Xác định một số đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn actinobacillus pleuropneumoniae và streptococcus suis gây bệnh viêm phổi ở lợn nuôi tại huyện việt yên, tỉnh bắc giang và đề xuất biện pháp phòng trị

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI --- --- HOÀNG MINH TÂN XÁC ðỊNH MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH VẬT HÓA HỌC CỦA VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE VÀ STREPTOCOCC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO

TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-
 -

HOÀNG MINH TÂN

XÁC ðỊNH MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH VẬT HÓA HỌC

CỦA VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE

VÀ STREPTOCOCCUS SUIS GÂY BỆNH VIÊM PHỔI Ở LỢN

NUÔI TẠI HUYỆN VIỆT YÊN, TỈNH BẮC GIANG

VÀ ðỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ

LUẬN VĂN THẠC SĨ

HÀ NỘI, 2013

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO

TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-
 -

HOÀNG MINH TÂN

XÁC ðỊNH MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH VẬT HÓA HỌC

CỦA VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE

VÀ STREPTOCOCCUS SUIS GÂY BỆNH VIÊM PHỔI Ở LỢN

NUÔI TẠI HUYỆN VIỆT YÊN, TỈNH BẮC GIANG

VÀ ðỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ

CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y

MÃ SỐ : 60.64.01.01

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:

1 TS BÙI TRẦN ANH ðÀO

2 PGS TS CÙ HỮU PHÚ

HÀ NỘI, 2013

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực, chưa hề sử dụng cho bảo vệ một học vị nào Mọi thông tin, tài liệu trích dẫn trong luận văn ñã ñược ghi rõ nguồn gốc

Hà Nội,ngày 30 tháng 8 năm 2013

Tác giả luận văn

Hoàng Minh Tân

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh ựạo Viện Thú y Quốc gia Ban quản lý ựào tạo, khoa Thú y- Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội, Chi cục Thú y tỉnh Bắc Giang

ựã tạo ựiều kiện và giúp tôi hoàn thành tập luận văn này

Hoàn thành luận văn này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận ựược

sự hướng dẫn tận tình, ựầy trách nhiệm và hết lòng vì khoa học của các thầy: TS Bùi Trần Anh đào, PGS.TS Cù Hữu Phú

Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Hoàng đăng Huyến, TS Lê Văn Dương- Chi cục Thú y tỉnh Bắc Giang và tập thể cán bộ Bộ môn vi trùng - Viện Thú y Quốc gia ựã tạo ựiều kiện thuận lợi nhất cho tôi hoàn thành tập luận văn

Xin chân thành cảm ơn các ựồng chắ trạm Thú y huyện Việt Yên; cảm ơn các ựồng nghiệp Thú y viên cơ sở, các hộ chăn nuôi thuộc 3 xã Tăng Tiến, Bắch Sơn, Quảng Minh

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn bạn bè, ựồng nghiệp và ựặc biệt biết ơn gia ựình

ựã luôn tạo ựiều kiện và giúp ựỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn này

1.1 Một số hiểu biết cơ bản về A.pleuropneumoniae và S suis gây bệnh viêm

1.1.1 Vi khuẩn A.pleuropneumoniae và bệnh viêm phổi màng phổi do vi khuẩn

1.1.2 Vi khuẩn S suis và bệnh liên cầu khuẩn do S suis gây ra ở lợn 9

1.2 Những nghiên cứu trong và ngoài nước về vi khuẩn A.pleuropneumoniae và S

2.2 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu 23

2.4.3 Phương pháp kiểm tra các ñặc tính sinh hoá và khả năng lên men ñường

2.4.4 Phương pháp xác ñịnh serotype của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 31 2.4.5 Phương pháp xác ñịnh ñộc lực của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 33 2.4.6 Phương pháp xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi

2.4.8 Xây dựng phác ñồ ñiều trị bệnh viêm ñường hô hấp, viêm phổi ở lợn tại

3.1 Kết quả nghiên cứu một số ñặc ñiểm dịch tễ bệnh viêm phổi ở lợn tại

3.1.1 Tỷ lệ lợn mắc bệnh và chết do viêm phổi tại một số xã của huyện Việt

3.1.2 Tỷ lệ lợn mắc bệnh và chết do viêm phổi theo mùa vụ tại một số xã của

3.1.3 Tỷ lệ lợn mắc bệnh và chết do viêm phổi theo lứa tuổi tại một số xã của

3.2 Kết quả phân lập, xác ñịnh một số ñặc tính gây bệnh của vi khuẩn

3.2.1 Kết quả phân lập vi khuẩn A.pleuropneumoniae và S suis từ mẫu bệnh

phẩm lợn mắc bệnh viêm phổi tại huyện Việt Yên, Bắc Giang 45 3.2.2 Kết quả giám ñịnh một số ñặc tính sinh học của vi khuẩn

3.2.3 Xác ñịnh serotype của các A.pleuropneumoniae và S.suis phân lập ñược 52 3.2.4 Xác ñịnh ñộc lực của A.pleuropneumoniae, S.suis phân lập ñược 55

3.3 Kết quả xác ñịnh tính mẫn cảm kháng sinh của A.pleuropneumoniae và S

3.5 Kết quả thử nghiệm một số phác ñồ ñiều trị lợn mắc viêm phổi 61

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

3 A pleuropneumoniae Actinobacillus pleuropneumoniae

4 B bronchiseptica Bordetella bronchiseptica

10 M hyopneumoniae Mycoplasma hyopneumoniae

DANH MỤC BẢNG

2.2 Trình tự các cặp mồi dùng ñể xác ñịnh các serotype 1, 2, 7 và 9 của vi

2.3 Thành phần các chất trong phản ứng MP - PCR dùng ñể xác ñịnh một số

2.4 Các chu kỳ nhiệt của phản ứng PCR dùng ñể xác ñịnh một số gen mã hoá

2.5 Tiêu chuẩn ñánh giá mức ñộ mẫn cảm và kháng kháng sinh theo NCCLS

3.7 Kết quả phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae và S suis từ mẫu bệnh

3.8 Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh học của A pleuropneumoniae

3.9 Phản ứng lên men ñường của A pleuropneumoniae phân lập ñược 48

3.10 Kết quả kiểm tra một số ñặc tính sinh học của S suis phân lập ñược 49

3.11 Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính sinh vật hóa học của S suis phân lập

3.13 Kết quả xác ñịnh serotype của A pleuropneumoniae phân lập ñược bằng

3.14 Kết quả xác ñịnh serotype của một số chủng S suis phân lập ñược 54

3.15 Kết quả kiểm tra ñộc lực của A pleuropneumoniae phân lập ñược 56

3.16 Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số vi khuẩn S suis phân lập ñược trên

3.17 Kết quả xác ñịnh mức ñộ mẫn cảm kháng sinh các chủng

3.18 Kết quả xác ñịnh tỷ lệ lợn mắc viêm phổi ở vùng tiêm và vùng không tiêm

DANH MỤC HÌNH

3.1 Thể hiện tỷ lệ mắc bệnh và chết do viêm phổi tại một số xã của huyện

3.3 Thể hiện tỷ lệ lợn mắc bệnh và chết do viêm phổi theo lứa tuổi 44

3.4 Kết quả phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae và S suis từ mẫu bệnh

DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ

Lê Văn Dương, Nguyễn Quang Tuyên, Hoàng Minh Tân, Cù Hữu Phú, Hoàng ðăng Huyến 2013, “Kết quả phân lập và xác ñịnh một số ñặc tính sinh

học của các chủng Streptococcus suis ở lợn dương tính với virus gây hội

chứng rối loạn hô hấp và sinh sản tại tỉnh Bắc Giang” tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, 2013 (1), trang 36 - 42

MỞ ðẦU

1 Tính cấp thiết của ñề tài

Việt Yên là huyện có nghề chăn nuôi lợn khá phát triển ñem lại nguồn thu nhập cao cho nhiều hộ gia ñình Theo thống kê chăn nuôi (01/4/2012) của Chi Cục thống kê huyện Việt Yên, tổng ñàn lợn của huyện là 120.246 con (trong ñó lợn nái 22.460 con, lợn thịt 97.641 con) Trong huyện có trên 50 trại chăn nuôi lợn tập trung (quy mô 20 nái và 100 lợn thịt trở lên) ðây thực sự là một bước tiến mới trong chăn nuôi lợn của huyện, góp phần phát triển chăn nuôi lợn bền vững, tạo ra sản phẩm an toàn có sức cạnh tranh cao trên thị trường Tuy nhiên, cũng như nhiều ñịa phương khác trong tỉnh, chăn nuôi lợn tập trung theo quy mô vừa và nhỏ ở huyện ñã và ñang gặp rất nhiều khó khăn, ñặc biệt là dịch bệnh, ñã ảnh hưởng lớn tới năng suất chăn nuôi Trong vài năm gần ñây, hội chứng viêm phổi ñã xuất hiện rất phổ biến trên ñàn lợn của huyện Việt Yên gây thiệt hại lớn về kinh tế do sinh trưởng chậm, hiệu quả sử dụng thức ăn thấp, bệnh thường kéo dài, chi phí thuốc thú y cao, ñặc biệt nghiêm trọng khi bệnh xẩy ra ñồng thời với hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp làm tổn thất nặng nề về kinh tế, gây hoang mang cho người chăn nuôi

Hội chứng viêm phổi ở lợn do nhiều nguyên nhân gây ra, có thể do một hay nhiều nguyên nhân kết hợp với nhau hoặc tạo ñiều kiện cho nguyên nhân thứ phát gây bệnh làm cho ñặc ñiểm của bệnh ñường hô hấp rất ña dạng Trong số ñó phải kể ñến bệnh

viêm phổi ở lợn thường do các loại vi khuẩn như: Actinobacillus pleuropneumoniae (A.pleuropneumoniae) và Streptococcus suis (S.suis) gây ra Do ñó, việc nghiên cứu một cách toàn diện về vi khuẩn A.pleuropneumoniae và S suis gây viêm phổi ở lợn tại huyện

Việt Yên rất cần thiết và là một yêu cầu cấp bách, từ ñó xác ñịnh ñược giải pháp phòng chống bệnh có hiệu quả và ñem lại kinh tế cao nhất cho người chăn nuôi

