệ chết tăng cao (ở ngày thứ 3, thứ 4 sau khi dịch bắt đầu bùng phát) và giảm nhanh, bệnh kết thúc trong khoảng một tuần, tỷ lệ mắc bệnh cao nhưng tỷ lệ chết thấp. Bệnh tích điển hình là ở túi Fabricius (sưng to, thuỷ thũng, xuất huyết), xuất huyết cơ ngực, cơ đùi, thận sưng (Hồ Thị Việt Thu, 2012). Ở gà con hoặc gà có kháng thể thụ động, khi bị nhiễm virus thường không có triệu chứng, trong trường hợp này chẩn đoán bằng phương pháp mổ khám, 11 quan sát đại thể và vi thể túi Fabricius. Gà bệnh ở bất kỳ lứa tuổi nào với các biến chủng của virus Gumboro chỉ chẩn đoán bằng phương pháp khảo sát bệnh tích vi thể túi Fabricius hoặc phân lập virus (Nguyễn Thành Trung, 1997). 2.6.2 Chẩn đoán phòng thí nghiệm Chẩn đoán huyết thanh học Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzyme (ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) là phương pháp tiên tiến để phát hiện mầm bệnh hay kháng thể dựa trên phản ứng đặc hiệu của kháng nguyên kháng thể. Dùng phương pháp ELISA để phát hiện và đánh giá kháng thể đặc hiệu bệnh Gumboro đã trở nên thông dụng nhất hiện nay (Luckert et al., 1991). ELISA dựa trên sự đo lường phản ứng enzyme có liên quan đến các phức hợp miễn dịch. Trong một phản ứng ELISA cụ thể, enzym có thể gắn kết với kháng nguyên hoặc kháng thể. Có 2 dạng chính của phản ứng này là: ELISA có thể dùng để kiểm tra sự hiện diện của kháng nguyên được nhận biết bởi kháng thể hoặc đo lường kháng thể được nhận biết bởi kháng nguyên (Võ Thị Trà An và Võ Ngọc Bảo, 2011). Theo Trần Ngọc Bích và Hồ Thị Việt Thu (2012), ELISA chủ yếu gồm 2 loại phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể và phản ứng ELISA trực tiếp tìm kháng nguyên. Nguyên lý của phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể: Các giếng của đĩa nhựa được phủ sẵn kháng nguyên. Kháng nguyên phải được gắn chặt vào đĩa nhựa sao cho sau khi rửa phải còn một lớp kháng nguyên phủ trong giếng. Nhỏ huyết thanh cần kiểm tra vào các giếng, nếu trong huyết thanh có kháng thể đặc hiệu thì kháng thể sẽ kết hợp với kháng nguyên được gắn sẵn trong giếng. Sau khi ủ và rửa để loại bỏ kháng thể không gắn kết với kháng nguyên, kháng thể đã kết hợp với kháng nguyên được phát hiện bởi kháng thể đã được gắn enzyme, nhỏ cơ chất của enzyme làm đổi màu thành phần phản ứng. Độ đậm đặc của màu sắc tỷ lệ với lượng kháng thể gắn enzyme được gắn với kháng thể có trong giếng, tức là tỷ lệ thuận với lượng kháng thể có trong huyết thanh. Kết quả của phản ứng được xác định bằng mắt thường hoặc bằng máy đọc ELISA. Nguyên lý của phản ứng ELISA trực tiếp tìm kháng nguyên: Cố định kháng thể đặc hiệu vào các giếng của đĩa nhựa, rửa nước để loại bỏ kháng thể không gắn kết. Sau đó cho huyết thanh hoặc huyễn dịch bệnh phẩm (nghi có chứa kháng nguyên) đã chiết xuất thành dung dịch vào các giếng. Nếu có kháng nguyên 12 tương ứng chúng sẽ gắn với kháng thể đặc hiệu, rửa nước để loại bỏ các thành phần thừa. Tiếp tục cho kháng thể đã gắn enzyme vào. Kháng thể sẽ gắn với kháng nguyên trong phức hợp kháng nguyên-kháng thể ở bước trên. Rửa nước để loại bỏ các thành phần thừa của phản ứng. Sau khi cho cơ chất của enzyme vào, nếu có xuất hiện màu tức là có kháng nguyên tương ứng với kháng thể đặc hiệu, phản ứng dương tính. Nếu không xuất hiện màu, tức là không có kháng nguyên tương ứng với kháng thể nên không có kết hợp kháng nguyên-kháng thể và kháng thể bị rửa trôi, phản ứng âm tính Phản ứng kết tủa khuếch tán trên thạch (Agar Gel Precipitation Test, AGP): dùng để phát hiện kháng thể khi có kháng nguyên chuẩn và ngược lại có thể dùng để phát hiện kháng nguyên khi có kháng thể chuẩn. Phản ứng AGP cho kết quả nhanh, nhạy, đơn giản, dễ tiến hành, nên được sử dụng nhiều trong chẩn đoán, nhưng phản ứng AGP chỉ có tính chất định tính không có tính chất định lượng (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997). 2.6.3 Chẩn đoán phân biệt Trong chẩn đoán cần phân biệt bệnh Gumboro với một số bệnh khác như: Bệnh cầu trùng: bệnh cầu trùng cấp tính có triệu chứng tương tự như bệnh Gumboro với các biểu hiện: bệnh xảy ra đột ngột, tỷ lệ mắc bệnh cao, lông xù, ủ rũ và tiêu chảy có vấy máu. Tuy nhiên, bệnh cầu trùng không dẫn đến xuất huyết cơ và viêm sưng túi Fabricius. Bệnh Newcastle: xảy ra ở gà mọi lứa tuổi, bệnh xảy ra nhanh, tỷ lệ chết cao, có triệu chứng bệnh đường hô hấp và tiêu hóa. Nếu bệnh kéo dài còn có triệu chứng thần kinh, có xuất huyết ở nhiều cơ quan, nhưng không có bệnh tích ở túi Fabricius. Bệnh viêm thận do virus (viral nephritis): có bệnh tích ở thận giống bệnh Gumboro, nhưng không có bệnh tích ở túi Fabricius. Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm (infectious bronchitis): có thể có độ tuổi mắc bệnh giống như bệnh Gumboro (trước 6 tuần tuổi) cũng có thể có biểu hiện bệnh tích ở thận mà trong nhiều trường hợp ở bệnh Gumboro cũng có, nhưng chắc chắn bệnh Gumboro thuần nhất không thấy có các triệu chứng đường hô hấp như ở bệnh viêm phế quản truyền nhiễm (Lê Văn Năm, 1996). 13 2.7 Phòng bệnh và điều trị 2.7.1 Phòng bệnh Phòng bằng vaccine Vaccine nhƣợc độc Đối với gà con hay gà thương phẩm để phòng bệnh Gumboro bắt buộc phải dùng vaccine sống nhược độc bằng phương pháp nhỏ mắt, mũi, miệng hoặc cho uống vào lúc 7, 14, 21 ngày tuổi (Nguyễn Như Thanh, 1997). Theo Lê Văn Năm (2004), căn cứ vào độc lực của virus vaccine mà người ta chia vaccine sống nhược độc thành 3 loại chính: Vaccine chứa virus với độc lực thấp Vaccine thuộc nhóm này thường chứa virus chủng Standard, MB, SL, BB… khi sử dụng không gây thương tổn cấu trúc túi Fabricius, nhưng một số lớn virus vaccine này lại bị trung hòa bởi kháng thể thụ động. Những loại vaccine này rất an toàn và được sử dụng rộng rãi trên mọi vùng lãnh thổ với đặc điểm dịch tễ khác nhau, nhưng khả năng đáp ứng miễn dịch yếu, khả năng bảo hộ thấp. Cho nên phải tiêm nhắc lại thêm 2-3 lần mới đủ đáp ứng miễn dịch. Những vaccine này chỉ dùng ở những nơi an toàn chưa có bệnh. Nếu bệnh đã nổ ra thì những vaccine này không có khả năng bảo hộ. Vaccine chứa virus với độc lực trung bình Một số chủng virus được sử dụng như: D78, C.T, Izovac chứa chủng 165 PV… Bursa-Blen.M, Medivac-Gumboro B… Khi sử dụng vaccine này không gây hại đến cấu trúc túi Fabricius lại có khả năng vượt qua sự trung hòa kháng thể thụ động ở gà con, đáp ứng miễn dịch rất tốt, an toàn. Vì thế, vaccine được sử dụng ở những vùng an toàn dịch bệnh cũng như vùng không an toàn dịch bệnh. Vaccine chứa virus độc lực cao Đây là những loại vaccine chứa virus sống, còn độc lực khá cao khi sử dụng có khả năng gây tổn thương túi Fabricius, gây mệt mỏi tạm thời cho đàn gà. Nếu ở những cơ sở bệnh Gumboro chưa xảy ra lần nào hoặc mới ở mức độ nhẹ thì không được dùng loại vaccine này, vì chính vaccine sẽ gây thành bệnh. Song nếu ở những