khảo sát hiệu quả của interferon alpha và gamma gà biểu hiện trên hệ thống pichia pastoris trong phòng bệnh viêm gan do virus type i trên vịt con

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG ĐỒN THỊ BÍCH TRÂM KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA INTERFERON ALPHA VÀ GAMMA GÀ BIỂU HIỆN TRÊN HỆ THỐNG PICHIA PASTORIS TRONG PHÒNG BỆNH VIÊM GAN DO VIRUS TYPE I TRÊN VỊT CON LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2014 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MƠN THƯ Y    LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP HIỆU QUẢ CỦA CHICKEN INTERFERON ALPHA VÀ CHICKEN INTERFERON GAMMA BIỂU HIỆN TRÊN HỆ THỐNG PICHIA PASTORIS TRONG PHÕNG BỆNH VIÊM GAN DO VIRUS TYPE TRÊN VỊT CON Cán hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU ĐỒN THỊ BÍCH TRÂM MSSV: 3103067 LỚP: THÚ Y – K36 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MƠN THƯ Y    -Đề tài: Hiệu chicken interferon alpha chicken interferon gama biểu hệ thống Pichia pastoris phòng bệnh viêm gan virus type vịt Do sinh viên Đồn Thị Bích Trâm thực Cần Thơ từ tháng 08/2014 đến tháng 12/2014 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Duyệt Bộ môn Duyệt Giáo viên hƣớng dẫn HỒ THỊ VIỆT THU Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Duyệt khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố luận văn trước Cần thơ, ngày … tháng … năm 2014 Tác giả luận văn Đồn Thị Bích Trâm iii LỜI CẢM TẠ Xin kính dâng lên ơng bà, cha mẹ lịng biết ơn sâu sắc quý trọng nhất, người cố gắng tạo điều kiện để tơi thực hồi bão Xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Cơ Hồ Thị Việt Thu tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp Thầy Lê Hoàng Sĩ – Cố vấn học tập tận tình dạy giúp đỡ suốt năm học vừa qua Quý thầy, cô Trường Đại Học Cần Thơ, đặc biệt thầy, cô thuộc Bộ Môn Chăn Nuôi Bộ Môn Thú Y khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng tận tình truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian học trường Chị Nguyễn Minh Thùy anh Lê Trần Hoài Khanh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Chị Nguyễn Thị Thanh Giang (Trung tâm viện Cơng Nghệ Sinh Học Thành phố Hồ Chí Minh) hết lịng giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Các bạn lớp Thú Y K36 giúp đỡ động viên trình học tập sống Xin kính gởi tới q thầy, cơ, người thân lời chúc sức khỏe, thành công xin nhận nơi lòng biết ơn sâu sắc Xin gởi đến bạn bè lời chúc sức khỏe lời chúc thành công đường nghiệp tương lai Cuối xin cảm ơn chân thành đến Hội Đồng Giám Khảo dành thời gian đọc, xem xét đóng góp ý kiến q báo cho luận văn tơi Đồn Thị Bích Trâm iv TĨM TẮT Đề tài: “Hiệu chicken interferon alpha chicken interferon gama biểu hệ thống Pichia pastoris phòng bệnh viêm gan virus type vịt con” tiến hành từ tháng 08/2014 đến tháng 12/2014 Trại nghiên cứu thực nghiệm Nông nghiệp, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ Nghiên cứu thực nhằm khảo sát hiệu interferon alpha gà interferon gamma gà biểu hệ thống Pichia pastoris phòng bệnh viêm gan vịt virus type vịt Hiệu phòng bệnh sinh phẩm thực qua thí nghiệm: Xác định liều gây chết 50% vịt thí nghiệm (LD50) cách cho vịt uống 0,2ml dịch virus viêm gan vịt type (DHV-1) từ nồng độ 100 đến 10-6 Dùng interferon alpha gà tái tổ hợp (rChIFN-α) interferon gamma gà tái tổ hợp (rChIFN-γ) với liều 100µg/0,1ml/con để đánh giá độ an tồn Thử hoạt tính kháng virus rChIFN-α rChIFN-γ riêng rẽ cách dùng 0,1ml rChIFN-α rChIFN-γ với liều 10µg, 50µg 100µg kết hợp với liều 100µg +1µg, 100µg +10µg, 50µg +1µg, 50µg +10µg sau 24h gây nhiễm