Khảo sát hiệu lực của nấm xanh (metarhizium anisopliae sorokin) trên sùng khoai lang (cylas formicarius fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm

Ket-noi.com KHẢO SÁT HIỆU LỰC CỦA NẤM XANH (Metarhizium anisopliae Sorokin) TRÊN SÙNG KHOAI LANG (Cylas formicarius Fabricius) TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM Luận văn tốt nghiệp Đại học NGÀNH NÔNG NGHIỆP SẠCH Cần Thơ, tháng 12 - 2012 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ƯNG DỤNG BỘ MÔN KHOA HỌC ĐẤT -----o0o----- KHẢO SÁT HIỆU LỰC CỦA NẤM XANH (Metarhizium anisopliae Sorokin) TRÊN SÙNG KHOAI LANG (Cylas formicarius Fabricius) TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM Luận văn tốt nghiệp Đại học Cán bộ hướng dẫn Ths. Phạm Kim Sơn Sinh viên thực hiện Nguyễn Thị Kim Quyên MSSV: 3093091 Cần Thơ, tháng 12 - 2012 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ i KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ƯNG DỤNG BỘ MÔN KHOA HỌC ĐẤT -----o0o----- Tôi đã chấp nhận luận văn tốt nghiệp đính kèm với đề tài: “Khảo sát hiệu lực cảa nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trên sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm”. Do sinh viên Nguyễn Thị Kim Quyên thực hiện. Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp. Cần Thơ, ngày … … tháng … …năm 2012 Cán bộ hướng dẫn Phạm Kim Sơn ii TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ƯNG DỤNG BỘ MÔN KHOA HỌC ĐẤT -----o0o----- Hội đồng chấm luận văn đã chấp nhận luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông nghiệp sạch với đề tài: KHẢO SÁT HIỆU LỰC CỦA NẤM XANH (Metarhizium anisopliae Sorokin) TRÊN SÙNG KHOAI LANG (Cylas formicarius Fabricius) TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM Do sinh viên Nguyễn Thị Kim Quyên thực hiện và bảo vệ trước hội đồng. Ý kiến của hội đồng: ........................................................................................................................................ ........................................................................................................................................ ........................................................................................................................................ ........................................................................................................................................ ........................................................................................................................................ Luận văn tốt nghiệp đã được hội đồng đánh giá ở mức ............................................ Cần Thơ, ngày … … tháng … …năm 2012 Duyệt khoa Chủ tịch Hội đồng BCN khoa nông nghiệp & SHƯD iii LƯỢC SỬ CÁ NHÂN -----o0o----- I. LÝ LỊCH SƠ LƯỢC Họ và tên: Nguyễn Thị Kim Quyên Giới tính: Nữ Ngày tháng năm sinh: 18/03/1991 Con ông Nguyễn Văn Hùng và bà Nguyễn Thị Kiều Nguyên quán: Số nhà 31, Tổ 2, Ấp Vĩnh Khánh II, xã Vĩnh Xuân, huyện Trà Ôn, tĩnh Vĩnh Long. II. QUÁ TRÌNH HỌC TẬP Từ năm 1997 đến năm 2002: học tại trường Tiểu học Vĩnh Xuân A, xã Vĩnh Xuân, huyện Trà Ôn, tĩnh Vĩnh Long. Từ năm 2002 đến năm 2006: học tại trường Trung học cơ sở Vĩnh Xuân, xã Vĩnh Xuân, huyện Trà Ôn, tĩnh Vĩnh Long. Từ năm 2006 đến năm 2009: học tại trường Trung học phổ thông Vĩnh Xuân, xã Vĩnh Xuân, huyện Trà Ôn, tĩnh Vĩnh Long. Từ năm 2009 dến nay, sinh viên trường Đại học Cần Thơ. Tốt nghiệp kỹ sư Nông nghiệp sạch năm 2012. iv LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là kết quả nghiên cứu của chính bản thân. Các số liệu kết quả trình bày trong luận văn này là trung thực và chưa từng được công bố. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kim Quyên v LỜI CẢM TẠ Kính dâng! Cha, mẹ suốt đời tận tụy vì tương lai, sự nghiệp của con. Thành kính ghi ơn! Thầy Phạm Kim Sơn đã tận tình dạy dỗ và giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn này. Tỏ lòng biết ơn sâu sắc! Thấy cố vấn học tập Châu Minh Khôi cùng toàn thể quý thầy cô khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ đã truyền đạt những kiến thức vô cùng quý báu cho em trong suốt thời gian em theo học tại trường. Đặc biệt là quý thầy cô Bộ môn Bảo vệ thực vật đã tận tình chỉ bảo và tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn này. Chân thành cảm ơn! Các bạn sinh viên lớp Nông nghiệp sạch K35 đã giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập. Đặc biệt là chị Nguyễn Thị Mỳ, Nguyễn Thị Ngọc Nghĩa, sinh viên lớp Bảo vệ thực vật K34, và các bạn các em đã nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Thân gửi về! Các bạn lớp Nông nghiệp sạch K35, chúc các bạn nhiều sức khỏe, luôn thành công và hạnh phúc trong tương lai. Trân trọng! Nguyễn Thị Kim Quyên vi Nguyễn Thị Kim Quyên, 2012: “Khảo sát hiệu lực của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trên sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm”. Luận văn tốt nghiệp kỹ Nông nghiệp sạch, khoa Nông Nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ. Cán bộ hướng dẫn: Ths. Phạm Kim Sơn TÓM LƯỢC Đề tài “Khảo sát hiệu lực của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trên sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm” đã được thực hiện tại phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học, Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ từ tháng 2 năm 2012 đến tháng 12 năm 2012 với mục tiêu tìm ra giải pháp hạn chế đến mức thấp nhất sự phát sinh và gây hại của sùng khoai lang bằng biện pháp sinh học đã thu được những kết quả sau: Nấm xanh Metarhizium anisopliae cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao hơn nấm trắng Beauveria bassiana và nấm tím Paecilomyces sp., đạt 100% sau 7 ngày sau khi chủng nấm. Nấm xanh Metarhizium anisopliae Nồng độ 10 9 bào tử/ml cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất, 100% sau 5 ngày chủng nấm. Nấm xanh Metarhizium anisopliae được phân lập từ bọ cách cứng hại dừa cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất, 100% sau 5 ngày chủng nấm. Nấm xanh Metarhizium anisopliae ở dạng nấm tươi cho hiệu quả lây nhiễm cao nhất trong quần thể thành trùng sùng khoai lang được chọn ngẫu nhiên, đạt hiệu quả 100% sau 18 ngày chủng nấm. Nấm xanh Metarhizium anisopliae ở dạng nấm tươi cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất, đạt 100% sau 12 ngày xử lý. vii MỤC LỤC ĐỀ MỤC ....................................................................................................... TRANG MỤC LỤC .............................................................................................................. viii DANH SÁCH HÌNH ................................................................................................ x DANH SÁCH BẢNG .............................................................................................. xi DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT .............................................................................. xii Chương 1: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU ................................................................... 3 1.1 NGUỒN GỐC, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC TÍNH THỰC VẬT CỦA KHOAI LANG (Ipomoea batatus Poir) ................................................................................ 3 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại........................................................................................ 3 1.1.2 Đặc điểm thực vật ............................................................................................. 3 1.2 SÙNG KHOAI LANG (Cylas formicarius Fabricius) .................................. 4 1.2.1 Đặc điểm phân bố ............................................................................................. 4 1.2.2 Phân loại ............................................................................................................ 4 1.2.3 Đặc điểm hình thái và sinh học........................................................................ 5 1.2.4 Tập quán sinh sống ........................................................................................... 7 1.2.5 Cách gây hại và triệu chứng gây hại ............................................................... 8 1.2.6 Thiên dịch của sùng khoai lang ....................................................................... 9 1.2.7 Biện pháp phòng trị ........................................................................................ 10 1.3 NẤM XANH (Metarhizium anisopliae)......................................................... 10 1.3.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố ...................................................................... 10 1.3.2 Đặc điểm ......................................................................................................... 11 1.3.3 Cơ chế tác động .............................................................................................. 12 1.3.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng và phát triển của nấm xanh Metarhizium anisopliae ........................................................................................... 13 1.4 NẤM TRẮNG (Beauveria bassiana) ............................................................. 14 1.4.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố ...................................................................... 14 1.4.2 Đặc điểm ......................................................................................................... 14 1.4.3 Cơ chế tác động .............................................................................................. 15 1.5 NẤM TÍM (Paecilomyces sp.) ........................................................................ 16 1.5.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố ...................................................................... 16 1.5.2 Đặc điểm ......................................................................................................... 16 1.5.3 Cơ chế tác động .............................................................................................. 17 1.6 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU ỨNG VÀ DỤNG NẤM KÝ SINH TRÊN SÙNG KHOAI LANG ........................................................................................... 17 1.6.1 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Metarhizium anisopliae.................. 17 1.6.2 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Beauveria bassiana ........................ 18 1.6.3 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Paecilomyces sp.............................. 19 1.7 PHEROMONE ................................................................................................. 19 viii 1.7.1 Định nghĩa, phân loại ..................................................................................... 19 1.7.2 Pheromone giới tính ....................................................................................... 20 Chương 2: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP .......................................... 21 2.1 PHƯƠNG TIỆN ............................................................................................... 21 2.1.1 Thời gian và địa điểm ..................................................................................... 21 2.1.2 Vật liệu và dụng cụ ......................................................................................... 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP.............................................................................................. 24 2.2.1 Thí nghiệm 1: khảo sát hiệu lực của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb và nấm tím Pae đối với thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. .................................................................................... 24 2.2.2 Thí nghiệm 2: khảo sát ảnh hưởng của mật số bào tử nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. .......................................................................... 25 2.2.3 Thí nghiệm 3: khảo sát ảnh hưởng của các chủng nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm ..................................................................................... 26 2.2.4 Thí nghiệm 4: khảo sát khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm.. ........................................................................................... 27 2.2.5 Thí nghiệm 5: khảo sát khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) qua các hình thức xử lý khác nhau trong điều kiện phòng thí nghiệm. .................................................... 29 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .......................................................... 31 3.1 Hiệu lực của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb và nấm tím Pae đối với thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm ...................................................................................................................... 31 3.2 Ảnh hưởng của mật số bào tử nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm ...................................................................................................................... 33 3.3 Ảnh hưởng của các chủng nấm xanh Ma khác nhau lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm ................................................................................................................. 35 3.4 Khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm ...... 