Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du

Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc ngô thù du

Trang 1

BỘ Y TẾ

TRUONG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ VĂN HƯNG

NGHIEN CUU ANH HUONG CUA PHUONG PHAP CHE BIEN CO TRUYEN DEN THANH PHAN HOA

HOC VA TAC DUNG KHANG KHUAN CUA VI THUOC NGO THU DU

KHOA LUAN TOT NGHIEP DUOC SI

Người hướng dẫn: GS.TS Pham Xuân Sinh Nơi thực hiện:

Bộ môn Dược học cô truyền

Sao eens

Ye

ph

Trang 2

LỜI CẢM ƠN

Trước hết với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới GS.TS Phạm Xuân Sinh người đã trực tiếp hướng

dẫn, chỉ bảo tận tình và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực

hiện đề tài

Tôi cũng xin được chân thành cảm ơn các thây cô, các anh chị kĩ thuật viên Bộ môn Dược Học Cổ Truyền đã mang lại cho tôi những kiến thức, kĩ

năng và niềm yêu thích với mơn học để tơi có quyết tâm hồn thành tốt khóa

luận này

Đồng thời tôi xin được gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Cao Văn Thu và

Bộ môn Vi Sinh —- Sinh Học đã hết sức tạo điều kiện và giúp đỡ tôi trong quá

trình thực hiện đề tài

Tôi xin chân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, các thầy cô giáo Trường Đại Học Dược Hà Nội đã giảng dạy,và tạo điều kiện cho tôi trong suốt 5 năm học tập và nghiên cứu tại trường

Do thời gian tiến hành khóa luận hạn hẹp cũng như kinh nghiệm tiến

hành thực nghiệm chưa nhiều nên khóa luận khơng thể tránh khỏi những thiếu

sót Rất mong nhận được sự góp ý để khóa luận thêm hoàn thiện

Ha Noi, 5 - 2010 Sinh vién

Trang 3

MỤC LỤC Trang DAT VAN DE Chương 1: TỎNG QUAN 1.1 Vị thuốc Ngô thù đu

1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố thu hái của Ngô thù du 1.1.2 Đặc điểm của được liệu

1.1.3 Đặc điểm bột Ngô thù đu 1.1.4 Thành phần hóa học

1,1,5 Tác dụng sinh học

1.1.6 Công dụng và liễu đùng

1.1.7 Một số phương thuốc có chứa Ngơ thù du

1.2 Chế biến cỗ truyền và chế biến Ngô thù du theo phương pháp cỗ

truyền

1.2.1 Mục đích của chế biến thuốc cỗ truyền 1.2.2 Các phương pháp chế biến cổ truyền

1.2.3 Phương pháp chế NTD theo phương pháp cổ truyền Chương 2: ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.2 Thiết bị thí nghiệm 2.1.3 Dung môi hỏa chất

2.2 Phương pháp thực nghiệm

2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc

2.2.2 Chế biến Ngô thù du theo một số phương pháp cổ truyền 2.2.3 Nghiên cứu về hóa học

Trang 4

2.2.3.1 Định tính

2.2.3.2 Định lượng tinh dầu

2.2.3.3 Sắc kí khí khối phố tinh dầu

2.2.4 Xác định độ tro toàn phần

2.2.5 Thử tác dụng kháng khuẩn

Chương 3: THỰC NGHIỆM, KET QUA VA BAN LUAN

3.1 Thue nghiém, két qua

3.1.1 Nghiên cứu tính đúng của được liệu 3.1.2 Chế biến cỗ truyền Ngô thù du

3.1.3 Về hóa học

3.1.3.1 Phản ứng hóa học định tính

3.1.3.2 Sắc kí lớp mỏng 3.1.3.3 Định lượng tỉnh dầu

3.1.3.4 Sắc kí khí - khối phổ tỉnh dầu

3.1.4 Xác định độ tro toàn phần của 2 mẫu NTD và NTDCT

3.1.5 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của 2 mẫu NTD và NTDCT 3.2 Bàn luận

KET LUAN VA DE XUẤT TAI LIEU THAM KHAO

Trang 5

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1 Cây và quả Ngơ thù du

Hình 3.1 Vị Ngơ thù du

Hình 3.2 Một số đặc điểm bột Ngơ thù du

Hình 3.3 Các mẫu Ngô thù du trước và sau khi chế biến Hình 3.4 SKLM các mẫu tỉnh dầu NTD với hệ dung mơi I Hình 3.5 SKLM các mẫu tỉnh dầu NTD với hệ dung môi 2 Hình 3.6 Hình ảnh sắc kí khí khối phổ của tỉnh dầu NTD Hình 3.7 Hình ảnh sắc kí khí khối phổ của tỉnh dầu NTDCT

Trang 6

DANH MỤC BẢNG

Trang

Bảng 3.1 Hiệu suất chế biến Ngô thù du 21

Bảng 3.2 Kết quả định tính các nhóm chất có trong các mau NTD 27

Bảng 3.3 Kết quả SKLM các mẫu tỉnh dầu NTD với hệ dung môi 1 29

Bảng 3.4 Kết quả SKLM các mẫu tinh dầu NTD với hệ dung môi 2 30

Bảng 3.5 Kết quả định lượng tỉnh dầu của 4 mẫu NTD 31

Bảng 3.6.Kết quả định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với 32

Toluen

Bảng 3.7 Kết qua sắc kí khí - khối phổ của tỉnh dầu NTD 33

Bảng 3.8 Kết quả sắc kí khí - khối phổ của tinh dầu NTDCT 35

Bảng 3.9 Bảng so sánh các thành phần có trong tinh dau NTD va 37

NTDCT

Bảng 3.10 Kết quả xác định độ tro toàn phần của 2 mẫu NTD và 39

NTDCT

Bảng 3.11 Bảng kết quả xác định đường kính vịng vơ khuẩn và độ 39

Trang 7

SKLM NTD NTDCT NTDG NTDM DDVN Gr (-) Gr (+) dd VSV GC MS vd

CHU THICH CHU VIET TAT Sắc kí lớp mỏng Ngơ thù dù

Ngơ thù dù chích cam thảo

Ngơ thù dù chích giấm Ngơ thù dù chích muối

Dược điển Việt Nam Gram âm

Gram dương Dung dịch Vị sinh vật

Gas Chromatography ( Sắc kí khí)

Mass Spectrometry ( Khối phổ)

