tình hình nhiễm leptospira trên chuộttại tỉnh an giang

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG NGUYỄN VĂN ĐẶNG TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA TRÊN CHUỘT TẠI TỈNH AN GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Tên đề tài TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA TRÊN CHUỘT TẠI TỈNH AN GIANG Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU NGUYỄN VĂN ĐẶNG MSSV: 3102941 Lớp: CN10Y4A1-K36 ii Cần Thơ, 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài “Tình hình nhiễm Leptospira chuột tỉnh An Giang” sinh viên Nguyễn Văn Đặng thực bệnh xá thú y phòng thí nghiệm vi sinh Bộ Môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ. Từ tháng 07 năm 2014 đến tháng 11 năm 2014. Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Duyệt Bộ Môn Duyệt Giảng viên hướng dẫn PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Duyệt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng i LỜI CẢM ƠN  Trong suốt thời gian học tập rèn luyện mái trường Đại học Cần Thơ, bên cạnh cố gắn nổ lực thân dạy bảo, giúp đỡ tận tình quý thầy cô, giúp đỡ chia bạn bè, người thân gia đình. Nay hoàn thành tốt khoá học, tất chân thành xin cám ơn cha mẹ tôi, người chịu bao gian khó để hoàn thành ước mơ tôi. Xin chân thành biết ơn: Cô Hồ Thị Việt Thu hết lòng quan tâm, động viên, bảo tận tình để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp. Cô Nguyễn Thị Bé Mười dìu dắt giúp đỡ mặt để thực tốt đề tài. Cô Châu Thị Huyền Trang nhiệt tình giúp đỡ, dạy bảo truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian cô làm cố vấn học tập cho tôi. Quý thầy cô Bộ Môn Thú Y - Bộ Môn Chăn Nuôi tận tâm truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm lẫn nhận thức xã hội cho suốt trình học tập rèn luyện mái trường Đại Học Cần Thơ. Xin chân thành cám ơn: Các cô chú, ban lãnh đạo, cán thú y Huyện Tịnh Biên, Tân Châu, Long Xuyên hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình lấy mẫu. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất anh chị, bạn bè giúp đỡ suốt thời gian học tập làm luận văn. Nguyễn Văn Đặng ii MỤC LỤC TRANG DUYỆT i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG . v DANH MỤC BIỂU ĐỒ . v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC VIẾT TẮT . vii TÓM LƯỢC . viii CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu Leptospirosis . 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới Leptospirosis 2.1.2 Tình hình nghiên cứu nước Leptospirosis 2.2 Căn bệnh học . 2.3 Truyền nhiễm học 2.3.1 Loài vật mắc bệnh . 2.3.2 Chất chứa mầm bệnh vật mang trùng 2.3.3 Đường lây lan . 2.3.4 Cơ chế sinh bệnh . 10 2.4 Triệu chứng bệnh tích . 11 2.4.1 Triệu chứng . 11 2.4.2 Bệnh tích . 12 2.5 Chẩn đoán 13 2.5.1 Dịch tễ học 13 2.5.2 Chẩn đoán lâm sàng 13 2.5.3 Chẩn đoán vi khuẩn học . 14 2.5.4 Chẩn đoán huyết học . 15 2.5.5 Sử dụng phương pháp sinh học phân tử . 17 2.6 Phòng bệnh 18 2.7 Điều trị . 19 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Thời gian địa điểm 20 iii 3.2 Nội dung nghiên cứu 20 3.3 Vật liệu thí nghiệm 20 3.3.1 Đối tượng. . 20 3.3.2 Thiết bị, dụng cụ . 20 3.4 Phương pháp tiến hành 22 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu. 22 3.4.2 Phương pháp thực phản ứng vi ngưng kết (MAT: Microscopic Agglutination Test) 22 3.4.3 Phương pháp thống kê số liệu . 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột An Giang . 27 4.2 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo giống 27 4.3 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm . 28 4.4 Tỷ lệ nhiễm chủng Leptospira chuột . 