Xuất phát từ thực tiễn sản xuất, nhằm mục ñích hiểu kỹ hơn về bệnh viêm phổi ở lợn, cũng như ảnh hưởng của nó tới chăn nuôi lợn Chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài:

“Xác ñịnh một số ñặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn Actinobacillus

pleuropneumoniae và Streptococcus suis gây bệnh viêm phổi ở lợn nuôi tại huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang và ñề xuất biện pháp phòng trị”

2 Mục tiêu nghiên cứu

- Xác ñịnh một số ñặc ñiểm dịch tễ hội chứng viêm phổi lợn tại một số xã thuộc huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang

- Phân lập, xác ñịnh một số ñặc tính sinh vật hoá học của các chủng vi

khuẩn A.pleuropneumoniae và S suis ở lợn mắc bệnh viêm phổi và thử nghiệm

Autovacxin phòng bệnh viêm phổi lợn

- Xây dựng và ñề xuất phác ñồ ñiều trị bệnh viêm ñường hô hấp, viêm phổi ở lợn ñạt hiệu quả cao

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài

- ðề tài là một công trình nghiên cứu có hệ thống, gắn liền với thực tiễn sản xuất,

ñã xác ñịnh ñược một số ñặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn A.pleuropneumoniae và

S suis gây viêm phổi ở lợn tại huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang

- Kết quả nghiên cứu của ñề tài là cơ sở khoa học phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo như bào chế các chế phẩm sinh học phòng bệnh (vacxin, kháng thể…), ñồng thời ñóng góp thêm tư liệu tham khảo cho nghiên cứu và giảng dạy cho cán bộ thú y cơ sở và người chăn nuôi

- Kết quả nghiên cứu ñề xuất biện pháp phòng trị bệnh viêm ñường hô hấp, viêm phổi ở lợn có hiệu quả cao sẽ giúp cho cán bộ thú y cơ sở, người chăn nuôi trong phòng trị bệnh, góp phần giảm thiệt hại và tăng thu nhập cho người chăn nuôi lợn

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Một số hiểu biết cơ bản về A.pleuropneumoniae và S suis gây bệnh viêm

phổi ở lợn

1.1.1 Vi khuẩn A pleuropneumoniae và bệnh viêm phổi màng phổi do vi khuẩn A Pleuropneumoniae gây ra ở lợn

Vi khuẩn A pleuropneumoniae là một tác nhân gây bệnh viêm phổi - màng

phổi ở lợn Bệnh có sự phân bố rộng rãi và ngày càng trở nên quan trọng do việc chăn nuôi lợn ngày một phát triển

Vi khuẩn A pleuropneumoniae thuộc họ Pasteurellae, thuộc giống Actinobacillus, trước ñây còn có tên là Haemophilus parahaemolyticus hay Haemophilus pleuropneumoniae ñã ñược chứng minh là nguyên nhân chính gây nên bệnh viêm phổi - màng phổi truyền nhiễm ở lợn

Vi khuẩn A pleuropneumoniae là loại cầu trực khuẩn nhỏ, gram (-), kích

thước 0,3 - 0,5 x 0,6 - 1,4 µm, không di ñộng, không sinh nha bào và có hình thành giáp mô Dưới kính hiển vi ñiện tử quan sát thấy vi khuẩn có lông hay còn gọi là pili có kích thước 0,5 - 2 x 60 - 450 nm

A pleuropneumoniae là một vi khuẩn khó tính, khó nuôi cấy Chủ yếu sinh

trưởng trong môi trường ñược bổ sung 5% huyết thanh ngựa và trong ñiều kiện có 5

- 10% CO2 Vi khuẩn không mọc trên môi trường thạch máu thông thường, trừ khi thạch máu ñược bổ sung NAD và chúng mọc xung quanh các khuẩn lạc của tụ cầu

là do Staphylococcus aureus trong quá trình phát triển trên thạch máu ñã phá huỷ

hồng cầu có trong máu và sản sinh ra chất NAD

Trong môi trường nuôi cấy, vi khuẩn ñòi hỏi yếu tố V ñể phát triển, nó phát triển tốt trên môi trường thạch Chocolate nhưng vi khuẩn không mọc trên môi

trường MacConkey Vi khuẩn A pleuropneumoniae có khả năng lên men các loại

ñường: Xylose, Ribose, Glucose, Fructose, Maltose, Mannitol, và không lên men: Trehalose, Arabinose, Lactose, Raffinose,… Phản ứng sinh Indol, Catalaza, Ureaza, CAMP Test dương tính

A pleuropneumoniae cĩ sức đề kháng kém Vi khuẩn chỉ tồn tại trong mơi

trường tự nhiên trong một thời gian ngắn Tuy nhiên khi được bảo vệ bởi chất nhầy hoặc các chất hữu cơ khác vi khuẩn cĩ thể sống sĩt trong vài ngày Trong nước sạch

ở nhiệt độ 4oC, vi khuẩn cĩ thể sống được 30 ngày, nhiều giờ trong khí dung và cĩ thể tồn tại được trong 4 ngày ở mơ phổi và chất thải ở nhiệt độ phịng Nĩ bị diệt nhanh chĩng ở nơi khơ và các chất sát trùng

A pleuropneumoniae được chia thành 2 biotype dựa trên nhu cầu sử dụng

NAD của vi khuẩn Pohl và cs (1983) Biotype 1 của vi khuẩn khi nuơi cấy trên mơi trường nhân tạo phụ thuộc vào NAD, biotype 2 khơng phụ thuộc vào NAD nhưng cần cĩ các pyridine nucleotide đặc hiệu hoặc các chất tiền thân của pyridine nucleotide để tổng hợp NAD cần thiết cho sự phát triển của chúng Biotype 1 cĩ độc lực cao hơn biotype 2

Trong biotype 1, cĩ 12 serotype được tìm thấy và được phân loại theo type huyết thanh từ 1 - 12 (riêng serotype 5 được chia làm serotype 5a và serotype 5b) Trong biotype 2, serotype 2, 4, 7 và 9 cĩ chung nhĩm quyết định kháng nguyên như biotype 1 Gần đây biotype 2 cĩ serotype 13, 14 được mơ tả cĩ kháng nguyên khác với biotype 1

* Cấu trúc kháng nguyên và yếu tố độc lực của vi khuẩn:

- Lớp vỏ vi khuẩn:

Vi khuẩn A pleuropneumoniae được bao bọc bên ngồi bởi một lớp vỏ cĩ

bản chất là các polysaccharide ðây là thành phần quyết định độc lực của vi khuẩn

và gây hiệu ứng cho serotyp đặc hiệu Ward and Inzawa (1997)

Lớp vỏ này khơng chỉ cĩ ý nghĩa trong quá trình gây bệnh mà cịn cĩ ý nghĩa chẩn đốn và dịch tễ Inzama (1991) Sự khác nhau về độc lực liên quan đến

cấu trúc và những sản phẩm do vỏ và nội độc tố tạo nên Dubreuil et al (2000) Quan

sát dưới kính hiển vi điện tử thấy những chủng cĩ độc lực cĩ kích thước lớn hơn và

cĩ lớp vỏ bám dính hơn trong khi những chủng ít độc nhỏ hơn và chỉ cĩ lớp vỏ

mỏng Inzana (1991) Jacques et al (1987) cũng xác định sự đa dạng trong cấu trúc

vỏ khi phân tích lớp vỏ ở các serotype 1 - 10 dưới kính hiển vi điện tử và cho thấy lớp vỏ dày khoảng 80 - 90mm đến 210 - 230mm tùy từng serotype Chính điều này

đã giải thích cho sự khác nhau về độc lực giữa các serotype

Lớp vỏ giúp bảo vệ vi khuẩn khỏi sự ñề kháng của ñộng vật như hoạt ñộng thực bào và hoạt ñộng bổ thể Những chủng có vỏ ñề kháng với hoạt ñộng tiêu diệt của bổ thể ñã ñược chứng minh Những thể ñột biến không có vỏ sẽ bị tiêu diệt ngay sau khi có mặt huyết thanh, trong khi những chủng có vỏ không bị tiêu diệt Ward and Inzana (1997)

- ðộc tố của vi khuẩn:

ða số các chủng A pleuropneumoniae ñều tạo ra 1 hoặc nhiều hơn 1 ñộc tố phân hủy hồng cầu Phân tích những ñộc tố hồng cầu này quan sát thấy chúng là 1 protein hạt nhân của RTX (Repeat in Toxin), ñược tìm thấy ở hầu hết các vi khuẩn

Gram (-) như E coli, B pertussin, M haemolytica Ở A pleuropneumoniae, ñộc tố này gọi là ñộc tố Apx ñược xác ñịnh là Apx I, Apx II, Apx III Frey et al (1993) và Apx

IV Cho and Chae (2001) Người ta xác ñịnh chắc chắn về vai trò của Apx trong quá

trình gây bệnh của A pleuropneumoniae Mỗi ñộc tố này khác nhau do hoạt ñộng phân giải hồng cầu gây ñộc tế bào Frey et al (1993)

- Lipopolysaccarit:

Lipopolysaccarit (LPS) là thành phần chính của lớp màng ngoài vi khuẩn và ñược cho là nguyên nhân gây tổn thương mô Những tổn thương do LPS tinh chế không gây xuất huyết, không gây hoại tử khác với tổn thương ñặc trưng của viêm phổi - màng phổi Song LPS chắc chắn kết hợp với ñộc tố Apx làm tăng ñộc lực và làm tăng ñộc tính cho ñộc tố Apx

LPS có vai trò quan trọng trong sự bám dính của vi khuẩn lên tế bào biểu mô

và lớp màng nhầy khí quản của lợn Bám dính là hoạt ñộng ban ñầu giúp cho sự xâm nhập của vi khuẩn và có thể là ñặc tính gây bệnh, là nguyên nhân gây ra bệnh

* Bệnh viêm phổi màng phổi ở lợn do vi khuẩn A pleuropneumoniae gây ra: Bệnh viêm phổi màng phổi truyền nhiễm của lợn do A pleuropneumoniae gây ra