37 3.5 Khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) qua các hình thức xử lý khác nhau trong điều kiện phòng thí nghiệm ............................................................................................. 41 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ............................................................... 44 4.1 Kết luận .............................................................................................................. 44 4.2 Đề nghị ............................................................................................................... 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO .................................................................................... 45 ix DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1 Tên hình Trang Thành trùng sùng khoai lang C. formicarius (nguồn Capinera, 6 1998) 2.1 Rổ khoai lang đã nhiễm sùng 22 2.2 Ba loại nấm ký sinh 23 2.3 Chế phẩm nấm xanh 23 2.4 Pheromone giới tính tổng hợp 24 2.5 Bố trí thí nghiệm 1 25 2.6 Bẫy pheromone giới tính tổng hợp hấp dẫn SKL và lây nhiễm 28 nấm xanh Ma 2.7 Bố trí thí nghiệm 3 28 2.8 Bố trí thí nghiệm 4 30 3.1 Sùng khoai lang bị nấm xanh, nấm trắng ký sinh 32 3.2 Thành trùng sùng khoai lang bi nhiễm nấm xanh M. 34 anisopliae nồng độ 109 bào tử/ml 3.3 Thành trùng SKL chết do sự lây lan của nấm xanh Ma 40 3.4 Sùng khoai lang nhiễm các dạng nấm xanh Ma 43 x DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Tên bảng Trang Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae 31 trong điều kiện phòng tchí nghiệm qua các thời điểm. 3.2 Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ khác nhau trong 33 điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. 3.3 Độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma trong điều kiện 35 phòng thí nghiệm qua các thời điểm. Khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma đối với thành 3.4 trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong 37 điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. 3.5 Khả năng ký sinh của nấm Metarhizium anisopliae lên SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. xi 41 DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa Ma Metarhizium anisopliae Bb Beauveria bassiana BXN Bọ xít nhãn DB Bị dừa NSKC Ngày sau khi chủng NSKT Ngày sau khi thả Pae Paecilomyces sp. RH Ẩm độ SKL Sùng khoai lang SSKXL Ngày sau khi xử lý T Nhiệt độ xii MỞ ĐẦU Khoai lang có nguồn gốc từ khu vực nhiệt đới châu Mỹ, được con người trồng cách đây trên 5.000 năm. Khoai lang được phổ biến rất sớm trong khu vực này, bao gồm cả khu vực Caribe (wikipedia – bách khoa toàn thư mở). Khoai lang là cây rau lương thực đứng hàng thứ bảy trên thế giới sau lúa mì, lúa nước, ngô, khoai tây, lúa mạch, sắn. Khoai lang là một loài cây nông nghiệp với các rễ củ lớn, chứa nhiều tinh bột, có vị ngọt. Khoai lang có khối lượng đường bột, vitamin A và năng lượng cao hơn so với lúa mì, lúa nước, sắn. Khoai lang dùng làm lương thực cho người, thức ăn chăn nuôi và làm nguyên liệu chế biến tinh bột, rượu, cồn, si rô, nước giải khát, bánh kẹo, mì, miến, phụ gia dược phẩm, màng phủ sinh học (Hà Hương – Những loại cây lương thực chính của thế giới). Ở Việt Nam, khoai lang là 1 trong 4 loại cây lương thực chính sau lúa, ngô, sắn (Rau hoa quả Việt Nam). Tại khu vực ĐB. Sông Cửu Long, các tỉnh Vĩnh Long, Đồng Tháp, Kiên Giang, TP. Cần Thơ… là những địa phương có diện tích trồng khoai lang nhiều, trong đó Vĩnh Long phát triển mạnh nhất. Trước đây, mỗi năm nông dân chỉ trồng 1 vụ khoai, còn lại sẽ trồng lúa hoặc trồng cây khác; những năm gần đây do giá khoai tăng cao nhiều nơi áp dụng “độc canh” khoai lang suốt năm. Hậu quả của việc “độc canh” khoai lang liên tục, sử dụng nhiều thuốc hóa học vừa làm tăng chi phí, phát sinh mầm bệnh và gây ô nhiễm môi trường… khoai lang còn bị dịch bệnh tấn công dữ dội gây thiệt hại nặng. Trong đó sùng khoai lang là loài gây hại nghiêm trọng nhất, có thể thiệt hại hoàn toàn. Hơn thế nữa, việc sử dụng liên tục thuốc hóa học còn gây nhiều ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người sản xuất và người tiêu dùng. Do đó, giải pháp canh tác bền vững, áp dụng các biện pháp sinh học đang được quan tâm nghiên cứu và ứng dụng rộng khắp cả nước. Việc sử dụng nấm xanh ký sinh trên côn trùng (Metarhizium anisopliae) đang được áp dụng như một biện pháp sinh học rất phổ biến trên thế giới hiện nay. Tại Việt Nam, nấm xanh cũng được sử dụng để quản lý một số côn trùng gây hại như rầy nâu, bọ cánh cúmg hại dừa, sâu ăn tạp, rầy mềm ở các tỉnh Tiền Giang, Sóc Trăng, Bạc Liêu và Cần Thơ (Trần Văn Hai và ctv., 2008). Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài “Khảo sát hiệu lực của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trên sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm” được thực hiện nhằm tìm ra biện pháp hạn chế đến mức thấp nhất sự phát sinh gây hại của sùng khoai lang. 2 1 Chương 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 NGUỒN GỐC, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC TÍNH THỰC VẬT CỦA KHOAI LANG (Ipomoea batatus Poir) Họ bìm bìm hay khoai lang hay rau muống biển là một nhóm của 55-60 chi và khoảng 1625-1650 loài, phân bố rộng khắp thế giới. Đa phần có tuyến nhựa mủ. Các chi đa dạng về loài có thể kể đến là: Ipomeae (khoảng 500 loài), Cuscuta (khoảng 145 loài), Convolvulus (khoảng 100 loài), Argyreia (khoảng 90 loài), Jacquemontia (khoảng 90 loài). Theo Nguyễn Thạch Bích và ctv., (2005), các loài trong họ này thuộc dây leo thân thảo hay hóa gỗ, dịch thường có màu trắng sữa. Lá đơn mọc so le và không có lá kèm. Hoa đơn tính hay lưỡng tính khác gốc, lá bắc thường tạo thành những tầng cao, có 5 lá đài và thường rời. Tràng hoa đối xứng xuyên tâm hình phễu, 5 cánh hoa hợp, 5 nhị hoa trên màng, bao phấn 2 ô, nẻ dọc, noãn đơn độc hay từng đôi mọc đứng, vòi tận cùng. Quả là dạng quả mang nang hay quả nạc và không mở. Hạt đôi khi có lông, nội nhũ rất ít, lá mầm xếp nếp hay nhàu nát. 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại Khoai lang (Ipomoea batatus Poir) có nguồn gốc từ vùng Nam Mỹ (Đỗ Huy Bích, 2004). Khoai lang thuộc họ bìm bìm (convol vulaceae), thân thảo, nhiều mủ, dây bò hay leo. Là loài duy nhất trong số 105 loài có củ ăn được (Nguyễn Thành Hối, 2010). 1.1.2 Đặc điểm thực vật Theo Đỗ Huy Bích (2004), khoai lang thuộc thân thảo, sống lâu năm. Ưa sáng, ưa ẩm nhưng không chịu được ngập úng. Có khả năng tái sinh vô cùng khỏe. Rể chùm, rể củ mập, hình thoi hoặc gần tròn; màu đỏ, trắng hoặc vàng. Hoa màu tím nhạt, trắng, đôi khi màu vàng. Lá khoai lang có dạng phiến, hình trái tim, lưỡi mác hoặc xẻ khía, chia làm 3-5-7 thùy tùy từng giống và vị trí lá. 3 Khoai lang ra hoa từ 20-30 ngày sau khi trồng ở vị trí nách lá, ngọn thân. Hoa mọc riêng rẻ hay từng chùm 3-7 hoa, hoa thuộc dạng cánh dính, hình chuông và có cuốn hoa dài (Nguyễn Thành Hối, 2010). Khoai lang được trồng ở nhiều nơi để lấy củ, lá làm thực phẩm cho con người, thức ăn chăn nuôi, nguyên liệu trong công nghiệp. Ngoài ra lá khoai lang còn có công dụng chữa một số bệnh (Đỗ Huy Bích, 2004) 1.2 SÙNG KHOAI LANG (Cylas formicarius Fabricius) 1.2.1 Đặc điểm phân bố Sùng khoai lang là loài có vùng phân bố rất rộng, được phát hiện nhiều tại các nước thuộc khu vực Đông Nam Á và nhiều nước thuộc Châu Phi, Châu Âu, Châu Á, Châu Mỹ, Châu Đại Dương và một số vùng Caribbean thuộc Châu Mỹ (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). Ames et at. (1997) cho rằng, Cylas bruneus và Cylas puncticollis là hai loài gây hại quan trọng ở Châu Phi, còn ở Châu Á và một phần Caribbean là Cylas formicarius. Ở Việt Nam, sùng khoai lang suất hiện và gây hại ở hầu hết các khu vực trồng khoai trên cả nước, đặc biệt chúng thường xuyên gây hại nặng ở các vùng khô hạn, đất nứt nẻ như các tỉnh Trung du miền núi phía Bắc, Tây Nguyên, các tỉnh Đông Nam Bộ (Hà Quang Hùng, 2005). Sùng gây hại trên khoai lang ở nước ta chỉ có một loài duy nhất là Cylas formicarius Fabricius (Nguyễn Đức Khiêm, 2006). Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen (2011) cũng khằng định rằng, sùng gây hại trên khoai lang ở ĐB sông Cửu Long có tên khoai học là Cylas formicarius Fabricius và chủ yếu gây hại vào mùa khô. 1.2.2 Phân loại Theo Nguyễn Thị Thu Cúc (2004), sùng khoai lang gây hại tại Việt Nam có tên khoa học là Cylas formicarius Fabricius (hay còn gọi là bọ hà hoặc mọt khoai lang). Sùng khoai lang thuộc: Lớp (Class): Insecta Bộ (Order): Coleoptera (Cánh cứng) 4 Họ (Family): Curculionidae (Vòi voi) Giống (Genus): Cylas Loài (Species): Formicarius Ngoài ra, loài này còn gây hại trên một số cây thuộc họ bìm bìm (Convolvulaceae) như rau muống biển. Chi Cylas có 3 loài đều gây hại trên khoai lang là: Cylas formicarius, Cylas puncticollis và Cylas bruneus. Cylas bruneus có cơ thể nhỏ và màu sắc không đồng nhất, Cylas formicarius có bụng màu đen hơi xanh và ngực có màu nâu đỏ, còn Cylas puncticollis thì dễ phân biệt nhất vì cơ thể chỉ toàn màu đen và có kích thước lớn hơn hai loài kia (Ames et al, 1997). 1.2.3 Đặc điểm hình thái và sinh học a. Trứng Sùng khoai lang cái có thể để từ 2-4 trứng/ngày, trứng được đẻ rải rác trong các hốc (do thành trùng đục trong quá trình ăn) và trên củ sâu bên trong lòng đất do chúng có kích thước khá nhỏ nên có thể len lỏi theo các kẽ nứt của đất. Trứng có kích thước nhỏ, bóng, hình bầu dục và dài từ 0,5-0,7 mm. Lúc mới đẻ trứng có màu trắng sữa, thời gian ủ trứng từ 5-10 ngày, trước khi trứng nở có màu vàng (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). Theo Capinera (1998), vào mùa hè thì giai đoạn trứng kéo dài 5-6 ngày, khi thời nhiệt độ giảm xuống vào mùa đông thì giai đoạn trứng kéo dài hơn, kéo dài khoảng 11-12 ngày. b. Ấu trùng Theo Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen (2011), ấu trùng sùng khoai lang có hình ống dài, 2 đầu thon nhỏ, đầu nâu, thân trắng, không chân, bụng chia đốt rõ ràng, dài khoảng 5-8,8 mm. Ấu trùng có 5 tuổi, phát triển từ 5-15 ngày. Nhiệt độ là nhân tố ảnh hưởng chủ yếu đến tốc độ phát triển của ấu trùng. Trong điều kiện nhiệt độ là 30oC thì sự phát triển của ấu trùng sùng khoai lang diễn ra khoảng 10 ngày, khi nhiệt độ giảm xuống còn 24 oC thì sự phát triển của ấu trùng sùng khoai lang diễn ra khoảng 35 ngày (Capinera, 1998). Như vậy, nhiệt độ càng tăng thì thời gian phát triển của ấu trùng sùng khoai lang càng giảm. 5 c. Nhộng Ấu trùng sùng khoai lang hóa nhộng ngay trong đường đục. Thời gian nhộng phát triển từ 4-10 ngày. Nhộng của sùng khoai lang thuộc dạng nhộng trần, dài từ 4-8 mm, lúc đầu cơ thể có màu trắng sữa về sau chuyển sang màu vàng. Vòi của nhộng cúi gập về phía mặt bụng. Ở múi bụng có một đôi gai lồi, hơi cong (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). d. Thành trùng Hình 1.1 Thành trùng sùng khoai lang C. formicarius (nguồn Capinera, 1998) Thành trùng c. formicarius dài từ 5-8 mm, mình thon, chân dài, trông tựa như kiến. Đầu đen, miệng dài, mắt kép hình bán cầu hơi lồi ra hai bên đầu. Râu đầu có 10 đốt. Ngực, đốt cuối râu và mắt có màu đỏ. Bụng và cánh màu xanh đen bóng. Đốt cuối râu của thành trùng đực hình ống dài, trong khi của thành trùng cái thì phình to, có hình trứng. Ngực trước có chiều dài gắp đôi chiều rộng. Đốt đùi nở to, thành trùng ít khi bay, chủ yếu là di chuyển bằng cách bò vào chiều mát và ban đêm. Lúc mới vũ hoá, thành trùng màu trắng sữa và ở trong củ khoai từ 2 - 3 ngày, khi cánh đủ cứng và cơ thể đủ mạnh sùng mới chui ra ngoài. Khoảng 6-8 ngày sau khi vũ hoá, thành trùng bắt đầu bắt cặp và 2-3 ngày sau đó đẻ trứng, thành trùng cái sống khoảng 100 ngày và đẻ khoảng 200 trứng. Chúng có khả năng nhịn đói rất lâu (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). Theo Capinera (1998), trong điều kiện cùa phòng thí nghiệm, ớ 15oC thành trùng sùng khoai lang có thể sống hơn 200 ngày nếu được cung cấp đầy đủ thức 6 ăn và khoảng 30 ngày nếu thiếu thức ăn. Ở 30 oC thành trùng sống khoảng 90 ngày nếu có thức ăn và 8 ngày nếu thiếu thức ăn. 1.2.4 Tập quán sinh sống Sùng khoai lang sau khi vũ hóa được 6-8 ngày bước vào thời kỳ giao phối và sau đó 2 - 3 ngày mới đẻ trứng. Thành trùng đẻ trứng trên củ, một ít có thể đẻ vào đoạn thân sát gốc, chúng dùng miệng đục một lỗ nhỏ trên bề mặt củ rồi đẻ trứng vào đấy, thông thường mỗi lỗ chỉ đẻ 1 trứng. Sau đó dùng nước bọt lấp lỗ trứng lại. Trong một củ khoai, nhiều ấu trùng có thể cùng chung sống và các ấu trùng này không di chuyền sang củ khoai khác trong suốt giai đoạn phát triển. Nhộng được hình thành ngay bên trong đường đục của củ khoai (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). Theo Nguyễn Đức Khiêm (2006), kết quả nghiên cửu ở nước ta và một số nước Đông Nam Á cho thấy tình hình phát sinh phát triền của loài sâu hại này có quan hệ chặt chẽ với điều kiện khí hậu thời tiết, đất đai và chế độ canh tác. Kết quả theo dõi cho thấy thời tiết khô và nóng là điều kiện thích hợp cho loài sâu này phát sinh và phát triển mạnh. Thời gian các giai đoạn phát triển của sùng khoai lang ở điều kiện nhiệt độ 25 oC là 46 ngày và 30oC là 31 ngày. Nhộng vũ hóa rải rác trong ngày. Nếu nhiệt độ thấp khoảng 10-15oC, sùng khoai lang vẫn nằm yên trong đường đục. Ở nhiệt độ cao (khoảng trên dưởỉ 30oC), sùng khoai lang hoạt động mạnh nhất. Sùng khoai lang di chuyển chủ yếu bằng hình thức bò, nhiệt độ càng cao sùng khoai lang bò càng nhanh. Những ngày mưa chúng thường ngưng hoạt động. Khi thời tiết nóng nực, chúng có thể bay một quảng ngắn. Sùng khoai lang có xu tính yếu đối với ảnh sáng, ban ngày chúng lẫn trốn các tia nắng trực xạ. Loài này cũng có hành vi giả chết như nhiều loài cánh cứng khác (Nguyễn Đức Khiêm, 2006). Sự giả chết của thành trùng sùng khoai lang chịu ảnh hưởng của việc thiếu thức ăn. Khi thành trùng sùng khoai lang không đói, tỉ lệ giả chết cao hơn đáng kể so với sùng đói ở cả hai giới tính đực và cái. Tuy nhiên, con cái cần giai đoạn thiếu ăn dài hơn con đực để giảm tỉ lệ chết. Sự 7 khác nhau này là do sự khác nhau về khả năng chịu đựng đối với sự thiếu thức ăn, con đực chết sớm hơn con cái khi bị đói (Miyatake, 2001). 