virus Khảo sát liều thích hợp dùng phịng DHV-1 rChIFNs cách cho vịt nhỏ mắt, mũi 0,1ml/con rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ với liều 100µg +1µg 100µg +10µg Sử dụng dịch rChIFNs liên tiếp ngày, ngày liều, sau gây nhiễm DHV-1 Kết thí nghiệm xác định sử dụng 0,2ml DHV-1 với liều 103LD50 gây chết 50% vịt thí nghiệm Sử dụng sinh phẩm rChIFNs với liều thấp 100µg/0,1ml/con an tồn cho vịt Sử dụng rChIFNs làm giảm tỷ lệ bệnh tỷ lệ chết vịt thí nghiệm so với đối chứng dương, đồng thời sử dụng dịch rChIFNs làm tăng hiệu giá kháng thể vịt Sử dụng rChIFN-α liều 50μg 100μg làm giảm tỷ lệ vịt bệnh chết mạnh so với sử dụng liều 10μg rChIFN-α rChIFN-γ Mặc khác, sử dụng kết hợp rChIFN-α với rChIFN-γ mang lại hiệu kháng virus cao sử dụng riêng rẽ loại rChIFNs, dùng liều kết hợp 100µg rChIFN-α +1µg rChIFN-γ 100µg rChIFN-α +10µg rChIFN-γ làm giảm tỷ lệ bệnh chết cao so với liều lại Đặc biệt, sử dụng liều kết hợp 100µg rChIFN-α +1µg rChIFN-γ 100µg rChIFN-α +10µgrChIFN-γ phịng bệnh viêm gan vịt virus type làm giảm tỷ lệ vịt bệnh chết mà giúp cải thiện tăng trọng, làm tăng hiệu giá kháng thể kháng virus DHV-1 vịt Kết thí nghiệm chứng minh rChIFN-α rChIFN-γ có tiềm việc phịng bệnh viêm gan virus type vịt v MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA i TRANG KÝ DUYỆT ii LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM TẠ iv TÓM TẮT v MỤC LỤC vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT ix DANH SÁCH BẢNG xi DANH SÁCH HÌNH xii Chƣơng ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Interferon 2.1.1 Sơ lược interferon 2.1.2 Phân loại interferon 2.1.3 Vai trò interferon 2.1.4 Cơ chế hoạt động interferon 2.2 Interferon gà 2.2.1 Phân loại interferon gà 2.2.2 Interferon alpha gà 2.2.3 Interferon gamma gà 2.3 Sự biểu ChIFN-α ChIFN-γ hệ thống Pichia pastoris 2.4 Các nghiên cứu sử dụng rChIFN- α rChIFN-γ 10 2.4.1 Nghiên cứu nước 11 2.4.2 Nghiên cứu nước 11 2.5 Bệnh viêm gan virus vịt 12 2.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 12 2.5.1.1 Nghiên cứu nước 12 2.5.1.2 Nghiên cứu nước 13 vi 2.5.2 Căn bệnh 13 2.5.2.1 Đặc điểm hình thái 13 2.5.2.2 Đặc tính sinh học virus 14 2.5.2.3 Sức đề kháng 14 2.5.3 Truyền nhiễm học 14 2.5.3.1 Loài mắc bệnh 14 2.5.3.2 Phương thức truyền lây 15 2.5.3.3 Cơ chế sinh bệnh 15 2.5.3.4 Triệu chứng 15 2.5.3.5 Bệnh tích 16 2.5.3.6 Chẩn đoán 17 2.5.3.7 Phòng bệnh 18 2.5.3.8 Điều trị 19 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 20 3.1 Nội dung phương pháp thí nghiệm 20 3.2 Phương tiện thí nghiệm 20 3.2.1 Thời gian địa điểm 20 3.2.2 Vật liệu thí nghiệm 20 3.3 Phương pháp thí nghiệm 21 3.3.1 Chuẩn bị chuồng nuôi 21 3.3.2 Bố trí thí nghiệm 21 3.3.2.1 Chuẩn độ xác định liều gây chết 50% vịt DHV-1 vịt 21 3.3.2.2 Đánh giá độ an toàn rChIFN-α rChIFN-γ vịt 23 3.3.2.3 Khảo sát hoạt tính kháng virus rChIFN-α rChIFN-γ vịt 23 3.3.2.4 Khảo sát hoạt tính kháng virus dùng liều kết hợp rChIFN-α với rChIFN-γ vịt 25 vii 3.3.2.5 Đánh giá hiệu phòng bệnh viêm gan vịt virus type dùng liều kết hợp rChIFN-α với rChIFN-γ vịt 27 3.4 Phản ứng trung hòa 29 3.5 Thống kê xử lí số liệu 30 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Kết xác định nồng độ liều gây chết 50% vịt (LD50) DHV-1 vịt 31 4.2 Kết đánh giá độ an toàn rChIFN-α rChIFN-γ liều nhỏ mắt, mũi 100µg/con vịt 32 4.3 Kết thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng DHV-1 rChIFN-α rChIFN-γ vịt 32 4.3.1 Kết theo dõi vịt mắc bệnh chết thí nghiệm 32 4.3.2 Kết kiểm tra kháng thể đặc hiệu kháng DHV-1 33 4.