ñã xuất hiện ở nhiều nước trên thế giới Tại Việt Nam trong những năm gần ñây, A

pleuropneumoniae ñã ñược phân lập và ñược ñánh giá là một vi khuẩn gây nên một

bệnh hô hấp khá quan trọng ở tất cả các trại lợn siêu nạc quy mô lớn

Tất cả các lứa tuổi lợn ñều bị cảm nhiễm Trong trường hợp cấp tính của bệnh tỷ lệ chết thường cao Tỷ lệ chết cũng phụ thuộc vào ñộc lực của vi khuẩn và

sự lưu hành bệnh trong môi trường

- Triệu chứng lâm sàng:

Triệu chứng lâm sàng có nhiều mức phụ thuộc vào tuổi của gia súc, tình trạng miễn dịch, ñiều kiện môi trường và mức ñộ cảm nhiễm với tác nhân gây bệnh Biểu hiện

lâm sàng của bệnh có thể là quá cấp tính, cấp tính hoặc mãn tính

+ Thể quá cấp tính: Một hoặc nhiều lợn cai sữa cùng một chuồng hoặc khác

chuồng bị ốm nặng, sốt tới 41,50C, ñờ ñẫn, không muốn ăn, nôn mửa và ỉa chảy, con vật bị bệnh nằm trên nền chuồng, không có dấu hiệu thở rõ ràng, mạch ñập tăng lên rất sớm và trụy tim mạch Da trên mũi, tai, chân và sau cùng là toàn bộ cơ thể trở nên tím tái ở giai ñoạn cuối và chết

+ Thể cấp tính: Nhiều lợn ở 1 chuồng hoặc ở những chuồng khác nhau cùng

mắc bệnh Lợn sốt cao từ 40,5 - 410C, da ñỏ, con vật mệt mỏi, không muốn dậy, không ăn uống Các dấu hiệu hô hấp nặng với khó thở, ho và ñôi khi thở bằng mồm trở nên rõ Thường xuất hiện trụy tim mạch, với xung huyết ở các ñầu tứ chi Toàn thân suy sụp trong vòng 24 giờ ñầu, bệnh diễn biến khác nhau ở từng con vật, phụ thuộc mức ñộ tổn thương phổi và thời ñiểm bắt ñầu ñiều trị

+ Thể bán cấp và mãn tính: xuất hiện sau khi các dấu hiệu cấp tính biến ñi

Không sốt hoặc sốt ít, xuất hiện ho tự phát hoặc thỉnh thoảng, với các cường ñộ khác nhau Có thể súc vật kém ăn, giảm tăng trọng, có thể xác ñịnh các gia súc bị

ốm bằng dấu hiệu các con vật này không gắng sức ñược Khi di chuyển, chúng thường ñi lùi lại phía sau và khi bị chặn lại chúng thường ít chống cự Ở các ñàn gia súc bị nhiễm mãn tính thường có nhiều súc vật bị nhiễm không biểu hiện rõ trên lâm sàng

Các dấu hiệu lâm sàng có thể trở lên rõ hơn bởi sự kết hợp với các yếu tố gây

nhiễm trùng ñường hô hấp khác (Mycoplasma, Vi khuẩn, Virus) Các biến chứng

như viêm khớp, viêm nội tâm mạc và áp xe ở các vị trí khác nhau có thể xảy ra cùng với nhiễmtrùng A pleuropneumoniae

- Bệnh tích:

Tổn thương bệnh lý ñại thể chủ yếu ở ñường hô hấp ða số các trường hợp bị viêm phổi hai bên, với tổn thương ở các thùy ñỉnh và thùy tim, cũng như ít nhất một phần các mỏm trên của thuỳ hoành và ở ñó viêm phổi thường khu trú, ranh giới rõ

Ở các trường hợp tử vong nhanh chóng, khí quản và các phế quản bị lấp ñầy bởi các chất tiết nhầy bọt nhuốm máu Có thể thấy một số tổn thương ñại thể ở các trường hợp tối cấp tính, các vùng viêm phổi trở nên sẫm màu và chắc, với viêm màng phổi có ít tơ huyết hoặc không tơ huyết và mặt cắt thường mủn Viêm màng phổi tơ huyết thường rất rõ ở các gia súc chết trong giai ñoạn cấp tính của bệnh ít nhất 24 giờ sau khi nhiễm trùng và khoang màng phổi chứa dịch nhuốm máu

Khi tổn thương tiến triển lớn hơn, viêm màng phổi tơ huyết trên vùng phổi tổn thương trở nên xơ và có thể dính rất chặt màng phổi vào thành ngực tới mức làm cho phổi dính vào thành ngực ngay cả khi mổ lợn chết lấy phổi ra phân tích Tổn thương sớm ở phổi là phổi trở nên ñỏ tím hoặc ñen ñồng ñều và sau ñó trở nên sáng hơn và sau ñó vẫn cứng ở những khu vực bị nặng nhất Các tổn thương kích cỡ

co lại khi bệnh giảm, ở trường hợp mãn tính còn tồn tại các nốt kích thước khác nhau, phần lớn ở thuỳ tim Những nốt dạng apxe ñược giới hạn bởi vỏ dày tổ chức liên kết và có lẽ kết hợp với khu vực viêm phổi tơ huyết Trong một số trường hợp khi tổn thương phổi ñược phục hồi chỉ còn lại một số ổ di chứng của viêm dính màng phổi

tơ huyết Tỷ lệ lưu hành bệnh viêm màng phổi mãn tính cao ở lợn giết thịt có nghĩa

là viêm phổi - màng phổi nhiều

Trong các giai ñoạn ñầu của bệnh, những biến ñổi về tổ chức bệnh lý ñược ñặc trưng bởi sự hoại tử, xuất huyết, thâm nhiễm các tế bào bạch cầu trung tính,

sự hoạt hoá ñại thực bào và tiểu cầu, nghẽn mạch máu, phù rộng và tiết dịch gỉ viêm lẫn fibrin Sau phản ứng cấp tính ñặc trưng là sự thâm nhiễm ñại thực bào,

xơ hoá rõ quanh những vùng hoại tử và viêm màng phổi fibrin

Việc khẳng ñịnh là A pleuropneumoniae có thể có nhiều cách: bằng kháng thể

huỳnh quang, bằng Peroxidase miễn dịch, bằng ñồng ngưng kết tìm kháng nguyên ñặc

hiệu cho serotype ở chiết xuất tổ chức phổi, sử dụng ngưng kết latex hoặc ELISA Có thể dùng kỹ thuật PCR hoặc test huyết thanh với kháng thể hấp thụ hoặc kháng thể ñơn

dòng ñể xác ñịnh vi khuẩn phân lập ñược có phải là A pleuropneumoniae không Có

thể xác ñịnh tới các serotype bằng cách sử dụng kỹ thuật PCR cho các gen hoạt hoá cấu trúc của ñộc tố hoặc có thể sử dụng kháng thể ñơn dòng với từng serotype Có thể xác ñịnh serotype khi cho ngưng kết vi khuẩn nuôi cấy trên môi trường giàu dinh dưỡng với huyết thanh hoặc bằng phản ứng ñồng ngưng kết Trong một số trường hợp dùng

phương pháp khuếch tán trên thạch và phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp

- ðiều trị:

A pleuropneumoniae trên ống nghiệm rất nhạy cảm với Penicilline, Ampiciline,

Cephalosporin, Chloramphenicol, Tetracycline, Colistin, Sulfonamide, Cotrimoxazole (Trimethoprim + Sulfamethoxazole) và Gentamycine với nồng ñộ ức chế tối thiểu (MIC ) thấp Vi khuẩn này có MIC cao với Streptromycine, Kanamycine, Spectinomycin, Spiramycine và Lincomycine Nicolet and Schifferli (1982); Inoue

et al (1984)

Prescott and Baggot (1993) ñã thông báo về tính mẫn cảm của vi khuẩn này với các thuốc kháng sinh Sự xuất hiện hiện tượng kháng thuốc với Ampicillin; Streptromycin, Sulfonamides, Tetracyclines và Chloramphenicol là vấn ñề ñáng lo ngại, thường gặp ở các serotype 1, 3, 5 và 7, nhưng hiếm gặp ở các serotype khác,

nhất là serotype 2 Nicolet and Schifferli (1982); Inoue et al (1984)

Sự kháng kháng sinh của vi khuẩn A pleuropneumoniae truyền theo

Plasmid Kháng sinh ñược chọn lựa phải là kháng sinh có sự kháng kháng sinh thấp nhất và có ñặc tính diệt khuẩn ñược tốt nhất Do vậy, các kháng sinh nhóm Betalactamin

A (chủ yếu Cephalosporin), Chloramphenicol, Cotrimoxazole và với một mức ñộ nhất ñịnh nào ñó, Tetracycline ñược xem là có tác dụng nhất Một số kháng sinh mới có gần ñây như các dẫn suất Quinolone (Enrofloxacine) hoặc Cephalosporin bán tổng hợp Ceftiofur sodium ñã ñược chứng minh trên thực nghiệm rất có kết quả

Người ta ñã thu ñược những kết quả tốt trên thực nghiệm khi dùng Tiamulin

và hỗn hợp Lincomycine và Spectinomycine Moore et al (1996) ñã dùng Tilmicosin

cho vào thức ăn Do ñó cần làm kháng sinh ñồ khi thí nghiệm ñiều trị kháng sinh

điều trị kháng sinh chỉ có hiệu quả ở giai ựoạn ựầu của bệnh và phải dùng liều cao ngay từ ựầu để ựảm bảo có nồng ựộ thuốc có hiệu quả ổn ựịnh trong máu

có thể cần tiêm nhiều lần, tùy theo ựặc tắnh mẫn cảm của thuốc sử dụng Sự thành công của việc ựiều trị phụ thuộc chủ yếu vào việc phát hiện sớm các dấu hiệu lâm sàng của bệnh và can thiệp ựiều trị sớm

- Phòng bệnh:

