1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis)

54 295 0
Tài liệu được quét OCR, nội dung có thể không chính xác

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 54
Dung lượng 16,97 MB

Nội dung

Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc hậu phác bắc (cortex magnoliae officinalis)

Trang 1

BO Y TE

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

*xw+%*********x**x**

NGƠ THỊ BÍCH

NGHIEN CUU ANH HUONG CUA CHE BIEN CO

TRUYEN DEN THANH PHAN HOA HOC VA TAC DUNG KHANG KHUAN CUA VI THUOC

HAU PHAC BAC

(Cortex Magnoliae officinalis)

(KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC SĨ KHÓA 2004-2009)

NGƯỜI HƯỚNG DẪN: GSTS PHAM XUAN SINH

NOI THUC HIEN: BỘ MƠN DƯỢC HỌC CĨ TRUYÈN

Trang 2

Lời cẩm ơn

Trong thời gian thực hiện khóa luận này, tơi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ tận tình, vì vậy tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình đến:

GS.TS Phạm Xuân Sinh

Là người hướng dẫn tận tâm, đã trực tiếp chỉ bảo tơi hồn thành khóa luân này Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn:

PGS TS Cao Văn Thu: Trưởng bộ môn VI sinh- Sinh học, Trường Đại học

Dược Hà Nội

PGS TS Nguyên Viết Thân: Trưởng bộ môn Dược liệu, Trường Đại học

Dược Hà Nội

Đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tơi trong q trình nghiên cứu, làm việc tại CƠ SỞ

Đồng thời tôi cũng bày tỏ lòng biết ơn của mình đến các thày cô, các anh chị kĩ thuật viên trong các bộ môn, các đồng nghiệp đã tạo điều kiện cho tôi hồn

thành khóa luận này

Xin trân trọng cảm ơn!

Hà nội, ngày Š thang 5 nam 2008 Sinh viên

Trang 3

SKLM HPB HPBS HPBAC HPBV HPBC Gen Pen DDVN Gr (+) Gr (-) dd DD VSV MS

CHU THICH CHU VIET TAT Sắc kí lớp mỏng Hậu phác bắc

Hậu phác bắc phiến

Hậu phác bắc tâm gừng phơi âm can Hậu phác bắc tâm gừng rồi vi sao Hậu phác bắc tâm gừng rồi chưng Gentamicin

Benzathin Penicillin G Dược điển Việt Nam Gram dương Gram âm Dung dịch Độ đậm VỊ sinh vật Gas Chromatography (Sắc kí khí)

Trang 4

MỤC LỤC

DAT VAN DE

Phan 1: TONG QUAN

1.1 Vị thuốc Hậu Phác bắc

1.1.1 Đặc điểm thực vật , phân bó, thu hái của cây HPB

1.1.2 Đặc điểm được liệu

1.1.3 Đặc điểm bột

1.1.4 Đặc điểm vi phẫu

1.1.5 Thành phần hóa học

1.1.6 Tac dung sinh học

1.1.7 Céng dung va liéu dung

1.1.8 Mét sé phuong thude cé6 chtta HPB

1.2 Chế biến cổ truyền và chế biến HPB theo phương pháp cô truyền 1.2.1 Mục đích của chế biến cô truyền

1.2.2 Các phương pháp chế biến cỗ truyền 1.2.3 Chế biến HPB theo phương pháp cô truyền

Phan 2- THUC NGHIEM VA KET QUA

2.1 Nguyên liệu, phương tiện

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 2.2 Phương pháp thực nghiệm 2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc

2.2.2 Chế biến HPB theo một số phương pháp cô truyền 2.2.3 Nghiên cứu về hóa học

Trang 5

2.3 Kết quả thực nghiệm và nhận xét

2.3.1 Nghiên cứu tính đúng của dược liệu HPB 2.3.2 Chế biến vị thuốc HPB

2.3.3 Về hóa học

2.3.4 Xác định độ tro toàn phần của 2 mẫu HPBP và HPBC

2.3.5 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của 2 mẫu HPBP và HPBC

2.4 Góp phần xây dựng quy trình chế biến cỗ truyền HPB 2.5 Bàn luận

Phan 3- KET LUAN VA DE XUẤT 3.1 Kết luận

3.2 Đề xuất

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Trang 6

DANH MUC BANG

Bang 2.1 Két qua ché bién HPB

Bang 2.2 Két qua dinh tinh cac nhom chat trong 4 mau HPB

Bảng 2.3 Kết quả SKLM của tỉnh đầu HPB với hệ dung môi 1 Bảng 2.4 Kết quả SKLM của tỉnh dầu HPB với hệ dung môi 2