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng DHV-1 rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ vịt 34 4.4.1 Kết theo dõi vịt mắc bệnh chết thí nghiệm 34 4.4.2 Kết kiểm tra kháng thể đặc hiệu kháng DHV-1 36 4.5 Kết khảo sát liều thích hợp phịng bệnh viêm gan vịt DHV-1 rChIFN-α kết hợp rChIFN-γ vịt 37 4.5.1 Kết theo dõi vịt mắc bệnh chết thí nghiệm 37 4.5.2 Kết theo dõi tăng trọng vịt trước sau thí nghiệm 38 4.5.3 Kết kiểm tra kháng thể đặc hiệu kháng DHV-1 vịt tuần tuổi vịt tuần tuổi 39 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 Phụ chƣơng Xử lý số liệu 47 viii DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Nguyên chữ Nghĩa tiếng việt ATP Adenosine triphosphate Phân tử sinh lượng cDNA Complementary deoxyribonucleic acid Chuỗi DNA bổ sung CEF Chicken embryo fibroblast Tế bào xơ phôi gà ChIFN Chicken interferon Interferon gà COS Cell line derived from kidney cells of the Dòng tế bào từ tế bào thận African green mokey khỉ xanh Châu Phi DHAV Duck hepatitis A virus Virus viêm gan vịt thuộc A DHV Duck hepatitis virus Virus gây bệnh viêm gan vịt DNA Deoxyribonucleic acid DEL Duck embryo liver ĐC Đối chứng E Coli Escherichia coli IBDV Infectious bursal diease virus Virus gây bệnh Gumboro IRF Interferon regulatory factor Thụ thể interferon gắn vào IFN Inteferon Cảm nhiễm tố IFNGR Interferon gamma receptor Yếu tố điều hòa cảm nhiễm tố UI Units Đơn vị quốc tế LD50 Lethal dose 50% Liều gây chết 50% động vật Tế bào gan phơi vịt thí nghiệm MaIFN Mammalian interferon Interferon loài hữu nhũ MHC Major histocompatibility complex Phức hợp tương thích mơ hóa học MEM Minimum essential medium Môi trường nuôi cấy tế bào mRNA Messenger ribonucleic acid RNA thông tin NDV Newcastle diease virus Virus gây bệnh Newcastle NK Natural killer Tế bào giết tự nhiên NT Nghiệm thức P pastoris Pichia pastoris Hệ thống nấm men rChIFNs Recombinant chicken interferon system Interferon gà tái tổ hợp rChIFN-α Recombinant chicken interferon alpha Interferon alpha gà tái tổ hợp ix Nguyễn Văn Nguyên Nguyễn Quốc Bình, 2012 Inteferon ứng dụng Trung tâm công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Xn Bình, Trần Xn Hạnh Tô Thị Phấn, 2005 109 bệnh gia cầm cách phịng trị Nhà xuất Nơng nghiệp Hà Nội Hà Nội 375 trang Pie J., Sekellick M J., Marcus P I., Choi I S and Collisson E W., 2001 Chicken interferon type I inhibits infectious bronchitis virus replication and associated respiratory illness Journal of Interferon and Cytokine Research, 21 (12): 1071-7 Phạm Hùng, Đỗ Văn Khiên, Đặng Thanh Hiền, Phạm Thị Bích Liên Đỗ Văn Tấn, 2014 Xác định tỷ lệ lưu hành virus viêm gan vịt đàn vịt nuôi Nam Trung Bộ Tạp chí Khoa học Kỹ Thuật Thú y, số 3: 5-9 Phạm Văn Ty, 2005 Virus học Nhà xuất Giáo Dục 468 trang Plachy J., Weining K C., Kremmer E., Puehler F., Hala K., Kaspers B and Staeheli P., 1999 Protective effect of type I and type II interferons toward Rous sarcoma virus-induced tumors in chicken Virology, 256 (1): 85-91 Sekellick M J., Ferrandino A F., Hopkins D A and Marcus P I., 1994 Chicken interferon type I and II enhance synergistically the antiviral state and nitric oxide secretion Journal of Interferon and Cytokine Research, 18 (6): 407-414 Song K D., Lillehoj H S., Choi K D., Zarlenga D and Han J Y., 1997 Expression and functional characterization of recombinant chicken interferongamma Vet Immunol Immunopathol, 48(3-4): 321-323 Song L., Zhao De-gang., Wu Yong-jun and Li Y., 2008 Transient expression chicken alpha interferon gene in lecttuce Journal of Zhejiang University, Science B, (5): 351-355 Tanaka N., Sato M., Lamphier M S., Nozawa H., Oda E., Noguchi S., Schreiber