30 4.5 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết 33 4.6 Tỷ lệ nhiễm ghép chủng Leptospira chuột . 33 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Đề Nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 35 PHỤ CHƯƠNG . 38 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Các serogroup serovar L. interrogans Bảng 2.2: Đặc điểm lâm sàng phân biệt bệnh Leptospira với bệnh khác . 13 Bảng 3.1: Kháng nguyên sử dụng phản ứng vi ngưng kết MAT 21 Bảng 4.1: Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột . 27 Bảng 4.2: Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo giống . 27 Bảng 4.3: Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo địa điểm 28 Bảng 4.4: Tỷ lệ nhiễm chủng Leptospira chuột 30 Bảng 4.5: Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết 32 Bảng 4.6: Tỷ lệ nhiễm ghép chủng Leptospira chuột . 33 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống chuột đồng . 28 Biều đồ 2. Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm 29 Biểu đồ 3. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết . 32 v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Leptospira kính hiển vi điện tử Hình 2.2 Đường lây nhiễm mầm Leptospirosis Hình 2.3 Viêm thận mãn tính chó 12 Hình 3.1 Cách lấy máu chuột . 22 Hình 3.2 Sơ đồ chẩn đoán huyết học Leptospirosis . 23 Hình 3.3 Sơ đồ pha loãng huyết 24 Hình 3.4 Các mức độ ngưng kết phản ứng vi ngưng kết MAT 25 Hình 3.5 Sơ đồ nâng cao hiệu giá huyết . 26 vi DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nguyên chữ Nghĩa tiếng Việt PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp hay phản ứng khuếch đại gen MAT Microscopic Agglutination Test Phản ứng vi ngưng kết ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay Xét nghiệm liên kết miễn dịch với enzyme Immuno fluorescence Phản ứng miễn dịch huỳnh quang CF Complement fixation Phản ứng kết hợp bổ thể EMJH Ellinghausen-McCulloughJohnson-Harris Môi trường Ellinghansen-Mc Cullough cải tiến Johnson Harris WHO World Health Organization Tổ chức y tế giới IgM Immunoglobulin M IgG Immunoglobulin G IF vii TÓM LƯỢC Để khảo sát tình hình lưu hành xoắn khuẩn Leptospira chuột tỉnh An Giang từ có kế hoạch phòng ngừa thích hợp, thời gian từ 07/2014 đến 11/2014 thu thập tiến hành xét nghiệm huyết học phản ứng vi ngưng kết 126 mẫu huyết chuột, có 54 mẫu chuột cống 72 mẫu chuột đồng có nguồn gốc An Giang. Chuột xác định dương tính với Leptospira hiệu giá ngưng kết kháng thể ≥ 1/20. Kết ghi nhận sau: Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột 32,5%, chuột cống nhiễm 40,7%, chuột đồng nhiễm 26,4%. Thành phần chủng Leptospira nhiễm chuột đa dạng phức tạp, 24 chủng Leptospira chuẩn dùng chẩn đoán huyết học có 21 chủng dương tính với chuột, Tính chung tỷ lệ chủng nhiễm chuột cống chuột đồng: L. icterohaemorrhagiae Verdun 13,25% L. icterohaemorrhagiae copenhagini Wijnberg 10,84% L. canicola canicola Chiffon 9,64% L. gryppotyphosa gryppotyphosa Moskva V 8,43% L. pomona pomona Pomona 6,02% Hiệu giá ngưng kết từ 1/20-1/320, cho thấy chuột vật mang trùng không mắc bệnh. Số lượng chủng nhiễm cá thể phổ biến từ 2-6 chủng. Trong nhiễm ghép chủng chiếm tỷ lệ cao (36,59%), nhiễm ghép chủng chiếm tỷ lệ thấp (2,44%). Với kết chứng tỏ chuột vật mang trùng lớn đối tượng lan truyền mầm bệnh Leptospira cần quan tâm. Đây yếu tố nguy sức khoẻ vật nuôi cộng đồng. viii Hút giọt ô nhỏ lên phiến kính. Đọc kết kính hiển vi đen có độ phóng đại 10 lần. Lần lượt quan sát kết 24 ô tương ứng với 24 chủng kháng nguyên. Tiến hành đối chứng âm Trên ô đĩa nhựa nhỏ 0,05ml dung dịch đệm 0,05ml kháng nguyên sống tương ứng với chủng Leptospira. Dưới kính hiển vi đen Leptospira xuất vi trường, không