Có thể tiến hành phòng bệnh viêm phổi - màng phổi theo một số cách Các trại không bị mắc bệnh và nhiễm khuẩn phải duy trì chắnh sách cách ly ựi ựôi với việc sử dụng tinh dịch hoặc bào thai ựể ựưa vào các gen mới Khi nhập lợn mới nào vào ựàn lợn phải xuất phát từ một ựàn không bị bệnh, không nhiễm vi khuẩn, nên cách ly chúng trong một thời gian trước khi cho chúng vào ựàn Một khi ựã xuất hiện nhiễm trùng ở một trại khó có thể loại trừ tác nhân nhiễm trùng, mặc dù về lâm sàng ựàn gia súc có thể bình thường Các chương trình kiểm soát phải tắnh ựến các ựặc ựiểm dịch tễ học của viêm màng phổi Có thể dùng thuốc liên tục hoặc ngắt quãng, nhưng không bao giờ ựược dùng kéo dài và cần thường xuyên theo dõi sự mẫn cảm của vi khuẩn với kháng sinh Chỉ sử dụng kháng sinh cho lợn mới vào chuồng khi chúng ựược chuyển ựến từ các ựàn lợn không bị nhiễm khuẩn ựể tránh ựưa vào các serotype mới hoặc kháng kháng sinh mới

Ở các ựàn bị nhiễm khuẩn mãn tắnh, cần tiêm chủng các con lợn mới mua có chẩn ựoán huyết thanh âm tắnh trước khi cho vào ựàn đã có nhiều loại vacxin ựược sản xuất cho bệnh này gồm 2 nhóm chắnh: Các vi khuẩn ựã chết (vacxin vô hoạt) và các loại vacxin với một số thành phần cấu tạo của vi khuẩn Vacxin vô hoạt toàn khuẩn ựặc hiệu theo serotype có thể có miễn dịch với các serotype khác có phản ứng chéo

Song song với ựó phải tiến hành các biện pháp khử trùng Vi khuẩn nhạy

cảm với nhiều chất tiệt trùng thông thường

1.1.2 Vi khuẩn S suis và bệnh liên cầu khuẩn do S suis gây ra ở lợn

Vi khuẩn S suis thuộc giống Streptococcus, họ Streptococcaceae, bộ Lactobacillales, lớp Bacilli

Theo Phạm Sỹ Lăng và cs (2005) cho biết, Streptococcus là vi khuẩn Gram

dương, hình cầu hoặc hình trứng ñường kính nhỏ hơn 1µm, chúng thường ñứng riêng lẻ, xếp thành ñôi hoặc thành từng chuỗi ngắn như chuỗi hạt, có ñộ dài ngắn không ñều nhau Chiều dài của chuỗi tuỳ thuộc vào ñiều kiện môi trường Vi khuẩn bắt màu dễ dàng với một số loại thuốc nhuộm thông thường, thuộc nhóm vi khuẩn Gram dương, phát triển trong ñiều kiện hiếu khí hoặc yếm khí tuỳ tiện và không di ñộng Vi khuẩn không sinh nha bào, nhưng có khả năng hình thành giáp mô Sự hình thành giáp mô có thể xác ñịnh ñược khi chúng sinh sống trong các mô hoặc phát triển trong các môi trường nuôi cấy có chứa huyết thanh

Vi khuẩn ñược nuôi cấy sau 18 giờ chủ yếu có dạng hình cầu, kích thước 0,5

- 1 µm, ñứng thành dạng chuỗi 5-10 tế bào Trong canh trùng già, sau 30 giờ nuôi cấy, vi khuẩn có thể thay ñổi tính chất bắt màu, chuỗi cũng thấy dài hơn ðặc biệt, khi nuôi cấy trong môi trường dạng lỏng, hình thái các chuỗi ñược nhìn thấy rõ nhất Khi làm tiêu bản trực tiếp từ bệnh phẩm lấy từ ñộng vật, có thể quan sát thấy

vi khuẩn có hình cầu, nhưng ở môi trường phân lập ban ñầu, có thể nhầm với trực khuẩn ngắn

Vi khuẩn S suis có khả năng lên men ñường: Glucose, Lactose, Saccarose,

Salicin, Innulin, Trehalose, Maltose Vi khuẩn không có khả năng lên men ñường: Mannit, Sorbitol, Mannitol, Dextrose, Xylose, Glyxerol Các phản ứng sinh hóa khác: Catalase âm tính, Oxidase âm tính, Indol âm tính, Coagulase âm tính

S suis có sức ñề kháng kém với nhiệt ñộ và hoá chất Trong phân, ở 00C vi khuẩn có thể sống 104 ngày, ở 90C vi khuẩn sống ñược 10 ngày, ở 22-250C vi khuẩn có thể sống ñược 8 ngày Ở 700C vi khuẩn chết trong 35- 40 phút, ở 1000C vi khuẩn chết trong 1 phút; vi khuẩn sống trong bụi 25 ngày ở 90C nhưng không phân lập ñược vi khuẩn ở bụi trong nhiệt ñộ phòng (18- 200C)/ 24 giờ Vi khuẩn bị diệt dưới ánh sáng mặt trời sau 40 - 60 phút

Lê Văn Tạo (2005) cho biết: S suis dễ bị diệt bởi nhiều chất sát trùng như:

phenol, iod, hypochlorid, acid phenic 3 - 5% diệt vi khuẩn trong vòng 3- 15 phút, formol 1% diệt vi khuẩn trong vòng 60 phút, cồn 700 diệt vi khuẩn trong vòng 30 phút

Vi khuẩn có thể sống trong xác lợn chết ở 400C trong 6 tuần Vi khuẩn tồn tại lâu trong

ñờm, chất bài xuất có protein Tuy nhiên, vi khuẩn có thể tồn tại ở trên hạch amidan lợn mang trùng hơn 1 năm, ngay khi các yếu tố thực bào, kháng thể và bổ sung kháng sinh phù hợp trong thức ăn

Streptococcus có cấu trúc kháng nguyên rất phức tạp Có rất nhiều kháng

nguyên ñã ñược tìm thấy:

- Kháng nguyên polyozit hay kháng nguyên “C” do Lancefield phát hiện năm

1928, ñây là một kháng nguyên thân Thành phần kháng nguyên thân có ý nghĩa quan

trọng, quyết ñịnh ñến tính ñộc lực của vi khuẩn Streptococcus và nó nằm ở thành vi khuẩn (Cell wall) Thành tế bào vi khuẩn S suis gồm 3 lớp: Lớp ngoài có chứa acid

và protein gọi là kháng nguyên M, T, R, , Map (M - Assotated Protein), SOF (Serua Oparty Factor) Phía ngoài cùng của lớp này thường chứa các fimbriae; lớp giữa chứa

polysaccharide; lớp trong cùng là peptidoglycan Những Streptococcus khác nhau có cấu tạo chất “C” khác nhau, dựa vào ñó người ta chia Streptococcus thành các nhóm:

A, B, C, D, , R, trong ñó Streptococcus type A, B thuộc loại tan máu type β

- Kháng nguyên protein M là yếu tố ñộc lực chống lại quá trình thực bào và là

kháng nguyên ñặc hiệu của Streptococcus type A Người ta ñã xác ñịnh có khoảng 42

type trong ñó có 12 type quan trọng và thường hay gây bệnh

- Các mucopeptit: làm cho vách tế bào của Streptococcus cứng rắn và còn

có khả năng gây ñộc

- Kháng nguyên bám dính: fimbriae có lipoteibic acid (LTA) giúp vi khuẩn bám dính vào tế bào biểu mô và ở tế bào lympho ña nhân có ñiểm tiếp nhận (receptor) tương ứng với LTA trong quá trình thực khuẩn Nguyễn Như Thanh và cs (1997)

Hiện nay vi khuẩn S suis có 20 nhóm huyết thanh và 25 serotype khác nhau

Phần lớn các vi khuẩn gây bệnh trên lợn ñều thuộc type 1 và type 2

Vi khuẩn S suis thuộc nhóm D có 9 serotype; nhóm R và nhóm S có 2 serotype

gây ra các thể bệnh viêm họng, nhiễm trùng huyết và viêm khớp ở lợn

Vi khuẩn S suis thuộc nhóm E có 6 serotype, trong ñó serotye 2, 4, 1, 6, 7

gây các thể bệnh apxe hạch và các nội quan khác

Vi khuẩn S suis thuộc nhóm L và C gồm 11 serotype gây các thể bệnh nhiễm

trùng huyết, viêm nội tâm mạc và viêm ña khớp ở lợn

Vi khuẩn có thể tồn tại trong phân, bụi bẩn, xác lợn và ở cả những con ruồi trong một thời gian dài Bệnh có thể truyền qua ñường hô hấp, các chất bài tiết, máu của lợn bệnh, lây lan thông qua tiếp xúc trực tiếp hoặc lây qua kim tiêm nhiễm trùng Lợn con có thể bị lây nhiễm từ lợn mẹ qua ñường hô hấp, ñường tiêu hoá và ñường máu

Vi khuẩn S suis lây truyền theo ñường hô hấp xâm nhập vào hạch amidan,

vòm họng, từ ñó di chuyển theo hệ lâm ba tới hạch dưới hàm, cư trú ở các mô; lúc này, cơ thể chưa có dấu hiệu về lâm sàng của bệnh Ở các tổ chức cư trú, chúng sống và nhân lên trong tế bào monocyt rồi chuyển vào xoang dịch não tuỷ, gây nên viêm màng não, có thể thông qua con ñường nhiễm trùng huyết ñể xâm nhập vào màng não, khớp xương và các mô khác Lê Văn Tạo (2005)