R D., Tsujimoto Y and Taniguchi T., 1998 Type I interferons are essential mediators of apoptotic death in virally infected cell Gene to Cells, 3: 29-37 Tompkin W A., 1999 Immunomodulation and therapeutic effects of the oral use of interferon alpha: Mechanism of Action Journal of Interferon and Cytokine Research, 19 (8): 817-828 Toth, T.E (1969), Studies of an agent causing mortaliry among ducklings immune to duck virus hepatitis Avian Dis, 13: 535-539 Trần Ngọc Bích Hồ Thị Việt Thu, 2012 Giáo trình miễn dịch học đại cương Nhà xuất Đại Học Cần Thơ Cần Thơ 131 trang Võ Thị Minh Tâm, Nguyễn Thị Thanh Giang, Nguyễn Đăng Quân Nguyễn Quốc Bình, 2014 Tạo dịng, biểu xác định hoạt tính sinh học interferon gà tái tổ hợp thu nhận từ hệ thống nấm men Pichia pastoris Tạp chí sinh học, 36(1): 216-225 44 Vương Cát Khánh, Ngô Thị Huyền Trang, Nguyễn Phạm Phương Thanh, Đặng Thị Phương Thảo, Trần Linh Thước, 2014 Nghiên cứu cấu trúc sàng lọc nấm men Pichia pastoris tái tổ hợp đa biểu nhân tố tăng trưởng từ tiểu cầu (BB-PDGF-BB) mức độ cao Tạp chí sinh học, 36(1se): 7783 Weining K C., Schultz U., Munster U., Kaspers B., and Staeheli P., 1996 Biological properties of recombinant chicken interferon gamma European Journal of Immunology, 26 (10): 2440-2447 Woolcock P R Fabricant J., 1997 Duck Hepatitis Diseases of Poultry (Calnek B W., Barnes H J., Beard C W., McDougald L R.) Saif Y M., Iowa State University Press, Ames, Iowa, USA, 661-670 Tài liệu Internet Donnelly R P and Kotenko S V., 2010 Interferon lambda : A new addition to an old family http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20712453 OIE (2008) Chapter 2.3.8 Duck virus hepatitis Terrestrial Manual 2008 http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/ 2008/pdf/2.03.08_DVH.pdf Yang L., Meng S., Xu L., Bi Y., Jia X., Li J., Sun L and Liu W., 2013 The differential antiviral activities of chicken interferon α (ChIFN-α) and ChIFN-β are related to distinct interferon-stimulated gene expression http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23527158 Steimle V., Siegrist C A., Mottet A., Lisowska-Grospierre B and Mach B., 1994 Regulation of MHC class II expression by interferon-gamma mediated by the transactivator gene CIITA http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8016 45 Phụ chƣơng XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng virus rChIFN-α rChIFN-γ Bảng 4.2 Tỷ lệ vịt mắc bệnh chết nghiệm thức thí nghiệm Tỷ lệ vịt mắc bệnh Chi-Square Test: 10µg rChIFN-α, ĐC (+) Expected counts are printed below observed Chi-Square contributions are printed below 10µg rChIFN-α ĐC (+) Total 11 15 26 13.00 13.00 0.308 0.308 4 2.00 2.00 2.000 2.000 Total 15 15 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 50µg rChIFN-α, ĐC (+) Expected counts are printed below observed Chi-Square contributions are printed below 50µg rChIFN-α ĐC (+) Total 15 23 11.50 11.50 1.065 1.065 7 3.50 3.50 3.500 3.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 9.130, DF = 1, P-Value = 0.003 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 10µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed Chi-Square contributions are printed below 10µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 13 15 28 14.00 14.00 0.071 0.071 2 1.00 1.00 1.000 1.000 Total 15 15 30 Chi-Sq = 2.143, DF = 1, P-Value = 0.143 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 50µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed 46 counts expected counts counts expected counts counts expected counts counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 12 15 27 13.50 13.50 0.167 0.167 3 1.50 1.50 1.500 1.