nơi bệnh Gumboro xảy ra liên tiếp và ở đó virus cường độc gây bệnh có tỷ lệ chết cao thì buộc phải dùng một trong những loại vaccine sau đây mới đủ bảo hộ như: vaccine 228E (Nobilis Gumboro 228E), TAD Gumboro vac Forte 14 với chủng L.C-75 Cevac IDB-L chứa các chủng 2512 và G61, Medivac – Gumboro A… Vaccine có độc lực yếu: là loại vaccine an toàn nhưng cho miễn dịch ngắn, thường được sử dụng ở đàn gà con không có kháng thể thụ động. Vaccine có độc lực cao cho miễn dịch tốt hơn, có thể khắc phục được hiện tượng trung hòa do kháng thể thụ động, nhưng có thể làm tổn thương túi Fabricius. Vaccine có độc lực trung bình thường được sử dụng nhất. Vaccine vô hoạt Vaccine vô hoạt thường được sử dụng trên các đàn gà giống. Theo Lê Văn Năm (2004), vaccine vô hoạt thường được dùng cho gà mái đẻ đạt 18-20 tuần tuổi và có thể dùng nhắc lại (nếu cần thiết) trong giai đoạn gà đẻ. Qui trình tiêm phòng tuỳ thuộc vào tình hình dịch bệnh từng nơi và tình trạng miễn dịch của đàn gà. Tuy nhiên có thể tham khảo qui trình phòng bệnh Gumboro theo lịch như sau: Bảng 2.1 Lịch phòng bệnh Gumboro Ngày tuổi Phòng bệnh Cách dùng 8 Phòng bệnh Gumboro (lần 1) Nhỏ mắt hoặc mũi 18 Phòng bệnh Gumboro (lần 2) Tiêm dưới da hoặc tiêm bắp 35 Phòng bệnh Gumboro (lần 3) Tiêm dưới da hoặc tiêm bắp (Nguồn: Hồ Thị Việt Thu, 2012) Phòng bằng cách vệ sinh phòng bệnh Cần áp dụng nghiêm ngặt qui trình vệ sinh phòng bệnh, thực hiện đồng nhập-đồng xuất. Định kỳ tiêu độc, vệ sinh chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi, diệt côn trùng. Tăng cường nuôi dưỡng chăm sóc để nâng cao sức đề kháng và tiến hành tiêm phòng cho đàn gà giống để tạo miễn dịch chủ động cho gà con, nếu có dịch đe doạ nên chú ý tiêm ngừa chặt chẽ bằng vaccine nhược độc (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 15 2.7.2 Điều trị Bệnh Gumboro là do một loại virus gây ra vì vậy về nguyên tắc thì không có thuốc điều trị. Nhưng nếu dựa vào cơ chế sinh bệnh và nguyên nhân gây chết khi gà bị bệnh Gumboro như: sốt cao, cơ thể thiếu nước, loạn khuẩn đường ruột,… thì việc điều trị bệnh Gumboro phải theo nguyên tắc: giải nhiệt và trợ lực kết hợp chống viêm và chống bội nhiễm, đồng thời cung cấp đủ nước, tránh gà dẫm đạp lên nhau sẽ thu kết quả điều trị tốt. Khi gà mắc bệnh Gumboro ghép với bệnh khác, nguyên tắc điều trị là phải tập trung cứu chữa bệnh Gumboro trước, sau đó mới triển khai đồng thời việc trị các bệnh ghép (Lê Văn Năm, 1996). 2.8 Sơ lƣợc về vaccine Vaccine là một huyễn dịch vi sinh vật hoặc chiết chất của chúng đã được làm giảm độc lực hoặc bị giết chết, dùng để phòng bệnh truyền nhiễm (Trần Ngọc Bích và Hồ Thị Việt Thu, 2012). Theo Võ Thị Trà An và Võ Bảo Ngọc (2011), thì vaccine là loại thuốc sinh học làm tăng cường miễn dịch chống lại một căn bệnh cụ thể. Một vaccine điển hình có chứa một số lượng nhỏ nhân tố tương đồng với mầm bệnh, nhân tố này gọi là kháng nguyên. Kháng nguyên sẽ kích thích hệ thống miễn dịch của cơ thể để nhận diện nó như một vật ngoại lai, cơ thể tiêu diệt vật ngoại lai này và cơ thể cũng “nhớ” nó để mà hệ miễn dịch có thể nhận diện nó dễ dàng hơn và tiêu diệt mầm bệnh khi gặp lần sao. 2.9 Vaccine Gumboro nhƣợc độc đông khô do công ty Navetco sản xuất Công dụng: Dùng để phòng bệnh Gumboro cho gà khoẻ mạnh từ 1 ngày tuổi trở lên, vaccine an toàn, tạo miễn dịch tốt cho gà mọi lứa tuổi. Thành phần: mỗi liều vaccine chứa ít nhất 103TCID50 virus Gumboro nhược độc, được sản suất từ virus Gumboro nhược độc nuôi cấy trên môi trường tế bào xơ phôi gà. Liều lƣợng và cách dùng: Vaccine có thể sử dụng bằng phương pháp nhỏ mắt, cho uống hoặc tiêm dưới da. Cho uống hoặc nhỏ mắt từng con: Pha 1 lọ vaccine với 5 ml nước sinh lý mặn vô trùng đã được làm mát, lắc tan đều rồi nhỏ 1 hoặc 2 giọt vào xoang miệng hoặc khoé mắt gà con. Cho uống cả đàn: Pha 1 lọ vaccine với 5 ml nước sinh lý mặn hoặc nước cất rồi cho vào nước mát không có chứa Chlor, Ion kim loại nặng hoặc chất sát trùng. 16 Trước khi cho uống vaccine nên cho gà nhịn khát từ 2-3 giờ để đảm bảo gà thu nhận được hết lượng vaccine. Sau khi pha vaccine phải giữ lạnh, tránh ánh sáng mặt trời và phải dùng hết trong vòng từ 2-3 giờ. Để tạo được miễn dịch đầy đủ, gà phải được chủng vaccine 2 lần  Lần 1: 5-10 ngày tuổi.  Lần 2: 20-25 ngày tuổi. Vaccine được sản xuất ở dạng đông khô, đóng chai 100 liều, 200 liều. Bảo quản vaccine ở nhiệt độ từ 2-80C, không để vaccine vào ngăn đông, tránh ánh sáng mặt trời. Hình 2.7 Vaccine nhƣợc độc đông khô Gumboro (http://navetco.com.vn) 17 Chƣơng 3 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 3.1 Nội dung nghiên cứu Kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro bằng phương pháp ELISA sau khi tiêm phòng vaccine. Khảo sát tác động của việc lấy máu kiểm tra có gây ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và tăng trọng của gà. 3.2 Phƣơng tiện thí nghiệm 3.2.1 Thời gian và địa điểm Thời gian thực hiện đề tài: từ tháng 07/2013 đến tháng 11/2013. Địa điểm thí nghiệm: gà thí nghiệm được nuôi tại trại thực nghiệm Ba Hoàng, phường Thới An Đông, Quận Bình Thủy, Thành Phố Cần Thơ. Xét nghiệm kiểm tra huyết thanh, định lượng kháng thể chống virus Gumboro bằng phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể, xét nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm Bệnh truyền nhiễm Bộ Môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ. 3.2.2 Đối tượng thí nghiệm Gà nuôi thí nghiệm là giống gà Tàu Vàng, gà được nuôi lúc 1 ngày tuổi, có trọng lượng tương đối đồng đều nhau, số lượng trống mái ở mỗi lô theo quá trình ngẫu nhiên của giống. Tổng số gà thí nghiệm là 63 con. 3.2.3 Vật liệu thí nghiệm Vật liệu và dụng cụ Ống tiêm y tế 1ml, 3ml, 5ml, bông gòn, găng tay, khẩu trang, cân, sổ ghi chép, viết, ống nghiệm vô trùng, giá đựng ống nghiệm, thùng trữ mẫu, máy ly tâm, máy lắc mẫu, eppendorf, micropipete, kéo, parafilm. Mẫu vật và sinh phẩm Huyết thanh gà. Vaccine phòng bệnh đậu gà, vaccine phòng bệnh cúm gia cầm, vaccine phòng bệnh Newcastle, vaccine tụ huyết trùng gia cầm, vaccine nhược độc phòng bệnh Gumboro (nguồn: Navetco). 