Vi khuẩn S suis là một trong số các tác nhân gây bệnh quan trọng ở lợn, là

nguyên nhân gây ra bệnh ở các thể cấp tính như bại huyết, viêm não, viêm màng trong tim, viêm khớp, viêm phổi, thường dẫn ñến chết ở lợn, ñặc biệt ở giai ñoạn lợn ñã cai sữa và lợn trưởng thành Bệnh do vi khuẩn này gây ra từ lâu ñã và ñang ñược coi là một bệnh thu hút ñược nhiều sự chú ý trong ngành chăn nuôi lợn Bên cạnh ñó, tác nhân gây bệnh cũng là nhân tố quan trọng, nguy cơ tiềm tàng gây các bệnh ở người như viêm não, viêm màng trong tim và nhiễm trùng máu Vi khuẩn này là mối nguy hiểm nghề nghiệp ñặc biệt quan trọng với những người trực tiếp làm công tác chăn nuôi, thú y, những người làm nghề giết mổ và bán thịt lợn Gần ñây nhất (tháng 7 và 8/2005), một vụ dịch lớn nhất, chưa từng gặp trong lịch sử ngành chăn nuôi lợn ñã xảy ra tại tỉnh Tứ Xuyên, Trung Quốc gây chết 644 con lợn, gây nhiễm bệnh cho 208 người, trong ñó có 39 người ñã tử vong Các nhà khoa học Trung Quốc ñã tiến hành các nghiên cứu cơ bản trong phòng thí nghiệm

và ñã chế tạo ñược một loại vacxin vô hoạt với kháng nguyên là chính các chủng

vi khuẩn phân lập ñược tại ổ dịch ñể tiêm phòng cho toàn bộ lợn nuôi trong vùng Các ghi nhận cho thấy kết quả bước ñầu rất khả quan, dịch bệnh ñã tạm dừng,

không thấy lợn và người bị nhiễm bệnh và chết

* Bệnh liên cầu khuẩn do S suis gây ra ở lợn:

Theo Phạm Sỹ Lăng và cs (2005), bệnh do vi khuẩn S suis gây ra ở lợn hay

còn gọi là bệnh liên cầu ở lợn xảy ra ở lợn mọi lứa tuổi, nhưng phổ biến ở lợn con một vài tuần tuổi ñến sau cai sữa vài tuần ðặc trưng lâm sàng của bệnh là nhiễm

trùng huyết, viêm màng não, viêm khớp và viêm phế quản phổi ðặc biệt S suis

type 2 có thể gây bệnh cho người

Thể nhiễm trùng huyết và viêm não có dịch (thường thấy ở lợn từ 2 - 3 tháng tuổi); thể viêm ñường hô hấp (ở lợn từ 2 tuần tuổi ñến 2 tháng tuổi); thể viêm âm ñạo, tử cung (ở lợn cái hậu bị và lợn mang thai); thể viêm vú (ở lợn ñang nuôi con); thể viêm hạch (ở lợn sau cai sữa và vỗ béo)

- Triệu chứng và bệnh tích: thời gian nung bệnh từ 6 giờ ñến 3 ngày, tuỳ thuộc

số lượng vi khuẩn xâm nhập vào cơ thể, lứa tuổi và sức ñề kháng của cơ thể Các thể bệnh thường thấy:

+ Thể nhiễm trùng huyết: lợn bệnh sốt rất cao 410 - 420C, chảy nước mắt, ly

bì, nằm bệt, niêm mạc ñỏ sẫm, da ñỏ tím từng mảng, lợn bệnh chết trong khoảng 1 -

3 ngày, tỷ lệ chết lên ñến 100 % Bệnh tích: da ñỏ tím từng mảng, tụ huyết và xuất huyết ở một số phủ tạng (lách, thận, hạch lâm ba)

+ Thể viêm não tuỷ: sốt cao, bỏ ăn, ñi lại siêu vẹo, run rẩy, co giật, nôn

mửa, hôn mê và chết sau 2 - 3 ngày Bệnh thường thấy ở lợn sau cai sữa, lợn từ 2

- 3 tháng tuổi Tỷ lệ chết 100 % Bệnh tích: màng não tụ huyết và xuất huyết, dịch não và tủy vẩn ñục

+ Thể viêm họng, viêm phế quản phổi: sốt cao, chảy nước mắt, dịch mũi, họng

sưng, bỏ ăn, thở khó, thở nhanh; da tụ huyết từng mảng Thường thấy ở lợn con ñang theo mẹ và sau cai sữa Tỷ lệ chết 60 - 70 % Bệnh tích: họng và amidan sưng, tụ máu, niêm mạc phế quản tụ huyết, niêm mạc mũi có màng giả, tiểu phế quản và phế nang viêm có dịch thẩm xuất, có mủ và bọt khí; hạch phổi sưng thũng, tụ huyết

+ Thể viêm hạch: sốt cao, hạch hầu và hạch mang tai sưng thũng, sau thành

apxe mủ, lâu thành bã ñậu Bệnh thấy ở lợn vỗ béo, diễn biến 5 - 8 ngày, tỷ lệ chết

20 - 30% Bệnh tích: hạch hầu, hạch trước vai, trước ñùi sưng tụ huyết ở giai ñoạn ñầu, giai ñoạn cuối viêm bã ñậu

- Chẩn đốn: chủ yếu chẩn đốn bệnh dựa vào các triệu chứng, bệnh tích, đặc điểm dịch tễ học của bệnh, phân lập và xác định vi khuẩn S suis trong phịng thí nghiệm Cần lưu ý khi chẩn đốn, phải tiến hành phân lập vi khuẩn từ một vài cơ quan phủ tạng khác nhau của cùng một lợn mắc bệnh và từ vài lợn trong cùng một đàn để tìm ra serotype gây bệnh chính

Các kỹ thuật sinh học phân tử là cơng cụ hữu ích giúp phân biệt các chủng S suis phân lập được, xác định nguồn gốc lây nhiễm trong đàn, giúp khống chế ổ dịch

hoặc tìm ra đúng chủng để bổ sung vào vắc xin Gần đây nhiều phịng thí nghiệm đã

phát triển kỹ thuật PCR để giám định vi khuẩn S suis, xác định các yếu tố độc lực

và serotype của chủng vi khuẩn gây bệnh đã được ứng dụng rộng rãi

- Phịng bệnh:

+ Phịng bệnh bằng vệ sinh, chăm sĩc, nuơi dưỡng và quản lý:

Thường xuyên quét dọn vệ sinh, phun thuốc tiêu độc, tẩy uế chuồng trại bằng các loại thuốc sát trùng

Chú trọng cơng tác chăm sĩc nuơi dưỡng và quản lý đàn Xác định và loại thải những lợn mang mầm bệnh, tách riêng điều trị, hoặc loại thải Bổ sung kháng sinh vào thức ăn để giảm tỷ lệ lợn khoẻ mang trùng

Khi cĩ dịch xảy ra, phải cách ly những con bệnh ra khu vực nuơi cách ly để tránh lây lan Theo dõi và điều trị kịp thời những con bị bệnh Với những con khơng

cĩ khả năng chữa khỏi phải được loại thải nhằm mục đích thu hẹp và thanh tốn được đàn lợn bị bệnh Trong quá trình theo dõi, phải cách ly tuyệt đối khơng được nhập đàn mới vào, phải tiến hành thường xuyên phun thuốc tiêu độc, tẩy uế chuồng trại bằng các thuốc sát trùng

+ Phịng bệnh bằng vacxin:

Các nhà khoa học đã nghiên cứu và đưa vào chế tạo thử nghiệm nhiều loại vắc xin khác nhau như: vacxin tồn khuẩn, vacxin sống nhược độc, vacxin tiểu phần (chế từ kháng nguyên giáp mơ hoặc các protein thành tế bào, protein là các yếu tố độc lực), Tuy nhiên, miễn dịch bảo hộ ở chuột hoặc lợn thí nghiệm được tiêm các loại vacxin này cũng rất thất thường và khơng ổn định

Trong một số trường hợp khẩn cấp, việc lựa chọn dùng vacxin vẫn là phương thức tối ưu nhất để bảo vệ sức khoẻ đàn lợn Tại Trung Quốc, năm 1994 đã dùng

vacxin chế từ chủng nhược độc của vi khuẩn S suis chủng ST.171 đơng khơ tiêm

cho lợn từ cai sữa đến trưởng thành và nái cĩ chửa ở thời kỳ đầu Khi sử dụng cho thêm nước muối sinh lý cĩ bổ trợ keo phèn 20% hồ thành huyễn dịch tiêm dưới da hoặc tiêm bắp với liều 1ml/con Sau khi tiêm 7 ngày đã sinh miễn dịch, miễn dịch cao nhất sau 14 ngày và thời gian miễn dịch kéo dài được 6 tháng Lê Văn Tạo và

ðỗ Ngọc Thuý (2006) Vi khuẩn S suis mẫn cảm với nhiều loại kháng sinh, nhưng cũng rất dễ kháng lại với các loại kháng sinh này Vì vậy, trong quá trình sử dụng kháng sinh để phịng và điều trị bệnh phải hết sức thận trọng

- ðiều trị: Chẩn đốn phát hiện sớm bệnh do vi khuẩn S suis gây ra và điều trị

bằng kháng sinh thích hợp là biện pháp nhằm tăng khả năng sống sĩt cho đàn lợn Với lợn con trước cai sữa và ở giai đoạn đầu của bệnh, nếu sử dụng penicillin và dexametasone sẽ mang lại hiệu quả rất cao Trong thực tế, khi sử dụng penicillin điều

trị bệnh do S suis gây ra, điều trị từng cá thể kết hợp với chăm sĩc và nuơi dưỡng tốt

cĩ thể khỏi bệnh hồn tồn, tránh được tử vong

Ngồi việc sử dụng kháng sinh để điều trị bệnh do S suis gây ra, nhiều nước

trên thế giới đã sử dụng huyết thanh đặc hiệu để điều trị bệnh và mang lại kết quả tốt

1.2 Những nghiên cứu trong và ngồi nước về vi khuẩn A.pleuropneumoniae và

S suis về bệnh viêm phổi ở lợn

1.2.1 Vi khuẩn A pleuropneumoniae

1.2.1.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Vào năm 1957, Pattison et al là những người đầu tiên phát hiện bệnh viêm phổi - màng phổi ở lợn, tiếp đến Matthews et al (1961) cũng đã cơng bố về bệnh Shope et al (1964), White et al (1964) đã phân lập được vi khuẩn gây bệnh và đặt tên

là Haemophilus pleuropneumoniae (H pleuropneumoniae) Năm 1978, Kilian et al khẳng định vi khuẩn H pleuropneumoniae là nguyên nhân gây bệnh viêm phổi màng

phổi ở lợn

Năm 1983, Pohl et al đã phân loại vi khuẩn H pleuropneumoniae vào giống Actinobacillus (A), đặt tên là A pleuropneumoniae do cĩ sự tương đồng về DNA giữa

H pleuropneumoniae và A lignieressi Chủng vi khuẩn gần giống với Pasteurella heamolytica ựược mô tả là nguyên nhân gây bệnh viêm phổi - màng phổi hoại tử