tự ngưng kết chuyển động tốt. Đánh giá kết Dưới kính hiển vi đen với độ phóng đại 10 lần, mức độ ngưng kết ghi nhận sau: - Âm tính (-): xoắn khuẩn không ngưng kết, di động tự đối chứng âm. - Dương tính (+): vi trường xuất cụm hay mảng ngưng kết trắng đục, rìa có tua xoắn khuẩn Leptospira dính vào, số Leptospira tự so với đối chứng âm. Dựa vào mức độ ngưng kết để đánh giá kết dương tính. (http://www.pasteur-kh.org/symposium_2014/files/2014/03/Juan-Carrique_1.pdf) Hình 3.4 Các mức độ ngưng kết phản ứng vi ngưng kết MAT Fiure + + + +: Tất Leptospira ngưng kết, cụm ngưng kết lớn, xoắn khuẩn tự do. + + +: Trên 75% số xoắn khuẩn bị ngưng kết, xoắn khuẩn tự do. + +: Từ 50% số xoắn khuẩn bị ngưng kết, có 1/2 số xoắn khuẩn tự do. 25 +: Từ 25% đến 50% số xoắn khuẩn bị ngưng kết, nhiều xoắn khuẩn tự do. Nâng cao hiệu giá Đối với mẫu huyết xét nghiệm mức 2+, 3+, 4+ tiếp tục nâng hiệu giá pha loãng huyết lên 1/20, 1/40, 1/80, phản ứng ngưng kết âm tính dương tính mức độ ngưng kết mức 2+ mẫu huyết hoàn tất. Cách pha loãng huyết thanh: lấy 1ml huyết nồng độ 1/10 pha với 1ml dung dịch đệm, ta có độ pha loãng 1/20. Tương tự, pha loãng huyết đến mức cần thiết. 1ml dung dịch đệm 1ml 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 Hình 3.5 Sơ đồ nâng cao hiệu giá huyết Figure 3.4.3 Phương pháp thống kê số liệu Số mẫu dương tính Tỷ lệ nhiễm (%) = x 100 Tổng số mẫu khảo sát Số liệu mẫu thu thập xử lý sơ phần mềm Microsoft Excel 2013. Xử lý thống kê phần mềm Minitab 13 theo phương pháp Chi-square. 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột An Giang Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột Table Số mẫu xét nghiệm Số mẫu dương tính 126 Tỷ lệ (%) 41 32,5 Qua bảng 4.1 cho thấy, số 126 mẫu kiểm tra có 41 mẫu dương tính, chiếm tỷ lệ 32,5%. Tỷ lệ phù hợp với số kết nghiên cứu trước đây. Theo Quách Quốc Nam (2007) tỷ lệ dương tính chung chuột cống chuột đồng Thành Phố Cần Thơ 32,52%. Theo nghiên cứu Nguyễn Văn Nhã (2010) tỷ lệ chuột dương tính xung quanh trại chăn nuôi Công ty cổ phần Thuỷ Sản Sông Hậu (55,56%). Tỷ lệ chuột dương tính nghiên cứu thấp điều kiện địa lý thời gian lấy mẫu khác nhau, chuột xung quanh trại chủ yếu chuột cống sống gần với heo bò nên dễ mang mầm bệnh. 4.2 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo giống Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo giống Table Giống chuột Số mẫu xét nghiệm Số mẫu nhiễm Tỷ lệ (%) Chuột cống 54 22 40,7 Chuột đồng P 0,089 72 19 27 26,4 Biểu đồ 1. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống chuột đồng Biểu đồ Qua bảng 4.2 cho thấy, có 22/54 mẫu chuột cống 19/72 mẫu chuột đồng dương tính với Leptospira, chiếm tỷ lệ 40,7% 26,4%. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống cao chuột đồng, nhiên khác biệt ý nghĩa thống kê (P=0,089). Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống (40,7%) tương đối cao lại thấp so với nghiên cứu Vũ Đình Hưng ctv (2002) Hà Nội, tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống (50,31%). Sự khác hai địa điểm khác địa lý, môi trường, thời gian năm 2002 Hà Nội bùng phát 28 ổ dịch Leptospira người (Lê Công Tảo, 2003). Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột đồng (26,4%) phù hợp với nghiên cứu Hoàng Mạnh Lâm ctv (2002) DakLak kiểm tra 714 mẫu huyết chuột đồng có 151 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ (21,1%). Và kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Quách Quốc Nam (2007) Cần Thơ, tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột cống 46% chuột đồng 23,28%. Chuột cống có tỷ lệ nhiễm cao chuột đồng chuột cống thường ăn tạp sống gần trang trại, khu công nghiệp, khu đông dân cư, chợ, bệnh viện, bãi rác, ống cống…là nơi có nhiều mầm bệnh cư trú. 4.3 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm Bảng 4.3 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo địa điểmble Số mẫu xét Tỷ lệ % Địa điểm Số mẫu nhiễm nghiệm Long Xuyên 40 11 27,5 Tân Châu 42 13 30,9 Tịnh Biên 44 17 38,6 Tổng cộng 126 41 100 28 P 0,534 Tỷ lệ (%) 45 38,6 40 35 30 30,9 27,5 25 20 15 10 Long Xuyên Tân Châu Tịnh Biên Biều đồ 2. Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm Biểu đồ Từ bảng 4.3 cho thấy, chuột Long Xuyên dương tính với Leptospira 27,5%, Tân Châu 30,9% Tịnh Biên nhiễm 38,6%. Tuy nhiên tỷ lệ nhiễm Leptospira địa điểm khác ý nghĩa thống kê (p=0,534). Chuột Tịnh Biên nhiễm Leptospira với tỷ lệ cao địa điểm nghiên cứu khác Tịnh Biên huyện có ngành chăn nuôi trâu bò truyền thống, huyện tiếp giáp biên giới Campuchia, thường ngày súc vật trao đổi buôn bán qua cửa ngạch với số lượng lớn, hệ thống kiểm dịch không đảm bảo. Hằng năm thường xảy ngập lụt kéo dài tạo điều kiện cho sinh trưởng phát triển Leptospira. Chuột Long Xuyên nhiễm với tỷ lệ thấp là trung tâm thành phố An Giang, có điều kiện kinh tế xã hội phát triển, nguồn nước công nghiệp sinh hoạt xử lý tốt nên tạo hội cho mầm bệnh phát triển. Kết phù hợp nghiên cứu Lê Huỳnh Thanh Phương (2001). Tỷ lệ nhiễm Leptospira vùng đồng trũng chiếm tỷ lệ cao (28,94%), thành phố vùng phụ cận chiếm tỷ lệ thấp (18,89%). 29 4.4 Tỷ lệ nhiễm chủng Leptospira chuột Bảng 4.4 Tỷ lệ nhiễm chủng Leptospira chuột Table Tỷ lệ %Stt Chủng Leptospira Chuột cống Chuột đồng Số Tỷ lệ (%) lượt 2,41 2,41 2,41 3,61 0,00 10,84 1,20 L. tonkini LT 9668 4,82 L. icterohaemorrhagiae Verdun 11 13,25 10 L. cynopterie 3522 C 6,02 11 L. gryppotyphosa Moskva V 8,43 12 L. hardjo Hardjo Bovis 4,82 13 L. hebdomadis Hebdomadis 3,61 14 L. javanica Veldrat Bataviae 46 6,02 15 L. panama CZ 214K 6,02 16 L. patoc Patoc 1,20 17 L. pomona Pomona 6,02 18 L. tarassovi Mitis Johnson 0,00 19 L. vughia LT 09 68 1,20 20 L. hardjo Hardjoprajitno 1,20 21 L. saxkoebing Mus 24 0,00 22 L. canicola Chiffon 9,64 23 L. louisiana LSU 1945 3,61 24 L. husbridge Husbridge 1,20 83 100 L. australis Ballico L. autumnalis Akiyami A L. bataviae Van Tienen L. canicola Hond Utrecht IV L. castellonis Castellon L. copenhageni Wijnberg L. pyrogenes Salinem Tổng cộng 60 30 1 23 Qua bảng 4.4 cho thấy, thành phần chủng Leptospira nhiễm chuột đa dạng phức tạp, 24 chủng Leptospira dùng chẩn đoán huyết học có 21 chủng dương tính với chuột. - Các chủng Leptospira chuột cống là: L. icterohaemorrhagiae copenhagini Wijnberg, L. canicola canicola Chiffon, L. icterohaemorrhagiae Verdun, L. javanica javanica Veldrat Bataviae 46. - Các chủng Leptospira chuột đồng là: L. gryppotyphosa gryppotyphosa Moskva V, L. icterohaemorrhagiae Verdun, L. cynopterie cynopterie 3522C, L. pomona pomona Pomona. - Tính chung chuột cống chuột đồng thì: L. icterohaemorrhagiae Verdun 13,25% L. icterohaemorrhagiae copenhagini Wijnberg 10,84% L. canicola canicola Chiffon 9,64% L. gryppotyphosa gryppotyphosa Moskva V 8,43% L. pomona pomona Pomona 6,02% Kết phù hợp với kết nghiên cứu trước Theo Vũ Đình Hưng ctv (2002) tỷ lệ nhiễm chuột Hà Nội là: L. canicola 9,42% L. Pomona 8,9% L. icterohaemorrhagiae 8,9% Theo Quách Quốc Nam (2007) tỷ lệ nhiễm chuột Cần Thơ là: L. canicola 17,14% L. autumnalis 14,29% L. icterohaemorrhagiae 12,86% Từ kết nhận thấy chuột An Giang Cần Thơ thường bị nhiễm chung chủng phổ biến gây bệnh cho người gia súc L. icterohaemorrhagiae Verdun, L. canicola canicola Chiffon, L. pomona pomona Pomona…nguyên nhân thói quen đa số người dân hay vứt bỏ bừa bãi phân người, phân gia súc – gia cầm, xác súc vật mang mầm bệnh xuống sông…làm cho mầm bệnh phát triển môi trường nước với bối cảnh nhu cầu tiêu thụ thịt chuột cộng đồng lớn điều kiện để chủng Leptospira nhiều dịch bệnh khác phát tán tỉnh lân cận. 31 4.5 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết Bảng 4.5 Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết Table Hiệu Giá Số mẫu nhiễm Tỷ lệ (%) 1/20 22 53,66 1/40 21,95 1/80 14,63 1/160 7,32 1/320 2,44 Tổng cộng 41 100 Biểu đồ 3. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo hiệu giá ngưng kết ểu đồ Đối với chuột mức hiệu giá ngưng kết ≥1/20 xác định dương tính với Leptospira (Theo hướng dẫn viện Pasteur Tp. Hồ Chí Minh). Qua kết trình bày bảng 4.5 nhận thấy, mức hiệu giá 1/20 có 22 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ cao (53,66%), mức hiệu giá 1/320 có mẫu dương tính chiếm tỷ lệ thấp (2,44%), hiệu giá kháng thể ngưng kết tập trung chủ yếu mức từ 1/20 đến 1/80. Theo kết nghiên cứu Sharon (2009) điều tra tình hình nhiễm Leptospira chuột Philippine, hiệu giá ngưng kế 1/20 chiếm tỷ lệ cao 19,39% (19/98), hiệu giá 1/5120 chiếm tỷ lệ thấp 1,02% (1/98), hiệu giá kháng thể ngưng kết tập trung chủ yếu mức 1/20 đến 1/320. Sở dĩ hiệu giá ngưng kết thấp năm 2009 Philippine xảy 32 dịch Leptospirosis nên nguyên nhân làm cho chuột có hàm lượng kháng thể cao (Alshere, 2009). Hiệu giá kháng thể phản ánh hàm lượng kháng thể có máu chuột. Hiệu giá cao chứng tỏ mức độ nhiễm xoắn khuẩn cao. 4.6 Tỷ lệ nhiễm ghép chủng Leptospira chuột Bảng 4.6 Tỷ lệ nhiễm ghép chủng Leptospira chuột Table Số chủng nhiễm ghép Số mẫu Tỷ lệ (%) nhiễm Tên chủng nhiễm ghép L. bataviae, L. hebdomadis, L. Pomona, L. icterohaemorrhagiae, L. australis, L. panama, L. Pomona, L. canicola 15 36,59 L. cynopterie, L. javanica, L. bataviae L. 17,07 L. canicola, L. icterohaemorrhagiae, L. hebdomadis, L. panama, L. canicola 9,75 L. bataviae, L. copenhageni, L. pyrogenes, L. hardjo, L. javanica, L. panama, L. canicola 4,88 2,44 hebdomadis, Qua bảng 4.6 cho thấy, số lượng chủng nhiễm cá thể phổ biến từ 2-6 chủng. Trong nhiễm ghép chủng chiếm tỷ lệ cao 36,59%, nhiễm ghép chủng 17,07% 9,75%, nhiễm ghép chủng chiếm tỷ lệ thấp 2,44%. Kết phù hợp với kết nghiên cứu Nguyễn Văn Nhã (2010) Tình hình nhiễm Leptospira chó chuột Công ty Cổ phần Thuỷ Sản Sông Hậu, Cần Thơ. Ở chuột nhiễm chủng chiếm 62,07%, nhiễm ghép chủng chiếm 17,24% 10,34%, nhiễm ghép chủng chiếm tỷ lệ 6,90% 3,45%. Với kết chứng tỏ chuột vật mang trùng lớn đối tượng lan truyền mầm bệnh Leptospira cần quan tâm. Đây yếu tố nguy sức khoẻ vật nuôi cộng đồng. Trong tự nhiên, ổ chứa Leptospira chủ yếu tất loài gặm nhấm, tất loài chuột, chuột cống mang thải mầm bệnh qua nước tiểu ( Nguyễn Bá Hiên Nguyễn Minh Tâm, 2007). 33 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận - Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột An Giang 32,5% - Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột khác biệt giống, địa điểm. - Chuột dương tính với 21/24 chủng Leptospira. Các nhóm huyết phổ biến là: L. icterohaemorrhagiae Verdun 13,25% L. icterohaemorrhagiae copenhagini Wijnberg 10,84% L. canicola canicola Chiffon 9,64% L. gryppotyphosa gryppotyphosa Moskva V 8,43% L. pomona pomona Pomona 6,02% - Hiệu giá ngưng kết tương đối thấp từ 1/20-1/320, hiệu giá tập trung chủ yếu 1/20-1/80. - Số chủng nhiễm ghép cá thể chiếm tỷ lệ cao chủng (36,59%), thấp chủng chiếm (2,44%). 