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 3.333, DF = 1, P-Value = 0.068 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 10µg rChIFN-α, 50µg rChIFN-α Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10µg 50µg rChIFN-α rChIFN-α Total 11 19 9.50 9.50 0.237 0.237 11 5.50 5.50 0.409 0.409 Total 15 15 30 Chi-Sq = 1.292, DF = 1, P-Value = 0.256 Tỷ lệ chết Chi-Square Test: 10µg rChIFN-α, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 10µg rChIFN-α ĐC (+) Total 14 20 10.00 10.00 1.600 1.600 10 5.00 5.00 3.200 3.200 Total 15 15 30 Chi-Sq = 9.600, DF = 1, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: 50µg rChIFN-α, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50µg rChIFN-α ĐC (+) Total 14 19 9.50 9.50 2.132 2.132 10 11 5.50 5.50 3.682 3.682 Total 15 15 30 Chi-Sq = 11.627, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg 47 rChIFN-α 9.00 2.778 ĐC (+) 14 9.00 2.778 Total 18 11 12 6.00 6.00 4.167 4.167 Total 15 15 30 Chi-Sq = 13.889, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: 10µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 14 23 11.50 11.50 0.543 0.543 3.50 3.50 1.786 1.786 Total 15 15 30 Chi-Sq = 4.658, DF = 1, P-Value = 0.031 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 50µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 50µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 14 22 11.00 11.00 0.818 0.818 4.00 4.00 2.250 2.250 Total 15 15 30 Chi-Sq = 6.136, DF = 1, P-Value = 0.013 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 10µg rChIFN-α, 100µg rChIFN-α Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 10µg 100µg rChIFN-α rChIFN-α Total 10 5.00 5.00 0.200 0.200 11 20 10.00 10.00 0.100 0.100 Total 15 15 30 Chi-Sq = 0.600, DF = 1, P-Value = 0.439 Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α, 10µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected 100µg 10µg rChIFN-α rChIFN-γ Total 13 48 counts counts counts counts 6.50 6.50 0.962 0.962 11 17 8.50 8.50 0.735 0.735 Total 15 15 30 Chi-Sq = 3.394, DF = 1, P-Value = 0.065 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng virus dùng rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ Bảng 4.4 Tỷ lệ vịt mắc bệnh chết vịt dùng rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ Tỷ lệ bệnh Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 15 23 11.13 11.87 0.880 0.825 3.87 4.13 2.529 2.371 Total 15 16 31 Chi-Sq = 6.605, DF = 1, P-Value = 0.010 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 15 23 11.50 11.50 1.065 1.065 7 3.50 3.50 3.500 3.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 9.130, DF = 1, P-Value = 0.003 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α+ 10µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α+ 10µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 15 22 11.00 11.00 1.455 1.455 49 Total 4.00 4.000 15 4.00 4.000 15 30 Chi-Sq = 10.909, DF = 1, P-Value = 0.001 cells with expected counts less than Chi-Square Test: 50µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50µg rChIFN-α+ 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 11 15 26 13.00 13.00 0.308 0.308 4 2.00 2.00 2.000 2.000 Total 15 15 30 Chi-Sq = 4.615, DF = 1, P-Value = 0.032 cells with expected counts less than Tỷ lệ chết Chi-Square Test: ĐC(+), ĐC(-) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts ĐC(+) ĐC(-) Total 13 13 6.50 6.50 6.500 6.500 2 15 17 8.50 8.50 4.971 4.971 Total 15 15 30 Chi-Sq = 22.941, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 