Bảng 2.5 Kết quả SKLM flavonoid của 4 mẫu HPB

Bảng 2.6 Kết quả định lượng tỉnh đầu của 4 mẫu HPB

Bảng 2.7 Kết quả định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với toluen

Bảng 2.8 Kết quả sắc kí khí khối phổ tinh dầu HPBP và HPBC

Bảng 2.9 Kết quả độ tro toàn phần của HPBP và HPBC

Bảng 2.10 Kết quả thử tác dụng kháng khuẩn của HPBP va HPBC

Trang 7

DANH MỤC HÌNH

Trang Hình 1.1 Cây Hậu phác bắc 2

Hình 2.1 Ảnh vỏ thân Hậu phác bắc 18 Hình 2.2 Ảnh vi phẫu vỏ thân Hậu phác bắc 19

Hình 2.3 Ảnh đặc điểm bột HPB 20

Hình 2.4 Ảnh các mẫu dược liệu Hậu phác bắc 21

Hình 2.5a, 2.5b, 2.5c, 2.5d Sắc kí đồ tinh dau 4 mẫu HPB trên

hệ dung môi l 29

Hình 2.6a, 2.6b, 2.6c, 2.6d Sắc kí đồ tinh dau 4 mẫu HPB trên

hệ dung môi 2 30

Hinh 2.7 Sac ki d6 flavonoid 4 mau HPB 32

Hình PL-1 Vịng vơ khuẩn của Gen, HPBP va HPBC trên các vi khuẩn

Gram (-) 45

Hình PL-2 Vịng vơ khuẩn của Pen, HPBP và HPBC trên các vi khuẩn

Gram (+) 46

Trang 8

ĐẶT VÁN ĐÈ

Có thể nói ngành Đơng dược chiếm vai trò to lớn đối với nền y tế nước nhà Ở Việt Nam, ngành Đơng dược có từ lâu đời, từ xưa nhân dân ta đã có nhiều kinh nghiệm trong sử dụng cây cỏ và chế biến cổ truyền để làm tăng tác

dụng chữa bệnh, giảm độc tính, thay đổi tính vị quy kinh hay bảo quản vị

thuốc

Trong khóa luận này, Hậu phác bắc được tiến hành nghiên cứu vì mục đích đó Hậu phác bắc là một vị thuốc có nguồn gốc từ Trung Quốc nhưng được nhân dân ta sử dụng từ lâu để chữa bệnh và là vị thuốc không thé thiếu trong một

số bài thuốc hành khí tiêu đạo, chữa các chứng bệnh như: Ăn không tiêu, ia

chảy, nôn ọe, bụng đầy chướng Để góp phần chứng minh cho tác dụng chữa

bệnh nói trên và đồng thời góp phần vào việc xây dựng các quy trình chế biến cổ truyền, chúng tôi đã nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuân của vị thuốc hậu phác Bac- Cortex Magnoliae oìcinalis” với những mục tiêu sau:

- Xác định tính đúng của vi thuốc Hậu phác bắc

- Tiến hành chế biến Hậu phác bắc theo một số phương pháp cô truyền - Sơ bộ nghiên cứu sự biến đổi về thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc trước và sau chế biến

Trang 9

Phan 1: TONG QUAN

1.1 Vi thuéc Hau phae bac (Cortex Magnoliae officinalis)

1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố, thu hái của cây HPB

Tén khoa hoc : Magnolia officinalis Rehd et Wils Ho Ngoc lan: Magnoliaceae

Hình I.I: Cây Hậu phác bắc

- Cây thân gỗ, chiều cao có thê từ 10-25m [15] [21] [25] [26] [27] Lá mọc

so le, cuống to, hình ơ van, dài 20-40cm, rộng 10-20cm, đầu hơi nhọn, mép

nguyên uốn lượn Hoa màu trăng, thơm, mọc đâu cành nhị và nhụy nhiều Quả

kép, gồm nhiều đại, hình trứng, đài 11-16mm [15], [21], [26]

- HPB chưa tìm thấy ở nước ta, thường mọc ở những nơi khí hậu mát ở Trung Quốc: Phúc Kiến, Chiết Giang Giang Tây, Hồ Nam, An Huy [15].[21] [27] - Vào tháng 5-6, chọn những cây từ 20 năm trở lên bóc lây vỏ [15], [21] [27]