5.2 Đề Nghị Cần tiến hành biện pháp sau để kiểm soát phòng Leptospirosis: - Đẩy mạnh phong trào diệt chuột, phát hoang bụi rậm sửa chữa cống rãnh để hạn chế động vật mang mầm bệnh lây truyền cho người vật nuôi. - Tập huấn kiến thức mối nguy hại Leptospirosis mạng lưới thú y để tìm biện pháp phòng bệnh thích hợp. - Kiểm tra số lượng mẫu lớn hơn, nhiều địa điểm, áp dụng nhiều biện pháp đại PCR,…để có kết xác hơn. - Cần tiếp tục thực nghiên cứu đối tượng chó, bò, người .để xác định mức độ lây lan loài. 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hoàng Kim Loan, Đậu Thị Việt Liên, Vũ Thị Quế Hương, Lạc Ngọc Thêm, Phan Ngọc Thảo, Lê Nhi, Bùi Chí Tâm, Phan Công Trung, Lê Thanh Tùng, Bùi Xuân Bảng, Vũ Đình Luân, Nguyễn Viết Chánh, Lê Thị Thanh Hà Cao Thị Bảo Vân, 2013. Leptospira: 10 năm (2004- 2013) khảo sát tình hình nhiễm người động vật gặm nhấm miền nam Việt Nam. Tạp chí y học dự phòng, tập XXIII, số 10. Hoàng Mạnh Lâm, Đậu Ngọc Hảo Đào Xuân Vinh, 2002. Xác định số chủng Leptospira chó, chuột người Đaklak. Tạp chí khoa học kĩ thuật thú y, tập IX, số 2, pp 13-18. Hồ Thị Việt Thu, Nguyễn Đức Hiền, 2012. Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc gia cầm. NXB Đại học Cần Thơ, pp 61-66. Lê Công Tảo, 2003. Hà Nội có nguy bùng phát dịch Leptospirosis. Trung tâm Y tế dự phòng Hà Nội. Lê Huỳnh Thanh Hương, 2001. Tình hình nhiễm Leptospira chó số địa phương phía Bắc Việt Nam biện pháp phòng trị. Luận án tiến sĩ nông nghiệp. Đại học Nông Nghiệp I. Lê Trung, 1997. Bệnh Leptospira nghề nghiệp, 21 bệnh nghề nghiệp bảo hiểm. NXB giao thông vận tải Hà nội. pp 356-365. Nguyễn Bá Hiên, 2007. Giáo trình vi sinh vật bệnh truyền nhiễm vật nuôi. NXB Hà Nội. pp 137-146. Nguyễn Lương, 1997. Dịch tể học thú y số II phần chuyên bệnh. Tủ sách trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Nguyễn Như Thanh, 1997. Vi sinh vật thú y. NXB Nông Nghiệp Hà Nội. pp 148-156. Nguyễn Như Thanh, 2001. Vi sinh vật thú y. NXB Nông Nghiệp Hà Nội. Nguyễn Thị Bé Mười, 2008. Tình hình nhiễm Leptospira chó Thành phố Cần Thơ. Luận văn thạc sĩ Thú y. Khoa NN&SHƯD. Trường Đại học Cần Thơ. Nguyễn Vĩnh Phước, 1977. Vi sinh vật thú y số II. Tủ sách trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. pp 310-328. 35 Nguyễn Văn Nhã, 2010, Điều tra tình hình nhiễm Leptospira chuột chó xung quanh trại chăn nuôi Công ty Cổ phần Thuỷ Sản Sông Hậu, Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Chăn Nuôi Thú Y, Đại Học Cần Thơ. Phạm Sỹ Lăng, Hoàng Văn Năm, 2012. Bệnh truyền lây từ động vật sang người. Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội. Quách Quốc Nam, 2007, Tình hình nhiễm Leptospira chuột thành phố Cần Thơ. Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Chăn Nuôi Thú Y, Đại Học Cần Thơ. Tiêu chuẩn Việt Nam, 2011. Bệnh động vật – Quy trình chẩn đoán – Phần 15: Bệnh xoắn khuẩn Leptospira. TCVN 8400-15:2011. Trần Thanh Phong, 1998. Bệnh sẩy thai truyền nhiệm Brucella, bệnh Lepto (xoắn khuẩn). Tủ sách trường Đại học Nông Lâm. TP. Hồ Chí Minh. Vũ Đình Hưng, Nguyễn Thị Gật, Đoàn khắc Hút, Nguyễn Thế Hùng, 2002. Tình hình nhiễm Leptospira chuột chuột Hà Nội đe doạ sức khoẻ người, Tạp chí KHKTTY, số 3, 2002, Viện Thú Y- Bộ nông nghiệp, pp 30-35. Tiếng Anh Adler, B., and A. Moctezuma, 2010. Leptospira and Leptospirosis. Veterinary Microbiology, 140, 287–296. Alshere, T. Amilasan, Mugen Ujiie, Motoi Suzuki, Eumelia Salva, Maria Cecilia P. Belo, Nobuo Koizumi, Kumiko Yoshimatsu, Wolf-Peter Schmidt, Shane Marte, Efren M. Dimaano, Jose Benito Villarama, and Koya Ariyoshi, 2009. Outbreak of Leptospirosis after Flood, the Philippines. Emerging Infectious Diseases, 18(1), pp 91-94Blood, D. C. & J. A. Henderson, 1975. Veterinarymedicine, 4th edition, pp 811-812. Cullen, P.A., D.A. Haake, B. Adler, 2004. Outer membrane proteins of pathgenic