13 17 8.50 8.50 2.382 2.382 2 11 13 6.50 6.50 3.115 3.115 Total 15 15 30 Chi-Sq = 10.995, DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α 50 ĐC(+) 13 8.00 3.125 + 10µg rChIFN-γ 8.00 3.125 Total 16 2 12 14 7.00 7.00 3.571 3.571 Total 15 15 30 Chi-Sq = 13.393, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC(+), 50µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50µg rChIFN-α + 1µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 13 18 9.00 9.00 1.778 1.778 2 10 12 6.00 6.00 2.667 2.667 Total 15 15 30 Chi-Sq = 8.889, DF = 1, P-Value = 0.003 Chi-Square Test: ĐC(+), 50µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 50µg rChIFN-α + 10µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 13 18 9.00 9.00 1.778 1.778 2 10 12 6.00 6.00 2.667 2.667 Total 15 15 30 Chi-Sq = 8.889, DF = 1, P-Value = 0.003 Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ, 50µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg 50µg rChIFN-α rChIFN-α + 10µg + 1µg rChIFN-γ rChIFN-γ Total 4.00 4.00 0.250 0.250 12 10 22 11.00 11.00 0.091 0.091 Total 15 15 30 Chi-Sq = 0.682, DF = 1, P-Value = 0.409 51 cells with expected counts less than Thí nghiệm hiệu phòng bệnh rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ Bảng 4.6 Tỷ lệ vịt mắc bệnh chết dùng rChIFN-α kết hợp với rChIFN-γ Tỷ lệ vịt bệnh Chi-Square Test: ĐC(-), ĐC(+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts ĐC(-) ĐC(+) Total 15 15 7.50 7.50 7.500 7.500 15 15 7.50 7.50 7.500 7.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 30.000, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 15 21 10.50 10.50 1.929 1.929 9 4.50 4.50 4.500 4.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 12.857, DF = 1, P-Value = 0.000 cells with expected counts less than Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 10µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 15 21 10.50 10.50 1.929 1.929 9 4.50 4.50 4.500 4.500 Total 15 15 30 Chi-Sq = 12.857, DF = 1, P-Value = 0.000 cells with expected counts less than Tỷ lệ vịt chết 52 Chi-Square Test: ĐC(+), ĐC(-) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts ĐC(+) ĐC(-) Total 13 13 6.50 6.50 6.500 6.500 2 15 17 8.50 8.50 4.971 4.971 Total 15 15 30 Chi-Sq = 22.941, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 13 15 7.50 7.50 4.033 4.033 2 13 15 7.50 7.50 4.033 4.033 Total 15 15 30 Chi-Sq = 16.133, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 10µg ĐC(+) rChIFN-γ Total 13 16 8.00 8.00 3.125 3.125 2 12 14 7.00 7.00 3.571 3.571 Total 15 15 30 Chi-Sq = 13.393, DF = 1, P-Value = 0.000 Kết theo dõi tăng trọng vịt trƣớc sau thí nghiệm Bảng 4.7 Tăng trọng vịt theo thời gian thí nghiệm Tăng trọng ngày Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), NTĐC(-) Two-sample T for NTĐC(+) vs NTĐC(-) N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 15 45.35 4.94 1.3 NTĐC(-) 15 45.09 4.98 1.3 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (NTĐC(-)) Estimate for difference: 0.26 95% CI for difference: (-3.46, 3.98) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = 0.14 P-Value = 0.887 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ 53 DF = 27 Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 15 45.35 4.94 1.3 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 15 45.01 4.32 1.1 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) Estimate for difference: 0.34 95% CI for difference: (-3.13, 3.82) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = 0.20 P-Value = 0.840 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 15 