1.2.5 Cách gây hại và triệu chứng gây hại Theo Capinera (1998), trên 90% ấu trùng được tìm thấy ở 15 cm trên củ và 10 cm trên dây. Vào đầu vụ, số lượng ấu trùng được tìm thấy ở dây và củ là tương đương nhau, nhưng vào cuối vụ thì hầu hết là trên cù. Ở ngoài đồng, sự phân bố của sùng thường theo tập hợp. Thành trùng thường ở mặt dưới lá, ăn biểu bì thân, lá và bề mặt củ tạo nên những lỗ thủng hình tròn nhỏ (Nguyễn Đức Khiêm, 2006). Theo Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen (2011), cả thành trùng và ấu trùng đều gây hại đối với cây khoai lang. Thành trùng cỏ thể ăn gặm phần thân, mầm hoặc lá khoai lang non, nhưng chúng thích nhất là củ khoai lang, vì vậy những củ lồi lên khỏi mặt đất hay lộ qua khe đất nứt thường dễ bị thành trùng tấn công. Các vết đẻ trứng của thành trùng sẽ là nơi xâm nhập của nấm và vi khuẩn, làm dây khoai bị suy yếu. Ấu trùng là đối tượng gây thiệt hại chủ yếu do chúng phát triển bên trong củ nhưng năng suất giảm còn do sự gảy hại của cả ấu trùng và thành trùng trên dây khoai (Sutherland, 1986 trích dẫn từ Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). Sùng khoai lang là loài sâu hại dưới đất, điều kiện khô hạn rất thuận lợi cho sự hoạt động của chúng. Điều kiện khô hạn còn làm đất nứt nẻ, thành trùng có thể tìm đến các củ khoai để đẻ trứng một cách dễ dàng (Hà Quang Hùng, 2005) Nếu bị sùng tấn công khi củ còn non thì củ sẽ bị lép, không phát triển được, năng suất giảm. Nếu bị lấn công khi củ đã lớn, năng suất không giảm nhiều nhưng mất phẩm chất do phần thịt chung quanh đường đục bị chuyển sang màu tím, có mùi hôi, vị đắng nên không thể ăn được và cũng không thể làm thức ăn cho gia súc nên gây tổn thất rất lớn cho người trồng khoai (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2011). 8 Để phản ứng lại sự gây hại của sùng khoai lang, cù khoai lang sẽ sinh ra chất terpenes có mùi rất khó chịu làm cho củ khoai không ăn được dù mức terpenes thấp và mức độ hư hỏng vật chất thấp (Mai Thạch Hoành, 2001). Sau khi thu hoạch, ấu trùng vẫn tiếp tục tấn công khoai lang tồn trữ do chúng được nở từ trứng đã có sẵn trong củ khoai hoặc đôi khi do thành trùng tấn công trong kho. Ngoài ra, việc sử dụng các hom khoai trồng trên ruộng bị sùng hại từ vụ trước cũng có thế lây lan sang vụ sau (Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2004). Ngoài ra, các tàn dư của cây khoai (củ, thân) ở vụ trước sẽ là nơi mà sùng có thể tiếp tục sinh sống và trở thành nguồn lưu tồn và lây lan cho vụ sau. Vì vậy, những ruộng khoai lang được canh tác liên tục trong nhiều năm thường bị sùng gây hại rất nặng trong khi trên đất mới được trồng khoai vụ đầu, thường ít bị sùng phá hại hơn (Nguyễn Đức Khiêm, 2006). Miyatake (1995) đã ghi nhận khoảng cách phân tán cùa sùng ở điều kiện ngoài đồng khi không có trồng khoai lang là lớn hơn so với tại các vùng có trồng khoai lang. Khoảng cách di chuyển lớn nhất của sùng ở nơi có trồng khoai lang là 500 m trong khi đó tại nơi không trồng khoai lang lại lên đến 1.000 m. 1.2.6 Thiên dịch của sùng khoai lang Kiến và một vài loài ong ký sinh được xem như là thiên địch của sùng khoai lang. Theo kết quả nghiên cứu của Huỳnh Thị Ngọc Linh (2010) thì thành phần thiên địch trên ruộng khoai lang khá phong phú bao gồm 10 loài thiên địch như kiến ba khoang, nhện lùn, nhện chân dài, bọ rùa, nhện lưới, nhện linh miêu, nhện sói, nhện nhảy, bọ xít mù xanh, bọ đuôi kiềm. Trong đó, nhện lùn và kiến ba khoang là 2 loài thiên địch quan trọng trên ruộng khoai lang. Một số nghiên cứu đã ghi nhận có sự xuất hiện của nấm trắng (Beauveria bassiana). Dưới điều kiện ẩm độ và mật độ sùng cao, nấm Beauveria bassiana có thể khiến sùng chết với tỷ lệ khá cao, nhưng ở điều kiện ngoài đồng thì nấm này lại ít khi phát triển thành dịch trên sùng (Capinera, 2006). 9 1.2.7 Biện pháp phòng trị Theo Dương Minh (1999), để phòng trị sùng khoai lang thường kết hợp một số biện pháp như sau: Sau khi thu hoạch xong, thu gom toàn bộ dây khoai và củ (nhất là những củ đã bị sùng gây hại) đưa ra khỏi ruộng để tiêu hủy nhằm hạn chế khả năng lưu tồn của sùng ở vụ sau. Nếu có điều kiện nên cho ruộng ngập nước vài ngày để tiêu diệt ấu trùng và nhộng nằm trong đất. Diệt ký chủ phụ có xung quanh ruộng khoai như các cây thuộc họ bìm bìm (Convolvulaceae). Thu hoạch củ sớm, tồn trữ cẩn thận và vệ sinh kho vựa. Không dùng dây khoai bị nhiễm sùng làm giống cho vụ sau. Nếu điều kiện cho phép thì cứ sau vài vụ trồng khoai lang nên luân canh một vài vụ với cây rau màu khác, tốt nhất là với cây trồng nước như lúa. Trồng luống đủ lớn, vun gốc lấp các vết nứt trên luống đề bít đường chui xuống củ đẻ trứng của con trưởng thành, tưới nước đủ ẩm nhất là trong giai đoạn củ phình to đề đất không bị nứt nẻ, có thể sử dụng nấm ký sinh để phòng trừ sùng khoai lang (Nguyễn Văn Đĩnh, 2005). Ngoài ra, còn có thể sử dụng một số biện pháp để quản lỷ sùng khoai lang như: sử dụng chất dẫn dụ sinh học thu hút con trưởng thành đực để diệt chúng, làm cho con cái không được thụ tinh, trứng không nở được nhằm mục đích hạn chế mật số sùng gây hại; xử lý hom giống trước khi trồng bằng cách nhúng hom trong dung dịch thuốc trừ sâu hoặc nấm Beauveria bassiana trong 30 phút (Nguyễn Đức Khiêm, 2006). 1.3 NẤM XANH (Metarhizium anisopliae) 1.3.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố Năm 1878, nhà khoa học người Nga I.I Metchnikov khi nghiên cứu về loài sâu non bộ cách cứng hại lúa mì Anisoplia austriaca đã phát hiện thấy loài nấm bào tử lục cương có thể gây chết hàng loạt sâu này. Ông xác định loài nấm này 10 có tên khoa học là Entomophthora anisopliae. Về sau, Sorokin kiểm tra lại và thấy rằng loài nấm này không thuộc giống Entomophthora mà thuộc giống Metarhizium (trích dẫn từ Lâm Tổ Oanh, 2005). Nấm Metarhizium anisopliae thuộc ngành phụ lớp nấm bất toàn (Deuteromycetes), giống Metarhizium (theo hệ thống phân loại nấm của G. C. Anisworth, 1996; 1970; 1971). Nấm M. anisopliae hiện diện rất phổ biến trong tự nhiên, có thể được phân lập từ trong đất hay từ xác côn trùng chết. Ở những nơi không có côn trùng, người ta cũng phân lập được nấm M. anisopliae. Tại những nơi có điều kiện thời tiết rất khắc nghiệt (Đức), trên những khu đất ở rừng sau khi bị đốt cháy, cả trong những chất thải hữu cơ (chuẩn bị ô nhiễm) hoặc trong trầm tích ở sông chứa đất đằm lầy trồng những loại cây đước, hoặc trong tổ của một số loài chim và cả trong rễ của cây dâu tây cũng phân lập được nấm M. anisopliae (Phạm Thị Thùy, 2004). 1.3.2 Đặc điểm Nấm Metarhizium anisopliae là loại nấm cỏ màu xanh lục hoặc xanh nên còn được gọi là nấm lục cương. Sợi nấm phát triển trên bề mặt côn trùng có màu trắng đến hồng, cuống sinh bào từ ngắn mọc tỏa tròn trên đám sợi nấm dày dặc. Bào tử trần dạng hình que có kích thước 3,5x6,4x7,2 µm, màu từ xám đến oliu lục. Bào tử xếp thành chuỗi khá chặt chẽ. Khi quan sát bằng mắt thường, người ta có thể nhìn thấy bào tử được tạo ra bên trên bề mặt cơ thể côn trùng, bào tử có chiều rộng khoảng 3-4 µm, dài khoảng 20µm, chia thành nhiều tế bào ngắn, trong tế bào có thể thấy rõ nhiều giọt mờ (Phạm Thị Thùy, 2004). Nấm M. anisopliae không thể sinh trường tốt trên nền cơ chất không có kitin. Chúng sống được ở nhiệt độ thấp đến 8oC. Nhiệt độ thích hợp cho sự nảy mầm của bào tử là 25-30oC và sẽ bị chết ở 49-55oC. Ở nhiệt độ dưới 10oC và trên 45 oC thì nấm thường không hình thành bào tử. Nhiệt độ cho nấm phát triển tốt nhất là 25oC. pH thích hợp là 6 và có thể dao động trong khoảng 3,3-8,5. Nơi tích lũy nhiều CO2 và thiếu O2, chúng có thể sống tới 445 ngày (Phạm Thị Thùy, 2004). 11 Nấm Metarhizium anisopliae có khả năng phân giải tinh bột, xenluloza và kitin (lông và da côn trùng). Nấm Metarhizium anisopliae có một số ngoại độc tố đó là các sản phẩm thứ cấp vòng peptid, L-prolyn, L-leucin, anhydride, L-prolynL-valine anhydride và Desmethyl Destruxin B. Destruxin gây chán ăn và gây độc cho côn trùng sau khi hấp thu vào da, một số destruxin làm tê liệt côn trùng, một số khác có thể ức chế miễn dịch. Độc tố thường được tích lũy vào cuối giai đoạn sinh trưởng của nấm khi các nguồn thức ăn và năng lượng đã cạn dần (Phạm Thị Thùy, 2004). 1.3.3 Cơ chế tác động Những bào tử của nấm M. anisopliae thường bay trong không khí. Khi dính vào côn trùng, bào tử bám chặt vào da và tấn công theo cơ chế bám dính không chuyên biệt thông qua tính kỵ nước của vách tế bào (Bocias, 1991; trích dẫn từ Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). Sau khi đã tiếp xúc với da côn trùng, gặp được điều kiện thích hợp thì bào tử có thể tạo ra các cấu trúc xâm nhiễm như ống mầm, túi ngoại bào hoặc túi áp suất từ đó xâm nhiễm vào cơ thể côn trùng qua lớp kitin. Sự xâm nhập của nấm vào trong biểu bì thường là do sự phối hợp của các enzyme như exoprotease, endoprotease, lipase, chitinase và chitobiase và cơ chế cơ học. Nấm tiết ra các loại men làm mềm vỏ kitin và tạo ra các lổ thủng tại nơi bào từ mọc mầm và từ đó bào tử sẽ xâm nhập vào cơ thể côn trùng. Sau dó, nấm tiếp tục phân nhánh tạo nên một mạng sợi nấm chằng chịt bên trong cơ thể côn trùng. Côn trùng phải huy động hết các tế bào bạch huyết (lympho cyte) để chống đỡ. Tuy nhiên, các độc tố Destruxin A và B của nấm Metarhizium anisopliae đã làm cho tế bào bạch huyết của côn trùng không chống đỡ nổi nên lần lượt bị hủy diệt. Khi các tế bào bạch huyết bị độc tố của nấm tiêu diệt hết cũng là lúc côn trùng chết, cơ thế cứng lại do các sợi nấm đan xen lại với nhau (Bocias and Penland, 1998: Butt and Copping, 2000 trích dẫn từ Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). Giai đoạn phát triển của nấm từ khi xâm nhiễm vào cơ thể côn trùng cho đến khi côn trùng chết là giai đoạn sống ký sinh của nấm. Trong giai đoạn này, nấm thường tạo ra rất nhiều sợi nấm ngắn, chúng phân tán khắp cơ thể 12 theo dịch máu. Trước khi nấm có thể sinh sôi nẩy nở trong máu, nó thường phải vượt qua phản ứng phòng vệ của côn trùng. Tuy nhiên, sự tạo độc tố của nấm có thể làm suy yếu phản ứng tự vệ cùa côn trùng. Côn trùng có thể phản ứng với sự xâm nhập của nấm bằng cách sử dụng thể dịch như phenoloxidase. Pectin, peptide và protein hoặc sử dụng cơ chế của vách tế bào như thực bào hoặc kết nang. Côn trùng chết có thể là do kết quả của sự làm giảm dinh dưỡng, làm tắt nghẽn cơ thể hoặc sự xâm lấn vào các cơ quan và sự tác động của các độc tố. Sau khi côn trùng chết, nấm thường phát triển hoại sinh trong cơ thể côn trùng. Dưới điều kiện thích hợp, nấm tạo ra bào tử hoặc mọc thành sợi ra ngoài bề mặt cơ thể vật chủ. Sau đó, các bào từ được tạo thành trên lớp sợi nấm ở bề mặt cơ thể vật chủ bị phóng thích đi. Theo Phạm Thị Thùy (2004), khi côn trùng bị nấm M anisopliae ký sinh, nấm sẽ phát triển tại những vị trí bào tử bám vào, bên trong thân côn trùng sẽ tạo nên một vệt đen, không có hình thù nhất định. Ngoài ra, cũng có trường hợp khi bị nấm M. anisopliae tấn công, cơ thể côn trùng bị ngắn lại hoặc bị khô do hệ thống tiêu hóa bị tổn thương hoặc do thiếu thức ăn. 1.3.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng và phát triển của nấm xanh Metarhizium anisopliae a. Nhiệt độ và ẩm độ Nhiệt độ và ẩm độ là những nhân tố quan trọng cho sự sinh trưởng và phát triển của nấm Metarhizium anisopliae. Theo kết quả nghiên cứu của Phạm Thị Thùy (2004), nhiệt độ tối ưu cho nấm M. anisopliae phát triển là 25-30oC, nhiệt độ từ 30oC trờ lên nấm sinh trưởng giảm dần và trên 35oC nấm ngừng sinh trưởng. Độ ẩm thích hợp nhất của nấm M. anisopliae là 30-50%. b. Ánh sáng Ánh sáng có tác dụng xúc tiến bào tử nảy mầm và hình thành bào tử, mặt khác ánh sáng cũng có tác dụng ức chế và diệt nấm. Qua nhiều năm sản xuất nấm côn trùng, viện Bảo vệ thực vật đã xác định nấm Metarhizium anisopliae phát triển tốt trong điều kiện ánh sáng yếu, chỉ cần một lượng ánh sáng nhỏ trong ngày với thời gian 6-8 giờ cũng đủ cho nấm phát 13 triển tốt. Vì vậy, phòng nuôi cấy nấm phải được che ánh sáng mặt trời để hạn chế tia tử ngoại (Phạm Thị Thùy, 2004). c. Độ thoáng khí Nấm Metarhizium anisopliae thuộc loại nấm hiếu khí, khi nấm phát triển chúng đòi hỏi điều kiện có hàm lượng oxy thích hợp. Phạm thị Thùy (2004) cho rằng, phạm vi thích hợp cho nấm Metarhizium anisopliae phát triển là 0,3-0,7 m3 môi trường/m3 không khí. d. Hàm lượng nước Nấm Metarhizium anisopliae đòi hỏi lượng nước thích hợp, nếu quá khô hoặc quá ẩm nấm đều phát triển không tốt, tỉ lệ nước thích hợp trong môi trường để nấm phát triển tốt nhất là 30-50%. e. pH Loài nấm M. anisopliae ưa môi trường axit và phát triển thích hợp nhất ở độ pH từ 5,5-6. Tuy nhiên, theo Trần Văn Mão (2002), nấm M. anisopliae có phạm vi pH là 6,9-7,2. Ngoài ra, các yếu tố thành phần môi trường, phương pháp nuôi cấy cũng ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và phát triển của nấm Metarhizium anisopliae. 1.4 NẤM TRẮNG (Beauveria bassiana) 1.4.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố Trong những năm từ 1885-1890, tại các trung tâm nuôi tầm ở Pháp, nhà khoa học Louis Paster đã phát hiện ra những loài vi sinh vật gây bệnh tầm vôi là nấm Beauveria bassiana (Phạm Thị Thùy, 2004). Xếp theo hệ thống phân loại của G.C. Anisworth 1996; 1970; 1971 thì nấm Beauveria bassiana thuộc ngành phụ lớp nấm bất toàn (Deutermycetes) giống Beauveria. Loài Beauveria bassiana là loài điển hình trong chi nấm bạch cương Beauveria (Phạm Thị Thùy, 2004). 