spirochetes. FEMS Microbiology Reviews, 28: 291-318. Ellis, W. A., J. G. Songer, J. Monegomery and J.A. Cassells, 1986. Prevalence of Leptospira interrogans serovar hardjo in the genital and urinary tracts of non-pregnant cattle. Vet Rec, 4, 118(1), pp.11-13. Faine, S., B. Adler, C. Bolin, and P. Perolat, 1999. Morphology and chemical composition. In: Leptospira and Leptospirosis, 2nd edition. MediSci, Melbourne, Australia, 17-28. Hanson, L.E. and D.N. Tripathy, 1986. Diseases of swine. Ames Iowa state Univ, 591-559 36 Johnson, R. C., and S. Faine. 1984. Leptospira, p. 62-67. In N. R. Krieg and J. G. Holt (ed.), Bergey’s manual of systematic bacteriology, 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md. Sharon Y. A. M. Villanueva, Hirokazu Ezoe, Rubelia A Baterna, Yasutake Yanagihara, Maki Muto, Nobuo Koizumi, Takashi Fukui, Yoshihiro Okamoto, Toshiyuki Masuzawa, Lolita L. Cavinta , Nina G. Gloriani and Shin-ichi Yoshida, 2010. Serologic and Molecular Studies of Leptospira and Leptospirosis among Rats in the Philippines. The American Society of Tropical Medicine and Hygiene, 82(5), pp. 889–898. Vinodkumar, G., Rajeshwari, Y. B., Shivaraj, U. Krishnamoorthy, 2010, Leptospires in field Rats in and around the laboratory animal facilities of Banglore, India. Veterinary World, 4(9):410-412. 37 PHỤ CHƯƠNG Phụ Lục A MỘT SỐ HÌNH ẢNH 38 Phụ lục B Kết xử lý thống kê chương trình MINITAB 13.0 1. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo giống Giống chuột Dương tính Âm tính Chuột cống 22 32 Chuột đồng 19 53 Chi-Square Test: Dương tính. Âm tính Expected counts are printed below observed counts Dương tính Âm tính Total 22 32 54 17,57 36,43 19 53 23,43 48,57 Total 41 85 72 126 Chi-Sq = 1,116 + 0,538 + 0,837 + 0,404 = 2,895 DF = 1, P-Value = 0,089 Kết luận: Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo giống khác ý nghĩa thống kê. 39 2. Tỷ lệ nhiễm Leptospira chuột theo địa điểm Địa điểm Dương tính Âm tính Tân Châu 11 29 Long Xuyên 13 29 Tịnh Biên 17 27 Chi-Square Test: Dương tính. Âm tính Expected counts are printed below observed counts Dương tính Âm tính Total 11 29 40 13,02 26,98 13 29 13,67 28,33 17 27 14,32 29,68 41 85 Total 42 44 126 Chi-Sq = 0,312 + 0,151 + 0,033 + 0,016 + 0,503 + 0,242 = 1,256 DF = 2, P-Value = 0,534 Kết luận: Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm khác ý nghĩa thống kê. 40 [...]... của bộ môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, chúng tôi thực hiện đề tài: Tình hình nhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh An Giang Mục tiêu đề tài: Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh An Giang 1 CHƯƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu về Leptospirosis 2.1.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới về Leptospirosis Năm 1883, bệnh đầu tiên được xem là bệnh nghề nghiệp... huyết thanh chuột ở các huyện Tịnh Biên, Tân Châu, Long Xuyên tỉnh An Giang - Xét nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm vi sinh, bệnh xá thú y của Bộ môn Thú Y Trường Đại học Cần Thơ 3.2 Nội dung nghiên cứu Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh An Giang bằng phản ứng vi ngưng kết (MAT-Microscopic Agglutination Test) nhằm xác định: - Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột tại An Giang. .. Louisiana louisiana, lanka Ranarum ranarum Manhao manhao Shermani shermani Hurstbridge hurstbridge (Levett, 2001) Hình thái vi khuẩn và tính chất bắt màu Leptospira có dạng hình xoắn khuẩn, đường kính khoảng 0,1µm-0,3µm, dài 6-20µm biên độ xoắn khuẩn khoảng 0,1- 0,15µm, chiều dài lượn sóng khoảng 0,5µm (Faine et al., 1999) Hai đầu