Thuốc thử

Trang 8

ĐẶT VÁN ĐÈ

Nền Y Học Cô Truyền Việt Nam đã có lịch sử hình thành và phát triển

lâu đời và phong phú Từ xa xưa ông cha ta đã biết sử dụng nguồn dược liệu phong phú từ cây cỏ với nhiều dạng chế biến khác nhau nhằm phục vụ cho nhu cầu phòng và chữa bệnh

Ngô thù du là vị thuốc đã được sử dụng khá pho bién trong Y Hoc Cô Truyền với tác dụng trị nôn, trị ho, đau nhức răng Ngô thù du không chỉ được sử dụng dưới dạng sông mà còn được chế biến đưới nhiều hình thức như

chích giám, chích muối, chích cam thảo Với mỗi hình thức chế biến sẽ làm

thay đôi tính vị, quy kinh của vị thuốc dẫn tới sự thay đôi về tác dụng điều trị Tuy nhiên từ trước tới nay việc chế biến và sử dụng vị thuốc chủ yếu vẫn dựa

vào kinh nghiệm dân gian là chủ yếu Để bắt nhịp với xu hướng phát triển của

nên Y Học cũng như nhu cầu chăm sóc sức khoẻ cộng đồng các vị thuốc cần

được tiến hành nghiên cứu, nhất là về mặt chế biến để nhằm nâng cao hiệu

quả của sử dụng vị thuốc Cũng với mục đích trên chúng tơi tiến hành thực

hiện khoá luận ”Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cô truyền tới thành phần

hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc Ng6 tht du - Fructus Evodiae

rutaecarpae” với các mục tiêu cụ thê sau:

- _ Xác định tính đúng của vị thuốc Ngô thù du

- _ Tiến hành chế biến Ngô thù du theo phương pháp cô truyền

- Sơ bộ nghiên cứu về sự thay đổi thành phần hóa học, tác dụng

kháng khuân của vị thuôc trước và sau chê biên

Trang 9

Chuong 1: TONG QUAN

1.1 Vị thuốc Ngô thù du

1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố thu hái của Ngô thù du

Tén khoa hoc: Evodia rutaecarpae (Juss.) Benth Ho Cam: Rutaceae

Hình 1.1 Cay va qua Ngé thi du

Ngô thù du là cây nhỏ, rụng lá, cao 1 - 3 m Than canh màu nâu tím, khi non có lơng mềm sau nhãn có nhiều lỗ bì Tồn cây có tinh dầu thơm hắc

Lá kép lông chim lẻ mọc đối, dài 30 - 40 cm, gồm 5 - 7 lá chét hình trứng

Trang 10

Phân bố, sinh thái:

Chi Evodia Forst Et Forst F gồm các loài là cây bụi hay cây gỗ nhỏ

có tinh dầu, phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, từ Đông Madagascar

đến vùng Nam A, Dong — Nam Á xuống Australia và một số hòn đảo ở Thái

Bình Dương Ở Việt Nam, chi này có khoảng 10 lồi, phân bố rải rác khắp các vùng núi và trung du [19], [22]

Ngô thù du là lồi có nguồn gốc ở vùng ôn đới ấm cận Himalaya thuộc Ấn Độ va Trung Quốc Hiện nay cây phân bố tự nhiên ở vùng Nam và Tây Trung Quốc, Bắc Ân độ Cây còn được trồng rải rác trong nhân dân ở các tỉnh

Quảng Tây và Vân Nam — Trung Quốc Ở Việt Nam, theo Võ Văn Chi Ngô thù du có ở Phó Bang — Ha Giang Tuy nhiên, Viện Dược liệu đã nhiều lần

điều tra ở khu vực này vào những năm 1999, 2000 mà chưa phát hiện được Nhân dân ở một số vùng thuộc huyện Quản Bạ và Yên Ninh (Hà Giang) cũng cho biết Ngô thù du mọc trong tự nhiên ở vùng rừng núi đá vôi giáp biên giới Cây cũng được trồng rải rác vườn một số gia đình người Nùng và Tày ở huyện Cao Lộc và Văn Quan tỉnh Lạng Sơn [12], [16], [19] [22]

1.1.2 Đặc điểm của dược liệu

Là quả nhỏ màu xám đen hình cầu đường kính 2 - 5 mm phía đỉnh quả phăng hơi lõm xuống Quả có các rãnh chia quả thành 5 mảnh bằng nhau, mỗi mảnh có chứa 1 - 2 hạt Khi cắt ra quả có màu nâu, và có mùi thơm nhẹ [S]

1.1.3 Đặc điểm bột Ngô thù du

Bột màu nâu, lông che chở đa bào gồm 2 - 6 tế bào, đường kính trung bình 140 - 350 ym, vách ngoài có mấu bướu rõ ràng Một số khoang tế bào chất có màu vàng nâu Lơng tiết có hình bầu dục, gồm 7 - 14 tế bào thường chứa chất tiết màu vàng và chân có 2 - 5 tế bào Cụm tỉnh thể Calcioxalate hình cầu gai hoặc lăng trụ, đường kính 10 - 25 um Tế bào đá hình trịn hoặc

Trang 11

Calcioxalate hình cầu gai hoặc lăng trụ Ngồi ra cịn có khối màu, mạch vạch Đôi khi còn thấy mảnh vỡ màu vàng của khoang dầu [8]

1.1.4 Thành phần hóa học

Các hoạt chất chính có trong quả của cây Ngô thù đu là tinh dầu và alcaloid + Tinh dầu: khoảng 1 %, trong đó chủ yếu là œ - Ocimene, Evoden,

Myrcen [12], [16], [19],[22], [23], [24]

+ Các Alcaloid có trong Ngô thù du: Evodiamin, Rutaecarpin, Evocarpin

wuchuyin, hydroxy evodiamin, Synephorin, Dehydroevodiamin; cac amid goshuytamid I, I], Evoamid, N - methyl anthranilamid, Forsyl thiazid; các hợp chat kh6ng chita N nhu Limonin (evodin, dictamnolacton), Rucuaevin, Evogin, Evodinon, 12a hydroxyl evodon [12], [16], [19],[22], [23], [24]

Trang 12

Limonin Rutaecarpin

1.1.5 Tác dụng sinh học

+ Tác dụng kháng khuẩn: Nước sắc Ngô thù du có tác dụng ức chế mạnh

invitro đối với Vibrio cholerae, và một số ký sinh trùng [16], [19], [22], [23]

+ Tác dụng đối với hệ thần kinh trung ương: Ngô thù du có tác dụng giảm

đau [19], [22], [23]

+ Tác dụng trên cơ mềm: Có tác dụng tăng trương lực cơ trên tử cung [16],

[19], [22], [23]