45.35 4.94 1.3 100µg rChIFN-α + 10µg rC 15 45.43 3.62 0.94 DF = 27 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -0.08 95% CI for difference: (-3.34, 3.18) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -0.05 P-Value = 0.960 DF = 25 Two-Sample T-Test and CI: 100µg rChIFN-α + 1µg rCh, 100µg rChIFN-α + 10µg rC Two-sample T for 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 15 45.01 4.32 1.1 100µg rChIFN-α + 10µg rC 15 45.43 3.62 0.94 Difference = mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -0.43 95% CI for difference: (-3.41, 2.56) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -0.29 P-Value = 0.773 DF = 27 Tăng trọng ngày Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), NTĐC(-) Two-sample T for NTĐC(+) vs NTĐC(-) N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 90.84 2.17 1.5 NTĐC(-) 15 130.13 5.10 1.3 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (NTĐC(-)) Estimate for difference: -39.30 95% CI for difference: (-47.99, -30.60) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -19.44 P-Value = 0.003 DF =2 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 90.84 2.17 1.5 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 146.70 3.76 1.1 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -55.86 95% CI for difference: (-63.94, -47.78) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -29.74 P-Value = 0.001 DF =2 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 90.84 2.17 1.5 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 165.00 3.06 0.85 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -74.16 95% CI for difference: (-96.43, -51.90) 54 T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -42.33 P-Value = 0.015 DF =1 Two-Sample T-Test and CI: 100µg rChIFN-α + 1µg rCh, 100µg rChIFN-α + 10µg rC Two-sample T for 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ vs 100µg rChIFN-α + 10µgrChIFN-γ N Mean StDev SE Mean 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 146.70 3.76 1.1 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 165.00 3.06 0.85 Difference = mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -18.31 95% CI for difference: (-21.17, -15.44) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -13.28 P-Value = 0.000 DF =21 Tăng trọng ngày 14 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), NTĐC(-) Two-sample T for NTĐC(+) vs NTĐC(-) N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 152.22 5.82 4.1 NTĐC(-) 15 210.4 10.2 2.6 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (NTĐC(-)) Estimate for difference: -58.18 95% CI for difference: (-120.27, 3.91) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -11.91 P-Value = 0.053 DF =1 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 152.22 5.82 4.1 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 206.28 8.15 2.4 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -54.06 95% CI for difference: (-114.28, 6.15) T-Test of difference = (vs not =):T-Value = -11.41 P-Value = 0.056 DF = Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 152.22 5.82 4.1 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 223.23 9.26 2.6 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -71.02 95% CI for difference: (-132.64, -9.39) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -14.64 P-Value = 0.043 DF = Two-Sample T-Test and CI: 100µg rChIFN-α + 1µg rCh, 100µg rChIFN-α + 10µg rC Two-sample T for 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 206.28 8.15 2.4 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 223.23 9.26 2.6 