Trang 10

1.1.2 Đặc điểm được liệu

Là những miếng vỏ thân hay vỏ rễ phơi khô, cuộn thành ống hoặc ống kép, bề dày 2-5mm, mặt ngoài màu xám tro, sần sùi, mặt trong màu tím xám, phăng hơn, mặt bẻ ngang màu vàng xanh hoặc xám, khơng phăng, có mùi thơm đặc biệt [9] [20]

1.1.3 Đặc điểm bột HPB

Màu nâu, nhiều sợi, đường kính 15-32um, vách rất dày, đơi khi có hình lượn sóng, hoặc hình răng cưa ở một cạnh, hóa gỗ, ơng lỗ không rõ Tế bào đá

hình vng hoặc hình bầu dục, hình trứng hoặc dạng phân nhánh không đều,

đường kính 11-65utm Đơi khi có vân sọc rõ Tế bào chứa dầu hình bầu dục hoặc

hơi trịn, đường kính 50-85uum, chứa chất dầu màu vàng [9]

1.1.4 Đặc điểm vi phẫu

Lớp bàn trên có 10 hàng tế bào, có khi thấy tầng vỏ khô bong ra Phía ngồi vỏ có vòng tế bào đá và phía trong rải rác nhiều tế bào chứa dầu và nhóm tế bào đá Tia libe có 1-3 hàng tế bào rộng, phần nhiều sợi xếp thành bó, rải rác có tế bào chứa dầu [9]

1.1.5 Thành phần hóa học

Các hoạt chất chính trong vỏ cây HPB là tinh dầu và alcaloid [10], [15] [21] 23] [26] [27] [28]

+ Tinh dầu: Khoảng 1%, trong đó chủ yếu là Magnolol, Honokiol [23] [26]

\ HO HO

Á ¿_€ Ho È— Ò

= \ ⁄ \

Trang 11

Ngoài ra cịn có Machilol, B -Eudesmol 17,4%, Cadinol 14,6%, Guaiol §.7%, Cymene 7,8%, 1,4-Cineol 5,6%, Caryophellen 5%, Linalool 4,6%, d-

Terpineol 4,5%, Globulol 3,1%, œ-Humulene 3,9%, 4-Terpineol 34% [21], [23] [28]

+ Alcaloid: có 6 alcaloid bậc 4 là Magnocurarin, Magnoflorin, Laurifolin, Ol

longin, Menisperin và Xanthoplanin đã được chiết bằng phương pháp trao đôi

ion [21], [23] trong đó hàm lượng Magnocurarin là 0,07% [26] tuy nhiên hàm lượng này thay đổi theo khu vực địa lý của cây và theo lồi, có khi chỉ 0,025% , có khi lên tới 0,2% [27]

CH;

Magnocurarin

1.1.6 Tac dung sinh hoc

Nước sắc HPB có tác dụng ức chế sự phát triển của các vi khuân: trực khuẩn thương hàn, phó thương hàn, trực khuẩn ly, phẩy khuẩn tả, tụ cầu,

liên cầu, phế cầu [1], [15] [21], [23] Nước sắc Hậu phác có tác dụng kích thích

ruột cơ lập của chuột Hà Lan, cũng có tác dụng hưng phấn cơ trơn khí quản Vỏ có tác dụng giảm đau và lợi tiêu [21] Các hoạt chất chính trong tỉnh dầu HPB cịn có tác dụng khác: Tác dụng tăng trương lực cơ tim, tác dụng chống nắm

Trang 12

Độc tính và độ an toàn: Nếu dùng quá liều, có thể gây ra liệt hô hấp Liều

LD50 với chuột nhắt là 6,12 + 0,04 g/kg, với mèo 1a 4,25 + 1,5 g/kg [26]

1.1.7 Công dụng và liều dùng

- HPB có vị đắng chát, tính ấm

- Quy kinh: Vào tỳ, vị, phế, đại tràng

- Công năng: Táo thấp, hạ khí, trừ đầy chướng Chủ trị: Thấp trệ, tốn thương

trung tiêu, thượng vị bĩ tức, nôn mửa, tiêu chảy, thực tích, khí trệ, bụng chướng, đàm 4m, ho suyén [1], [9], [10], [15], [21] [23] [26], [28]

Ngồi ra cịn sử dụng hoa HPB, cũng có vị cay, tính ấm, có khả năng hành khí, khoan xung, trị tì vị khí trệ, các chứng buồn bực ở lồng ngực [24]