ựược coi là một biến thể của A pleuropneumoniae không phụ thuộc vào NAD Pohl et

al (1983), hiện nay ựược gọi là A pleuropneumoniae thuộc biotype 2

Từ năm 1995 ựến năm 1998, tại Hàn Quốc các nhà khoa học ựã phân lập ựược 76 chủng A pleuropneumoniae từ lợn mắc bệnh viêm phổi - màng phổi Trong số ựó, tỷ lệ các chủng thuộc serotype 2 chiếm 60,53%; serotype 5 chiếm

26,32%; serotype 6 chiếm 13,16% Bongtae et al (2001)

Sự phân bố các serotype của A pleuropneumoniae có tắnh chất ựịa lý nhất

ựịnh, vắ dụ serotype 2 chủ yếu có mặt ở châu Âu như ở Thụy điển, đức và Thụy Sĩ, còn serotype 1 và 5 ở Mỹ và Canada Taylor DJ (1999); tại Hàn Quốc, các serotype

thường gặp là 2, 5, 6, 7 Min et al (1999); ở đài Loan thường xuất hiện các serotype

1, 2, 5 Chang et al (2002)

Việc chẩn ựoán bệnh viêm phổi - màng phổi ở lợn ựã ựược nhiều tác giả trên

thế giới nghiên cứu Năm 1995, Frey et al phát triển phương pháp PCR có hiệu quả trong việc ựịnh loại ựộc tố của các chủng A pleuropneumoniae còn Lairini et al (1995)

ựã dùng kháng thể ựơn dòng ựể xác ựịnh ựộc tố của từng serotype Gram et al (1998)

ựã áp dụng kỹ thuật PCR ựể chẩn ựoán A pleuropneumoniae dựa trên việc xác ựịnh trình tự nucleotide của lipoprotein màng ngoài hoặc dùng huyết thanh với kháng thể

hấp phụ hoặc kháng thể ựơn dòng ựể xác ựịnh A pleuropneumoniae đến năm 2000 các nhà khoa học ựã sử dụng phương pháp PCR ựể xác ựịnh serotype của A pleuropneumoniae dựa trên các gen apx và omlA Gram et al (2000)

1.2.1.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Tại Việt Nam bệnh VPMP có ựặc tắnh lây lan mạnh, ảnh hưởng tới tăng trọng, tỷ lệ loại thải và chất lượng con giống Ngoài ra chi phắ ựiều trị cũng rất cao, gây nhiều tổn thất kinh tế cho ngành chăn nuôi đặc biệt trong những năm

gần ựây, vi khuẩn A pleuropneumoniae ựã ựược phân lập và xác ựịnh là một tác

nhân gây bệnh nhiễm trùng hô hấp khá quan trọng cho lợn nuôi ở tất cả các trại lợn quy mô lớn

Trịnh Quang Hiệp và cs (2004) ñã phân lập ñược A pleuropneumoniae ở 17 mẫu

trong tổng số 250 mẫu là dịch ngoáy mũi lợn nuôi tại 3 trại lợn của Thái Bình và Hải Phòng Trong 30 mẫu là tổ chức phổi và hạch lympho thu thập từ lợn có triệu

chứng viêm phổi ñã phát hiện thấy có 1 mẫu dương tính với A pleuropneumoniae

Cù Hữu Phú và cs (2004) ñã xác ñịnh tỷ lệ nhiễm, các ñặc tính sinh vật hóa học, ñộc lực trên chuột, mức ñộ mẫn cảm với kháng sinh của 5 loại vi khuẩn ñược xem là nguyên nhân chính gây bệnh hô hấp ở lợn Kết quả cho thấy có nhiều vi

khuẩn gây bệnh cư trú tại ñường hô hấp của lợn, trong ñó A pleuropneumoniae cư trú chủ yếu ở niêm mạc ñường hô hấp trên A pleuropneumoniae tồn tại thường

xuyên ở niêm dịch và chỉ gây bệnh khi có ñủ các ñiều kiện cần thiết như: ñộc lực của vi khuẩn cao, sức ñề kháng của con vật giảm sút hay yếu tố môi trường khắc nghiệt Kiểm tra các mẫu bệnh phẩm của lợn khỏe và lợn bệnh cho thấy trong số

542 mẫu dịch ngoáy mũi của lợn dưới 3 tháng tuổi, số mẫu phân lập ñược A pleuropneumoniae là 43 mẫu (7,93%) và chỉ có 1/53 (0,19%) mẫu phổi, hạch phổi của lợn dương tính với A pleuropneumoniae Kết quả xác ñịnh serotype của 44

chủng vi khuẩn phân lập ñược cho thấy chúng thuộc serotype 1, 2, 5 (có 19 chủng thuộc serotype 2 chiếm 43,18%, 22 chủng thuộc serotype 5 chiếm 50%)

ðặng Xuân Bình và cs (2007) ñã phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae từ 37 mẫu bệnh phẩm phổi lợn chết hoặc sắp chết có triệu chứng viêm phổi, tại các trại chăn nuôi lợn của Hà Tây và Thái Nguyên Kết quả phân lập cho thấy tỷ lệ dương

tính với A pleuropneumoniae là 37,83%

Nguyễn Thị Thu Hằng (2010) tỷ lệ phân lập A pleuropneumoniae từ 79 mẫu

bệnh phẩm lấy ở lợn bị viêm phổi - màng phổi tại các ñịa phương rất khác nhau

Bệnh phẩm lấy tại Hải Phòng có tỷ lệ phân lập ñược A pleuropneumoniae cao nhất

(61,43%), tiếp ñến Thái Nguyên (54,17%), Hà Nội và Bắc Giang (50%), Thái Bình (46,67%), thấp nhất là Hà Tây (33,33%)

Từ những nghiên cứu trên có thể thấy A pleropneumoniae là vi khuẩn mới

ñược quan tâm tại Việt Nam trong thời gian gần ñây, tuy tỷ lệ phát hiện ñược chưa cao, song sự có mặt của chúng ñã chứng tỏ vai trò quan trọng trong bệnh viêm phổi

- màng phổi ở lợn tại Việt Nam

1.2.2 Vi khuẩn S suis

1.2.2.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Vi khuẩn S suis là một trong số các tác nhân gây bệnh quan trọng và gây ra

những thiệt hại ñáng kể trong chăn nuôi lợn công nghiệp Các thông báo ñầu tiên về

bệnh do S suis gây ra ở lợn ñã ñược chính thức xác nhận lần ñầu tiên ở Hà Lan vào năm 1951 Jansen and Van Dorssen (1951) và ở Anh vào năm 1954 Field et al

(1954) Kể từ ñó, bệnh ñã ñược thông báo là xảy ở hầu khắp các nước trên thế giới

- nơi có ngành chăn nuôi lợn phát triển Higgins and Gottschalk (2002)

Bệnh do vi khuẩn S Suis gây ra ở lợn mọi lứa tuổi, nhưng thường gặp nhất ở

giai ñoạn 3 - 16 tuần tuổi do lợn thời kỳ sau cai sữa trở nên ñặc biệt mẫn cảm với vi

khuẩn này Lamont et al (1980) Vi khuẩn S suis là nguyên nhân gây ra các thể

bệnh như viêm phế quản - phổi, viêm màng phổi và viêm phổi ở các lứa tuổi của

lợn Erickson et al (1984) Các triệu chứng của bệnh do vi khuẩn này gây ra ở lợn có

sự sai khác nhau giữa các quốc gia Higgins and Gottschalk (2002) và rất ña dạng, bao gồm như viêm não, nhiễm trùng máu, viêm khớp, viêm nội tâm mạc, viêm ña thanh mạc, viêm màng bụng, viêm phổi, và thường dẫn ñến chết ñột ngột Higgins

and Gottschalk (2002); Lun et al (2007) Ngoài ra, vi khuẩn còn có thể phân lập

ñược trong các trường hợp lợn bị viêm teo mũi và sảy thai

Ở Anh, bệnh do S suis type 2 chủ yếu là gây ra các triệu chứng như bại huyết và viêm não ở lợn cai sữa Windsor and Elliott (1975) Trong khi ñó, ở các

nước Bắc Mỹ, các báo cáo ñều cho thấy S suis là vi khuẩn chủ yếu phân lập ñược

từ những lợn bị viêm phổi Koehne et al (1979); Erickson et al (1984)

Các chủng S suis thuộc các serotype khác (không phải type 2) cũng ñã phân lập ñược từ lợn bị viêm phổi - màng phổi tại ðan Mạch Perch et al (1983), Hà Lan Vecht et al (1985), Bỉ Hommez et al (1986), Phần Lan Sihvonen et al (1988), Australia Gogolewski et al (1990), Canada Higgins et al (1990), (Gottschalk et al, 1991a, 1991b) và Mỹ Reams et al (1994)

Các chủng thuộc S suis type 2 thường gây ra bệnh cho lợn giai ñoạn sau

cai sữa và vỗ béo (4-16 tuần tuổi) với rất nhiều thể bệnh như viêm não, viêm nội tâm mạc, ngoại tâm mạc, cơ tim hoại tử, viêm phổi, viêm khớp và bại huyết

Vetcht et al (1985), (Sanford 1987a, 1987b) và Gogolewski et al (1990) Bệnh

thường xảy ra sau khi lợn khoẻ ựược nuôi hoặc nhốt chung với lợn bệnh và thường gây chết ựột ngột với các triệu chứng như sốt, thần kinh và viêm khớp

Tại Hà Lan, tỷ lệ S suis type 2 có liên quan ựến viêm phổi chiếm 42% các trường

hợp mắc bệnh, tiếp ựến là viêm não (18%), viêm nội tâm mạc (18%), và viêm ựa

thanh mạc (10%) Vecht et al (1985) Kataoka et al (1993) nghiên cứu ở Nhật Bản

ựã cho biết kết quả là 38% số chủng S suis phân lập ựược từ lợn bị viêm não và 33% từ lợn bị viêm phổi