14 1.4.2 Đặc điểm Nấm Beauveria bassiana hay còn được gọi là nấm bạch cương có sợi từ màu trắng đến màu kem pha một ít màu đỏ, da cam, đôi khi pha một ít màu lục. Nấm có thể tiết vào môi trường sắc tố màu vàng, màu đỏ nhạt hoặc màu xanh da trời. Sợi nấm phân nhánh, có vách ngăn ngang, chiều dài khoảng từ 3-5 µm phát triển dày đặc trên môi trường, về sau xuất hiện chi chít các cuống sinh bào tử. Đặc điểm của loài nấm này là có sợi xốp, cuống bào tử trần đứng riêng rẽ hay tụ lại thành từng đám. Sợi nấm có thể phân nhánh hoặc không phân nhánh, hình ống hoặc hình bình với chiều dài không đều nhau. Trên cuống có những nhánh nhỏ mang bào tử trần (Phạm Thị Thùy, 2004). Năm 1969, Hamill và ctv. đã xác định được độc tố diệt côn trùng của nấm Beauveria bassiana và đặt tên cho độc tố này. Butt và Copping, (2000) đã xác định bản chất là vòng peptide có sắc tố màu vàng tenelin và basianin, những sắc tố này có thể là do hydroxylat progesteron và những phần tách nhỏ ra từ testosteron sinh ra (trích dẫn Bùi Thị Ngọc Liễu, 2010). Nấm Beaưveria bassiana (Hypocreales, Clavicipitaceae) có rất nhiều chủng và phổ ký chủ của nó rất rộng. Sự khác nhau về độ độc của một chủng Beaưveria bassiana đối với những loài côn trùng khác nhau thì không nhiều hơn so với sự khác nhau về quần thể Beauveria bassiana bên trong một loài côn trùng đơn độc. Beauveria bassiana không lựa chọn ký chủ chuyên biệt chính xác, nó có thể được sử dụng như một loại nấm ký sinh côn trùng phổ rộng trong việc chống lại nhiều loài côn trùng gây hại (Uma Devi et al., 2008 trích dẫn từ Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). 1.4.3 Cơ chế tác động Những bào tử nấm bạch cương khi dính vào cơ thể côn trùng, gặp điều kiện thích hợp sẽ nảy mầm và mọc thành sợi nấm đâm xuyên qua vỏ kitin. Chúng phát triển ngay trong cơ thể côn trùng cho đến khi xuất hiện các tế bào nấm đầu tiên có dạng chuỗi ngắn như nấm men. Lúc này, côn trùng huy động hết tế bào bạch huyết (lympho-cyte) nhưng nấm bạch cương đã tiết ra độc tố beauvericin, 15 proteaza và một số chất khác làm cho tế bào bạch huyết của côn trùng lần lượt bị huỷ diệt. Khi đó, côn trùng chết, cơ thể bị cứng lại là do các sợi nấm đan xen lại với nhau (Phạm Thị Thùy, 2004). 1.5 NẤM TÍM (Paecilomyces sp.) 1.5.1 Nguồn gốc, phân loại, phân bố Năm 1983, Riley phát hiện một loại nấm ký sinh trên côn trùng họ Ngài đêm ở Bắc Mỹ và đặt tên là Botrytis rileyi và Spicaria rileyi. Năm 1903, Maublanc cho rằng chúng không giống 2 chi trên và Nomura đặt tên mới là Nomuraea. Ông chia ra 2 loài trong chi này là Nomuraea rileyi có khuẩn lạc màu xanh, cuốn bào tử mọc đơn, bào tử hình bầu dục dài hoặc hình ống; và loài Nomuraea atypicola có cuốn bào tử đa bào, có khuẩn lạc màu tím, bào tử hình ống hơi cong. Nấm này có thể gây bệnh cho các loài côn trùng bộ cánh vẩy (trích dẫn từ Trần Văn Mão, 2002). Nấm Paecilomyces sp. được phân lập trên thân côn trùng ngủ nghỉ trong đất dễ dàng tìm thấy ở đất tơi xốp, phân hữu cơ và thức ăn, xác bã hừu cơ, dư thừa thực vật. Trên thế giới, nấm Pacilomyces sp. có rất nhiều loài với sự phân bố rất rộng trên rất nhiều loài thuộc bộ cánh cứng, cánh nửa cứng, cánh màng và cánh vẩy (Trần Văn Mão, 2002). 1.5.2 Đặc điểm Nấm Paecilomyces sp. có khuẩn lạc dạng thảm nhung, bó sợi, màu trắng, hồng nhạt đến tím đinh hương, có khi màu nâu vàng và nâu xám, thỉnh thoảng có màu lục nhạt. Cuống bào tử phân sinh phân nhánh, mức độ phân nhánh lớn, gốc cuống dạng phình to, phía trên nhỏ và uốn cong. Cuống bình sắp xếp dạng vòng hoặc không đồng đều. Bào tử phân sinh đơn bào, không màu, mọc thành chuỗi, hình bầu dục, bề mặt nhẵn hoặc có gai (Trần Văn Mão, 2002). Theo Phạm Thị Thuỳ (2004), Stalhers xác định nấm Paecilomyces sp. thích hợp ở nhiệt độ 28oC và ẩm độ 80-90%. Trong quá trình phát triển, nấm Paecilomyces sp. cần nhiều dưỡng chất, nếu chất dinh dưỡng bị thiếu sẽ làm hạn chế khả năng gây bệnh của nấm đối với côn trùng. 16 1.5.3 Cơ chế tác động Cách xâm nhiễm của nấm Paecilomyces sp. vào cơ thể côn trùng cũng tương tự như nấm Metarhizium anisopliae và nấm Beauveria bassiana. Các loài nấm này xâm nhập vào cơ thể côn trùng thông qua áp lực cơ giới và nhờ tác dụng của các enzyme để phân giải và chọc thủng biểu bì của côn trùng làm cho côn trùng chết. Những enzyme phân giải gồm protease, lipoase và chitinase (Stathers et al, 1999 trích dẫn Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). 1.6 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU ỨNG VÀ DỤNG NẤM KÝ SINH TRÊN SÙNG KHOAI LANG 1.6.1 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Metarhizium anisopliae Nhiều loài nấm Metarhizium anisopliae trong chi có khả năng diệt côn trùng thuộc họ Elaleridae và Curculionidae thuộc bộ cánh cứng Coleoptera. Trên thế giới đã có nhiều nước sản xuất nấm M. anisopliae có khả năng thương mại hóa trên thị trường điển hình như Bio-Path® được sử dụng trong phòng trừ mối tại Mỹ, BioGreen® được khuyến cáo phòng trừ bọ hung đầu đỏ ở úc và Metaquino dùng phòng trừ muỗi sốt rét Lubilose, châu chấu Schistocerra gregaria (Yasuhisa Kunimi, 2005 trích dẫn từ Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). Tại Việt Nam, cũng có nhiều nghiên cứu về các loại nấm ký sinh côn trùng để phòng trừ sâu hại, điển hình như tại Tiền Giang, Sóc Trăng, Bạc Liêu đã sử dụng nấm xanh để phòng trừ rầy nâu, bọ xít, bọ cánh cứng hại dừa đạt hiệu quả cao. Tại Cần Thơ, từ năm 2005-2007 đã sử dụng nấm Metarhizium anisopliae để phòng trị sâu ăn tạp, rầy mềm đạt hiệu quả khá cao trên 70% sau 7-12 ngày (Trần Văn Hai và ctv., 2008). Chế phẩm nấm xanh cho hiệu quả phòng trị sâu xếp lá trong điều kiện ngoài đồng, làm mật số sâu xếp lá giảm xuống một cách đáng kể và hiệu lực của thuốc sinh học tăng khá cao trên 40% sau 14 ngày phun và kéo dài theo thời gian do thuốc có thời gian tích lũy được mật số nên tồn tại ngoài môi trường để kiểm soát sâu hại. 17 1.6.2 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Beauveria bassiana Theo Milner (1991), nấm Beauveria bassiana đã được sử dụng ở rất nhiều nước trên thế giới để phòng trừ nhiều đối tượng sau hại cây trồng. Năm 1998, một số nhà khoa học Nhật Bản đã phòng trừ dòi hại củ cải đường bằng nấm Beauveria bassiana ngoài ra còn có nhiều nghiên cứa và ứng dụng các chế phẩm nấm Beauveria bassiana ở các nước như Pháp, Mĩ, Ấn Độ đã sản xuất nấm Beauveria bassiana có khả năng thương mại hóa trên thị trường: Boverin do hãng GlavmiKrobioprom (Nga) sản xuất với công dụng diệt bọ hại khoai tây, Botani Gard của công ty Arysta Lofe Science Co. (Nhật Bản) với công dụng phòng trừ rấy mềm, sâu tơ… Beauveria bassiana là loài nấm ký sinh chiếm ưu thế nhất được phân lập trên Cylas spp. (Carruthers and Soper, 1987; Jansson, 1992; Phạm Thị Thùy, 2004) và cho hiệu quả ký sinh sùng khoai lang ở cả giai đoạn ấu trùng, thành trùng và nhộng (Jansson 1992; Lagnaoui et al., 2000). Tại Việt Nam, Nguyễn Văn Đĩnh et al. (2005) ghi nhận nấm Beauveria bassiana là loài ký sinh phổ biến trên bọ hà (sùng khoai lang) trưởng thành trong các tháng xuân hè trên các ruộng khoai tại bốn tỉnh Hà Nội, Hà Tây, Bắc Giang và Thanh Hóa. Thuốc vi nấm Beauveria bassiana được rất nhiều nước trên thế giới như Mỹ, Canada, Anh, Úc, Philippines và Trung Quốc đã được ứng dụng trên nhiều loại cây trồng để phòng trừ nhiều đối tượng sâu hại cây trồng thuộc bộ cánh vảy (Lepidoptera), bộ cánh cứng (Coleoptera), bộ cánh thẳng (Orthoptera) đặc biệt là các loại sâu hại cây rừng như sâu róm thông, bọ hại dừa, châu chấu...(Rombach và Agudu, 1998; Milner, 1991 được trích dẫn bởi Phạm Thị Thùy, 2004). Tại Việt Nam, Beauveria bassiana đã được sử dụng ở nồng độ 3-5 x 106-108 bào tử/ml để phòng trừ sùng khoai lang đạt hiệu lực từ 58,9% đến 75,6% sau 710 ngày phun và phần lớn sùng khoai lang chết đều có sự hiện diện của Beauveria bassiana. 18 1.6.3 Một số nghiên cứu ứng dụng của nấm Paecilomyces sp. Theo Trần Văn Mão (2002), Liang (1981), đã phân lập được nấm Paecilomyces sp. Nấm này được ký sinh trên nhiều loài thuộc bộ cách cứng (Coleoptera), bộ cánh nữa cứng (Hemiptera), bộ cánh màng (Hymenoptera), bộ cánh vảy (Lepidoptera) và bộ hai cánh (Diptera). Ngày nay Nhật Bản, Mỹ, Ấn Độ và Bỉ đã sản xuất nấm Paecilomyces fumosoroseus có khả năng thương mại hóa trên thị trường và có tên thương mại là: PreFeRal, Priority, Pae-Sin để phòng trừ rệp sáp và rầy mềm (Yasuhisa Kunimi, 2005). 1.7 PHEROMONE 1.7.1 Định nghĩa, phân loại Theo Karlson và Luscher (1959), thuật ngữ pheromone là một từ ghép bắt nguồn từ hai chữ Hy Lạp: pherein có nghĩa là mang đi, truyền đi và hormone có nghĩa là kích thích. Pheromone là chất được sử dụng như những tín hiệu hóa học giữa các cá thể cùng loài, những chất này được tiết ra ngoài cơ thể côn trùng và có thể gây ra những phản ứng chuyên biệt cho những cá thể khác cùng loài (Nguyễn Thị Thu Cúc, 2009). Pheromone là một chất lỏng, dễ bay hơi trong điều kiện tự nhiên, tốc độ bay hơi và khuếch tán phụ thuộc vào tốc độ của gió, sự vận động của dòng khí hay dòng nước, nhiệt độ và ẩm độ. Trong môi trường tự nhiên, pheromone chỉ tồn tại ở một giới hạn nhiệt độ nhất định. Nhiệt độ càng cao, tốc độ khuếch tán và phân hủy càng nhanh (Bùi Công Hiển, 2002). Hầu hết, các pheromone được nghiên cứu cho thấy chúng là các alcol, este hoặc ete, một số khác là các alkaloid và dẫn xuất của alkaloid. Chúng có khả năng hòa tan trong một số dung môi hữu cơ như n-hexan, methyl, ethanol, petrol, chloroform, benzene, ether-etylic (Châu Nguyễn Quốc Khánh và Trương Thị Mỹ Lộc, 2008). 19 Dựa vào tác dụng sinh lý, sinh thái của pheromone đối với côn trùng và những đặc tính tồn tại ngoài tự nhiên mà pheromone được phân thành: pheromone đánh dấu (trail-making pheromone), pheromone báo động (alarm pheromone) và pheromone giới tính (sex pheromone) (Lê Văn Vàng, 2006). 1.7.2 Pheromone giới tính Pheromone giới tính (sex pheromone) là hóa chất tín hiệu được tiết ra ngoài môi trường để hấp dẫn sự bắt cặp của những cá thể khác giới trong cùng một loài. Có thể do thành trùng đực hay cái tiết ra, thông thường là do thành trùng cái tiết ra (Lê Văn Vàng, 2006). Do hoạt động như những hóa chất sinh học với tính chọn lọc cao và ở nồng độ rất thấp nên pheromone giới tính không gây ảnh hưởng đến môi trường sinh thái. Pheromone giới tính là một sự thay thế hiệu quả cho nông dược trong công tác quản lý sâu hại (Gibb et al., 2005; trích dẫn Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). 20 2 Chương 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 PHƯƠNG TIỆN 2.1.1 Thời gian và địa điểm Thời gian thực hiện: từ tháng 2 năm 2012 đến tháng 12 năm 2012. Địa điểm thực hiện: phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học, Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ. 2.1.2 Vật liệu và dụng cụ a. Dụng cụ - Hộp nhựa các loại, mụn sơ dừa. - Vải lượt, giấy thấm, bông gòn. - Kẹp gắp côn trùng. - Micro syringe, máy phun thuốc và một số dụng cụ cần thiết khác. b. Vật liệu  Khoai lang Khoai lang sử dụng trong quá trình thí nghiệm được mua tại các vựa khoai lang ở xã Thuận An, huyện Bình Minh. Chọn những củ khoai tốt, không bị nhiễm sùng để sử dụng trong các thí nghiệm  Sùng khoai lang Thu củ khoai lang bị sùng tấn công tại các ruộng khoai ở huyện Bình Tân Vĩnh Long về bảo quản trong rổ nhựa tại phòng thí nghiệm. Khi sùng đã vũ hóa và thoát ra bên ngoài, tách riêng sùng đực - cái để sử dụng cho các thí nghiệm. Thành trùng sùng khoai lang được nuôi trong hộp nhựa đậy kín bằng vải thoáng khí, bên trong có củ khoai lang sạch làm thức ăn. Đồng thời, rổ khoai cũng được dùng để hấp dẫn thành trùng sùng khoai lang đực thực hiện ở thí nghiệm 3 (khảo sát khả năng lây lan của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm). 21 Hình 2.1 Rổ khoai lang đã nhiễm sùng  Nguồn nấm ký sinh a) Nấm xanh (Ma) b) Nấm trắng (Bb) c) Nấm tím (Pae) Hình 2.2 Ba loại nấm ký sinh - Dung dịch nấm Metarhizium anisopliae (Ma), nấm Beauveria bassiana (Bb), nấm Paecilomyces sp. (Pae) Dung dịch bào tử nấm xanh (Ma), nấm trắng (Bb) và nấm tím (Pae) được lấy trực tiếp từ đĩa petri. Các đĩa nấm sau khi cấy khoảng 2 tuần, quan sát thấy bào tử đã mọc đều khắp đĩa và không bị nhiễm tạp thì có thể sử dụng trong thí nghiệm. Thu hết bào tử nấm bằng nước cất đã thanh trùng. Lọc lấy dung dịch bào tử nấm bằng 3 lớp lưới mịn. Xác định mật số bào tử bằng lame đếm Thoma. Mật số bào tử được tính bằng công thức như sau: Số bào tử = 4 x a x b x 106 (bào tử/ml) Trong đó: a: số bào tử trung bình/ô nhỏ nhất b: hệ số pha loãng 22 - Chế phẩm nấm xanh Sử dụng chế phẩm nấm xanh Ma do phòng thí nghiệm Nedo, bộ môn Bảo vệ thực vật, khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ cung cấp. Chế phẩm nấm xanh Ma có 2 dạng: dạng nấm tươi và dạng bột khô. Cách làm nấm tươi trong điều kiện phòng thí nghiệm: Nguyên vật liệu: gạo trắng (0,5kg/bọc), đĩa nấm nguồn Ma, bọc nilon 20x30 cm, nút bông gòn không thấm nước, giấy báo, dây thun và một số dụng cụ cần thiết khác. Chuẩn bị: ngâm gạo trong nước sạch 1 giờ trước khi vo sạch và để ráo nước. Sau đó cho vào các túi nilon kích thước 20x30 cm (0,5 kg gạo/bọc), buộc kín và thanh trùng bằng Autoclave ở 121 0C trong 30 phút, để nguội. Cách làm: cắt 1/4 đĩa nấm nguồn Ma ra thành nhiều mảnh nhỏ (khoảng 0,5 cm2) cho vào bọc gạo đã chuẩn bị, phía trên để nút bông gòn và buộc lại bằng giấy báo. Đem ủ bọc gạo trong điều kiện nhiệt độ từ 28-300C, thoáng mát và tránh ánh nắng trực tiếp. Để yên bọc chế phẩm trong 3 ngày đầu, từ ngày thứ 4 trở đi lắc bọc chế phẩm 1 lần/ngày để bào tử nấm phát triển đều khắp môi trường xốp bên trong bọc gạo. Sau 10-14 ngày nuôi cấy mật số bào tử có thể đạt được 10 8-109 bào tử/g sẽ được sử dụng trong các thí nghiệm. a) Dạng tươi b) Dạng bột khô Hình 2.3 Chế phẩm nấm xanh 23  Pheromone giới tính tổng hợp Pheromone giới tính của sùng khoai lang là hợp chất (Z)-3-Dodecenyl-(E)2-Butenoate (Z3-12:E2) được pha loãng trong n-hexane tinh khiết với tỉ lệ 1mg/10μl. Dùng micro syringe dung tích 25 μl hút 3μl dung dịch tổng hợp được cho vào ống cao su non. Sau khi dung môi bay hơi, ống cao su non trên không thêm vào bất cứ một chất nào khác được gói lại bằng giấy nhôm, hàn kín, dán nhãn và bảo quản ở 0oC cho đến khi sử dụng. Hình 2.4 Pheromone giới tính tổng hợp 2.2 PHƯƠNG PHÁP 2.2.1 Thí nghiệm 1: khảo sát hiệu lực của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb và nấm tím Pae đối với thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Mục tiêu: xác định chủng nấm có hiệu lực cao đối với thành trùng sùng khoai lang trong điều kiện phòng thí nghiệm làm cơ sở ứng dụng phòng trị sùng khoai lang ở điều kiện ngoài đồng. Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, mỗi lặp lại quan sát 30 cá thể thành trùng và 4 nghiệm thức như sau: Nghiệm thức Thành phần A Dung nấm trắng Bb (108 bào tử/ml) B Dung dịch nấm tím Pae (108 bào tử/ml) C Dung dịch nấm xanh Ma (108 bào tử/ml) ĐC Nước cất thanh trùng 24 Cách tiến hành: cho khoảng 50 thành trùng sùng khoai lang vào đĩa petri có chứa 10ml dung dịch nấm trắng Bb, sau 20 giây tiến hành vớt sùng ra chọn 30 cá thể khỏe bò ra ngoài cho vào 30 hộp nhựa nhỏ. Mỗi hộp sẽ bao gồm một mẫu giấy thấm nước để giữ ẩm, một miếng khoai lang nhỏ để làm thức ăn và một thành trùng sùng khoai lang đã được chủng nấm. Thực hiện tương tự đối với các nghiệm thức khác (đối chứng thay bằng nước cất). Hình 2.5 Bố trí thí nghiệm 1 Cách lấy chỉ tiêu: theo dõi và ghi nhận tỉ lệ sùng chết vào các ngày 3, 5, 7, 9, 11, 13, và 15 sau khi chủng nấm. Nhiệt độ, ẩm độ trong suốt quá trình thực hiện thí nghiệm. Hiệu lực của nấm ký sinh được tính theo công thức Abbott dựa vào tỉ lệ sùng chết. Độ hữu hiệu (%) = C T x 100 C Trong đó: C: tỷ lệ (%) thành trùng SKL sống ở nghiệm thức đối chứng T: tỷ lệ (%) thành trùng SKL sống ở nghiệm thức có xử lý nấm Xử lý số liệu: số liệu ghi nhận được nhập vào phần mềm Excel để tính độ hữu hiệu, sau đó phân tích thống kê bằng chương trình MSTATC. 2.2.2 Thí nghiệm 2: khảo sát ảnh hưởng của mật số bào tử nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Mục tiêu: xác định nồng độ bào tử nấm xanh Ma cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất. 25 Khảo sát hiệu quả của nấm xanh Ma ở các nồng độ khác nhau gồm 5 nghiệm thức được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại quan sát 30 cá thể. Nghiệm thức Thành phần A Dung dịch nấm xanh Ma 10 6 (bào tử/ml) B Dung dịch nấm xanh Ma 10 7 (bào tử/ml) C Dung dịch nấm xanh Ma 10 8 (bào tử/ml) D Dung dịch nấm xanh Ma 10 9 (bào tử/ml) ĐC Nước cất thanh trùng Cách tiến hành tương tự thí nghiệm 1. Cách lấy chỉ tiêu: theo dõi và ghi nhận tỉ lệ sùng chết vào các ngày 3, 5, 7, 9, 11, 13, và 15 sau khi chủng nấm. Nhiệt độ, ẩm độ trong suốt quá trình thực hiện thí nghiệm. Hiệu lực của nấm ký sinh được tính theo công thức Abbott dựa vào tỉ lệ sùng chết. 2.2.3 Thí nghiệm 3: khảo sát ảnh hưởng của các chủng nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Mục tiêu: xác định chủng nấm xanh Ma cho hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất trong điều kiện phòng thí nghiệm. Khảo sát hiệu quả của các chủng nấm xanh Ma gồm 4 nghiệm thức được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại quan sát 30 cá thể. Nghiệm thức Thành phần A Ma phân lập từ sùng khoai lang (10 8 bào tử/ml) B Ma phân lập từ bọ xít nhãn (108 bào tử/ml) C Ma phân lập từ bọ dừa (10 8 bào tử/ml) ĐC Nước cất thanh trùng Cách tiến hành tương tự thí nghiệm 1. 26 Cách lấy chỉ tiêu: theo dõi và ghi nhận tỉ lệ sùng chết vào các ngày 3, 5, 7, 9, 11 và 13 ngày sau khi chủng nấm. Nhiệt độ, ẩm độ trong suốt quá trình tiến hành thí nghiệm. Hiệu lực của nấm ký sinh được tính theo công thức Abbott dựa vào tỉ lệ sùng chết. 2.2.4 Thí nghiệm 4: khảo sát khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Mục tiêu: thí nghiệm được thực hiện nhằm khảo sát hiệu quả và khả năng lây lan của thành trùng sùng đực bị nhiễm nấm xanh Ma ở những dạng khác nhau được hấp dẫn bởi pheromone giới tính. Khảo sát khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong quần thể sùng khoai lang được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 4 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Nghiệm thức Thành phần A Pheromone + Dạng dd từ đĩa petri (108 bào tử/ml) B Pheromone + Dạng nấm tươi C Pheromone + Dạng bột khô ĐC Pheromone + Nước cất thanh trùng Mỗi lần lặp lại gồm 5 thành trùng sùng khoai lang đực đã tiếp xúc với pheromone và nhiễm nấm xanh ở các dạng khác nhau (đối chứng dùng nước cất) và 150 thành trùng khỏe chia đều vào 5 hộp nhựa (15x15x24 cm). Như vậy, mỗi hộp nhựa bao gồm 1 sùng khoai lang đực đã tiếp xúc với pheromone, nhiễm nấm xanh Ma và 30 thành trùng sùng khỏe mạnh chưa nhiễm nấm thoát ra từ củ khoai. 27 Cách tiến hành: tiến hành hấp dẫn sùng khoai lang đực và lây nhiễm nấm bằng cách thực hiện bẫy như sau: Hình 2.6 Bẫy pheromone giới tính tổng hợp hấp dẫn SKL và lây nhiễm nấm xanh Ma Hộp nhựa (12x12x18 cm) được cắt 3 cửa bẫy xung quanh hộp như hình trên, phần đáy hộp để dung dịch nấm xanh, nấm tươi, nấm bột xanh hoặc nước cất tùy từng nghiệm thức. Để bẫy gần rổ khoai lang nuôi sùng, đợi sùng bay vào tiếp xúc với pheromone và rơi xuống đáy hộp, sau đó bò ra bên ngoài bẫy thì dùng kẹp gắp vào hộp nhựa đã chuẩn bị trước gồm 30 thành trùng sùng khoai lang khỏe mạnh không bị nhiễm nấm, 1 củ khoai. Bên dưới đáy hộp rãi một lớp mụn sơ dừa thanh trùng bằng Autoclave ở 121oC trong 30 phút để giữ ẩm và tạo môi trường tương tự như trong tự nhiên. Cách lấy chỉ tiêu: theo dõi và đánh giá khả năng lây lan của các dạng nấm xanh thể hiện qua tỉ lệ sùng chết theo thời gian. Ghi nhận chỉ tiêu vào các ngày: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33 và 36 sau khi thả sùng đực vào. Nhiệt độ và ẩm độ trong quá trình thực hiện thí nghiệm. Hình 2.7 Bố trí thí nghiệm 4 28 2.2.5 Thí nghiệm 5: khảo sát khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) qua các hình thức xử lý khác nhau trong điều kiện phòng thí nghiệm. Mục tiêu: nhằm khảo sát hiệu quả và khả năng ký sinh gây chết thành trùng sùng khoai lang của nấm xanh Ma ở những dạng khác nhau. Khảo sát khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể sùng khoai lang được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức và 3 lần lặp lại. Nghiệm thức Thành phần A Dạng nấm tươi + rãi (2g/hộp) B Dạng nấm tươi hòa vào nước + phun (10 8 bào tử/ml, phun 20 giây, tương đương 5ml) C Dạng bột khô + rãi (1g/hộp) D Dạng bột khô hòa vào nước + phun (108 bào tử/ml phun 20 giây, tương đương 5ml) ĐC Nước cất thanh trùng + phun Cách tiến hành: tùy theo từng nghiệm thức mà tiến hành rãi hoặc phun các dạng nấm khác nhau vào lớp mụn sơ dừa đã thanh trùng bằng Autoclave ở 121oC trong 30 phút được nén chặt trong đáy hộp nhựa kích thước (15x15x24 cm) nhằm giữ ẩm và tạo môi trường tương tự trong tự nhiên, bên trên để một miếng khoai lang làm thức ăn. Sau đó cho vào hộp 30 con sùng khỏe mạnh không bị nhiễm nấm thoát ra từ củ khoai. Cách lấy chỉ tiêu: theo dõi và đánh giá khả năng ký sinh của các dạng nấm xanh Ma thể hiện qua tỉ lệ sùng chết do bị nhiễm nấm xanh Ma theo thời gian. Ghi nhận chỉ tiêu vào các ngày: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 và 24 sau khi xử lý nấm. Nhiệt độ và ẩm độ trong quá trình thực hiện thí nghiệm. 29 3 Hình 2.8 Bố trí thí nghiệm 5 30 Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hiệu lực của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb và nấm tím Pae đối với thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Bảng 3.1 Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. T: 31,3oC RH: 67,1% Nghiệm thức 3 Độ hữu hiệu (%) vào các ngày sau khi chủng (NSKC) 5 7 9 11 13 15 Nấm xanh Ma 43,42 a 92,68 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a Nấm trắng Bb 25,33 b 79,35 b 97,53 a 100 a 100 a 100 a 100 a Nấm tím Pae 21,71 b 25,33 c 27,23 b 27,23 b 27,59 b 27,59 b 31,39 b 0c 0d 0c 0c 0c 0c 0c 11,03 7,55 9,58 3,63 3,63 3,63 5,65 ** ** ** ** ** ** ** Đối chứng CV (%) Mức ý nghĩa Trong cùng một cột, các trung bình có cùng mẫu tự theo sau giống nhau thì không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1% qua phép thử DUNCAN Hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang (SKL) của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae được thể hiện ở bảng 3.1. Kết quả cho thấy cả ba loại nấm đều có khả năng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm ngay từ thời điểm 3 NSKC. Ở thời điểm 3 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức nấm xanh Ma cao nhất (43,42%) và khác biệt có ý nghĩa thống kê với 2 nghiệm thức nấm trắng Bb và nấm tím Pae ở mức ý nghĩa 1%. Ở thời điểm 5 NSKC, tỉ lệ thành trùng SKL chết ở nghiệm thức nấm trắng Bb và nấm tím Pae tăng rất nhanh. Nghiệm thức nấm xanh Ma có hiệu lực gây chết thành trùng SKL cao nhất (92,68 %) và nghiệm thức nấm tím Pae có hiệu lực thấp nhất (25,3%). Tại thời điểm này, cả 3 nghiệm thức đều hoàn toàn khác biệt với nhau và khác biệt với nghiệm thức đối chứng qua thống kê ở mức ý nghĩa 1%. 31 Ở thời điểm 7 NSKC, nghiệm thức nấm xanh Ma vẫn cho hiệu lực gây chết thành trùng SKL cao nhất (100%) và nghiệm thức nấm tím Pae cho hiệu lực thấp nhất (27,23%). Tuy nhiên khác với thời điểm 3 NSKC, tại thời điểm này nghiệm thức nấm xanh Ma và nghiệm thức nấm trắng Bb không khác biệt nhau và khác biệt với nghiệm thức nấm tím Pae qua thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Từ thời điểm 5 NSKC trở về sau, tỉ lệ thành trùng SKL chết ở nghiệm thức nấm trắng Bb, nấm tím Pae tiếp tục tăng nhưng nhìn chung hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức nấm tím Pae vẫn thấp nhất (độ hữu hiệu ở thời điểm 15 NSKC là 31,39%). Nghiệm thức nấm trắng Bb đạt độ hữu hiệu 100% ở 9 NSKC. a) SKL bị nhiễm nấm xanh b) SKL bị nhiễm nấm trắng Hình 3.1 Sùng khoai lang bị nấm xanh, nấm trắng ký sinh Nhìn chung, cả 3 loại nấm đều có tác dụng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Tuy nhiên, nấm trắng Bb và nấm tím Pae chỉ có tác dụng rõ rệt sau 5 ngày chủng nấm, riêng đối với nấm tím Pae ở thời điểm 15 NSKC hiệu quả gây chết thành trùng SKL vẫn ở mức thấp. Như vậy, trong đều kiện phòng thí nghiệm cả nấm xanh Ma và nấm trắng Bb đều có khả năng gây chết thành trùng SKL cao nhưng hiệu quả gây chết thành trùng SKL ở của nấm xanh Ma là cao nhất do thời gian gây chết hoàn toàn thành trùng SKL (100% sau 7 ngày chủng nấm) ngắn hơn nấm trắng (97,62% ở thời điểm 15 NSKC). Hơn thế nữa, nấm xanh Ma dễ nhân nguồn và sản xuất chế phẩm với số lượng lớn dễ hơn nấm trắng Bb. Điều này tương thích với nghiên cứa của Huỳnh Thị Ngọc Linh (2010), trong điều kiện phòng thí nghiệm, M. anisopliae, B. Bassiana và 32 Paecilomyces sp. đều cho hiệu lực gây chết đối với sùng khoai lang, trong đó độ hữu hiệu của M. anisopliae là cao và nhanh nhất. 3.2 Ảnh hưởng của mật số bào tử nấm xanh Ma lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm. Bảng 3.2 Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ khác nhau trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. T: 30,2 oC RH: 75,5% Nghiệm thức 3 Độ hữu hiệu (%) vào các ngày sau khi chủng (NSKC) 5 7 9 11 13 15 Ma-10 9 80,46 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a Ma-10 8 50,57 b 92,45 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a Ma-10 7 36,78 b 93,68 ab 94,77 a 97,33 a 98,67 a 98,67 a 98,67 a Ma-10 6 22,99 c 53,51 c 78,03 b 85,59 b 86,87 b 88,21 b 88,21 b Đối chứng 0d 0d 0c 0c 0c 0c 0c CV (%) 9,52 9,69 8,17 7,84 6,74 5,97 5,97 ** ** ** ** ** ** ** Mức ý nghĩa Trong cùng một cột, các trung bình có cùng mẫu tự theo sau giống nhau thì không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1% qua phép thử DUNCAN Sau 3 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL tăng tỉ lệ thuận với nồng độ, cự thể: ĐHH của nghiệm thức Ma-106 là 22,99%, kế đến là nghiệm thức Ma107 là 36,78%, nghiệm thức Ma-108 là 50,57% và cao nhất là ở nghiệm thức Ma109 là 80,46%. Ở thời điểm này, cả 4 nghiệm thức đều hoàn toàn khác biệt với nhau và khác biệt với nghiệm thức đối chứng qua thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Ở thời điểm 5 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở cả 4 nghiệm thức đều tăng. Trong đó, tăng nhanh nhất là nghiêm thức Ma-109 (100%), kế đến là nghiệm thức Ma-10 8 (93,68%), Ma-107 (92,45%) và thấp nhất là ở nghiệm thức Ma-106 (53,51%). Tại thời điểm này, nghiệm thức Ma-107 và nghiệm thức Ma-108 không có khác biệt thống kê, nghiệm thức Ma-107 và nghiệm thức Ma109 cũng không có khác biệt thống kê. Tuy nhiên, cả 3 nghiệm thức trên đều khác biệt hoàn toàn qua thống kê với nghiệm thức Ma-106 ở mức ý nghĩa 1%. 