18 Dung dịch sinh lý 0,85%, nước cất, ELISA kit (USA) do công ty Thịnh Á phân phối. Thành phần bộ kit: STT 1 2 3 4 5 6 7 Thành phần Đĩa 96 giếng được hấp phụ kháng nguyên Đối chứng dương Đối chứng âm Dung dịch Conjugate Dung dịch pha loãng mẫu Dung dịch TMB Dung dịch Stop Số lƣợng 5 1,9 ml 1,9 ml 50 ml 253 ml 60 ml 60 ml 3.3 Phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm 3.3.1 Qui trình chăm sóc gà thí nghiệm Chuồng trại Tiến hành vệ sinh sát trùng chuồng úm, lồng úm, máng ăn, máng uống từ 57 ngày trước khi nuôi. Gà từ 1 ngày tuổi đến 4 tuần tuổi được nuôi úm trên lồng, mỗi lồng úm sử dụng một bóng đèn tròn có công suất 65W. Xung quanh chuồng được che kín cẩn thận để tránh mưa tạt, gió lùa, phía dưới nền chuồng có lớp trấu trộn men vi sinh với độ dày khoảng 20cm. Từ tuần thứ 5 gà không còn nuôi úm, chuyển gà xuống nuôi nền xung quanh rào bằng lưới B40, sử dụng trấu làm chất độn chuồng có trộn thêm men vi sinh để hạn chế mùi với độ dày 25-30cm, cho gà ăn uống bình thường, vệ sinh tốt chuồng trại. Mật độ nuôi 1 ngày đến 2 tuần tuổi: 50 con/m2 2 tuần đến 3 tuần tuổi: 35 con/m2 3 tuần đến 4 tuần tuổi: 30 con/m2 4 tuần đến 5 tuần tuổi: 25 con/m2 5 tuần đến 6 tuần tuổi: 20 con/m2 6 tuần đến 7 tuần tuổi: 15 con/m2 7 tuần đến xuất chuồng: 10 con/m2 19 Thức ăn và nƣớc uống Gà được cho ăn uống tự do, cung cấp nước sạch, mát cho gà uống. Sử dụng thức ăn hỗn hợp dạng viên C225 và C235 của công ty Proconco (Pháp) cho gà ăn, bổ sung thêm Bcomplex, vitamin C. Hỗn hợp C225 viên cho gà ta, gà tàu từ 1-42 ngày tuổi Nguyên liệu chính: bắp, tấm, cám gạo, cám mì, khoai mì, bánh dầu đậu nành, bánh dầu cải, đạm động vật và thực vật, vitamin, khoáng, phụ gia. Thành phần dinh dưỡng: Năng lượng trao đổi (min) 2850Kcal/kg Protein thô (đạm) (min) 20% Xơ thô (max) 7% Canxi (min-max) 0,7-1,6% Phospho tổng số (min-max) 0,5-1,1% Lysine tổng số (min) 1,0% Methionine + Cystine (min) 0,8% Colistine (max) 80mg/kg Độ ẩm (max) 13% Hỗn hợp C235 viên cho gà ta, gà tàu trên 42 ngày tuổi Nguyên liệu chính: chất bột đường, đạm động vật và thực vật, vitamin, khoáng vi-đa lượng, phụ gia. Thành phần dinh dưỡng: Năng lượng trao đổi (min) 2900Kcal/kg Protein thô (đạm) (min) 16,5% Xơ thô (max) 6% Canxi (min-max) Phospho tổng số Nacl Độ ẩm (min) 0,7-1,5% 0,45% (min- max) (max) 20 0,2-0,5% 13% Trong quá trình nuôi dưỡng gà thí nghiệm, đàn gà được tiêm phòng đầy đủ các bệnh theo qui trình (bảng 3.1). Bảng 3.1: Qui trình phòng bệnh chung Ngày tuổi Tên vaccine Tên công ty Cách tiêm ngừa 3 7 10 15 18 21 30 40 Lasota Gumboro Đậu Cúm Lasota Gumboro Cúm Tụ huyết trùng Navetco Navetco Navetco Navetco Navetco Navetco Navetco Navetco Nhỏ mắt mũi Nhỏ mắt mũi Chủng qua cánh Tiêm dưới da cổ Nhỏ mắt mũi Nhỏ mắt mũi Tiêm dưới da cổ Tiêm dưới da cổ 3.3.2 Bố trí thí nghiệm Gà thí nghiệm được nuôi lúc 1 ngày tuổi, thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên 7 con/ nghiệm thức, gồm 3 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Bảng 3.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm Lặp lại Nghiệm thức Số gà trong thí nghiệm (con) NT1 NT2 NT3 I 7 7 7 II 7 7 7 III 7 7 7 NT1: sử dụng vaccine Gumboro; NT2: đối chứng-vaccine; NT3: đối chứng-tăng trọng Nghiệm thức 1 (NT1) và nghiệm thức 3 (NT3): gà được tiêm vaccine đầy đủ theo qui trình, riêng ở NT1 gà được lấy máu định kỳ để theo dõi khả năng đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch, NT3 không lấy máu nhằm khảo sát sự sinh trưởng và tăng trọng của gà. Nghiệm thức 2 (NT2): nghiệm thức đối chứng không tiêm phòng vaccine Gumboro, lấy máu định kỳ kiểm tra kháng thể thụ động. 21 3.4 Các phƣơng pháp thực hiện xét nghiệm Phƣơng pháp lấy máu Lấy máu tim lúc gà được 3, 10, ngày tuổi tiếp tục lấy máu ở tĩnh mạch cánh lúc 17, 24, 35, 49 và trước khi xuất bán để kiểm tra kháng thể thụ động. Lấy máu ở tĩnh mạch cánh đối với nghiệm thức gà sau khi sử dụng vaccine 35, 49 và lúc trước khi xuất bán để kiểm tra đáp ứng miễn dịch sau tiêm vaccine. Mỗi con lấy khoảng 0,5-2 ml máu (tuỳ vào giai đoạn tuổi của gà), cho vào ống nghiệm vô trùng, lưu ý không sử dụng chất kháng đông, ghi lại ký hiệu của gà thí nghiệm. Đặt ống nghiệm nằm nghiêng cho máu đông, đến khi có huyết thanh đem ly tâm 2000 vòng/phút trong 15 phút, chiết lấy huyết thanh cho vào ống eppendorf bảo quản ở - 200C cho đến khi xét nghiệm. Qui trình xét nghiệm kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro bằng phản ứng ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) Nguyên lý: kỹ thuật ELISA là phản ứng huyết thanh học dựa vào phản ứng miễn dịch học giữa kháng nguyên và kháng thể chuẩn. Kháng nguyên hoặc kháng thể trong mẫu huyết thanh dương tính sẽ được gắn kết với kháng thể hoặc kháng nguyên đã được gắn sẵn trong giếng. Thành phần không gắn kết sẽ bị rửa trôi, phần giữ lại tiếp tục kết hợp với Conjugate (chất kết hợp) có enzyme peroxidase. Phản ứng chuyển màu (từ không màu thành màu xanh dương) khi có sự tham gia của cơ chất Chromagen. Mức độ màu thể hiện ở mỗi giếng tương ứng với hàm lượng kháng thể ở mỗi mẫu xét nghiệm. Máy đọc ở bước sóng phù hợp sẽ xác định lượng kháng thể hoặc kháng nguyên bị giữ lại trong giếng. Phƣơng pháp thực hiện Chuẩn bị mẫu: Cho 500l dung dịch pha mẫu vào mỗi giếng của đĩa 96 giếng (đĩa sạch). Đĩa này được gọi là đĩa pha loãng huyết thanh, dùng máy lắc trộn đều mẫu huyết thanh và dung dịch pha mẫu. Sau đó cho 1l huyết thanh cần kiểm tra vào mỗi giếng (pha loãng theo tỷ lệ 1:500). Bắt đầu với giếng A5 và kết thúc bằng giếng H12 (di chuyển trái sang phải) như hình 3.1. 22 1 + 2 + 3 - 4 A - 5 1 6 2 7 3 8 4 9 5 10 6 11 7 12 8 B 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 C 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 D 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 E 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 F 57 57 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 G 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 H 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí huyết thanh cho xét nghiệm ELISA Qui trình thực hiện phản ứng 1. Ghi lại vị trí của mẫu bố trí trên đĩa. 2. Cho 100 l đối chứng dương không bị pha loãng vào giếng A1 và A2. 3. Cho 100 l đối chứng âm không bị pha loãng vào giếng A3 và A4. 4. Cho 100 l mẫu pha loãng, vào đúng vị trí các giếng còn lại. 5. Ủ đĩa trong 30 phút ở nhiệt độ phòng. 6. Giũ hết chất lỏng trong các giếng vào bồn rửa dụng cụ. 7. Cho 350l nước cất vào mỗi giếng, sau đó loại bỏ các chất lỏng. Lập lại việc rửa 3-5 lần. 8. Cho 100l dung dịch Conjugate vào mỗi giếng thí nghiệm. 9. Ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng. 10. Lặp lại bước 6 và 7 ở trên. 11. Cho 100l dung dịch TMB vào mỗi giếng. 12. Ủ trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. 13. Cho 100l dung dịch Stop vào mỗi giếng. 