+ Tác dụng hạ huyết áp và làm chậm nhịp tim: Tác dụng này chủ yếu do dehydroevodiamine gay ra [19], [22], [23]

Độc tính và độ an toàn: Nếu dùng với lượng lớn Ngô thù du - tác dụng kích thích thần kinh trung ương và có thê dẫn đến rối loạn thị giác, gây nên ảo

giác Độc tính rất thấp liều chích tĩnh mạch gây chết (LD50) ở chuột nhắt là

135 g/kg [19], [22], [23]

1.1.6 Công dụng và liều dùng

Trang 13

- Công năng: Tán hàn hành khí, táo thấp chỉ thống, sơ can hạ khí, ơn trung

chi ta, dùng ngồi, thuốc có tác dụng dẫn hỏa đi xuống [8], [10], [16], [21], [22], [23], [24]

- Chủ trị:

+ Trị nơn do vị hàn khí nghịch [10], [12], [16], [19], [22] [23] [24] + Trị các chứng đau do hàn như đau đầu, đau bụng, đau cước

khi [9], [10], [12], [16], [19], [22], [23], [24]

+ Tri loét mém [19], [22], [23]

+ Tăng cường tiêu hóa [I0], [16], [19], [22], [23], [24] + Chảy nước ngứa ngáy ở bộ hạ [23]

+ Trị nhức răng [10], [12], [16], [19], [22] [23] [24]

+ Trị chàm (thấp chẩn) [23]

- Liều dùng: 2 - 4 g, đưới dạng thuốc sắc, thuốc bột (dùng ngoài) [19], [22], [23] [24]

- Kiêng kị: Không dùng cho phụ nữ có thai và những người huyết hư, cơ thể nhiệt [9], [19], [22] [23] [24]

1.1.7 Một số phương thuốc có chứa NTD

Ngơ thù du hồn:

Ngơ thù du lŠg Can khương Sg

Xich thach chi 60 g Thân khúc 60 g

Đương quy 120g Hậu phác 120g

Cách dùng: Làm thành bột luyện mật thành viên hồn có kích thước to bằng

hạt ngô đồng Mỗi lần dùng 6 g lúc bụng đói với nước cơm, ngày 3 lần

Cơng dụng: Ơn trung sáp tràng

Trang 14

7 e Ngo tht du thang: Ngo thu du 3g Đạitáo 4 quả Nhân sâm 6g

Sinh khương l&g

Cách dùng: Sắc uống

Cơng năng: Ơn trung bố hư, giáng nghịch chỉ âu thỏ

Chủ trị: Đau lạnh dạ dày, nôn mửa, vùng ngực và cơ hồnh bn bực, nhức đầu, thổ tá, chân tay nghịch lạnh

* Dao khi thang:

Xuyén luyén tur 12g

Tiêu hồi hương 6g

Mộc hương 9g

Ngô thù du 3g

Cách dùng: Sắc uống

Công năng: Hành khí sơ can, tán khí chỉ thống Chủ trị: Hàn xán đau nhức, rêu lưỡi mỏng trắng

°Ị - Hịa can ôn thận phương:

Đương quy 12g Quất hạnh 3g

Sài hồ 4g Chỉ tử 4g

Ô dược 2g Bạch truật 4g

Mẫu đơn 4g Ngô thù du 3g

Xuyén khung 34g Tiểu hồi lg

Doc hoat 4g Bạch thược 10g

Trang 15

10

đến khi đạt yêu cầu kỹ thuật riêng Với mục đích: Tăng tác dụng trị bệnh nhờ tác dụng hiệp đồng giữa vị thuốc và phụ liệu, giảm độc tính, giảm tác dụng phụ hay thay đôi tác dụng theo chiều hướng có lợi cho mục đích điều trị, làm mềm vị thuốc thuận lợi cho việc phân chia thuốc

Ngồi ra cịn có các phương pháp thủy chế khác như ngâm, tay, rita, thủy phi

e, Phương pháp thủy hỏa hợp chế

Là phương pháp chế biến phối hợp nước - lửa, sử dụng sự tác động của nước ở nhiệt độ cao hơn bình thường

e_ Chích: Là phương pháp tâm vào vị thuốc một hay nhiều dịch phụ liệu, ủ đến khi thấm đều thì sao hoặc nướng Tùy vào mục đích điều trị mà sử dụng các loại dịch phụ liệu khác nhau Dược liệu thường chích với gừng, giấm, cam thảo, mật, rượu, muối

e Chung: Dun cach thủy vị thuốc với nước hay dịch phụ liệu Mục đích

là để chuyền hóa thuốc trong điều kiện nhiệt độ cao khoảng 100 °C hoặc làm

giảm tác dụng bất lợi của vị thuốc

Một số phương pháp thủy hỏa hợp chế khác: Đồ, nấu, sôi, sắc 1.2.3 Phương pháp chế Ngô thù du theo phương pháp cỗ truyền

Sơ chế: Quả NTD sau khi thu hái được làm sạch sau đó ngâm trong nước sơi hoặc nước ấm 60 — 70 °C đến khi nguội, gạn nước, làm vài lần như vậy rồi

sây khô [8] [16], [19], [22]

a, Phương pháp chích cam thảo

Mục đích: - Tăng tác dụng nhuận bơ, kiện tỳ ích khí - Tăng tác dụng dẫn thuốc vào 12 kinh

- Hiệp đồng tác dụng trị các chứng ho, nhiều đờm, viêm loét dạ

dày

Trang 16

11

Cam thảo được sắc lấy nước Trộn đều nước cam thảo với Ngô thù du

Ủ cho hút hết nước cam thảo Lấy ra phơi khô hoặc vi sao tới khô cho mùi

thơm đặc trưng [9], [16], [19], [22]

b, Chích giấm

Mục đích: - Tăng dẫn thuốc vào kinh can, đởm

- Tăng tác dụng hành khí hoạt huyết giảm đau

Ngâm NTD trong giấm trong 6 - 12 h, đỗ ra, để khô se, rồi phơi khô

hoặc sao cho tới khi thấy mùi thơm [9], [16], [19], [22]

c, Chích muối

Mục đích: - Dẫn thuốc vào kinh thận

- Dẫn thuốc xuống hạ tiêu

- Nhập vào huyết mà nhuận táo, làm mềm chất rắn, bảo quản chống mốc mọt

Phun vấy nước muối vào Ngô thù du, trộn đều, sao khơ Có thể sao

Ngơ thù du cho thơm rồi mới thêm nước muối trộn đều sao khô [9], [16],

Trang 17

12

CHƯƠNG 2

ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Qua chin phoi khé cla Ngo tha du (Fructus Evodiae rutaecarpae (Juss.) Benth.)

