- Môi trường phân lập vi khuẩn và tăng sinh: thạch BHI có bổ sung 5% máu c ừu hoặc máu bò; thạch chocolate; thạch TSA (Tryptone soya agar) có b ổ xung
2.4.2.Thu thập mẫu và phân lập vi khuẩn
2.4.2.1. Thu thập mẫu
- Mẫu bệnh phẩm gồm: phổi, cuống họng, lách, gan của lợn nghi mắc bệnh viêm phổi .
- Mẫu ñược bảo quản trong ñiều kiện lạnh 40C, theo quy trình bảo quản mẫu của Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y và ñược vận chuyển ngay ñến phòng nghiệm ñể tiến hành các xét nghiệm tiếp theọ
2.4.2.2. Phân lập và giám ñịnh vi khuẩn
Các phương pháp nuôi cấy và giám ñịnh vi khuẩn ñược thực hiện theo quy trình nghiên cứu thường quy của Bộ môn Vi trùng, Viện Thú ỵ
Các mẫu bệnh phẩm ñược ria cấy trên các loại môi trường như nước thịt thường, thạch máu, thạch Mac Conkey, thạch chocolatẹ Bệnh phẩm trước khi ria cấy vào các môi trường phải dùng bông tẩm cồn ñốt mặt ngoài ñể diệt tạp khuẩn. Sau ñó dùng kéo ñã ñược sát trùng cẩn thận cắt sâu vào bên trong phần ñã ñốt, lấy
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 28 một mẩu nhỏ các mô, rồi phết lên mặt các loại môi trường thạch, ñồng thời cho vào môi trường nước thịt, bồi dưỡng ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ. Căn cứ vào tính chất mọc và hình thái của khuẩn lạc trên các môi trường sẽ tiến hành chọn khuẩn lạc nghi của Ạ pleuropneumoniae và S. suis, phết kính nhuộm Gram kiểm tra hình thái vi khuẩn dưới kính hiển vi, ñồng thời tiến hành giám ñịnh vi khuẩn qua các phản ứng sinh hóa và cấy giữ giống ñể dùng cho các nghiên cứu tiếp theọ Có thể tóm tắt phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm theo sơñồ sau:
Sơ ñồ phân lập vi khuẩn
Mẫu bệnh phẩm
Nuôi cấy trên các môi trường:
Nước thịt, thạch máu, thạch Mac Conkey, thạch Chocolate
Chọn, thuần khiết từng loại khuẩn lạc
Nhuộm Gram kiểm tra hình thái vi khuẩn
Giám ñịnh vi khuẩn qua các ñặc tính sinh hoá và lên men ñường
2.4.3. Phương pháp kiểm tra các ñặc tính sinh hoá và khả năng lên men ñường của các chủng vi khuẩn phân lập ñược