Những nghiên cứu về dịch tễ học cho thấy S suis type 2 có thể lây từ ựàn

này sang ựàn khác do sự di chuyển của một số cá thể nào ựó trong ựàn Ngay trong cùng một ựàn, sự lây lan chủ yếu là do tiếp xúc giữa các cá thể với nhau hoặc với chất thải nhiễm vi khuẩn Ngoài ra, các vật chủ trung gian cũng ựóng vai trò quan

trọng trong quá trình truyền lây S suis Enright et al (1987) ựã chứng minh ruồi có thể mang S suis type 2 trong vòng ắt nhất là 5 ngày và có thể gây nhiễm thức ăn và

nguyên liệu mà chúng ựậu vào trong vòng ắt nhất là 4 ngày Bởi vậy, chắnh ruồi ựóng vai trò quan trọng trong việc làm lây lan dịch bệnh giữa các cá thể trong cùng một ựàn và giữa các ựàn Vai trò của các loài ựộng vật khác, kể cả chim như là nguồn lây nhiễm vẫn còn ựang ựược tiến hành nghiên cứu Chắnh con người cũng

có thể là nguồn mang trùng Sala et al (1989)

Trong khi ựó, Vi khuẩn S suis type 1 thường gây bệnh cho lợn con ựang

theo mẹ (1 - 3 tuần tuổi), có khi tới 6 tuần tuổi và thường ở thể bại huyết hoặc các nhiễm trùng tại chỗ như viêm màng não, viêm não, viêm khớp, viêm nội tâm mạc, ựặc biệt là lợn con từ 1-7 ngày tuổi Cook et al (1988) đôi khi, nhóm vi khuẩn thuộc type 2 cũng gây bệnh cho lứa tuổi này, nhưng thường ắt gặp hơn Lợn con bị nhiễm bệnh là do lợn mẹ truyền qua ựường hô hấp, ựường tiêu hoá (do tiếp xúc với phân, các chất thải hoặc các chất tiết khác), ựường máu (do tiếp xúc trực tiếp hoặc qua kim tiêm nhiễm trùng) Với một số cá thể, hiện tượng nhiễm khuẩn chỉ biểu hiện ở dạng nhiễm khuẩn qua máu và không bao giờ phát bệnh Tuy nhiên, với một

số cá thể khác, vi khuẩn sẽ gây bệnh và biểu hiện bằng hiện tượng nhiễm trùng máu

hoặc vi khuẩn di chuyển ñến hệ thần kinh trung ương, gây viêm màng não và ñây chính là biểu hiện bệnh lý quan trọng nhất

Những năm sau ñó, các nghiên cứu từ Anh lại kết luận vi khuẩn này là nguyên nhân chính gây bại huyết, viêm não và viêm ña khớp, ít khi gây viêm phổi

MacLennan et al (1996), Heath et al (1996); trong khi ñó, các bệnh tích ở phổi vẫn

là chủ yếu trong các trường hợp lợn bị bệnh tại Bắc Mỹ Reams et al (1994), Hogg

et al (1996)

1.2.2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Ở Việt Nam, theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thị Nội và Nguyễn Ngọc Nhiên (1993) về vi khuẩn ñường hô hấp của 162 lợn bị bệnh ho thở truyền nhiễm

cho thấy tỷ lệ nhiễm vi khuẩn S suis là 74%

Từ các kết quả nghiên cứu về bệnh cầu khuẩn ở lợn, Khương Thị Bích Ngọc (1996) ñã chế tạo vắc xin cầu khuẩn chết có bổ trợ keo phèn tiêm phòng cho lợn nái, ñạt hiệu quả bảo hộ cao

Cù Hữu Phú (1998) ñã phân lập ñược vi khuẩn S suis từ bệnh phẩm của lợn

ốm chết nghi do vi khuẩn S suis gây ra ở cả 2 phương thức chăn nuôi là rất cao, trong ñó chăn nuôi tập trung chiếm 93,9%, chăn nuôi hộ gia ñình chiếm 95,3%

Năm 2005, chính Trung Quốc cũng ñã kiểm soát dịch bệnh do S suis gây ra ở lợn bằng vắc xin vô hoạt chế từ các chủng S suis serotype 2 Lê Văn Tạo và ðỗ Ngọc

1.3 Tình hình dịch bệnh trên ñàn lợn của huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang

1.3.1 Một số ñặc ñiểm tự nhiên ảnh hưởng ñến bệnh viêm phổi ở lợn

Việt Yên là huyện trung du nằm ở phía Tây Nam tỉnh Bắc Giang, có phạm vi ranh giới như sau:

+ Phía Bắc giáp huyện Tân Yên

+ Phắa Nam giáp thành phố Bắc Ninh và huyện Quế Võ tỉnh Bắc Ninh

+ Phắa đông giáp huyện Yên Dũng và thành phố Bắc Giang

+ Phắa Tây giáp huyện Yên Phong và huyện Hiệp Hoà

Huyện có toạ ựộ ựịa lý:

+ 21O11Ỗ29ỖỖ ựến 21O20Ỗ26ỖỖ vĩ ựộ Bắc

+ 106O0Ỗ08ỖỖ ựến 106O9Ỗ57ỖỖ kinh ựộ đông

Việt Yên có vị trắ tương ựối thuận lợi trong giao lưu phát triển kinh tế - xã hội:

là ựầu mối của một số tuyến giao thông quan trọng như quốc lộ 37, tỉnh lộ 298, tỉnh

lộ 295b nối vùng ựồng bằng tỉnh Bắc Giang với các huyện miền núi phắa Tây Bắc

và Bắc của tỉnh và các tỉnh lân cận ; có các tuyến giao thông huyết mạch Xuyên Việt như quốc lộ 1A, ựường sắt Bắc Nam và giao thông ựường thuỷ trên sông Cầu ; Nằm tương ựối gần với thủ ựô Hà Nội (cách 42 km) với hoạt ựộng buôn bán ựộng vật, sản phẩm ựộng vật lớn, trước diễn biến phức tạp của tình hình dịch bệnh trong

cả nước nên nguy cơ các dịch bệnh xảy ra trên ựịa bàn huyện là rất cao

Huyện Việt Yên có có 17 xã và 2 thị trấn ựịa hình có thể chia thành 3 dạng chắnh:

- địa hình ựồi núi thấp: dạng ựịa hình này ựược phân bố rải rác ở các xã: Việt Tiến, Thượng Lan, Minh đức, Nghĩa Trung ở phắa Bắc và Trung Sơn, Tiên Sơn, Ninh Sơn, Vân Trung ở phắa Nam huyện đỉnh cao nhất là ựỉnh Mỏ Thổ 161 m Những ựồi núi thấp này ựa phần có ựộ dốc bình quân 15O (chỉ khoảng 20% diện tắch

có ựộ dốc bình quân dưới 15O)

- Dạng ựịa hình vùng ựồng bằng có lượn sóng: dạng ựịa hình này tập trung ở

các xã phắa đông ựường quốc lộ 1A (Quang Châu,Vân Hà, Vân Trung, Hoàng Ninh, TT Nếnh, TT Bắch độngẦ) và một số xã vùng giữa huyện (Hương Mai, Tự Lạn, Bắch Sơn, Quảng Minh, Hồng Thái) độ cao bình quân so với mặt biển từ 2,5 -

5 m độ nghiêng của ựịa hình theo hướng Bắc xuống Nam và Tây Tây Bắc sang đông đông Nam

Nhiệt ựộ: theo số liệu thống kê cho thấy nhiệt ựộ trung bình năm dao ựộng từ 19-20oC, cao nhất vào tháng 6 dao ựộng từ 28-29oC và thấp nhất vào tháng 12 và tháng 1 dao ựộng từ 14-15oC

Số giờ nắng trung bình/năm là 1.500 giờ; các tháng 12, 1, 2, có số giờ nắng thấp nhất trong năm

Lượng mưa: lượng mưa trung bình trong năm vào khoảng 1.581mm; Các tháng 6,7,8 là những tháng có lượng mưa cao, chủ yếu là mưa rào; các tháng 1,2,3

là những tháng có lượng mưa thấp chủ yếu là mưa nhỏ, mưa phùn, lượng nước ít nhưng thời gian kéo dài

Ẩm ñộ: ẩm ñộ trong năm dao ñộng lớn từ 80- 82%, những tháng có ñộ ẩm cao là tháng 12, 1, 2, 3, 4

ðăc ñiểm ñịa hình và khí hậu ở huyện Việt Yên rất thuận lợi cho sinh trưởng

và phát triển của vi sinh vật, trong ñó có tác ñộng ñáng kể ñến tình hình dịch bệnh trên ñàn lợn và ñặc biệt là bệnh viêm phổi

1.3.2 Tình hình dịch bệnh trên ñàn lợn

Tình hình dịch bệnh trên ñàn lợn ở huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang những năm vừa qua diễn biến hết sức phức tạp ñã gây tổn thất khá lớn cho phát triển của ngành chăn nuôi

Tổng hợp các báo cáo dịch tễ của Chi cục Thú y tỉnh Bắc Giang trong 2 năm (từ 2011-2012) cho thấy, dịch bệnh trên ñàn lợn có trên 8 loại bệnh thường xuyên xảy ra với số lượng: Năm 2011 toàn huyện có 7.217 con lợn bị ốm, 895 con chết; năm 2012 toàn huyện có 8.427 con lợn bị ốm, 901 con chết

Tỷ lệ bệnh viêm phổi ở lợn hai năm 2011, 2012 xảy ra phổ biến chiếm tỷ lệ 40% so với tổng số các ca bệnh thường gặp ở lợn, riêng từ tháng 1 ñến tháng 5 năm

2013 số lợn mắc bệnh viêm phổi là 1.565 con / 3.025 con mắc các ca bệnh thông thường (chiếm tỷ lệ 51,73%)

Qua số liệu thống kê hàng tháng chúng tôi thấy: bệnh tiêu chảy ở lợn và ñặc biệt là bệnh viêm phổi ở lợn xảy ra quanh năm, xảy ra nhiều vào các tháng 9, 10, 11

và tháng 6, 7, 8

Chương 2 ðỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu một số ñặc ñiểm dịch tễ bệnh viêm phổi ở lợn do 2 loại vi

khuẩn A pleuropneumoniae, S suis gây bệnh viêm phổi tại một số xã của huyện

Việt Yên, tỉnh Bắc Giang từ tháng 8/2012 ñến tháng 8/2013

- Phân lập, xác ñịnh một số ñặc tính sinh vật hoá học của các chủng vi khuẩn A

pleuropneumoniae và S suis

- Xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn A

pleuropneumoniae và S suis phân lập ñược

- Thử nghiệm Autovaccine do bộ môn vi trùng Viện thú y chế tạo phòng viêm phổi lợn