- Liều dùng: 4-12g/ ngày, dạng thuốc sắc, thuốc bột

- Kiêng kị: Người có cơ thể nhiệt, phụ nữ có thai khơng nên dùng Không dùng

cùng với trạch tả, hàn thủy thạch, tiêu thạch [I ], [9] [10] [15] 1.1.8 Một số phương thuốc có chứa HPB

- Hậu phác tam vật thang

Chi tử 5 quả Hậu phác 320g Đại hồng 200g

Cơng dụng: Trị đầy bụng, táo bón

- Bình vị tản

Thương truật 400g Tran bi 200g

Hậu phác 200g Cam thảo 200g

Công dụng: Trị đàm thấp ứ trệ ở tỳ vị gây đầy chướng, ăn uống khó tiêu, nôn

mua ia chay

- Hau phac tan I

Trang 13

Đương quy 0,4g Hậu phác 20g Hoàng liên 20g Long cốt 20g

Vân mộc hương 0,4g Nhục đậu khấu 0.4g

Công dụng: Trị trẻ suy sinh dưỡng, lười ăn Ngồi ra cịn có cac bai Hau phac tan II, III - Hau phac thang I

A giao 16g Can khuong lóg Hậu phác lóg Hoàng liên 24g Ngải diệp 20g Thạch lựu bì 20g Cơng dụng: Trị ly mạn tính do nhiệt

Ngồi ra cịn có các bài Hậu phác thang II, Ill, IV, V [3], [15], [18], [20], [21], [28]

- Hậu phác chỉ thực thang

Cam thảo nướng 8g Chỉ thực 40g

Đại hoàng 12g Hậu phác 40g Hoàng liên 8g Kha tử 40g Mộc hương 20g

Công dụng: Trị bụng đau tức [L7]

Ngồi ra cịn có bài Hoắc hương chính khí tán dùng trị cảm mạo phong hàn kèm

thấp dẫn đến sốt, đau bụng lạnh, nôn mửa [3], bài Hoắc hương chính khí gia

giảm dùng trị tiêu chảy cấp tinh [21], bai Hau phác thất vật thang dùng trị đầy

bung, bi tire [18]

1.2 Chế biến cỗ truyền và chế biến HPB theo phương pháp cơ truyền 1.2.1 Mục đích của chế biến thuốc cỗ truyền

Trang 14

+ Làm sạch vị thuốc

+ Tăng hiệu lực điều trị bệnh

+ Làm thay đổi tính vị của thuốc từ đó tạo ra tác dụng điều trị mới + Giảm độc tính của thuốc, giảm tác dụng khơng mong muốn

+ Ơn định thành phần hóa học, góp phần bảo quản thuốc được tốt

+ Thay đổi về mặt hóa học của vị thuốc dẫn đến thay đổi tác dụng của vị thuốc + Giảm tính bền vững cơ học, tăng khả năng giải phóng dược chất do đó làm

tăng hiệu lực thuốc trực tiếp hay gián tiếp qua các phụ liệu trung gian với mức nhiệt độ khác nhau [1], [2], [17], [22]

1.2.2 Các phương pháp chế biến cổ truyền

Trong khóa luận này chỉ trình bày các phương pháp có liên quan đến đề tài

1.2.2.1 Phương pháp hỏa chế

Là phương pháp sử dụng các sự tác động của nhiệt độ trực tiếp hay gián tiếp (qua phụ liệu trung gian) ở các mức nhiệt độ khác nhau

Mục đích: Tăng tính ấm, giảm tính hàn của vị thuốc

a) Sao

- Sao trực tiếp (sao khơng có phụ liệu): Là phương pháp sao mà lửa được truyền

trực tiếp qua dụng cụ sao

+ Sao qua (vi sao): Nhiệt độ sao khoảng 50-80”C, màu sắc dược liệu ít thay đổi

so với dược liệu phiến, mục đích để làm khô thuốc, diệt nấm mốc sâu mọt, làm

cho vị thuốc trở nên thơm, góp phân ôn định hoạt chất có trong vị thuốc

+ Sao vàng: Nhiệt độ sao khoảng 100-140°C, mặt ngoài của phiến mâu vàng, bên trong có mâu dược liệu sống Mục đích tăng tác dụng quy tì, tăng mùi thơm của vị thuốc

Trang 15

- Sao gián tiếp (sao có phụ liệu): Là phương pháp sao mà lửa được truyền

gián tiếp qua phụ liệu trung gian Các phụ liệu hay dùng là : Cám, cát, gạo, hoạt thach, van cap [1], [2], [13], [17], [22]

b) Cac phuong phap hoa ché khac

Nung, nuéng, hoa phi, ché suong [1], [2], [13], [17], [22] 1.2.2.2 Phương pháp thủy chế