14. Đo và đọc kết quả bằng máy đọc ELISA ở bước sóng 650nm. 23 Tính toán kết quả Trung bình đối chứng dương tính (PCX) = OD Giếng A1+ OD Giếng A2 2 Trung bình đối chứng âm tính (NCX) = OD Giếng A3+ OD Giếng A4 2 Tỷ số S/P = OD mẫu - (NCX) (PCX) - (NCX) Hiệu giá kháng thể (X): Log10 X = 1,09 (log10 S/P) + 3,36 X = 10 ^ [1,09 (log10 S/P + 3,36)] Kết quả Kết quả IBD ELISA có giá trị khi mật độ quang trung bình (OD) của đối chứng huyết thanh âm tính là nhỏ hơn 0,150 và trung bình đối chứng dương tính lớn hơn 0,750. Nếu một trong những giá trị này vượt ra khỏi phạm vi trên, kết quả xét nghiệm IBD nên được coi là không hợp lý và mẫu phải được kiểm tra lại. Tỷ số S/P trong phạm vi nhỏ hơn hoặc bằng 0,2 (hiệu giá kháng thể bằng hoặc nhỏ hơn 396), cho kiểm tra huyết thanh âm tính và lớn hơn 0,2 (hiệu giá kháng thể lớn hơn 396) cho kiểm tra huyết thanh dương tính. 3.5 Phƣơng pháp theo dõi tốc độ tăng trƣởng và tiêu tốn thức ăn Phương pháp này được tiến hành trên 2 nghiệm thức đều có sử dụng vaccine Gumboro (NT1 và NT3) nhưng điểm khác nhau ở 2 nghiệm thức là: NT1 có tiến hành định kỳ lấy máu kiểm tra kháng thể, ở NT3 không có lấy máu. Để tiến hành phương pháp này cần sự theo dõi và ghi chép cẩn thận. Theo dõi tốc độ tăng trưởng của gà, tiến hành cân trọng lượng của gà lúc 1 ngày tuổi, kết thúc giai đoạn úm (28 ngày tuổi) và lần cuối cùng vào lúc xuất chuồng (12 tuần tuổi). Lưu ý nên cân gà vào sáng sớm lúc trước khi cho gà ăn. Theo dõi sự tiêu tốn thức ăn, tiến hành cân lượng thức ăn trước khi cho ăn, sau đó cộng toàn bộ lượng thức ăn của ngày hôm đó trừ đi lượng thức ăn thừa vào ngày hôm sau. Số lượng thức ăn theo từng ngày tuổi, được theo dõi ghi chép từ đó sẽ tính được lượng thức ăn mà đàn gà đã tiêu thụ. 24 3.6 Các chỉ tiêu theo dõi + Tỷ lệ gà có đáp ứng miễn dịch với virus Gumboro, qua kết quả kiểm tra ELISA. Số mẫu dương tính Tỷ lệ huyết thanh dương tính (%) = x 100 Số mẫu xét nghiệm + Tăng trọng (g/con) = Trọng lượng cuối (g/con) – Trọng lượng đầu (g/con) + Tiêu tốn thức ăn, hệ số chuyển hoá thức ăn Lượng thức ăn tiêu thụ Hệ số chuyển hoá thức ăn = (kg thức ăn/kg tăng trọng) Tăng trọng 3.7 Phƣơng pháp xử lý số liệu Tất cả các số liệu thô được sử lý bằng phần mềm Excel. So sánh trọng lượng, tiêu tốn thức ăn và hệ số chuyển hoá thức ăn giữa các nghiệm thức bằng phép thử t của phần mềm Minitab 16. 25 Chƣơng 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả kiểm tra kháng thể 4.1.1 Khảo sát kháng thể thụ động mẹ truyền Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể thụ động do mẹ truyền, được thể hiện qua bảng 4.1. Bảng 4.1 Kiểm tra kháng thể thụ động mẹ truyền Ngày tuổi Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể (X±SE) 3 5 5 100 0,81±0,30 1877±758 10 5 5 100 0,44±0,05 930±108 17 5 3 60 0,20±0,02 394±31 24 5 0 0 0,12±0,02 236±38 X: giá trị trung bình; SE: sai số chuẩn Từ kết quả bảng 4.1 cho thấy ở 3 ngày tuổi, 100% gà đều có kháng thể thụ động với hiệu giá kháng thể trung bình 1877 và lượng kháng thể duy trì đến 10 ngày tuổi. Tại thời điểm lúc gà 10 ngày tuổi tỷ lệ gà có kháng thể thụ động vẫn duy trì ở tỷ lệ cao 100%, mặc dù tại thời điểm này hàm lượng kháng thể đã giảm đáng kể chỉ bằng 1/2 so với lúc gà 3 ngày tuổi. Tuy nhiên với hiệu giá 930 vẫn đảm bảo miễn dịch chắc chắn cho gia cầm con. Vì theo tiêu chuẩn của bộ kit ELISA, với hiệu giá 396 qua xét nghiệm ELISA đã đủ miễn dịch bảo vệ cho đàn gà. Qua đó cho thấy việc tiêm phòng cho đàn gà mẹ, là rất cần thiết để tạo miễn dịch bảo hộ cho gia cầm con trong những ngày đầu. Cũng từ kết quả bảng 4.1 cho thấy tại thời điểm 17 ngày tuổi, tỷ lệ dương tính với kháng thể mẹ truyền chỉ còn duy trì ở 60% gà thí nghiệm và hiệu giá giảm đáng kể chỉ còn 394 dưới ngưỡng bảo hộ (theo tiêu chuẩn bộ kit là 396) và đến 24 ngày tuổi kháng thể thụ động đã giảm hoàn toàn, hoặc một ít cá thể vẫn còn kháng thể nhưng rất thấp không phát hiện qua phản ứng ELISA. Theo Lê Văn Năm (2004), hàm lượng kháng thể thụ động trong cơ thể gà con phụ thuộc vào khoảng thời gian từ khi dùng vaccine cho gà mẹ đến khi lấy trứng ấp và hiệu giá kháng thể chủ động ở gà mẹ chuyển cho gà con. Từ kết quả nghiên cứu trên cho thấy kháng thể mẹ truyền sẽ bảo hộ được gia cầm đến 10 ngày tuổi. Theo nhận định của Simon M.Shane (1997), kháng thể thụ 26 động có thể bảo hộ đàn gia cầm con khi tiếp xúc với một số mầm bệnh sau khi mới nở tới 2 tuần. Qua đó cho thấy có sự khác nhau về sự tồn tại kháng thể thụ động giữa các đàn gia cầm, cho nên để công tác tiêm phòng đạt hiệu quả cần khảo sát sự tồn tại kháng thể mẹ truyền để có qui trình tiêm phòng thích hợp tránh bị ức chế miễn dịch do sự trung hoà vaccine với kháng thể thụ động. Theo Nguyễn Xuân Bình và ctv (2000), hiện nay qui trình tiêm phòng bằng vaccine cho gà con không có lịch rõ ràng và cũng không thể áp dụng lịch tiêm phòng chung cho tất cả mọi nơi. 4.1.2 Khảo sát mức độ bảo hộ của vaccine đối với virus gây bệnh Gumboro Kết quả kiểm tra đáp ứng miễn dịch đối với vaccine Gumboro trên gà thí nghiệm được thể hiện qua bảng 4.2 Bảng 4.2 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 35 ngày tuổi Nghiệm thức Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể (X±SE) NT1 7 0 0 0,11±0,02 212±34 NT2 7 0 0 0,03±0,02 46±29 NT1: sử dụng vaccine; NT2: không sử dụng vaccine; X: giá trị trung bình; SE: sai số chuẩn Từ kết quả bảng 4.2 cho thấy, sau khi tiêm vaccine Gumboro lần 2 được 14 ngày tương ứng với gà được 35 ngày tuổi, hầu hết gà đều chưa được miễn dịch mặc dù một số gà có đáp ứng miễn dịch nhưng với hiệu giá thấp, trung bình 212 với mức hiệu giá này chưa đủ bảo hộ đàn gà chống lại bệnh Gumboro. Với vaccine nhược độc thường cho đáp ứng miễn dịch nhanh, thông thường là 14 ngày sau tiêm phòng. Nhưng qua khảo sát trên cho thấy tại thời điểm này đáp ứng miễn dịch trên đàn gà rất thấp. Điều này có thể do vaccine cho đáp ứng miễn dịch chậm. Vì sự miễn dịch còn phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố như cơ địa con vật và đặc tính của vaccine sử dụng. Ở nghiệm thức đối chứng gà không được tiêm phòng vaccine hiệu giá kháng thể trung bình chỉ còn 46, không còn khả năng bảo hộ gà chống bệnh Gumboro theo tiêu chuẩn đánh giá của bộ kit ELISA. Theo Võ Thị Trà An và Võ Ngọc Bảo (2011), cần lưu ý rằng không phải kháng thể cứ xuất hiện trong máu là con vật được bảo vệ khỏi sự tấn công của mầm bệnh mà hàm lượng kháng thể phải đạt đến một trị số nhất định thì cơ thể mới có mức độ miễn dịch bảo vệ. Trị số kháng thể này được gọi là ngưỡng bảo hộ. Hàm lượng kháng thể càng cao hơn ngưỡng bảo hộ thì mức độ miễn dịch của cơ thể càng lớn và ngược lại. 27 Bảng 4.3 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 49 ngày tuổi Nghiệm thức Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể (X±SE) NT1 7 7 100 1,45±0,45 3536±1168 NT2 7 0 0 0,01±0,01 11±8 NT1: sử dụng vaccine; NT2: không sử dụng vaccine; X: giá trị trung bình; SE: sai số chuẩn Từ kết quả bảng 4.3 cho thấy sau khi tiêm vaccine 28 ngày tương ứng với gà được 49 ngày tuổi, 100% gà đáp ứng miễn dịch với hiệu giá kháng thể khá cao 3536. Với hiệu giá kháng thể này theo tiêu chuẩn đánh giá của bộ kit ELISA thì đàn gà hoàn toàn được bảo vệ khỏi bệnh Gumboro. Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hồng Minh và ctv (2011), gà sử dụng hai lần vaccine Gumboro vào lúc 7 và 14 ngày tuổi, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 42 ngày tuổi (2289,79±18,26 với vaccine đơn giá và 1995,01±24,28 với vaccine đa giá). Trong khi đó những gà không được tiêm phòng vaccine hàm lượng kháng thể rất thấp với hiệu giá 11 không đủ khả năng bảo vệ, do đó đàn gà hoàn toàn mẫn cảm với bệnh. Từ kết quả trên cho thấy gà cho đáp ứng miễn dịch tốt đối với vaccine đang sử dụng. Chính vì vậy để phòng tránh bệnh Gumboro hiệu quả cần phải tiêm phòng vaccine đầy đủ và đúng qui trình cho đàn gà. Để theo dõi độ dài miễn dịch của gà sau khi tiêm vaccine Gumboro, thí nghiệm tiếp tục khảo sát hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro vào thời điểm gà được 80 ngày tuổi, kết quả được thể hiện ở bảng 4.4. Bảng 4.4 Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 80 ngày tuổi Nghiệm thức Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể(X±SE) NT1 7 7 100 2,11±0,30 5212±795 NT2 7 0 0 0 0 NT1: sử dụng vaccine; NT2: không sử dụng vaccine; X: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn Qua kết quả bảng 4.4 cho thấy ở nghiệm thức gà có tiêm phòng vaccine hiệu giá kháng thể vẫn được duy trì ở 100% gà thí nghiệm và tiếp tục tăng lên đạt 5212. Theo Võ Thị Trà An và Võ Ngọc Bảo (2011), khi sử dụng vaccine sống thường tạo đáp ứng miễn dịch lâu dài do vi sinh vật có khả năng nhân lên và tồn tại trong cơ thể vật chủ. Do khả năng nhân lên và tồn tại lâu dài trong cơ thể vật 28 chủ nên sẽ kích thích cơ thể vật chủ tạo đáp ứng miễn dịch chống lại mầm bệnh và tiếp tục tạo ra kích thích sinh kháng thể trong một khoảng thời gian. Cho nên việc tiêm phòng vaccine đầy đủ và đúng qui trình là cần thiết để tạo miễn dịch cho đàn gà, nếu việc tiêm phòng không được thực hiện hoặc không đầy đủ thì nguy cơ xảy ra dịch bệnh trên đàn gà là rất cao. Theo Hồ Thị Việt Thu (2012), bệnh Gumboro thường xảy ra nhất ở các đàn gà không được tiêm vaccine (70%), kế đến là đàn gà chỉ được tiêm vaccine một lần (62,5%), và đàn gà được tiêm vaccine hai lần (28,57%). Trong điều kiện chăn nuôi ở Việt Nam để phòng chống thiệt hại do bệnh truyền nhiễm gây ra không những đối với bệnh Gumboro mà còn đối với các bệnh truyền nhiễm khác cần tiêm phòng vaccine đầy đủ cho đàn đàn gia cầm. 4.2 Kết quả khảo sát khả năng sinh trƣởng và tăng trọng của gà thí nghiệm Thí nghiệm tiến hành theo dõi khả năng sinh trưởng của đàn gà trong 12 tuần tuổi, kết quả được ghi nhận lại theo 2 giai đoạn; giai đoạn nuôi úm (0-4 tuần tuổi) và giai đoạn sau nuôi úm (5-12 tuần tuổi), kết quả được thể hiện ở bảng 4.5 và 4.6. 4.2.1 Kết quả theo dõi tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi úm (0-4 tuần tuổi) Bảng 4.5 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi úm (0-4 tuần tuổi) NT1 NT3 (X±SE) (X±SE) Trọng lượng ban đầu (gram/con) 37,80±0,59 37,90±0,69 0,93 Trọng lượng 4 tuần tuổi (gram/con) 254,00±4,99 257,40±4,56 0,56 Tăng trọng (gram/con/ngày) 7,72±0,19 7,84±0,17 0,60 Thức ăn tiêu thụ (gram/con/ngày) 18,39±4,63 18,41±4,73 0,97 HSCH.TĂ (gram TĂ/ gram tăng trọng) 2,39±0,06 2,36±0,05 0,58 Thông số P NT1: sử dụng vaccine; NT3: đối chứng; HSCH.TĂ: hệ số chuyển hoá thức ăn; X: giá trị trung bình; SE: sai số chuẩn. Kết quả bảng 4.5 cho thấy trọng lượng bình quân ban đầu của gà thí nghiệm tương đối đồng đều nhau. Qua 4 tuần nuôi úm trọng lượng gà ở nghiệm thức 1 đạt 254 g/con nhỏ hơn gà ở nghiệm thức 3 (257,40 g/con), nhưng qua phân tích thống 29 kê sự khác biệt không có ý nghĩa (P = 0,56). Điều này cho thấy khả năng sinh trưởng của giống gà Tàu trong giai đoạn úm khá đồng đều nhau giữa các cá thể. Theo nghiên cứu của của La Tấn Cường (2000), kết thúc giai đoạn úm 4 tuần trọng lượng bình quân đạt 246,25 g/con. Sự khác biệt này, có thể do điều kiện chăn sóc nuôi dưỡng ảnh hưởng đến trọng lượng gà con trong giai đoạn úm, nếu nhiệt độ úm không đủ gà bị lạnh khả năng tăng trọng của gà sẽ bị ảnh hưởng, do đó cần chú ý đến yếu tố nhiệt độ trong giai đoạn úm. Tăng trọng bình quân của gà thí nghiệm trong giai đoạn úm ở nghiệm thức 1 là 7,72 g/con/ngày và ở nghiệm thức 3 là 7,84 g/con/ngày, kết quả này thấp hơn nghiên cứu của Đỗ Võ Anh Khoa và Nguyễn Minh Thông (2013), trên gà Tàu Vàng F2 tăng trọng trung bình trong giai đoạn úm đạt 10,83g/con/ngày. Sự chênh lệch trên có thể do sự khác biệt về mặt di truyền, do giống gà Tàu Vàng hiện nay lai tạo với các giống gà khác nên sức sản xuất của gà bị ảnh hưởng. Điều đó cho thấy rằng ngoài công tác chăm sóc nuôi dưỡng chu đáo thì yếu tố giống đóng vai trò rất quan trọng. Do đó để đạt hiệu quả kinh tế trong chăn nuôi thì cần phải chọn lựa những con giống tốt. Hệ số chuyển hoá thức ăn trung bình trong giai đoạn úm ở nghiệm thức 1 là 2,39 và ở nghiệm thức 3 là 2,36 qua phân tích thống kê sự sai khác không có ý nghĩa (P = 0,58). 4.2.2 Kết quả theo dõi tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi thịt (5-12 tuần tuổi) Bảng 4.6 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi thịt (5-12 tuần tuổi) Thông số NT1 (X±SE) NT3 (X±SE) P Trọng lượng 4 tuần tuổi (gram/con) 254,00±4,99 257,40±4,56 0,56 Trọng lượng 12 tuần tuổi (gram/con) 1289,50±53,10 1376,50±55,60 0,20 Tăng trọng (gram/con/ngày) 18,49±0,95 19,98±0,99 0,21 T.Ă.T.thụ (gram/con/ngày) 56,77±7,16 57,53±7,40 0,37 HSCH.TĂ (kg TĂ/kg tăng trọng) 3,14±0,15 2,94±0,14 0,26 NT1: sử dụng vaccine; NT3: đối chứng; HSCH.TĂ: hệ số chuyển hoá thức ăn X: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn. Từ kết quả bảng 4.6 cho thấy trọng lượng gà ở nghiệm thức 1 đạt 1289,50 gram/con với mức tăng trọng 18,49 gram/con/ngày và ở nghiệm thức 3 là 1376,50 30 gram/con với mức tăng trọng 19,98 gram/con/ngày, tuy nhiên sự khác biệt giữa 2 nghiệm thức đều không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). Qua đó cho thấy việc lấy máu (gà nghiệm thức 1 được lấy máu vào lúc 35, 49 và 80 ngày tuổi) không làm ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của gà. Kết quả nghiên cứu là cơ sở để góp phần tạo điều kiện thuận lợi cho các cán bộ Thú y cơ sở khi muốn tiến hành lấy máu kiểm tra các bệnh truyền nhiễm trong các hộ chăn nuôi gia cầm, đặc biệt đối với bệnh nguy hiểm như cúm gia cầm không những gây thiệt hại nặng nề về kinh tế mà còn gây nguy hại đến sức khoẻ cộng đồng. Theo nghiên cứu của Đỗ Võ Anh Khoa (2012), trọng lượng trung bình lúc gà 12 tuần tuổi trọng lượng từ 1596,30±245 gram/con với mức tăng trọng 21,51±2,53 gram/con/ngày. Sự khác biệt trên do nhiều nguyên nhân có thể do khẩu phần cho gà ăn khác nhau, tính thuần chủng của giống gà và phương thức chăn nuôi cũng làm ảnh hưởng đến trọng lượng và khả năng tăng trọng của gà. Theo đặc tính của giống gà Tàu Vàng nuôi thả vườn trọng lượng lúc 6 tháng tuổi đạt 1,5-2 kg, nhưng khi nuôi nhốt và sử dụng thức ăn công nghiệp thì trọng lượng lúc 3 tháng tuổi (12 tuần) đạt từ 1,5-1,7 kg ở gà trống và 1,2-1,4 kg ở gà mái (Lâm Minh Thuận, 2001). 