33 Ở thời điểm 7 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức Ma-108 cũng đạt ĐHH 100%, hiệu lực gây chết thành trùng SKL thấp nhất vẫn là ở nghiệm thức Ma-10 6 (78,03%). Ba nghiệm thức Ma-109, Ma-108, Ma-107 không khác biệt nhau về ý nghĩa thông kê và khác biệt với nghiệm thức Ma-10 6 ở mức ý nghĩa 1%. Sau 7 ngày, ĐHH ở 2 nghiệm thức Ma-107, Ma-106 vẫn tiếp tục tăng. Đến ngày thứ 15, ngày lấy chỉ tiêu cuối cùng, hiệu lực gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức Ma-10 6 vẫn thấp nhất (88,21%) và khác biệt thống kê ở mức 1% so với 3 nghiệm thức Ma-109, Ma-10 8, Ma-107. Ba nghiệm thức Ma-109, Ma-108, Ma-107 không có khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Hình 3.2 Thành trùng sùng khoai lang bi nhiễm nấm xanh M. anisopliae nồng độ 10 9 bào tử/ml Tóm lại, cả 4 nồng độ đều có khả năng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Hiệu quả gây chết thành trùng SKL tăng tỉ lệ thuận với nồng độ. Nồng độ 109 bào tử/ml cho hiệu quả cao nhất do gây chết hoàn toàn thành trùng SKL chỉ sau 5 NSKC, thời gian ngắn hơn các nghiệm thức còn lại. Kết quả này tương đồng với nghiên cứu của Huỳnh Thị Ngọc Linh (2010) và Nguyễn Thúy Liễu (2011). Tuy nhiên, hiệu lực gây chết thành trùng SKL của nấm xanh Ma ở nồng độ 108 bào tử/ml vẫn rất cao và không khác biệt thống kê với nghiệm thức nấm xanh Ma ở nồng độ 109 bào tử/ml ở thời điểm 7 NSKC. Bên cạnh đó, việc sản xuất các dạng nấm xanh Ma có nồng độ 108 bào tử/ml dễ dàng, đơn giản và kinh tế hơn. Do đó, trong các thí nghiệm trong điều kiện phòng thí nghiệm và ngoài đồng nên sử dụng các dạng nấm xanh ở nồng độ 108 bào tử/ml. 34 3.3 Ảnh hưởng của các chủng nấm xanh Ma khác nhau lên hiệu quả gây chết thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm Bảng 3.3 Độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. T: 30,1oC Nghiệm thức 3 RH: 75,6% Độ hữu hiệu (%)và các ngày sau khi chủng (NSKC) 5 7 9 11 13 Ma-BD 53,61 a 97,62 a 98,77 a 100 a 100 a 100 Ma-BXN 3,45 b 59,71 b 82,48 b 88,40 b 100 a 100 Ma-SKL 1,15 b 29,15 c 60,02 c 83,06 b 97,33 a 100 Đối chứng 0b 0d 0d 0c 0b 0 CV (%) 46,6 9,76 8,04 3,31 5,07 ** ** ** ** ** Mức ý nghĩa Trong cùng một cột, các trung bình có cùng mẫu tự theo sau giống nhau thì không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1% qua phép thử DUNCAN Hiệu lực gây chết thành trùng SKL của các chủng nấm xanh Ma được trình bày ở bảng 3.5. Kết quả cho thấy cả 3 chủng nấm đều có khả năng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm và khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng từ thời điểm 5 NSKC. Ở thời điểm 3 ngày sau khi chủng nấm, hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở các nghiệm thức rất thấp trừ nghiệm thức Ma-BD (53,36%). Hiệu lực gây chết SKL của nghiệm thức Ma-BD cao nhất và khác biệt thống kê với nghiệm thức Ma-SKL (11,15%), nghiệm thức Ma-BXN (3,45%) ở mức ý nghĩa 1%. Ba nghiệm thức Ma-SKL, Ma-BXN, đối chứng không khác biệt thống kê với nhau ở mức ý nghĩa 1%. Hiệu lực gây chết thành trùng SKL của các nghiệm thức tăng rất nhanh ở những ngày tiếp theo. Ở thời điểm 7 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức Ma-BD là cao nhất (98,77%), kế đến là nghiệm thức Ma-BXN (82,48%) và nghiệm thức Ma-SKL cho hiệu lực thấp nhất (60,02%). Cả 3 nghiệm thức trên đều khác biệt hoàn toàn qua thống kê ở mức ý nghĩa 1%. 35 Ở thời điểm 9 NSKC, hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức Ma-BD đạt độ hữu hiệu 100% và khác biệt thống kê so với nghiệm thức Ma-SKL (83,06%), Ma-BXN (88,04%) ở mức ý nghĩa 1%. Hiệu lực gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức Ma-BXN đạt 100% ở thời điểm 11 NSKC. Nghiệm thức Ma-SKL cũng đạt hiệu quả tối đa 100% ở thời điểm 13 NSKC. Tóm lại, kết quả thể hiện ở bảng 3.5 cho thấy cả 3 chủng nấm đều có khả năng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Trong đó, nấm Ma-BD cho hiệu quả cao nhất (100% ở thời điểm 9 NSKC). Bên cạnh đó, hiệu lực gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức Ma-BXN cũng khá cao, đạt hiệu quả tối đa (100%) ở thời điểm 9 NSKC. Kết quả trên phù hợp với nghiên cứu của Nguyễn Thị Thùy Dương (2011), ở thời điểm 5 NSKC ĐHH của nấm xanh MaBD đạt 98,11% cao hơn các chủng nấm khác (Ma-SKL, Ma-BXN. Kết quả trên cũng cho thấy Ma-SKL cho hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang thấp hơn Ma-BD và Ma-BXN. Nguyên nhân có thể do nguồn MaSKL sử dụng trong thí nghiệm này được phân lập từ rầy nâu bị nhiễm nấm xanh trong tự nhiên rồi sau đó tiến hành chủng lên thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Do qua nhiều lần phân lập nên hoạt lực sinh học yếu hơn MaBD và Ma-BXN được phân lập trực tiếp trên ký chủ thu thập từ tự nhiên 36 3.4 Khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm Bảng 3.4 Khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma đối với thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. Nghiệm thức Nấm tươi Dung dịch Bột khô Đối chứng CV (%) Mức ý nghĩa 3 9,89 a 6,67 ab 3,87 bc 2.37 c 8,88 ** 6 32,26 a 17,42 b 6,88 c 4,30 c 3,31 ** 9 56,77 a 33,55 b 10,32 c 4,73 d 2,12 ** T: 29,71oC RH: 83,3% Tỉ lệ (%) sùng chết theo thời gian sau khi thả sùng (NSKT) 12 15 18 21 24 27 30 33 36 78,92 a 97,42 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 64,09 b 94,24 a 94,84 a 98,28 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 14,19 c 19,35 b 24,95 b 29,03 b 33,12 b 40,00 b 60,42 b 80,00 b 99,5 7 a 7,53 d 10,11 c 13,76 c 16,99 c 19,78 c 23,23 c 24,73 c 27,10 c 28,17 b 3,59 3,35 2,71 0,42 1,07 1,44 1,61 1,15 1,79 ** ** ** ** ** ** ** ** ** Trong cùng một cột, các trung bình có cùng mẫu tự theo sau giống nhau thì không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1% qua phép thử DUNCAN 37 Kết quả khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma trong điều kiện phòng thí nghiệm được trình bày ở bảng 3.3. Kết quả cho thấy cả 3 dạng nấm đều cho hiệu quả lây lan và gây chết thành trùng SKL khá cao từ thời điểm 9 NSKT. Ở thời điểm 3 NSKT, khả năng gây chết thành trùng SKL của các nghiệm thức còn khá thấp, cao nhất ở nghiệm thức dạng nấm tươi có tỉ lệ sùng chết là 9,89%, thấp nhất ở nghiệm thức sử dụng dạng bột khô (3,87%) không khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng ở mức ý nghĩa 1%. Tỉ lệ thành trùng SKL chết dần theo thời gian ở tất cả các nghiệm thức, đặc biệt tăng nhanh ở nghiệm thức dạng nấm tươi và dạng dung dịch. Tại thơi điểm 9 NSKT tỉ lệ gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức sử dạng dụng nấm tươi đạt cao nhất 56,77%, kế dến là dạng dung dịch 33,55%. Tại thời điểm này cả 3 nghiệm thức đều hoàn toàn khác biệt với nhau và với nghiệm thức đối chứng qua thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Tuy có khác biệt thống kê so với nghiệm thức đối chứng nhưng khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức sứ dụng nấm dạng bột khô vẫn rất thấp (10,32%). Tại thời điểm 15 ngày sau khi chủng nấm, tỉ lệ gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức sử dụng dạng nấm bột khô vẫn khá thấp, đạt 19,35%. Khi đó tỉ lệ thành trùng SKL của nghiệm thức dạng nấm tươi là 97,42% và dạng dung dịch là 94,24%, không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Ở thời điểm 18 NSKT, tỉ lệ gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức sử dụng nấm tươi đạt tối đa 100%, khác biệt hoàn toàn qua thống kê ở mức ý nghĩa 1% so với các nghiệm thức sử dụng dạng dung dịch (94,84%), bột khô (24,95%) Khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức sử dụng dạng dung dịch cũng đạt tỉ lệ 100% ở thời điểm 24 NSKT, lúc này tỉ lệ gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức dạng nấm bột khô vẫn chưa cao (33,12%). Khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức sử dụng dạng nấm bột khô bắt đầu có hiệu quả cao từ thời điểm 27 NSKT. Tỉ lệ gây chết thành trùng SKL tại thời điểm 27 NSKT là 40%, 30 NSKT là 60,43%, 33 NSKT là 80% và 38 36 NSKT là 99,57%. Tại thời điểm 36 NSKT, khả năng gây chết thành trùng SKL của cả 3 nghiệm thức sử dụng nấm đều không khác biệt với nhau về ý nghĩa thống kê ở mức ý nghĩa 1%, Tóm lại, việc sử dụng kết hợp pheromone với 3 dạng nấm xanh Ma đều có hiệu quả gây chết SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Nguyên nhân là do quần thể SKL sử dụng trong thí nghiệm được chọn ngẫu nhiên không phân biệt đực cái nên khả năng lây nhiễm theo kiểu bắt cầu có thể xảy ra (Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010). Hiệu quả gây chết của nghiệm thức sử dụng dạng nấm tươi là cao nhất do có thời gian gây chết 100% thành trùng SKL nhanh nhất (18 ngày), kế đến là nghiệm thức sử dụng dạng dung dịch nấm (21 ngày) và nghiệm thức sử dụng dạng nấm bột khô cho hiệu quả thấp nhất. Điều này có thể là do dạng nước thiếu tính bám dính và cơ thể thành trùng sùng khoai lang nhẵn bóng nên bào tử nấm có trong dung dịch sẽ dễ bị trôi hơn so với dạng nấm tươi. Còn ở nghiệm thức sử dụng dạng dung dịch nấm xanh Ma, do ở dạng dung dịch thiếu chất bám dính và cơ thể SKL nhẵn bóng nên bào tử khó bám vào da và tấn công theo cơ chế bám dính không chuyên biệt thông qua tính kỵ nước của vách tế bào (Bocias et al., 1991). Đối với chế phẩm nấm xanh Ma dạng nấm tươi, bào tử nấm đang phát triển mạnh trên nền cơ chất gạo sau 15 ngày nuôi cấy nên dễ dàng bám dính vào cơ thể thành trùng SKL khi sùng đực tiếp xúc với pheromone và rơi xuống đáy hộp chứa các hạt gạo phủ đầy bào tử nấm xanh Ma bên ngoài. Dạng bột khô có thể dễ dàng tiếp xúc với bề mặt SKL nhưng do cơ thể thành trùng SKL cũng khô nên rất khó bám dính. Hơn thế nữa dạng bột khô trong quá trình sấy khô và nghiền mịn có thể làm lẫn một số tạp chất, nấm tạp làm suy giảm hoạt lực của nấm nên khả năng gây chết chậm hơn dạng dung dịch và dạng nấm tươi. 39 Hình 3.3 Thành trùng SKL chết do sự lây lan của nấm xanh Ma Từ đây có thể nhận thấy rằng, việc sử dụng pheromone kết hợp với chế phẩm nấm xanh cho hiệu quả gây chết SKL rất cao. Bên cạnh đó, quy trình sản xuất chế phẩm nấm xanh dạng tươi tương đối đơn giản, dễ dàng, chi phí thấp, dễ dàng sản xuất với số lượng lớn. Như vậy, sử dụng pheromone hấp dẫn SKL đực cho tiếp xúc với chế phẩm nấm xanh Ma dạng nấm tươi rất có triển vọng trong phòng trị SKL ở điều kiện ngoài đồng. 40 3.5 Khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) qua các hình thức xử lý khác nhau trong điều kiện phòng thí nghiệm Bảng 3.5 Khả năng ký sinh của nấm Metarhizium anisopliae lên SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm. T: 30,4oC Nghiệm thức 3 Tỉ lệ (%) sùng chết theo thời gian sau khi xử lý (NSKXL) 6 9 12 15 18 21 RH: 73,7% 24 Nấm tươi + rãi 10,67 a 79,11 a 98,67 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a Nấm tươi + phun 4,44 ab 49,56 b 87,56 b 97,33 a 100 a 100 a 100 a 100 a Nấm bột khô + rãi 4,89 ab 8,44 c 17,78 c 42,67 b 72,44 b 89,33 b 96,89 b 100 a Nấm bột khô + phun 2,67 b 5,78 cd 15,78 c 32,44 c 57,11 c 82,67 b 96,22 b 100 a Đối chứng 0,89 b 2,67 d 3,78 d 4,67 d 6,67 d 7,78 c 9,33 c 10,67 b 6,58 5,55 2,69 2,91 5,96 3,47 1,21 0,36 ** ** ** ** ** ** ** ** CV (%) Mức ý nghĩa Trong cùng một cột, các trung bình có cùng mẫu tự theo sau giống nhau thì không khác biệt thống kê ở mức ý nghĩa 1% qua phép thử DUNCAN 41 Khả năng ký sinh và gây chết thành trùng SKL của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau được thể hiện ở bảng 3.4 cho thấy cả 4 nghiệm thức đều có khả năng gây chết thành trùng SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm. Tại thời điểm 3 NSKXL, khả năng gây chết thành trùng SKL ở cả 4 nghiệm thức đều thấp. Nghiệm thức nấm tươi + rãi có khả năng gây chết thành trùng SKL cao nhất, đạt tỉ lệ 10,67%. Ba nghiệm thức còn lại có tỉ lệ gây chết thành trùng SKL rất thấp, nghiệm thức nấm tươi + phun (4,44%), nấm bột khô + rãi (4,89%) và nấm bột khô + phun (2,67%), cả 3 nghiệm thức đều không khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng ở mức ý nghĩa 1%. Ở thời điểm 6 NSKXL, khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm tươi + rãi tăng rất nhanh và đạt tỉ lệ 79,11%, cao nhất và khác biệt hoàn toàn với các nghiệm thức còn lại ở mức ý nghĩa 1%. Tỉ lệ gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm tươi + phun cũng khá cao (49,56%). Tại thời điểm này, khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm bột khô + phun vẫn rất thấp (5,78%) và không khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng ở mức ý nghĩa 1%. Tại thời điểm 9 NSKXL, tỉ lệ thành trùng SKL chết ở cả 4 nghiệm thức đều tăng. Tăng nhanh ở 2 nghiệm thức nấm tươi + rãi (98,67%) và nấm tươi + phun (87,56%). Tỉ lệ gây chết thành trùng SKL ở nghiệm thức nấm bột khô + rãi và nấm bột khô + phun cũng tăng và đã có sự khác biệt thống kê với nghiệm thức đối chứng nhưng khả năng gây chết thành trùng SKL vẫn còn khá thấp (bột khô + rãi – 17,48%, bột khô + phun – 15,78%). Thời điểm 12 NSKXL, tỉ lệ gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm tươi + rãi đạt tối đa 100% và không khác biệt thồng kê với nghiệm thức đối chứng ở mức ý nghĩa 1%. Tại thời điểm này, khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm bột khô + rãi và nấm bột khô + phun vẫn còn khá thấp, lần lượt là 42,67% và 32,44%. 