Các mẫu Ngô thù du đã qua chế biến:

+ NTDCT + NTDG + NTDM

Các mẫu tỉnh dầu của NTD và NTD đã qua chế biến Dịch chiết trong cồn của các mẫu NTD trước và sau chế

2.1.2 Thiết bị thí nghiệm

+ Bộ dụng cụ cất tỉnh dầu nhẹ hơn nước bằng phương pháp cất kéo hơi nước + Bộ dụng cụ đo hàm âm bằng phương pháp cất với dung môi

+ Kính hiển vi LABOMED

+ Dụng cụ phun hiện màu sắc kí

+ Nồi hấp tiệt trùng

+ Dụng cụ sao được liệu (chảo gang, nồi nhôm) + Các dụng cụ đo lường đạt tiêu chuẩn kiểm định + Dụng cụ chạy sắc kí lớp mỏng

+ Tủ sây Memmert (Đúc)

+ Máy ảnh kĩ thuật sé

+ Cân phân tích, cân kĩ thuật

2.1.3 Dung mơi hóa chất

Trang 18

13

+ Nước cất, cồn tuyệt đối và Ethanol 96 %, Ether dầu hỏa, Ethylacetate, n - hexan, Toluen

+ Acid Sulfuric diac, NaOH 0,1 N, KOH 0,1 N, NH; dac, Vanilin

+ Ban mong Silicagel GF254 trang san cla Merck

Các dung mơi, hóa chat, vi sinh vật dùng trong thử tác dụng kháng khuẩn

+ Cac khang sinh: Gentamycin, Penicillin G

+ Các vi sinh vật: 10 vi khuẩn đã kiểm định (5 vi khuẩn Gram (-), 5 vi khuân Gram (+))

2.2 Phương pháp thực nghiệm

2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc

Mơ tả đặc điểm của dược liệu

Nghiên cứu đặc điểm vi học của vị thuốc: Soi bột của vị thuốc theo các phương pháp trong DĐVN IV

Tiến hành các phản ứng hóa học đặc trưng cho vị thuốc được trình bày trong DDVN IV

2.2.2 Chế biến Ngô thù du theo một số phương pháp cỗ truyền - NTD: Từ NTD sống được loại bỏ các tạp hữu cơ và vô cơ

- NTDCT: Tỷ lệ NTD và cam thao 1a 100 : 6 Dem Cam thao sac lay dịch, tâm và ủ cho ngắm rồi đem sao nhỏ lửa tới khi khô và có mùi thơm bay lên

- NTDG: Tỷ lệ NTD và giấm là 100 : 20 Giâm được tâm và ủ cho thấm vào

NTD, sau đó tiền hành sao NTD cho tới khi khô và có mùi thơm nhẹ bay lên

- NTDM: Tỷ lệ NTD và muối là 100 : 2 Muối đem hòa tan vào nước vừa đủ,

lay nước muối vậy vào NTD sau đó trộn đều, sao khô

2.2.3 Nghiên cứu về hóa học

2.2.3.1 Định tính

Định tính các thành phần trong Ngô thù du trước và sau chế biến:

Trang 19

14

Định tính tỉnh dầu Ngô thù du trước và sau chế biến bằng SKLM:

- Chuẩn bị dịch chấm sắc kí: Tinh dầu sau khi cất được làm khan nước bằng natri sulfate khan, gan lay phan tinh dau khan lam các mẫu chấm

- Chất hấp phụ: Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 của hãng Merck được

hoạt hóa ở 110 °C /1h

- Hệ dung môi khai triển: Hệ 1: Ether dầu hỏa — Ethyl acetate (85:15) (TT) Hệ 2: n - hexan — Ethylacetate (95:5) (TT)

- Thuốc thử hiện màu: dd Valinin 2 % trong ethanol 90 % (TT) và thêm vài giọt H;ạSO; đặc (TT)

- Cham riêng biệt các mẫu tỉnh dầu NTD trước và sau chế Khai triển với

các hệ dung mơi, sau đó tiến hành hiện màu

2.2.3.2 Định lượng tinh dầu

Định lượng tỉnh dầu bằng phương pháp cất kéo hơi nước, áp dụng với tỉnh

dầu nhẹ hơn nước (Phy luc 12.13 DDVN IV) Mỗi mẫu tiến hành 3 lần, lấy

kết quả trung bình Hàm lượng tinh dầu được tính theo cơng thức:

X(%)= —— x10!

m(100— p)

X: Hàm lượng tỉnh dầu có trong dược liệu (%)

V: Thể tích tinh dau (ml)

m: Khối lượng dược liệu đem định lượng (g) p: Hàm âm của được liệu (%)

Kết quả được tính theo phương pháp thống kê đẻ tính hàm lượng trung bình (Xtb), độ lệch chuẩn (3), khoảng tin cậy (u), với độ tin cậy 95%

Tiến hành định lượng hàm ẩm bằng phương pháp cất với dung môi (Phự lục 9.6 DDVN IV): Cho khoảng 200 ml Toluen va 2 - 3 ml nước cất vào bình

cầu có thể tích 500 ml, cat đến khi thể tích nước thu được không đổi, cất tiếp

Trang 20

15

chứa khoảng 2 - 3 ml nước, cho thêm vào bình vài viên đá bọt, đun nhẹ 15

phút, đến khi Toluen sôi đều thì điều chỉnh nhiệt độ, sao cho tốc độ khoảng 2

giọt dịch/1 giây Khi được nhiều nước, điều chỉnh nhiệt độ sao cho tốc độ đạt 4 got/1 gidy Cat tiếp đến thể tích nước không đổi Cho 5 - 10 ml Toluen rửa ống sinh hàn, để kéo hết nước xuống Cất thêm 5 phút nữa Tách bộ dụng cụ ra khỏi nguồn nhiệt, để nguội đến nhiệt độ phòng (rửa nước bằng Toluen nêu cần) Đến khi nước và Toluen tách ra hoàn toàn, đọc kết quả (V2) Mỗi mẫu tiền hành 3 lần, lấy kết quả trung bình Hàm ẩm của được liệu được tinh theo công thức:

(V2-V1)

p(%)= x100

Trong đó:

p: Độ âm của được liệu (%) V2: Thể tích nước đo lần 2 (ml)