- Thử nghiệm phác ñồ ñiều trị bệnh viêm ñường hô hấp, viêm phổi ở lợn

2.2 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu

2.2.1 ðối tượng nghiên cứu

- Lợn mắc bệnh viêm phổi nuôi tại huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang

- Vi khuẩn A pleuropneumoniae và S suis gây bệnh viêm phổi ở lợn

2.2.2 ðịa ñiểm nghiên cứu

- ðịa bàn nghiên cứu: Một số trang trại, hộ gia ñình chăn nuôi lợn tại huyện

Việt Yên thuộc tỉnh Bắc Giang

- ðịa ñiểm xét nghiệm mẫu: Bộ môn vi trùng - Viện Thú y Quốc gia

2.2.3 Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 8/ 2012 ñến tháng 8/ 2013

2.3 Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu

2.3.1 Mẫu bệnh phẩm

Mẫu bệnh phẩm ñược lấy bao gồm máu tim và các cơ quan phủ tạng (gan, lách, phổi) của các con lợn ốm hoặc chết có triệu chứng, bệnh tích nghi mắc bệnh viêm phổi

2.3.2 Các loại môi trường, hoá chất

- Các loại môi trường dùng ñể nuôi cấy, phân lập vi khuẩn do hãng Oxoid

(Anh) và Merck (Pháp) sản xuất:

- Môi trường thông thường: Nước thịt, thạch thường, nước thịt gan yếm khí, thạch Sabauraud, SCD (Soybean Casein Digest)

- Môi trường phân lập vi khuẩn và tăng sinh: thạch BHI có bổ sung 5% máu cừu hoặc máu bò; thạch chocolate; thạch TSA (Tryptone soya agar) có bổ xung 1-3% fresh Yeast Extract; TSB (Tryptone soya broth) có bổ xung 1-3% fresh Yeast Extract và 5% huyết thanh ngựa; nước thịt TYE (Tryptone Yeast Extract Broth); thạch dinh dưỡng PPLO có bổ xung 0,1% glucose; 8-10% YE tươi và 5% huyết thanh ngựa

- Môi trường xác ñịnh các ñặc tính sinh hóa: Oxidase, Catalase, Indol, Urerase, O.N.P.G Các loại ñường: Glucose, Mannitol, Trehalose, Arabinose, Lactose, Raffinose, Maltose, môi trường TMB dạng dung dịch và dạng thạch

- Các vật liệu hóa chất khác: Giấy thử phản ứng Oxidase, dung dịch H2O2 3%, thuốc thử Kovac’s, giấy tẩm kháng sinh, huyết thanh ngựa, NAD, thiamine

2.3.3 ðộng vật thí nghiệm

Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh ñủ ñiều kiện thí nghiệm, có khối lượng trung bình từ 18 - 20g/con

Lợn khoẻ 6 tuần tuổi chưa ñược tiêm vaccine phòng bệnh viêm phổi chế từ

các vi khuẩn A pleuropneumoniae và S suis

2.4 Phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ

Sử dụng phương pháp nghiên cứu dịch tễ học mô tả (Descriptive study) dịch tễ học phân tích (Analysic study) và dịch tễ học thực nghiệm của Nguyễn Như Thanh (2001), Nguyễn Văn Thiện (1997)

Dùng phương pháp nghiên cứu cắt ngang tìm căn nguyên của bệnh So sánh tần suất của bệnh viêm phổi giữa các nhóm khác nhau, các cá thể trong cùng nhóm, cũng như các yếu tố nguy cơ, các thông tin khác ñều ñược tiến hành trong cùng thời ñiểm nghiên cứu

2.4.1.1 Chọn mẫu ựiều tra

Chọn mẫu theo phương pháp ngẫu nhiên, mẫu chùm nhiều bậc Chọn

ngẫu nhiên 3 xã, mỗi xã ngẫu nhiên chọn 3 thôn; trong thôn ựiều tra các hộ

chăn nuôi lợn

- Số xã ựược ựiều tra: 3; số thôn, xóm là: 9

- Số lần ựiều tra: 4 lần theo các mùa (mùa Thu, mùa đông trong năm 2012;

mùa Xuân, mùa Hè trong năm 2013)

2.4.1.2 Phương pháp

- Trực tiếp quan sát ựể phát hiện lợn mắc bệnh viêm phổi Những lợn có triệu

chứng ho, khó thở, sốt, kém ănẦ ựược coi là bị mắc bệnh viêm phổi

- Phỏng vấn chủ hộ chăn nuôi về những thông tin cần thiết

- Thông tin ựiều tra ựược ghi vào các phiếu ựiều tra

2.4.1.3 Nội dung ựiều tra, theo dõi

- Số lợn mắc bệnh viêm phổi và chết do bệnh viêm phổi tại các hộ, các trang

trại chăn nuôi

- Các triệu chứng thường gặp ở lợn mắc bệnh viêm phổi

- Phương thức chăn nuôi và việc thực hiện vệ sinh chuồng trại

2.4.1.4 Các phương pháp ựo lường trong dịch tễ

Số lợn viêm phổi

Tỷ lệ lợn mắc viêm phổi (%) = x 100

Tổng số lợn ựiều tra

Số lợn mắc viêm phổi theo ựộ tuổi

Tỷ lệ mắc viêm phổi theo ựộ tuổi (%) = x 100

Tổng số lợn theo ựộ tuổi ựược ựiều tra

Số lợn chết do viêm phổi

Tỷ lệ tử vong viêm phổi (%) = x 100

Tổng số lợn mắc viêm phổi

2.4.1.5 Phương pháp phân tắch dịch tễ

Dùng chỉ tiêu nguy cơ tương ựối (Relative Risk - RR) ựể so sánh nguy cơ mắc bệnh tiêu chảy và chết do bệnh tiêu chảy ở lợn theo lứa tuổi, mùa vụ và phương thức chăn nuôi

Theo Nguyễn Như Thanh (2001), nguy cơ tương ựối biểu thị bằng các nguy cơ so sánh và ựược ựịnh nghĩa là nguy cơ phát triển một bệnh trong số các

cá thể có cảm nhiễm (có tiếp xúc) với yếu tố nguy cơ nghi ngờ, ựược so sánh với nguy cơ phát triển bệnh ựó, trong số các cá thể không cảm nhiễm (không tiếp xúc) với yếu tố nguy cơ ựó

để so sánh một yếu tố nguy cơ với các nhóm bệnh và nhóm ựối chứng liệu dịch tễ học ựược thể hiện ở bảng sau:

Bảng 2.1 So sánh yếu tố nguy cơ

Bệnh trạng Khai thác sau

a: Số gia súc ựược chọn là có bệnh, có tiếp xúc với yếu tố nguy cơ

b: Số gia súc không có bệnh, nhưng tiếp xúc với yếu tố nguy cơ

c: Số gia súc có bệnh nhưng không có tiếp xúc

d: Số gia súc không có bệnh và cũng không có tiếp xúc

Nguy cơ tương ựối ựược tắnh theo công thức sau:

I elà tỷ lệ mắc bệnh ở nhóm có cảm nhiễm với yếu tố nguy cơ

I o là tỷ lệ mắc bệnh ở nhóm không cảm nhiễm với yếu tố nguy cơ

đánh giá kết quả:

+ Nếu RR > 1 sự liên quan giữa bệnh và cảm nhiễm với yếu tố nguy cơ, nếu trị số

RR càng lớn sự kết hợp giữa bệnh và cảm nhiễm càng mạnh

+ RR = 1 bệnh và sự cảm nhiễm bệnh không có liên quan gì ñến nhau

+ RR < 1 sự kết hợp âm tính

* Dùng khi bình phương (χ2 )so sánh tần suất bệnh:

Bằng công thức của Nguyễn Văn Thiện và cs (2002):

2.4.2.2 Phân lập và giám ñịnh vi khuẩn

Các phương pháp nuôi cấy và giám ñịnh vi khuẩn ñược thực hiện theo quy trình nghiên cứu thường quy của Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y

Các mẫu bệnh phẩm ñược ria cấy trên các loại môi trường như nước thịt thường, thạch máu, thạch Mac Conkey, thạch chocolate Bệnh phẩm trước khi ria cấy vào các môi trường phải dùng bông tẩm cồn ñốt mặt ngoài ñể diệt tạp khuẩn Sau ñó dùng kéo ñã ñược sát trùng cẩn thận cắt sâu vào bên trong phần ñã ñốt, lấy

một mẩu nhỏ các mô, rồi phết lên mặt các loại môi trường thạch, ñồng thời cho vào môi trường nước thịt, bồi dưỡng ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ Căn cứ vào tính chất mọc và hình thái của khuẩn lạc trên các môi trường sẽ tiến hành chọn khuẩn lạc

nghi của A pleuropneumoniae và S suis, phết kính nhuộm Gram kiểm tra hình thái

vi khuẩn dưới kính hiển vi, ñồng thời tiến hành giám ñịnh vi khuẩn qua các phản ứng sinh hóa và cấy giữ giống ñể dùng cho các nghiên cứu tiếp theo Có thể tóm tắt phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm theo sơ ñồ sau:

Sơ ñồ phân lập vi khuẩn

Mẫu bệnh phẩm

Nuôi cấy trên các môi trường:

Nước thịt, thạch máu, thạch Mac Conkey, thạch Chocolate

Chọn, thuần khiết từng loại khuẩn lạc

Nhuộm Gram kiểm tra hình thái vi khuẩn

Giám ñịnh vi khuẩn qua các ñặc tính sinh hoá và lên men ñường

2.4.3 Phương pháp kiểm tra các ñặc tính sinh hoá và khả năng lên men ñường của các chủng vi khuẩn phân lập ñược

Kiểm tra ñộc lực Xác ñịnh serotype

Kiểm tra khả năng mẫn cảm với kháng sinh