42 Khả năng gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm tươi + phun cũng đạt tỉ lệ 100% tại thời điểm 15 NSKXL. Tại thời điểm này tỉ lệ gây chết thành trùng SKL của nghiệm thức nấm bột khô + phun thấp nhất (57,11%) và khác biệt hoàn toàn qua thống kê với so các nghiệm thức còn lại ở mức ý nghĩa 1%. Tỉ lệ SKL chết ở nghiệm thức nấm bột khô + rãi và nấm bột khô + phun bắt đầu tăng nhanh trong những thời điểm kế tiếp và cùng đạt tỉ lệ tối đa tại thời điểm 24 NSKXL. Tóm lại, kết quả thể hiện ở bảng 3.4 cho thấy hình thức xử lý bằng nấm tươi + rãi cho khả năng ký sinh gây chết thành trùng SKL tương đối cao hơn các hình thức còn lại (đạt tỉ lệ 100% tại thời điểm 12 NSKXL). Khả năng ký sinh gây chết thành trùng SKL cũng khá cao, đạt tỉ lệ 100% ở thời điểm 15 NSKXL. Kết quả trên một lần nữa cho thấy rằng dạng nấm tươi có hoạt lực sinh học cao hơn dạng bột khô. Bên cạnh đó, kết quả trên cũng cho thấy xử lý bằng hình thức rãi có hiệu quả gây chết thành trùng SKL cao hơn xử lý bằng hình thức phun. Nguyên nhân có thể do khi xử lý bằng hình thức rãi, các cá thể SKL dễ dàng tiếp xúc với bào tử nấm xanh Ma nằm trên bề mặt lớp mụn sơ dừa; còn khi phun, bào tử nấm xanh Ma hòa lẫn vào nước và thấm vào lớp mụn sơ dừa nên khó tiếp xúc với các cá thể thành trùng SKL. Kết quả trên gần giống với nghiên cứu của Trần Nam Dương (2010), trong điều kiện nhà lưới hiệu lực phun chế phẩm nấm tươi đạt 73,3% (ở thời điểm 12 NSKP) cho hiệu quả ký sinh trên rầy đầu vàng cao hơn so với phun nấm bột khô (đạt 55,9% ở thời điểm 12 NSKP). Hình 3.4 Sùng khoai lang nhiễm các dạng nấm xanh Ma 43 4 Chương 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Nấm xanh Ma cho hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang cao nhất so với nấm trắng Bb và nấm tím Pae. Hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang tăng tỉ lệ thuận với nồng độ. Dung dịch nấm Ma ở nồng độ 109 bào tử/ml có hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang cao hơn các nồng độ còn lại (độ hữu hiệu 100% ở thời điểm 5 NSKC). Nồng độ 108 bào tử/ml cũng cho hiệu quả gây chết thành trùng SKL cao (dộ hữu hiệu 100% ở thời điểm 7 NSKC). Nấm xanh Ma phân lập từ bọ cánh cứng hại (Ma-BD) dừa có hiệu lực gây chết thành trùng sùng khoai lang cao hơn Ma phân lập từ bọ xít nhãn (Ma-BXN) và sùng khoai lang (Ma-SKL), đạt ĐHH 100% ở thời điểm 9 NSKC. Khả năng lây lan của thành trùng sùng khoai lang đực đã tiếp xúc với pheromone và nhiễm nấm xanh Ma ở dạng nấm tươi cho hiệu quả cao nhất, đạt độ hữu hiệu 100% ở thời điểm 18 NSKT. Khả năng ký sinh và gây chết thành trùng sùng khoai lang của chế phẩm nấm xanh dạng nấm tươi và xử lý bằng hình thức rãi cho hiệu quả cao nhất, đạt tỉ lệ chết 100% ở thời điểm 12 NSKXL. 4.2 Đề nghị Nghiên cứu phân lập các chủng nấm xanh Ma trên nhiều loại côn trùng khác để chọn ra chủng có hiệu lực gây chết sùng khoai lang cao nhất. Khảo sát khả năng ký sinh của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) qua các hình thức xử lý khác nhau trong điều kiện nhà lưới. Tiếp tục nghiên cứu và ứng dụng nấm xanh Ma kết hợp với pheromone (đặc biệt ở dạng chế phẩm) để phòng trị sùng khoai lang trong điều kiện ngoài đồng. 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bùi Công Hiển, 2002. Pheromone của côn trùng. Nhà xuất bàn Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội, 52 - 57. Bùi Thị Ngọc Liễu, 2010. Khảo sát hiệu quả của pheromone giới tính tồng hợp và nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trong việc phòng trị sùng khoai lang (Cylas formicarins Fabricius) ở tỉnh Vĩnh Long. Luận văn tốt nghiệp. Trường Đại học Cần Thơ, 38. Châu Nguyễn Quốc Khánh và Trương Thị Mỹ Lộc, 2008. Nghiên cứu ứng dụng pheromone giới tính của sâu vẽ bùa, Phyllocnistis citrella Stainton. Luận văn tôt nghiệp. Trưởng Đại học cần Thơ, 57. Đặng Hoàng Xuân, 2009. Đánh giá hiệu quả của pheromone giới tính (Z)-3Dodecenyl-(E)-2-Butenoate trong việc quản lý sùng khoai lang, Cylas formicarius Fabricius (Coleoptera: Curculionidae), Luận văn đại học Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ, 24. Đỗ Huy Bích, 2004. Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam tập II. Nhà xuất bản Khoa học và kỉ thuật Hà Nội, 76-77 Dương Minh, 1999. Giáo trình môn học: Hoa màu, phần Khoai lang. Khoa Nông Nghiệp. Trường Đại học cần Thơ, 43. Hà Quang Hùng, 2005. Giáo trình dịch học bảo vệ thực vật. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội, 97-98. Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010. Đáng giá hiệu quả phòng trị của pheromone giới tính tổng hợp và nấm xanh (Metarhizinm anisopliae Sorokin) đối với sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius). Luận án thạc sĩ. Trường Đại học Cần Thơ, 3-42. Lâm Tổ Oanh, 2005. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy lên sự sinh trưởng của nấm Metarhizium anisopliae Sorok. Luận văn tốt nghiệp đại học, khoa Nông Nghiệp và Sinh học Ứng dụng. Trường Đại học Cần Thơ. Mai Thạch Hoành, 2001. Cây khoai lang các côn trùng gây bệnh và những rối loạn dinh dưỡng chủ yếu, Nhà xuất bản Văn hóa dân tộc Hà Nội, 7-9. 45 Nguyễn Đức Khiêm, 2006. Giáo trình côn trùng học nông nghiệp. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội, 137-140. Nguyễn Thạch Bích, Vũ Văn Chuyên, Vũ Văn Dũng, Lê Văn Quỳ, Trịnh Đình Thanh, 1975. Nhừng họ thực vật có hoa. Tập 1. Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật Hà Nội, 482. Nguyễn Thành Hối, 2010. GT. Cây trồng đại cương. Tủ sách Đại học Cần Thơ, 29-30. Nguyễn Thị Thu Cúc, 2004. Giáo trình Côn trùng đại cương. Khoa Nông Nghiệp, trường Đại học Cần Thơ, 125. Nguyễn Thị Thùy Dương, 2011. Thu thập và định danh các chủng nấm Metarhizium anisopliae và đánh giá hiệu quả đối với sùng khoai lang (Cylas formicarins Fabricius) và rầy nâu (Nilaparvata lugens Stal), 37. Nguyễn Thúy Liễu, 2011. Khảo sát một số nấm ký sinh trong phòng thí nghiệm và đánh ứng dụng nấm xanh kết hợp với pheromone giới tính trong quản lý sùng khoai lang (Cylas formicarins Fabricius) tại huyện Tri Tôn, tỉnh An Giang. Luận văn đại học Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ, 32-33. Nguyễn Văn Đĩnh, 2005. Nghiên cứu thành phần sâu hại khoai lang và kỹ thuật mới phòng ngừa bọ hà hại khoai lang (Cylas formicarius F.), Tạp chí bảo vệ thực vật số 5. Nguyền Văn Huỳnh và Lê Thị Sen, 2004. Giáo trình côn trùng học nông nghiệp phần B: Côn trùng gảy hại cây trồng chính ở Đồng Bằng Sông Cữu Long. Tủ sách đại học Cần Thơ, 74-76. Nguyễn Văn Huỳnh và Lê Thị Sen. 2011. Côn trùng gây hại cây trồng. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, 88-91. Phạm Thị Thùy, 2004. Công nghệ sinh học trong bào vệ thực vật, Nhà xuất bản Đại học Quốc Gia Hà Nội, 335 trang. Trần Nam Dương, 2010. Ảnh hưởng của một số nông dược đối vơi nấm xanh Metarhizium anisopliae Sorokin và hiệu quả của chế phẩm nấm xanh trên rầy đầu vàng Eoeurysa flavocapitata hại mía tại huyện Long Phú tỉnh Sóc Trăng, 46 luận án Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp, chuyên ngành Bảo vệ Thực vật, khoa Nông nghiệp và SHƯD, Đại học Cần Thơ, 67 trang. Trần Văn Hai và ctv., 2008. Ứng dụng chế phẩm sinh học từ nấm có ích để phòng trừ sâu ăn lá, bọ cánh cứng (sùng đất) hại rễ cây trồng cạn cho vùng đất giồng cát tỉnh Trà Vinh. Đề tài nghiên cứu khoa học cấp tỉnh. Trần Văn Mão, 2002. Sử dụng côn trùng và vi sinh vặt có ích, Tập II, Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội, 300 trang. TIẾNG ANH Ames, N.E.J.M. Smit, A.R. Braun, J.N. O’Sullivan, and L.G. Skoglund. 1997. Sweetpotato: Major Pests, Diseases, and Nutritional Disorders. International Potato Center (CIP). Lima, Peru, 152. Bocias D. G, J. c. Penland and J. p. Latge. 1991. Nonspecific factors involed in attachment of entomopathogenic Deuteromycetes to host insect cuticle. Applied and Environment Microbiology, 54. Capinera, J. L. 1998. Sweetpotato Weevil, Cylas formicarius (Fabricius) (Insecta: Coleoptera: Brentidae (Curculionidae)). University of Florida. Health, R. R., J. A. Coffelt, p. E. Sonnet, F. I. Proshoỉd, B. Dueben & J. H. Tumỉinson. 1986. Indentification of sex pheromone pro-ducted by female sweetpotato weevil, Cylas formicarius elegan-tuius (Summer). Journal of Chemical Ecology 12: 1489- 1503. Jansson, R. J. C. Mason LJ. Heath RR, 1991. Use of sex pheromone for monitoring and managing Cylas formicarius. Pages 97-138. In R.K. Jansson and K.v Raman (eds.). Sweet Potato Pest Management: A Global Perspective. Westview Press, Boulder, Colorado. Jansson, 1992 Jansson, R. K., L- J. Mason, R. R. Heath, K. A. Sorensen, A. Kenneth, A. M. Hammond and J. V. Robinson (1992), Pheromone-trap monitoring system for sweetpotato weevil (Coleoptera: Apionidae) in the Southern United State: effects of trap type and pheromone dose. Journal of Economic Entomology 85(2), pp. 416-423. 47 Lagnaoui, A., F. Cisnerros, J. Alcaszar and F. Morales, A sustainable pest management strategy for sweet potato weevils in sweet in Cuba. A suscess story, pp. 3-13. In: Chien-The C., Control of weevil in sweet potato production, Proceedings of the 12 th Symposium of the Internationnal Society for Tropical Crops. Tsukubu, Japan. Milner, R. J., Huppatz R. J., and Swairis S. C., 1991. A new method for assessment of germination of Metarhizium conidia. J. Invertebr. Pathol 57: 121-123. Miyatakc, T. 2001. Effects of starvation on death-feigning in adults of Cylas fonnicariits (Coleoptera: Brentidae). Annals of the entomological society of America 94 (4), 612-616. Miyatake, T., K. Kawasaki, T. Kohama, S. Moriya anh K. Shimoji (1995), Dispersal ò male sweetpotato weevil (Coleoptera: Curculionidae) in field with oryctes rhinoceros without sweet potato plants. Environmental entomology 24(5), pp. 1167-1174. Perron p. 1978. Biological control of insect pests by enthomogenous fungi. Annual Review of Entomology 23, 409 - 442. Sutherland JA. 1986. Damage by Cylas formicarius Fab. to sweet potato vines and tubers and the effect of infestations on total yield in Papua New Guinea. Tropical Pest Management 32, 316-323 TRANG WEB http://www.khoahoc.com.vn/khampha/sinh-vat-hoc/thuc-vat/25551_Nhung-loai-cayluong-thuc-chinh-cua-the-gioi.aspx http://www.rauhoaquavietnam.vn/default.aspx?ID=45&LangID=1&tabID=5&NewsI D=947 http://vi.wikipedia.org/wiki/Khoai_lang 48 PHỤ LỤC Bảng 1: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 3 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 2686.172 895.391 118.773 0.0000 Within 8 60.309 7.539 -----------------------------------------------------------------------Total 11 2746.481 Coefficient of Variation = 11.03% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 2: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 5 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 10124.406 3374.802 333.336 0.0000 Within 8 80.995 10.124 -----------------------------------------------------------------------Total 11 10205.400 Coefficient of Variation = 7.55% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 3: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 7 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 16773.421 5591.140 228.531 0.0000 Within 8 195.724 24.466 -----------------------------------------------------------------------Total 11 16969.146 Coefficient of Variation = 9.58% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 4: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 9 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 17880.445 5960.148 1615.859 0.0000 Within 8 29.508 3.689 -----------------------------------------------------------------------Total 11 17909.953 Coefficient of Variation = 3.63% Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 5: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 11 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 17850.749 5950.250 1603.924 0.0000 Within 8 29.678 3.710 -----------------------------------------------------------------------Total 11 17880.428 Coefficient of Variation = 3.63% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 6: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 13 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 17850.749 5950.250 1603.924 0.0000 Within 8 29.678 3.710 -----------------------------------------------------------------------Total 11 17880.428 Coefficient of Variation = 3.63% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 7: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae tại thời điểm 15 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 17566.883 5855.628 638.020 0.0000 Within 8 73.422 9.178 -----------------------------------------------------------------------Total 11 17640.305 Coefficient of Variation = 5.65% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 8: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 10 7, 108, 10 9 bào tử/ml tại thời điểm 3 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 6552.761 1638.190 146.525 0.0000 Within 10 111.803 11.180 -----------------------------------------------------------------------Total 14 6664.563 Coefficient of Variation = 9.52% Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 9: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 10 7, 108, 10 9 bào tử/ml tại thời điểm 5 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 15117.334 3779.334 121.324 0.0000 Within 10 311.509 31.151 -----------------------------------------------------------------------Total 14 15428.843 Coefficient of Variation = 9.69% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 10: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 107, 10 8, 109 bào tử/ml tại thời điểm 7 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 16874.933 4218.733 151.887 0.0000 Within 10 277.754 27.775 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17152.687 Coefficient of Variation = 8.17% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 11: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 107, 10 8, 109 bào tử/ml tại thời điểm 9 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 17356.786 4339.196 158.995 0.0000 Within 10 272.914 27.291 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17629.700 Coefficient of Variation = 7.84% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 12: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 107, 10 8, 109 bào tử/ml tại thời điểm 11 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 17551.110 4387.778 213.549 0.0000 Within 10 205.470 20.547 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17756.580 Coefficient of Variation = 6.74% Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 13: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 107, 10 8, 109 bào tử/ml tại thời điểm 13 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 17565.602 4391.400 271.306 0.0000 Within 10 161.862 16.186 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17727.464 Coefficient of Variation = 5.97% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 14: Bảng ANOVA độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ 106, 107, 10 8, 109 bào tử/ml tại thời điểm 15 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 17565.602 4391.400 271.306 0.0000 Within 10 161.862 16.186 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17727.464 Coefficient of Variation = 5.97% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 15 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 3 ngày sau khi thả sùng. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 4.037 1.346 29.259 0.0001 Within 8 0.368 0.046 -----------------------------------------------------------------------Total 11 4.404 Coefficient of Variation = 8.88% X  0,5 trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 16 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 6 ngày sau khi thả sùng. Số liệu đã được chuyển đổi sang Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 1451.625 483.875 536.170 0.0000 Within 8 7.220 0.902 -----------------------------------------------------------------------Total 11 1458.845 Coefficient of Variation = 6.24% Bảng 17 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 9 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 5104.516 1701.505 2223.006 0.0000 Within 8 6.123 0.765 -----------------------------------------------------------------------Total 11 5110.639 Coefficient of Variation = 3.32% Bảng 18 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 12 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 11431.059 3810.353 915.420 0.0000 Within 8 33.299 4.162 -----------------------------------------------------------------------Total 11 11464.359 Coefficient of Variation = 4.95% Bảng 19 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 15 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 20014.369 6671.456 2749.059 0.0000 Within 8 19.415 2.427 -----------------------------------------------------------------------Total 11 20033.783 Coefficient of Variation = 2.81% Bảng 20 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 18 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 19288.196 6429.399 8817.955 0.0000 Within 8 5.833 0.729 -----------------------------------------------------------------------Total 11 19294.029 Coefficient of Variation = 1.44% Bảng 21 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 21 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 18000.063 6000.021 43098.407 0.0000 Within 8 1.114 0.139 -----------------------------------------------------------------------Total 11 18001.177 Coefficient of Variation = 0.61% Bảng 22 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 24 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 16495.474 5498.491 4958.660 0.0000 Within 8 8.871 1.109 -----------------------------------------------------------------------Total 11 16504.345 Coefficient of Variation = 1.67% Bảng 23 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 27 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 16495.474 5498.491 4958.660 0.0000 Within 8 8.871 1.109 -----------------------------------------------------------------------Total 11 16504.345 Coefficient of Variation = 1.67% Bảng 24 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 30 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 11801.973 3933.991 1231.746 0.0000 Within 8 25.551 3.194 -----------------------------------------------------------------------Total 11 11827.524 Coefficient of Variation = 2.51% Bảng 25 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 33 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 10670.422 3556.807 2849.831 0.0000 Within 8 9.985 1.248 -----------------------------------------------------------------------Total 11 10680.407 Coefficient of Variation = 1.46% Bảng 26 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma tại thòi điểm 36 ngày sau khi thả sùng. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 11561.643 3853.881 54729.574 0.0000 Within 8 0.563 0.070 -----------------------------------------------------------------------Total 11 11562.206 Coefficient of Variation = 0.32% Bảng 27 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 3 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 1.788 0.447 57.808 0.0000 Within 10 0.077 0.008 -----------------------------------------------------------------------Total 14 1.866 Coefficient of Variation = 6.58% X  0,5 trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 28 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 6 ngày sua khi xử lý. Số liệu đã được chuyển đổi sang Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 13767.206 3441.801 1320.755 0.0000 Within 10 26.059 2.606 -----------------------------------------------------------------------Total 14 13793.265 Coefficient of Variation = 5.55% Bảng 29 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 9 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 23954.359 5988.590 4127.728 0.0000 Within 10 14.508 1.451 -----------------------------------------------------------------------Total 14 23968.867 Coefficient of Variation = 2.69% Bảng 30 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 12 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 21032.294 5258.074 2018.078 0.0000 Within 10 26.055 2.605 -----------------------------------------------------------------------Total 14 21058.349 Coefficient of Variation = 2.91% Bảng 31 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 15 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 17835.870 4458.968 277.685 0.0000 Within 10 160.576 16.058 -----------------------------------------------------------------------Total 14 17996.447 Coefficient of Variation = 5.96% Bảng 32 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 18 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 18085.773 4521.443 649.453 0.0000 Within 10 69.619 6.962 -----------------------------------------------------------------------Total 14 18155.392 Coefficient of Variation = 3.47% Bảng 33 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 21 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 19022.833 4755.708 5010.301 0.0000 Within 10 9.492 0.949 -----------------------------------------------------------------------Total 14 19032.325 Coefficient of Variation = 1.21% Bảng 34 Bảng ANOVA tỉ lệ gây chết thành trùng sùng khoai lang của các dạng nấm xanh Ma qua các hình thức xử lý khác nhau tại thời điểm 24 ngày sua khi xử lý. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 4 19153.067 4788.267 54137.339 0.0000 Within 10 0.884 0.088 -----------------------------------------------------------------------Total 14 19153.951 Coefficient of Variation = 0.36% Bảng 35 Bảng ANOVA độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma khác nhau tại thời điểm 3 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 4229.748 1409.916 29.297 0.0001 Within 8 385.001 48.125 -----------------------------------------------------------------------Total 11 4614.749 Coefficient of Variation = 46.40% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 36 Bảng ANOVA độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma khác nhau tại thời điểm 5 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 10626.170 3542.057 214.517 0.0000 Within 8 132.094 16.512 -----------------------------------------------------------------------Total 11 10758.264 Coefficient of Variation = 9.76% Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 37 Bảng ANOVA độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma khác nhau tại thời điểm 7 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 12010.014 4003.338 240.104 0.0000 Within 8 133.387 16.673 -----------------------------------------------------------------------Total 11 12143.400 Coefficient of Variation = 8.04% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 38 Bảng ANOVA độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma khác nhau tại thời điểm 9 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 13588.524 4529.508 1291.145 0.0000 Within 8 28.065 3.508 -----------------------------------------------------------------------Total 11 13616.589 Coefficient of Variation = 3.31% X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. Bảng 39 Bảng ANOVA độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma khác nhau tại thời điểm 11 ngày sau khi chủng nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm. Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -----------------------------------------------------------------------Between 3 17115.581 5705.194 514.091 0.0000 Within 8 88.781 11.098 -----------------------------------------------------------------------Total 11 17204.362 Coefficient of Variation = 5.07% Số liệu đã được chuyển đổi sang arcsin X % trước khi phân tích thống kê ở mức ý nghĩa 1%. [...]... điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm 3.3 Độ hữu hiệu của các chủng nấm xanh Ma trong điều kiện 35 phòng thí nghiệm qua các thời điểm Khả năng lây lan của các dạng nấm xanh Ma đối với thành 3.4 trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong 37 điều kiện phòng thí nghiệm qua các thời điểm 3.5 Khả năng ký sinh của nấm Metarhizium anisopliae lên SKL trong điều kiện phòng thí nghiệm qua... dụng cho các thí nghiệm Thành trùng sùng khoai lang được nuôi trong hộp nhựa đậy kín bằng vải thoáng khí, bên trong có củ khoai lang sạch làm thức ăn Đồng thời, rổ khoai cũng được dùng để hấp dẫn thành trùng sùng khoai lang đực thực hiện ở thí nghiệm 3 (khảo sát khả năng lây lan của nấm xanh Ma trong quần thể thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm) 21... trùng sùng khoai lang bi nhiễm nấm xanh M 34 anisopliae nồng độ 109 bào tử/ml 3.3 Thành trùng SKL chết do sự lây lan của nấm xanh Ma 40 3.4 Sùng khoai lang nhiễm các dạng nấm xanh Ma 43 x DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Tên bảng Trang Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma, nấm trắng Bb, nấm tím Pae 31 trong điều kiện phòng tchí nghiệm qua các thời điểm 3.2 Độ hữu hiệu của nấm xanh Ma ở 4 nồng độ khác nhau trong 33 điều kiện. .. Khảo sát hiệu lực của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) trên sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) trong điều kiện phòng thí nghiệm được thực hiện nhằm tìm ra biện pháp hạn chế đến mức thấp nhất sự phát sinh gây hại của sùng khoai lang 2 1 Chương 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 NGUỒN GỐC, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC TÍNH THỰC VẬT CỦA KHOAI LANG (Ipomoea batatus Poir) Họ bìm bìm hay khoai lang hay rau...  Khoai lang Khoai lang sử dụng trong quá trình thí nghiệm được mua tại các vựa khoai lang ở xã Thuận An, huyện Bình Minh Chọn những củ khoai tốt, không bị nhiễm sùng để sử dụng trong các thí nghiệm  Sùng khoai lang Thu củ khoai lang bị sùng tấn công tại các ruộng khoai ở huyện Bình Tân Vĩnh Long về bảo quản trong rổ nhựa tại phòng thí nghiệm Khi sùng đã vũ hóa và thoát ra bên ngoài, tách riêng sùng. .. Trang Thành trùng sùng khoai lang C formicarius (nguồn Capinera, 6 1998) 2.1 Rổ khoai lang đã nhiễm sùng 22 2.2 Ba loại nấm ký sinh 23 2.3 Chế phẩm nấm xanh 23 2.4 Pheromone giới tính tổng hợp 24 2.5 Bố trí thí nghiệm 1 25 2.6 Bẫy pheromone giới tính tổng hợp hấp dẫn SKL và lây nhiễm 28 nấm xanh Ma 2.7 Bố trí thí nghiệm 3 28 2.8 Bố trí thí nghiệm 4 30 3.1 Sùng khoai lang bị nấm xanh, nấm trắng ký sinh... quan trọng trên ruộng khoai lang Một số nghiên cứu đã ghi nhận có sự xuất hiện của nấm trắng (Beauveria bassiana) Dưới điều kiện ẩm độ và mật độ sùng cao, nấm Beauveria bassiana có thể khiến sùng chết với tỷ lệ khá cao, nhưng ở điều kiện ngoài đồng thì nấm này lại ít khi phát triển thành dịch trên sùng (Capinera, 2006) 9 1.2.7 Biện pháp phòng trị Theo Dương Minh (1999), để phòng trị sùng khoai lang thường... nghiệm) 21 Hình 2.1 Rổ khoai lang đã nhiễm sùng  Nguồn nấm ký sinh a) Nấm xanh (Ma) b) Nấm trắng (Bb) c) Nấm tím (Pae) Hình 2.2 Ba loại nấm ký sinh - Dung dịch nấm Metarhizium anisopliae (Ma), nấm Beauveria bassiana (Bb), nấm Paecilomyces sp (Pae) Dung dịch bào tử nấm xanh (Ma), nấm trắng (Bb) và nấm tím (Pae) được lấy trực tiếp từ đĩa petri Các đĩa nấm sau khi cấy khoảng 2 tuần, quan sát thấy bào tử đã... hại rất nặng trong khi trên đất mới được trồng khoai vụ đầu, thường ít bị sùng phá hại hơn (Nguyễn Đức Khiêm, 2006) Miyatake (1995) đã ghi nhận khoảng cách phân tán cùa sùng ở điều kiện ngoài đồng khi không có trồng khoai lang là lớn hơn so với tại các vùng có trồng khoai lang Khoảng cách di chuyển lớn nhất của sùng ở nơi có trồng khoai lang là 500 m trong khi đó tại nơi không trồng khoai lang lại lên... ấu trùng sùng khoai lang diễn ra khoảng 35 ngày (Capinera, 1998) Như vậy, nhiệt độ càng tăng thì thời gian phát triển của ấu trùng sùng khoai lang càng giảm 5 c Nhộng Ấu trùng sùng khoai lang hóa nhộng ngay trong đường đục Thời gian nhộng phát triển từ 4-10 ngày Nhộng của sùng khoai lang thuộc dạng nhộng trần, dài từ 4-8 mm, lúc đầu cơ thể có màu trắng sữa về sau chuyển sang màu vàng Vòi của nhộng ... TÓM LƯỢC Đề tài Khảo sát hiệu lực nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) điều kiện phòng thí nghiệm thực phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học,... 2.2.1 Thí nghiệm 1: khảo sát hiệu lực nấm xanh Ma, nấm trắng Bb nấm tím Pae thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) điều kiện phòng thí nghiệm 24 2.2.2 Thí nghiệm 2: khảo. .. trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) điều kiện phòng thí nghiệm Bảng 3.4 Khả lây lan dạng nấm xanh Ma thành trùng sùng khoai lang (Cylas formicarius Fabricius) điều kiện phòng thí nghiệm