VI: Thể tích nước đo lần 1 (ml)

m: Khối lượng dược liệu đem xác định hàm am (g)

2.2.3.3 Sac ki khi - khối phố tinh dầu

Tiến hành đại diện với hai mẫu NTD và NTDCT, tại phòng phân tích, Viện

Pháp Y Quân Đội, máy sắc ký khí khối phổ Agilent 6§890N kết nối với

detector Agilent 59731

2.2.4 Xác định độ tro toàn phần

Tiến hành đại diện với hai mẫu NTD và NTDCT theo (phụ lục 9.8, phương pháp 1, DĐVN IV) Độ tro tồn phần được tính theo công thức:

T(%) = m2 x100

Trang 21

16

T: Độ tro toàn phần của dược liệu (%) m1: Khối lương tro thu được (g)

m2: Khối lượng dược liệu đã làm khơ trong khơng khí (g)

2.2.5 Thử tác dụng kháng khuẩn

Tiến hành đại diện với hai mẫu dịch chiết trong cồn của NTD và NTDCT

Thử hoạt tính kháng khuẩn trên 10 chủng vi khuẩn: 5 ching Gram (-) va 5

chung Gram (+) Vi khuan Gram (-):

Escherichia coli ATCC 25922

Shigella flexneri DT 112

Salmonella typhi DT 220

Pseudomonas aeruginosa VM

Proteus mirabilis BV 108

Vi khuẩn Gram (+):

Bacillus pumilus ATCC 10241

Staphylococus aureus ATCC 1128

Bacillus subtilis ATCC 10241

Bacillus cereus ATCC 9946

Sarcina lutea ATCC 9341

(EC) (Shi) (Sal) (Pseu) (Pro) (Bp) (Sta) (Bs) (Bc) (SL)

Các kháng sinh chuẩn: Gentamycin 20 ug/ml, Penicillin G 28 IU/ml + MO6i truong thir nghiém:

- Môi trường canh thang nuôi cấy vi khuẩn kiểm định: NaCl 0,5 %;

Pepton 0,5 %; Cao thịt 0,3 %; Nước cất vđ 100 ml

Trang 22

17

+ Phương pháp thử: (Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp

khuếch tán)

- Nguyên tắc: Mẫu thử có chứa hoạt chất được đặt lên lớp thạch dinh dưỡng

đã cấy vi khuẩn kiểm định, hoạt chất thử từ mẫu thử khuếch tán vào môi trường thạch sẽ ức chế sự phát triển của VSV đã kiểm định tạo vịng vơ khuẩn

Đánh giá kết quả dựa vào đường kính vịng vơ khuẩn và được tính theo cơng

thức:

Dtb = 21D ¬ pi _

n

Trong đó: Dtb: Đường kính trung bình vịng vơ khuẩn

Di: Đường kính vịng vơ khuẩn n: Số thí nghiệm tiến hành song song

Trang 23

Hình 3.2 Một số đặc điểm bột Ngô thù du

A Lông che chở, B.Tế bào lông tiết,

C Đám tế bào đá; D Mạch vạch; E Tỉnh thể Calcioxalate

- Định tính:

Phản ứng hóa học: Lay 0,5 ø bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm 10 ml

dd acid HCI 1 % (TT), lắc mạnh vài phút, lọc Lấy dịch lọc làm các phản ứng + Lấy 2 ml dịch lọc, thêm I giọt thuốc thử Mayer (TT) lắc đều thấy có kết

tủa màu trắng ngà

+ Lấy Iml dich loc, thém tir tir 2 ml dd p - dimethyl aminobenzaldehyd (TT), đun nóng cách thủy Thay giữa hai lớp dd có hình thành vòng nâu đỏ Nhận xét: Qua các đặc điểm mô tả thực vật, đặc điểm bột và các phản ứng hóa học đặc trưng của vị thuốc Ngô thù du thấy rằng vị thuốc Ngô thù du mà

chúng tôi nghiên cứu giống với vị Ngô thù du mà DĐVN IV mơ tả, có tên

khoa hoc 1a Fructus Evodiae rutaecarpae (Juss.) Benth

3.1.2 Chế biến cỗ truyền Ngô thù du

- NTD: Lấy quả Ngô thù du đem loại bỏ các tạp hữu cơ và vô cơ

- Chế NTDCT:

Trang 24

20

Cam thảo 60 g

Cam thảo đem nấu lấy nước Tiến hành như vậy 2 lần, mỗi lần với 300

mÌ nước, đun sơi I h Gộp dịch sắc cam thảo thu được cơ cịn 160 ml Trộn

đều dịch cam thảo với NTD đã giã hơi đập Ủ 1h cho thấm hết địch cam thảo

Lây ra để khô se Phơi khô hoặc sao nhỏ lửa (vi sao) tới khi khơ và có mùi thơm đặc trưng

- Chế NTDG:

Ngô thù du 1000 g

Giấm 160 ml

Trộn đều NTD đã giã hơi dập với giấm, ủ trong 6 - 12h, đồ ra, để se, rồi phơi khô hoặc sao cho tới khi thấy mùi thơm

- Chế NTDM:

Ngô thù du 1000 g

dd natri clorid 5 % 160 ml

Đem nước muối trộn đều vào NTD đã giã hơi dập Ủ 1h cho thấm hết

dd nước muối Đem được liệu ra phơi khô hoặc vi sao tới khi khô cho mùi đặc trưng của NTD

Kết quả chế biến Ngô thù du được trình bày trong bảng 3.1 và hình 3.3

Trang 25

Hình 3.3.Các mẫu Ngơ thù du trước và sau khi chế biến A NTD; B NTDCT; C.NTDG; D NTDM

21

Bảng 3.1 Hiệu suất chế biến Ngô thù du

Khối lượng | Hiệu

Mẫu NTD (g) Mau sac, mii vi sau khi chế | xuat

biến (g) (%)

NTDCT 1000 Xám đen mùi thơm 9578 95,78

NTDG 1000 Xam đen,mùi thơm hơi 944.7 94,47

chua mùi giâm

NTDM 1000 Xam den,mui thom 9392 93,92

Nhận xét: Qua 3 cách chế biến, các sản phẩm có màu sắc, mùi vị gần giống nhau Trong đó hiệu xuất chế biến không khác nhau nhiều khoảng

93 — 95 %, va trong 3 mẫu chế thì NTDCT có hiệu xuất cao nhất (95,78 %) 3.1.3 Về hóa học

3.1.3.1 Phản ứng hóa học định tính

Trang 26

22

Tiến hành song song giữa các mẫu Ngô thù du trước và sau chế biến, với các phản ứng định tính:

*Dinh tinh Alcaloid

Cho khoang 10 g dugc liéu vao trong binh non dung tich 100 ml, tham ầm bằng dd NH,OH đậm đặc Sau đó ngâm lạnh với 50 ml chloroform trong 24 h Gạn lấy dịch chiết chloroform cho vào bình gạn, thêm khoảng 5 ml dd

H;SO¿ 1 N, lắc kĩ, gạn lẫy dịch acid này làm các phản ứng với các thuốc thử

chung của alcaloid

° - Lấy khoảng 1 ml dịch chiết vào ông nghiệm, thêm 2 - 3 giọt thuốc thử

Dragendoff, thấy xuất hiện tủa đỏ gạch Kết quả: Phản ứng dương tính

* Cho 1 ml dich chiét vào ống nghiệm, thêm 2 - 3 giọt thuốc thử Mayer, thấy xuất hiện tủa trắng ngà

Kết quả: Phản ứng dương tính

« - Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 - 3 giọt thuốc thử

Bouchardat, thấy tủa màu nâu

Kết quả: Phản ứng dương tính

*Dinh tinh anthranoid

Lấy khoảng 2 g bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm 10 ml dd H;SO¿ 1N Đun sôi trực tiếp 10 phút Để nguội, lọc Cho dịch lọc vào bình gạn, thêm khoang 10 ml chloroform vào lắc nhẹ Gạn bỏ lớp nước, lay lớp chloroform lam phản ứng Borntraeger Cho 1 ml địch chiết chloroform vào

ống nghiệm nhỏ, thêm 1 ml dd NHOH, lắc đều Không thấy lớp nước màu

Trang 27

23

*Định tính chất béo, Carotene

Cho dược liệu vào bình nón, đỗ ngập Ether dầu hỏa ngâm qua đêm Lọc lấy dịch lọc để làm các phản ứng

- - Định tính chất béo: Nhỏ I1 giọt dịch chiết lên mảnh giấy lọc, sau khi bay hơi tự nhiên, không để lại vết mờ

Kết quả: Phản ứng âm tính

* Dinh tinh Carotene: C6 5 ml dich chiết tới cắn Thêm 1 - 2 giọt HạSO¿

đặc thấy xuất hiện màu nâu đen

Kết quả: Phản ứng âm tính

*Dinh tinh flavonoid

Lay khoảng Š g bột dược liệu cho vao binh non, thém ethanol 90 %, dun sơi cách thủy sau đó lọc nóng Dùng dịch lọc để làm các phản ứng định tính:

* Phan img Cyanidin: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm thêm ít bột Mg kim loại vào sau đó thêm vài giọt HCI đặc (TT) rồi đun cách thủy vài phút Xuất hiện màu đỏ cam

Kết quả: Phản ứng dương tính

5 - Phản ứng với FeCl;: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết, thêm vài giọt FeCl 5 % (TT) Xuất hiện màu xanh

Kết quả: Phản ứng dương tính

¢ Phan ung voi NH;: Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy loc, dé khô rồi hơ lên miệng lọ NH; đặc (TT) Giấy lọc có màu vàng đậm

Kết quả: Phản ứng dương tính

e_ Phản ứng với dd NaOH: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết, thêm

vài giọt dd NaOH 10 % (TT), thấy xuất hiện màu nâu sẫm

Kết quả: Phản ứng dương tính

Trang 28

25

chloroform, mỗi lần lắc với 20 ml gộp dịch chiết trong pha hữu cơ lại bốc hơi

cho tới khi thu được cắn Cắn được hòa tan bằng ethanol 90 %, dùng dịch chiết trong cồn làm các phản ứng định tính sau:

- - Phản ứng Legal: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm sau đó thêm vào vài giọt Natri nitroprusiat 1 % (TT) va vài giọt NaOH 5 %, lắc Khơng thấy có màu hồng xuất hiện

Kết quả: Phản ứng âm tính

- - Phản ứng Baljet: Cho I ml địch chiết vào ống nghiệm sau đó thêm vào 0,5 ml thuốc thử Baljet (acid picric : NaOH 10 % (9:1)) Thấy xuất hiện màu vàng chanh

Kết quả: Phản ứng dương tính

- - Phản ứng với thuốc thử Lieberman: Cho 1 ml địch chiết vào ống

nghiệm sau đó cơ cách thủy thu lấy cắn Hòa tan cắn bằng 1 ml anhydride

acetic Đặt nghiêng thành ống nghiệm một góc 45”, cho thêm acid sulfuric đặc

(TT) theo thành ống nghiệm để trong ống tách thành hai lớp Giữa hai lớp

xuất hiện vịng màu đỏ tím

Kết quả: Phản ứng dương tính

* Phan tng Keller-Kiliani: Cho 1 ml dich chiết vào ống nghiệm sau đó cơ

cách thủy đến khơ Hịa tan cắn bằng ethanol 90 %, thêm vài giọt FeCl 5 % trong acid acetic Lắc đều, đề nghiêng thành ống nghiệm một góc 45” Thêm

từ từ acid sulfurie đặc (TT) theo thành ống nghiệm để dịch trong ống nghiệm chia thành 2 lớp Giữa hai lớp có xuất hiện vịng đỏ tím

Kết quả: Phản ứng dương tính *Dinh tinh Phytosterol

Cho vào ống nghiệm | ml dich chiét trong Ether dau héa, béc hoi dén

Trang 29

26

nghiệm một góc 45° rồi thêm 1ml H;SO; đặc (TT) theo thành ống nghiệm Giữa hai lớp chất lỏng xuất hiện màu nâu đỏ

Kết quả: Phản ứng dương tính

*Dinh tính đường khử

Cho vào ông nghiệm 2 ml dịch chiết trong nước sau đó thêm vào 0,5 mÏ thuốc thử Fehling A và 0,5 ml thuốc thử Fehling B Đun cách thủy vài phút thấy xuất hiện màu đỏ gạch

Kết quả: Phản ứng dương tính *Dinh tinh coumarin

Lay 5 g bột dược liệu vào ống nghiệm, thêm 30 ml ethanol 90 % chiết nóng, lọc trong để lấy dịch lọc làm các phản ứng định tính:

e Phản ứng mở đóng vịng lacton: Làm song song với 2 ống nghiệm + Ong 1: 1 ml dich chiết và 0,5 ml dd NaOH 10 % (TT)