31 Chƣơng 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Kháng thể mẹ truyền duy trì với hiệu giá kháng thể cao bảo hộ được 100% gà con đến 10 ngày tuổi. Sử dụng vaccine Gumboro có hiệu quả tốt trong việc bảo hộ đàn gà chống lại bệnh Gumboro. Tuy rằng tại thời điểm khảo sát lúc gà 35 ngày tuổi, vaccine cho đáp ứng miễn dịch thấp với hiệu giá kháng thể 212±34 so với tiêu chuẩn đánh giá bộ kit ELISA là 396, nhưng đến giai đoạn lúc gà 49 ngày tuổi thì hiệu giá kháng thể đạt 3536±1168 tỷ lệ dương tính đạt 100% số mẫu kiểm tra và đến lúc gà 80 ngày tuổi hiệu giá kháng thể đạt cao nhất 5212±795 tỷ lệ dương tính 100% số mẫu kiểm tra. Qua kết quả thí nghiệm chưa phát hiện việc lấy máu kiểm tra kháng thể làm ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng và tăng trọng của gà. 5.2 Đề nghị Cần nghiên cứu độ dài miễn dịch trên gà đến giai đoạn sinh sản để có qui trình phòng bệnh thích hợp và tạo miễn dịch thụ động chắc chắn cho gà con. Tiếp tục tiến hành thử nghiệm trên nhiều loại vaccine phòng bệnh Gumboro để chọn vaccine phù hợp, đem lại hiệu quả kinh tế nhất cho nhà chăn nuôi. 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Đái Duy Ban & Phạm Công Hoạt (2004), vaccine Gumboro phòng chống suy giảm miễn dịch cho gia cầm, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 9 – 56. Đỗ Võ Anh Khoa (2012), Đặc điểm sinh trưởng và hiệu quả sử dụng thức ăn của gà Tàu Vàng, Tạp chí Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn, tr.30-36. Đỗ Võ Anh Khoa và Nguyễn Minh Thông (2013), Ảnh hưởng của các loại thức ăn công nghiệp lên khả năng sinh trưởng và FCR ở gà Tàu Vàng giai đoạn 1-4 tuần, Tạp chí khoa học trường Đại Học Cần Thơ, tr.114-118. Hồ Thị Việt Thu (2012), Tình hình bệnh Gumboro trên các giống gà thả vườn tại tỉnh Hậu Giang, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, (số 22a-2012), Hội thú y Việt Nam, tr.25-32. Hồ Thị Việt Thu (2012), Bệnh gia cầm, NXB Đại Học Cần Thơ, tr.19-22. La Tấn Cường (2000), Theo dõi khả năng sinh trưởng của gà Tàu Vàng từ 0 đến 12 tuần tuổi nuôi theo phương thức thả vườn, Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Chăn nuôi-Thú y, Đại học Cần Thơ, tr.28-37. Lâm Minh Thuận (2001) Nâng cao khả năng sản xuất của gà Tàu vàng, tập san KHKT Nông Lâm nghiệp số 2/2011. Lê Thanh Hòa (1992), Bệnh Gumboro suy giảm miễn dịch gia cầm, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr.10-14. Lê Văn Hùng & Nguyễn Phước Ninh (1995), “Nghiên cứu miễn dịch thu được chống bệnh Gumboro trên gà, hội nghị khoa học ngành chăn nuôi thú y”, Đại học nông lâm 1995, tr. 20-25. Lê Văn Hùng (1996), Nghiên cứu miễn dịch thu được trên các bệnh truyền nhiễm do virus (Newcastle, Gumboro) đề xuất những cải tiến trong quy trình phòng bệnh bằng vaccine cho gà, Luận án PTS Khoa học Nông nghiệp, Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, tr. 11-12. Lê Văn Năm (1996), 60 câu hỏi và đáp về những bệnh ghép phức tạp ở gà, NXB Nông Nghiệp, tr. 48-54. Lê Văn Năm (2003), Hướng dẫn điều trị bệnh ghép phức tạp ở gà, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 12-13, 170-171. Lê Văn Năm (2004), Bệnh Gumboro ở gà và biện pháp phòng trị, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 1- 53. Lê Hồng Mận & Bùi Đức Lũng (2004), Kỹ thuật nuôi gà công nghiệp lông màu thả vườn và phòng trị một số bệnh, NXB Lao Động Xã Hội, tr. 169-171. Lê Hồng Mận & Phương Song Liên (1999), Bệnh gia cầm và biện pháp phòng trị, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 34-35. 33 Nguyễn Bá Thành (2004), Khảo sát đặc tính gây bệnh thực nghiệm của chủng virut Gumboro 52/70 và chủng phân lập tại địa phương trên gà con có hiệu giá kháng thể mẹ truyền cao, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XI (số 2 - 2005), Hội thú y Việt Nam, tr. 26 - 32. Nguyễn Bá Thành (2005), Một số đặc điểm dịch tễ bệnh Gumboro trên đàn gà tỉnh Đồng Nai, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập XV (số 3 - 2004), Hội thú y Việt Nam, tr. 22 - 28. Nguyễn Bá Thành (2006), Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh Gumboro, virus gây bệnh và đề xuất quy trình tiêm chủng vaccine phù hợp để phòng bệnh cho đàn gà tại tỉnh Đồng Nai, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, tr. 4-43. Nguyễn Bá Hiên (2007), Giáo trình miễn dịch học ứng học, NXB Nông Nghiệp Hà Nội tr.73 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên và Trần Thị Lan Hương (1997), Vi sinh vật thú y, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 246 – 251. Nguyễn Tiến Dũng (1989), Bệnh Gumboro và tình hình bệnh ở Việt Nam, Tạp chí khoa học kỹ thuật Nông Nghiệp 2, tr.104-109. Nguyễn Thành Đạt (2001), Cơ sở sinh học vi sinh vật, NXB Đại Học Sư Phạm, tr. 176178. Nguyễn Thành Trung (1997), Tình hình và biện pháp phòng tổng hợp bệnh Gumboro tại xí nghiệp gia cầm Meko, Luận án thạc sĩ Khoa học Nông Nghiệp, Đại học Cần Thơ, tr.9-21. Nguyễn Hồng Minh, Trần Thị Liên, Trương Quang (2011), “Kết quả nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chống bệnh Gumboro của gà được sử dụng vaccine đơn giá và đa giá sản xuất tại xí nghiệp thuốc thú y trung ương”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tập IIX (số 4 - 2011), Hội thú y Việt Nam, tr.13-19. Nguyễn Quang Tuyên & Trần Thanh Vân (2001), Phòng và trị bệnh trong chăn nuôi gà, NXB Văn Hóa Dân Tộc- Hà Nội, tr. 176-180. Nguyễn Xuân Bình, Trần Xuân Hạnh và Tô Thị Phấn (2000), 43 bệnh gia cầm và biện pháp phòng trị, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 170-179. Phạm Sĩ Lăng & Lê Thị Tài (2000), Thuốc điều trị và vaccine sử dụng trong thú y, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr. 171- 180. Phạm Sĩ Lăng & Nguyễn Thiện (2004), Một số bệnh mới do virus ở gia súc, gia cầm nhập nội và biện pháp phòng trị, NXB NN Hà Nội, tr 170-171. Tập ảnh màu về bệnh gia súc (2001), phòng vệ sinh gia súc, cục chăn nuôi, bộ nông lâm - ngư nghiệp Tokyo Nhật Bản, tr 167-168. Trần Minh Châu, Dương Công Thuận và Bitayzotan (1982), Phát hiện bệnh Gumboro ở gà công nghiệp, đăng trong kết quả nghiên cứu khoa học và kỹ thuật thú y của viện thú y (1979-1984), tr 28 -31. 