Difference = mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -16.95 95% CI for difference: (-24.18, -9.73) T-Test of difference = (vs not =): T-Value= -4.87 P-Value = 0.000 DF = 22 Tăng trọng ngày 21 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), NTĐC(-) Two-sample T for NTĐC(+) vs NTĐC(-) N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 241.913 0.156 0.11 NTĐC(-) 15 334.5 10.7 2.8 55 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (NTĐC(-)) Estimate for difference: -92.62 95% CI for difference: (-98.53, -86.70) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -33.60 P-Value = 0.000 DF =14 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 241.913 0.156 0.11 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 336.4 15.5 4.5 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -94.50 95% CI for difference: (-104.35, -84.65) T-Test of difference = 0(vs not =): T-Value = -21.12 P-Value = 0.000 DF = 11 Two-Sample T-Test and CI: NTĐC(+), 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ Two-sample T for NTĐC(+) vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean NTĐC(+) 241.913 0.156 0.11 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 358.8 15.2 4.2 Difference = mu (NTĐC(+)) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -116.90 95% CI for difference: (-126.12, -107.69) T-Test of difference = 0(vs not =):T-Value = -27.65 P-Value = 0.000 DF = 12 Two-Sample T-Test and CI: 100µg rChIFN-α + 1µg rCh, 100µg rChIFN-α + 10µg rC Two-sample T for 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ vs 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ N Mean StDev SE Mean 100µg rChIFN-α + 1µg rCh 12 336.4 15.5 4.5 100µg rChIFN-α + 10µg rC 13 358.8 15.2 4.2 Difference = mu (100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ) - mu (100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ) Estimate for difference: -22.40 95% CI for difference: (-35.17, -9.64) T-Test of difference = (vs not =):T-Value = -3.64 P-Value = 0.001 DF = 22 Kết theo dõi hiệu giá kháng thể trƣớc sau thí nghiệm phòng bệnh Hiệu giá kháng thể tuần Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 20 20 10.00 10.00 10.000 10.000 80 100 180 90.00 90.00 1.111 1.111 Total 100 100 200 Chi-Sq = 22.222, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 20 20 56 10.00 10.00 10.000 10.000 80 100 180 90.00 90.00 1.111 1.111 Total 100 100 200 Chi-Sq = 22.222, DF = 1, P-Value = 0.000 Hiệu giá kháng thể tuần Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 80 40 120 60.00 60.00 6.667 6.667 20 60 80 40.00 40.00 10.000 10.000 Total 100 100 200 Chi-Sq = 33.333, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: 100µg rChIFN-α + 10µg rChIFN-γ, ĐC (+) Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 100µg rChIFN-α + 1µg rChIFN-γ ĐC (+) Total 80 40 120 60.00 60.00 6.667 6.667 20 60 80 40.00 40.00 10.000 10.000 Total 100 100 200 Chi-Sq = 33.333, DF = 1, P-Value = 0.000 57 58 ... trường Đ? ?i học Cần Thơ Nghiên cứu thực nhằm khảo sát hiệu interferon alpha gà interferon gamma gà biểu hệ thống Pichia pastoris phòng bệnh viêm gan vịt virus type vịt Hiệu phòng bệnh sinh phẩm... viêm gan virus type vịt con? ?? tiến hành v? ?i mục tiêu xác định hiệu phòng bệnh viêm gan vịt virus type ChIFN-α ChIFN-γ vịt Mục tiêu đề t? ?i: Khảo sát tính an tồn rChIFN-α rChIFN-γ vịt Khảo sát hiệu. .. NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MƠN THƯ Y    -Đề t? ?i: Hiệu chicken interferon alpha chicken interferon gama biểu hệ thống Pichia pastoris phòng bệnh viêm gan virus type vịt Do sinh viên