+ Ong 2: 1 ml dich chiét

Đun nóng cả 2 ống đến sôi để nguội rồi quan sát thấy ống 1 có tủa đục màu nâu, ông 2 trong Thêm vào cả 2 ống I ml nước cất lắc đều quan sát thấy ống 1 trong ống 2 có tủa đục Thêm 1 vài giọt acid vào ống 1 ml thấy ống 1 lại đục như Ống 2

Kết quả: Phản ứng đương tính

e_ Soi huỳnh quang: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc, nhỏ tiếp lên đó dd NaOH 5 % (TT) sấy nhẹ Che 1/2 vết bằng đồng xu, soi dưới đèn tử ngoại (A= 365 nm) trong vài phút, sau đó bỏ đồng xu ra Thấy phần không bị che phát quang xanh lơ mạnh hơn phân bị che

Kết quả: Phản ứng đương tính

e Phan tng diazo hóa: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm vài giọt

dd NaOH 10 % vào Dun sôi cách thủy vài phút Lấy ra để nguội, rồi cho

Trang 30

27

Kết quả: Phản ứng đương tính

Kết quả định tính các chất trong 4 mẫu NTD được tóm tắt trong bảng 3.2

Bảng 3.2 Kết quả định tính các nhóm chất có trong các mẫu NTD

Tên nhóm

STT chất Thuốc thử, Phản ứng Kết quả | Kết luận

Thuộc thử Dragendoff +++

1 | Alcaloid Thudc thir Mayer et Co

Thuôc thử Bouchadat oe

2 | Anthranoid | Phan tng Borntraeger - Không

3 | Chât béo Quan sát vết mờ giây lọc - Không

4 | Caroten Phản ứng với HạSO; đặc - Không

Phản ứng Cyanidin +

: Phản ứng với FeCl; 5 % +++ \

5 | Flavonoid Phan ting véi hoi NH; hel Co

Phan tmg voi NaOH PPh

Phản ứng voi Pb(CH;COO), +++

6 | Tanin Phan tmg FeCl, +++ Có

Phản ứng với dd gelatin +++

7 |Saponin Hiện tượng tạo bọt ˆ Không

8 |Acidamin | Thuốc thử Ninhydrin 3 % +++ Có

Phản ứng Legal -

Glycosid Phản ứng Baljet + Có

9 |tim Phan ung Lieberman >

Phan tng Keller - Kiliani +++

10_| Phytosterol_| Phan ung Liebermann _ PF Co

11 | Đường khử Phản ứng với thc thử ng Có

Fehling

I2 |Tinhdầu | Cất kéo bằng hơi nước +++ Có

Phản ứng mở đóng vịng| + + +

13 ; lacton ‘

aii Soi huynh quang ++ Co

Phản ứng diazo hóa ++

14 | Acid hữu cơ | Phản ứng với bột Na;ạCO; - Không

Trang 31

28 Chú thích : +++ Phản ứng dương tính rất rõ ++ Phản ứng dương tính rõ + Phản ứng dương tính - Phản ứng âm tính

Nhận xét: Bảng 3.2 cho thấy trong 4 mẫu NTD đều có 9 nhóm chất: Tinh

dầu, Alcaloid, Coumarin, Đường khử, Phytosterol, Glycosid tim, Tanin, Flavonoid, Acid amin Như vậy các nhóm chất có trong vị thuốc NTD vẫn tồn

tại sau khi chế biến

3.1.3.2 Sắc kí lớp mỏng

Mẫu thử, chất hấp phụ, dung môi khai triển, thuốc thử hiện màu tiến

hành như đã trình bày ở mục 2.2.3.1

Tiến hành: Chấm riêng biệt 2 tul mỗi mẫu tỉnh dầu NTD trước và sau chế lên

bản mỏng đã hoạt hóa Sau khi khai triển với hệ dung môi trên, lấy bản mỏng

ra để khô ở nhiệt độ phòng Soi dưới đèn tử ngoại (2=365 nm) Sau đó phun

dd hiện màu, để khô bản mỏng rồi đặt vào tủ sấy có nhiệt độ 70 °C vài phút

+ Hệ dung môi 1: Ether dầu hỏa — Ethyl acetate (85:15)

Kết quả SKLM với hệ dung môi 1 được trình bày trong bảng 3.3 và hình 3.4

Trang 32

Chú thích:

29

3.4.D

Hình 3.4 SKLM các mẫu tỉnh dầu NTD với hệ dung mơi Ì

Hình 3.4.A: Hình 3.4.B: Hình 3.4.C: 3.4.E 1: NTD; 2: NIDCT 1: NTD; 2: NTDG 1: NTD; 2: NTDM Hinh 3.4.D: Hinh 3.4.E: 1: NTDCT; 2: NTDM; 3: NTDG 1: NTD; 2: NTDG; 3: NTDCT; 4: NTDM

Bảng 3.3 Kết quả SKLM các mâu tỉnh dầu NTD với hệ dung môi 1

NTD NTDCT NTDG NTDM

ts Mau Mau Mau Mau

vet | Rf.100 sac ; Rf.100 sac z Rf.100 sac z Rf.100 sac ,

Xanh Xanh Xanh Xanh

| 3l đen 1 den 31 đen 1 den

Xanh Xanh ant ma

2 43 lá đâ á đậm 43 lá đậm 43 lá đậm 43 lá a

dam

3 48 Vang 48 Vang 48 Vang 48 Vang

4 56 Tim 56 Tim 56 Tim 56 Tim

s | œ |Xmh| réu œ || réu œ | A) réu ow | A réu

Tim Tim Tim Tim

6 87 den g7 đen dd den sỹ đen

+ Hệ dung môi 2: N-Hexan : Ethyl acetate ( 95:5 )

Trang 33

30

“` sn=

Kết quả SKLM với hệ dung môi 2 được trình bày trong bảng 3.4 và hình 3.5

3.5.A

Hình 3.5 SKLM các mâu tỉnh dầu NTD với hệ dung mơi 2

Chú thích: Hình 3.5.A: Hình 3.S.B: Hình 3.S.C: 3.5.B 1: NTD; 2: NTDG 1: NTD; 2: NTDCT 3u 1: NTD; 2: NTDCT; 3: NTDG; 4:NTDM Bang 3.4 Két qua SKLM cdc mau tinh dau NTD véi hé dung méi 2