xoắn hoặc hình móc câu Leptospira có khả năng... trên chuột tại An Giang - Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột theo giống, địa điểm - Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột theo hiệu giá ngưng kết - Tỷ lệ nhiễm ghép các chủng Leptospira trên chuột 3.3 Vật liệu thí nghiệm 3.3.1 Đối tượng Mẫu được lấy ngẫu nhiên ở chuột gồm 126 mẫu, trong đó có 54 chuột cống và 72 chuột đồng từ Long Xuyên, Tịnh Biên và Tân Châu của tỉnh An Giang 3.3.2 Thiết bị, dụng cụ Thiết... Verdun, L Hustbridge Hoàng Kim Loan và ctv (2004-2013) khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên động vật gặm nhấm ở miền nam Việt Nam Sử dụng phương pháp xét nghiệm huyết thanh học MAT với hiệu giá ≥ 1/20 được xác định là dương tính trên động vật gặm nhấm Kết quả cho thấy có 72 mẫu huyết thanh được xác định là dương tính trên 1009 mẫu huyết thanh động vật gặm nhấm, chiếm tỉ lệ nhiễm là 7,14% Các serovar... tại thành phố Hà Nội có 28 ổ dịch trên người (Lê Công Tảo, 2003) Quách Quốc Nam ( 2007), kiểm tra 123 mẫu huyết thanh chuột ở Cần Thơ Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột là 32,52%, trong đó tỷ lệ nhiễm L.canicola 17,14%, L autumnalis 14,29%, L icterohaemorrhagiae 12,86%, L pyrogenes 10,0%, L Pomona 8,57% Nguyễn Thị Bé Mười (2008), khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chó tại thành phố Cần Thơ được... grippotyphosa, canalzonae, ratnapura Canicola canicola Australis australis, bratislava, lora Pomona pomona Javanica javanica Sejroe sejroe, saxkoebing, hardjo Panama panama, mangus Cynopteri cynopteri Djasiman djasiman Sarmin sarmin Mini mini, georgia Tarassovi tarassovi Ballum ballum, aroborea Celledoni celledoni Louisiana ... đặc hiệu của chủng huyết thanh, dùng để nhận biết các loài Leptospira Chủng huyết thanh Leptospira được xác định dựa trên kháng nguyên bề mặt hay kháng nguyên P Do sự khác nhau về cấu trúc kháng nguyên, người ta chia Leptospira thành nhiều nhóm huyết thanh (serogroupe) Mỗi nhóm huyết thanh có nhiều chủng huyết thanh hay còn gọi là serovar (Johnson and Feine, 1984) 7 2.3 Truyền nhiễm học 2.3.1 Loài vật... (http://benh.vn/truyen-Nhiem/Benh-do-xoan-khuan -Leptospira/ 35/4081/12-11-2013.htm) Leptospira sinh sản theo cách trực phân, bắt màu gram âm nhưng khó nhuộm màu, thuốc nhuộm màu anilin thông thường không thể nhuộm được, phải được nhuộm bằng những phương pháp đặc biệt như Romanovski hoặc phương pháp nhuộm bạc Fontana - Tribondeau (Nguyễn Như Thanh, 2001) - Phương pháp Romanovski: Leptospira sau khi nhuộm có màu... 14 Javanica javanica Veldrat Bataviae 46 15 Panama panama CZ 214K 16 Semaranga patoc Patoc 1 17 Pomona pomona Pomona 18 Tarassovi tarassovi Mitis Johnson 19 Tarassovi vughia LT 09 68 20 Sejroe hardjo Hardjoprajitno 21 Sejroe saxkoebing Mus 24 22 Canicola canicola Chiffon 23 Louisiana louisiana LSU 1945 24 Husbridge husbridge Husbridge 21 3.4 Phương pháp tiến hành 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu - Mang bao . chúng tôi thực hiện đề tài: Tình hình nhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh An Giang . Mục tiêu đề tài: Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chuột tại tỉnh An Giang. 2 CHƯƠNG. 4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột tại An Giang 27 4.2 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo giống 27 4.3 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo địa điểm 28 4.4 Tỷ lệ nhiễm các chủng Leptospira trên chuột. TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA TRÊN CHUỘT TẠI TỈNH AN GIANG Cần Thơ, 2014 i TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài Tình hình nhiễm Leptospira