34 Trương Minh Dũng, Nguyễn Hồng Phong, Nguyễn Thị Minh Thư và Ngô Thị Thu Ngân (2006), Bệnh Gumboro và các kỹ thuật sinh học phân tử, Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, tr. 7-19. Trần Ngọc Bích và Hồ Thị Việt Thu (2012), Giáo trình miễn dịch học đại cương, NXB Đại Học Cần Thơ, tr.100-121. Trần Ngọc Bích và Nguyễn Thị Mỹ Hiệp (2013), Đặc điểm dịch tễ học của bệnh Gumboro trên đàn gà tại huyện An Phú, tỉnh An Giang, tạp chí khoa học trường Đại học Cần Thơ, phần B: nông nghiệp, thuỷ sản và công nghệ sinh học, tr.255259. Võ Thị Trà An và Võ Ngọc Bảo (2011), Vắc xin trong thú y, NXB Nông Nghiệp Thành Phố Hồ Chí Minh, tr.10-43. Tiếng Anh Allan W.H., Faragher J.T., and Cullen G.A. (1972), Immunosuppression by the infectious bursal agent in chickens immunized against Newcastle disease, Veterinary Record 90, pp. 511-512. Benton, H.1967. Infectious bursal virus disease virus, Current Top Microbiology and Immunology 90, pp 107-121. Chaisingha, A, trongwiongsa, I. Panoolsinsap, T, Tantas Wasdi (1992). The virulence of the infectious bursal disease virus isolated in 1991, Proceeding of the 11th Annual Livesrock Conference F. 48, (1992). Cheville, N.F. (1967), Study on pathogenesis of Gumboro disease in the bursal of Fabricius, speen and thymus of the chicken, Journal of Pathology, 51, pp. 527 551. Cosgrove A.S. (1962), An apparently new disease of Chicken – Avian nephrosis, Avian Diseases, pp. 282-287. Cowen, B.S, and M.O Braunl, 1988. The propagation of avan viruse in a continuous cell line. (QT-35 of Japanese quali orgin). Avian Disease, 32, pp 282-297 Eterradossi, N.J, P. Picault, P. Drouin, M.Guittet, R. L’Hospitalier and G. Bennejean (1992), Pathogenicity and preliminary antigenic characterization of six infectious bursal disease virus strains isolated in France from acute outbreaks Zentralbl Veteri Reihe B 399, pp.683-691. Faragher, JT 1972. Infection bursal disease of chickens, Veterinary Bulletin, 42, pp 36369 Jackwood D.J.; Y.M. Saif and P.D. Moorhead, 1985. Immunogenicity and antigenicity of infectious bursal disease virus serotypes I and II in chickens. Avian disease, 29, pp 1184-1194 Hichner, S.B (1970), Infectivity of infectious bursal disease virus for embrionating egg, Poultry Science 49, pp. 511-516. 35 Hirai K, K. Kunihiro and Shimakura S. (1979), Characterization of immunosuppression in chickens by infectious bursal disease virus, Nucleic Acids Research, 14, pp. 5001-5010. Luckert P.D and Y.M Saif, 1991. Infectious bursal disease, disease of poultry, ninth edition, IOWA, VSA.F. pp 643-663 Lucio, B & Hitchner S.B (1979), Infectious bursal disease emulsifield vaccine: Effect upon neutralizing antibody levels in the dam and supsequent protection of the progeny, Avian Diseases, 23, pp. 466-478. Mc Ferran J.B, Mc Nulty M.S, Odenwale W.F. Conner T.J, Mc Cracker R. M, Collin D.S and Allan G. M. (1980), Isolation and serological studies with infectious bursal disease viruses from 10 weeks turkey and duck, Demonstration of second serotypes, Avian Pathology, 9, pp. 395-404. Nunoya, T, Otaki, Y. Tajima, M. Hiraga, M and Saito, T. (1992), Occurrence of acute infectious disease with high mortality in Japan and pathogenicity of field isolates in SPF chicken, Avian Diseases 36, pp. 597-609. Rosenberger J. K and Cloud S.S. (1985), Isolation and characterizatin of variant infectious bursal disease viruses, Journal American Veterinary Medicine Association, 18, pp. 375. Skeeles J.K, Lukert P.D, Fletcher O.J, and Leonard (1979), Immunization studies with a cell – culture – adapted infectious bursal disease virus, Avian diseases 23, pp. 456465. Wesman J, and S.B Hitchner, 1978. Infectious bursal disease virus infectious attempts in Turkeys and cucurnix quali, avian disease, 22, pp. 604-609. Internet www.anova.com.vn/contents/article.asp?id=285&detail=16&ucat=44, http://www.ebook.edu.vn/?page=1.1&view=7250 www.vcn.vnn.vn/PrintPreview.aspx?ID=12218 http://srmo.hcmuaf.edu.vn/data/file/tap%20chi/2002/CNTY, Lâm Minh Thuận (2002), Khảo sát khả năng sản xuất thịt của gà Tàu Vàng nuôi tại Bà Rịa Vũng Tàu. http://www.vemedim.vn/benhvadieutri.php?id=3&b=38 http://marphavet.com/modules.php?name=News&opcase=detailsnews&mid=29&mcid= 330 http://navetco.com.vn/gav_02.html 36 PHỤ CHƯƠNG 1 Một số hình ảnh trong quá trình làm thí nghiệm Lấy máu gà Đĩa ELISA Máy ly tâm Gà thí nghiệm Nhỏ vaccine cho gà thí nghiệm Máy đọc ELISA PHỤ CHƯƠNG 2 Kết quả thống kê Bảng 4.1: Kiểm tra kháng thể thụ động mẹ truyền One-Sample T: S/P 3 ngay tuoi Variable S/P 3 ngay tuoi N 5 Mean 0,814 StDev 0,679 SE Mean 0,303 95% CI (-0,028. 1,657) One-Sample T: HGKT 3 ngay tuoi Variable HGKT 3 ngay tuoi N 5 Mean 1877 StDev 1695 SE Mean 758 95% CI (-228. 3982) One-Sample T: S/P 10 ngay tuoi Variable S/P 10 ngay tuoi N 5 Mean 0,4364 StDev 0,1049 SE Mean 0,0469 95% CI (0,3061. 0,5666) One-Sample T: HGKT 10 ngay tuoi Variable HGKT 10 ngay tuoi N 5 Mean 930 StDev 242 SE Mean 108 95% CI (630. 1230) One-Sample T: S/P 17 ngay tuoi Variable S/P 17 ngay tuoi N 5 Mean 0,1987 StDev 0,0326 SE Mean 0,0146 95% CI (0,1582. 0,2392) One-Sample T: HGKT 17 ngay tuoi Variable HGKT 17 ngay tuoi N 5 Mean 394,0 StDev 70,1 SE Mean 31,4 95% CI (306,9. 481,1) One-Sample T: S/P 24 ngay tuoi Variable S/P 24 ngay tuoi N 5 Mean 0,1240 StDev 0,0410 SE Mean 0,0183 95% CI (0,0732. 0,1749) One-Sample T: HGKT 24 ngay tuoi Variable HGKT 24 ngay tuoi N 5 Mean 236,5 StDev 84,6 SE Mean 37,8 95% CI (131,4. 341,6) Bảng 4.2: Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 35 ngày tuổi One-Sample T: NT 1 (S/P) Variable NT 1 (S/P) N 7 Mean 0,1118 StDev 0,0441 SE Mean 0,0167 95% CI (0,0710. 0,1525) One-Sample T: NT 1 (HGKT) Variable NT 1 (HGKT) N 7 Mean 211,6 StDev 90,4 SE Mean 34,2 95% CI (128,1. 295,2) One-Sample T: NT 2 (S/P) Variable NT 2 (S/P) N 7 Mean 0,0260 StDev 0,0353 SE Mean 0,0158 95% CI (-0,0178. 0,0698) One-Sample T: NT 2 (HGKT) Variable NT 2 (HGKT) N 7 Mean 45,9 StDev 64,8 SE Mean 29,0 95% CI (-34,6. 126,4) Bảng 4.3: Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 49 ngày tuổi One-Sample T: NT 1 (S/P) Variable NT 1 (S/P) N 7 Mean 1,453 StDev 1,183 SE Mean 0,447 95% CI (0,359. 2,547) SE Mean 1168 95% CI (677. 6395) One-Sample T: NT 1 (HGKT) Variable NT 1 (HGKT) N 7 Mean 3536 StDev 3091 One-Sample T: NT 2 (S/P) Variable NT 2 (S/P) N 7 Mean 0,00714 StDev 0,01087 SE Mean 0,00586 95% CI (-0,00635. 0,02063) One-Sample T: NT 2 (HGKT) Variable NT 2 (HGKT) N 7 Mean 11,35 StDev 18,03 SE Mean 8,06 95% CI (-11,04. 33,74) Bảng 4.4: Mức độ bảo hộ của gà Tàu Vàng ở 80 ngày tuổi One-Sample T: NT 1 (S/P) Variable NT 1 (S/P) N 7 Mean 2,114 StDev 0,790 SE Mean 0,298 95% CI (1,384. 2,844) SE Mean 795 95% CI (3267. 7157) One-Sample T: NT 1 (HGKT) Variable NT 1 (HGKT) N 7 Mean 5212 StDev 2103 Bảng 4.5 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi úm (0-4 tuần tuổi) Paired T-Test and CI: NT1. NT3 Paired T for NT1 - NT3 NT1 NT3 Difference N 10 10 10 Mean 37,800 37,900 -0,10 StDev 1,874 2,183 3,48 SE Mean 0,593 0,690 1,10 95% CI for mean difference: (-2,59. 2,39) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -0,09 P-Value = 0,930 Paired T-Test and CI: NT1. NT3 Paired T for NT1 - NT3 NT1 NT3 Difference N 10 10 10 Mean 254,00 257,40 -3,40 StDev 15,78 14,41 18,20 SE Mean 4,99 4,56 5,75 95% CI for mean difference: (-16,42. 