STT NTD NTDCT NTDG NTDM

vet | R£100 | Mẫu |Rf.100| Mẫu |Rf.100| Mẫu | Rf.100| Mâu

sắc sắc sắc sắc

| 49 | Vang] 49 | Vàng | 49 | Vàng | 49 | Vang

chanh chanh chanh chanh

2 53 Xanh | 53 | Xanh | 53 | Xanh | 53 | Xanh

đậm đậm đậm đậm

3 68 | Vàng | 68 | Vàng | 6$ | Vàng | 68 | Vàng

4 74 Tím T4 Tím 74 Tím 74 Tím

5 85 Nau 85 Nau 85 Nau 85 Nau

6 89 | Xanh | 89 | Xanh | 89 | Xanh | 89 | Xanh

nhat nhat nhat nhat

7 97 Tim 97 Tim 97 Tim 97 Tim

den den den den

Trang 34

31

Nhận xét: Qua SKLM trên hai hệ dung môi khác nhau khơng có sự khác biệt giữa các mẫu tỉnh dầu NTD trước và sau chế Hệ dung môi 1 tách được

khoảng 6 vết, hệ dung môi 2 tách được khoảng 7 vết Với mỗi hệ dung môi

các mẫu tinh dầu NTD trước và sau chế đều cho các vét với giá trị Rf và màu sắc tương tự nhau

3.1.3.3 Định lượng tỉnh dầu

Cân chính xác khoảng 20 g bột thô của 4 mẫu NTD vào các bình cầu có thể tích 500 ml, thêm vào khoảng 200 ml nước cắt, lắp ống hứng tỉnh dầu và

ống sinh hàn ngược, đun sôi đến khi thê tích tỉnh dầu khơng đơi, để nguội

Đọc thể tích tinh dầu thu được Mỗi mẫu tiến hành định lượng 3 lần rồi lấy kết quả trung bình Song song xác định hàm 4m 4 mẫu NTD trước và sau chế bằng phương pháp cất dung mơi được trình bày trong mục 2.2.3.2 Kết quả định lượng tỉnh dầu được trình bày trong bảng 3.5 và kết quả hàm âm các

mẫu được trình bày ở bảng 3.6

Bảng 3.5 Kết quả định lượng tỉnh dầu của 4 mẫu NTD

Mẫu NTD NTDCT NTDG NTDM Xtb (%) 1,15 0,86 0,94 0,91 S 0,0374 0,0315 0,0352 0,0348 u(%) |1,15+0,0557 |0,86+0,0469 |0,94+0,0524 | 0,91+ 0,0518

Nhận xét: Từ bảng kết quả 3.5 ta thấy sau khi chế biến hàm lượng tỉnh dầu ở

các mẫu thay đổi không nhiều Mẫu NTD sống có hàm lượng tỉnh dầu cao

Trang 35

32

Bảng 3.6 Kết quả định lượng hàm ẩm bằng phương pháp cất với Toluen

Mẫu NTD NTDCT NTDG NTDM p(%) 4,21 4.07 3,95 4,17

Nhận xét: Qua so sánh kết quả trong bảng 3.6 và các tiêu chuẩn về hàm âm của vị thuốc trong DĐVN IV các mẫu NTD trước và sau chế đều đạt tiêu

chuẩn

3.1.3.4 Sắc kí khí - khối phố tỉnh dầu

Trong phần khảo sát tỉnh dầu qua sắc kí khí - khối phơ (GC/MS) chúng tôi

chỉ tiền hành với hai mẫu đại diện: Mẫu sống (NTD) và 1 mẫu chế (NTDCT)

Chuẩn bị dd thử: Hòa tan 2 ul tỉnh dầu trong 1 ml n - hexan, lắc kĩ để có dung

dịch có nồng độ 0,2 %

Điều kiện chạy sắc kí khí khối phổ:

+ Máy sắc ký khí khối phổ Agilent 6890N kết nói với detector Agilent 5973i

+ Thư viện phố Wiley 7n.] và NIST 05 có 350 ngàn phổ, cau tric chat

+ Cột mao quản phân tích: HP SMS, dài 30 cm, đường kính 0,25 mm, độ

dầy lớp film là 0,25 um

+ Nhiệt độ kết nối detector là 280 °C

+ Nhiét d6 MS source: 230 °C

+ Nhiệt độ MS quad: 150 ”C

Trang 36

33

+ Tốc độ dịng khí mang Heli là 1 ml/phút,

+ Bơm mẫu chia đỏng: 25:1

+ Thé tich miu bom: | yl

+ Chế độ phân tich Scan, quét các mảnh phổ cỏ m/z từ 40 đến 550 Kết quá sắc kí khí - khối phổ của tỉnh dầu NTD được trình bày trong bảng 3.7 vả hình 3.6,

TS) Neo Tew OU Shag Seon

Hinh 3.6 Hinh ảnh sắc kí khi khối phổ của tỉnh đầu NTD Bảng 3.7 Kết quả sắc kỉ khi khói phổ của tình dẫu NTD

Tén hyp chất = Hàm lượng

17

Trang 37

Caryophyllene oxide

1-cyclohexenecarbaldehyde

Nhận xét: Qua sắc kí khí - khối phd (GC/MS) trên mẫu tính đầu NTD xác định được 20 thành phần Những thành phần có hàm lượng lớn là:

Caryophyllene oxide (16,58 %), a — Terpinolene (10,2 %), Cryptone (9,21

%), Ocimene (6,22 %4) Và khoảng hàm lượng 0,7 - 4,0 %4 xác định được 13

hợp chất

Kết quả sắc kí khí - khối phổ của tỉnh dầu NTDCT được trinh bảy trong bảng

Trang 38

TH) Gam ee ee een

Hình 3.7 Hình ảnh sốc kí khí - khơi phổ tình đầu của NTDCT Bảng 3.8 Kết quả sắc ki khí - khối phổ của tink dau NTDCT

Trang 39

3,6dimethyl 3,5 octadien Dodecane-2,9-diol lượng quá nhỏ

Nhận xét: Qua sắc kí khí - khối phổ (GCMS) trên mẫu tỉnh dầu NTDCT cũng xác định được 20 thảnh phần Những thành phẩn có hàm lượng lớn lả:

a—Ocimene (8,1 %), Caryophyllene oxide (10,92 %), Spathulenol(5,83 %), Linalool oxide (7,39 %), Cryptone (8,14 %) va khoảng hàm lượng 0,7-3,5 % xác định được 12 hợp chất

Trang 40

a7

Bang 3.9 Bang so sánh các thành phân có trong tỉnh dau NTD va NTDCT

NTD

Tên hợp chất

Limonene Linalool oxide

-2-y1 Methanol

— dimethyl Thiophen 2,5 — dimethyl Thiophen

^ “ác de

Pyridinol