9,62) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -0,59 P-Value = 0,569 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 NT 3 Difference N 10 10 10 Mean 7,721 7,839 -0,118 StDev 0,605 0,542 0,677 SE Mean 0,191 0,171 0,214 95% CI for mean difference: (-0,602. 0,367) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -0,55 P-Value = 0,595 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 NT 3 Difference N 4 4 4 Mean 18,39 18,41 -0,015 StDev 9,25 9,46 0,631 SE Mean 4,63 4,73 0,315 95% CI for mean difference: (-1,019. 0,989) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -0,05 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 N 10 Mean 2,3947 StDev 0,1846 SE Mean 0,0584 P-Value = 0,965 NT 3 Difference 10 10 2,3583 0,0364 0,1588 0,2012 0,0502 0,0636 95% CI for mean difference: (-0,1075. 0,1803) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = 0,57 P-Value = 0,581 Bảng 4.6 Tăng trọng và tiêu tốn thức ăn của gà giai đoạn nuôi thịt (5-12 tuần tuổi) Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 NT 3 Difference N 10 10 10 Mean 1289,5 1376,5 -87,0 StDev 167,8 175,9 198,4 SE Mean 53,1 55,6 62,7 95% CI for mean difference: (-228,9. 54,9) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -1,39 P-Value = 0,199 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 N Mean StDev NT 1 10 18,491 3,012 NT 3 10 19,984 3,158 Difference 10 -1,49 3,52 SE Mean 0,952 0,999 1,11 95% CI for mean difference: (-4,01. 1,02) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -1,34 P-Value = 0,213 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 NT 3 Difference N 8 8 8 Mean 56,77 57,53 -0,754 StDev 20,26 20,93 2,210 SE Mean 7,16 7,40 0,781 95% CI for mean difference: (-2,601. 1,094) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = -0,96 P-Value = 0,367 Paired T-Test and CI: NT 1. NT 3 Paired T for NT 1 - NT 3 NT 1 NT 3 Difference N 10 10 10 Mean 3,137 2,939 0,197 StDev 0,460 0,428 0,524 SE Mean 0,145 0,135 0,166 95% CI for mean difference: (-0,178. 0,573) T-Test of mean difference = 0 (vs not = 0): T-Value = 1,19 P-Value = 0,264 [...]... trên cùng sự đồng ý của Bộ môn Thú y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà Tàu Vàng đối với vaccine Gumboro của Navetco Mục tiêu đề tài: Kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro bằng phương pháp ELISA sau khi tiêm phòng vaccine Gumboro do công ty Navetco sản xuất Khảo sát tác động của việc lấy máu... Số gà trong thí nghiệm (con) NT1 NT2 NT3 I 7 7 7 II 7 7 7 III 7 7 7 NT1: sử dụng vaccine Gumboro; NT2: đối chứng -vaccine; NT3: đối chứng-tăng trọng Nghiệm thức 1 (NT1) và nghiệm thức 3 (NT3): gà được tiêm vaccine đầy đủ theo qui trình, riêng ở NT1 gà được lấy máu định kỳ để theo dõi khả năng đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch, NT3 không lấy máu nhằm khảo sát sự sinh trưởng và tăng trọng của gà Nghiệm... 32 5.2 Đề nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 ix TÓM LƯỢC Đề tài Khảo sát khả năng đáp ứng miễn dịch của gà Tàu Vàng đối với vaccine Gumboro của Navetco được thực hiện tại trại thực nghiệm Ba Hoàng, phường Thới An Đông, quận Bình Thuỷ, thành phố Cần Thơ và phòng thí nghiệm Bệnh truyền nhiễm Bộ Môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng 07/2013... động Những loại vaccine này rất an toàn và được sử dụng rộng rãi trên mọi vùng lãnh thổ với đặc điểm dịch tễ khác nhau, nhưng khả năng đáp ứng miễn dịch yếu, khả năng bảo hộ thấp Cho nên phải tiêm nhắc lại thêm 2-3 lần mới đủ đáp ứng miễn dịch Những vaccine này chỉ dùng ở những nơi an toàn chưa có bệnh Nếu bệnh đã nổ ra thì những vaccine này không có khả năng bảo hộ Vaccine chứa virus với độc lực trung... ẩn và gà thường bị bệnh ở dưới 3 tuần tuổi Theo nhận định của Lê Văn Năm (2004), cho rằng độ mẫn cảm đối với mầm bệnh, tỷ lệ mắc bệnh cũng như tỷ lệ chết ở bệnh Gumboro giữa gà trống và gà mái không có sự khác biệt 2.4 Miễn dịch học 2.4.1 Miễn dịch chủ động Đối với miễn dịch chống bệnh Gumboro, quá trình miễn dịch dịch thể là quan trọng Gà ở lứa tuổi nhỏ hơn 3-4 tuần tuổi chỉ cần tiếp xúc virus Gumboro. .. thụ động duy trì 100% ở gà thí nghiệm từ 3 ngày cho đến 10 ngày tuổi, với hiệu giá kháng thể lần lược là 1877±758, 930±108 Đến 17 ngày tuổi còn 60% gà có kháng thể và giảm hẳn ở 24 ngày tuổi (tỷ lệ 0%) Kiểm tra đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine vào thời điểm gà 35, 49 và 80 ngày tuổi Kết quả thí nghiệm cho thấy gà sử dụng 2 lần vaccine Gumboro của Navetco vào lúc 7 và 21 ngày tuổi, hiệu giá kháng... nhiều trại gà trong cả nước (Nguyễn Bá Thành, 2006) Kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hồng Minh và ctv (2011), gà được tiêm một lần vaccine Gumboro, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 28 ngày tuổi (914,23±13,78 với vaccine đơn giá và 823,25±15,56 với vaccine đa giá) Gà sử dụng hai lần vaccine Gumboro vào lúc 7 và 14 ngày tuổi, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất ở 42 ngày tuổi (2289,79±18,26 với vaccine đơn... gà mắc bệnh Gumboro là 22,30% so với gà mắc bệnh khác (18,62%) Tỷ lệ đàn nhiễm bệnh Gumboro cao nhất được ghi nhận ở những đàn gà nhỏ hơn 30 ngày tuổi (62,5%), kế đến là gà từ 30-45 ngày tuổi (53,85%) và thấp nhất là ở những đàn gà lớn hơn 45 ngày tuổi (23,08%) Bệnh thường xảy ra nhất ở các đàn không được tiêm vaccine (70,0%), kế đến là các gà chỉ được tiêm vaccine một lần (62,5%) và gà được tiêm vaccine. .. Medivac -Gumboro B… Khi sử dụng vaccine này không gây hại đến cấu trúc túi Fabricius lại có khả năng vượt qua sự trung hòa kháng thể thụ động ở gà con, đáp ứng miễn dịch rất tốt, an toàn Vì thế, vaccine được sử dụng ở những vùng an toàn dịch bệnh cũng như vùng không an toàn dịch bệnh Vaccine chứa virus độc lực cao Đây là những loại vaccine chứa virus sống, còn độc lực khá cao khi sử dụng có khả năng gây... 80 ngày tuổi (5212±795) so với lần kiểm tra lúc 35 ngày tuổi (212±34) và 49 ngày tuổi (3536±1168) Khảo sát khả năng sinh trưởng và tăng trọng của gà Tàu Vàng qua 2 giai đoạn, giai đoạn nuôi úm 0-4 tuần tuổi và giai đoạn nuôi thịt 5-12 tuần tuổi, kết quả ghi nhận như sau: trọng lượng gà lúc 4 tuần tuổi đạt từ 254-257,4 gram/con, tăng trọng bình quân trong giai đoạn úm từ 7,727,84 gram/con/ngày với hệ ... NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Luận văn tốt nghiệp ngành: THÚ Y Tên đề tài: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA GÀ TÀU VÀNG ĐỐI VỚI VACCINE GUMBORO CỦA NAVETCO Cán hướng dẫn:... 14 ngày sau tiêm phòng Nhưng qua khảo sát cho thấy thời điểm đáp ứng miễn dịch đàn gà thấp Điều vaccine cho đáp ứng miễn dịch chậm Vì miễn dịch phụ thuộc vào nhiều yếu tố địa vật đặc tính vaccine. .. Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ, tiến hành thực đề tài: Khảo sát khả đáp ứng miễn dịch gà Tàu Vàng vaccine Gumboro Navetco Mục tiêu đề tài: Kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro phương