Là phương pháp chế biến sử dụng các tác động của nước hoặc dịch phụ

liệu ở những mức nhiệt độ khác nhau trong điều kiện nhiệt độ tự nhiên nhằm đáp ứng các mục đích khác nhau

+Ủ: Dùng nước hay dịch phụ liệu tâm vào vị thuốc vài giờ đến vài ngày, đến khi

đạt yêu cầu kỹ thuật riêng Với mục đích: Tăng tác dụng trị bệnh nhờ tác dụng hiệp đồng giữa thuốc với phụ liệu, giảm độc tính, giảm tác dụng phụ hay thay đổi tác dụng theo chiều hướng có lợi cho mục đích điều trị, làm mềm vị thuốc thuận lợi cho việc phân chia thuốc

Ngồi ra cịn có các phương pháp thủy chế khác là ngâm, tây, rửa, thủy phi [1], [2], [13], [17], (22)

1.2.2.3 Phương pháp thủy hỏa hợp chế

Là phương pháp chế biến phối hợp nước- lửa, sử dụng sự tác động của nước ở nhiệt độ cao hơn bình thường

a) Chích : Là phương pháp tâm vào vị thuốc một hay nhiều loại dịch

phụ liệu, ủ đến khi thấm đều thì sao hoặc nướng Tùy vào mục đích điều trị mà sử dụng các loại dịch phụ liệu khác nhau

- Chích gừng: Mục đích là giảm tính hàn, tăng tính ấm cho vị thuốc, tăng tác dụng phát hãn của thuốc, tăng dẫn thuốc vào kinh tỳ, vị, phế Thường dùng

Trang 16

sâu vào bên trong dược liệu rồi đem sao nhỏ lửa cho đến khi dược liệu khơ và có

màu vàng

Ngồi ra cịn chích rượu, giấm, mật, cam thảo [1], [3] [13], [17], [22]

b) Chưng: Ðun cách thủy vi thuốc với nước hay dịch phụ liệu Mục đích là để chuyên hóa thuốc trong điều kiện nhiệt độ cao khoảng 100°C hoặc làm giảm tác dụng bất lợi của vị thuốc

Một số phương pháp thủy hỏa hợp chế khác: Đồ, nâu, sôi, sắc [1] [3], [13] [17] [22]:

1.2.3 Chế biến HPB theo phương pháp cổ truyền

- Sơ chế: Sau khi thu hái, vỏ được sơ chế theo hai cách sau:

1 Cho vỏ vào ngăn gỗ, đun nóng cho bốc hơi hết nước rồi phun nước lạnh vào, đun và phun nước lạnh như vậy 3 lần là được, đem ra cuộn thành cuộn 2 — Đào hồ dưới đất, cho vỏ vào, đậy rơm và ủ trong 3-4 ngày cho ra hơi nước, sau đó cuộn lại thành từng ống [15] [21]

HPB có thể dùng dạng sống hoặc có thể được bào chế theo các phương pháp khác nhau:

- Chế HPBP: Sau khi mua HPB về, rửa sạch, đem cạo bỏ lớp vỏ bần bên ngoài,

ngâm qua, ủ mềm, sau đó thái phiến 2-3mm, dài 5cm, phơi khô - Tâm gừng phơi âm can: HPB IOkg

Gừng tươi Ikg

Gừng tươi cạo sạch vỏ, giã nát, thêm nước lã, vắt lay dịch, ủ cho ngắm vào HPB, rồi phơi âm can đến khô

Trang 17

Dem gig tuoi cao sạch vỏ, giã nhỏ, thêm nước lã, vắt lấy dịch, ủ cho

ngắm vào HPB rồi sao nhỏ lửa khoảng 50- 60°C đến khô

- Chưng với gừng: HPB 10kg Ging tuoi 2kg

Gừng tươi cạo sạch vỏ, giã nát, thêm nước lã, vắt lấy dich, ủ cho ngắm

HPB, đem chưng mềm, thái phiến, sấy ở 50°C đến khô - Chế với tử tô và gừng tươi: HPB 10kg

Gừng tươi lkg Tử tô lkg

Trước hết sắc nước tử tô Sau dùng nước này trộn đều với Hậu phác phiến, chờ cho hút hết dịch thì trộn lần nữa với nước cốt gừng, đến ngắm hết Dùng lửa nhỏ sao cho khô đên màu vàng

- Nấu với tô diệp, gừng tươi: HPB 10kg

Tô diệp 0,4kg

Gừng tươi 1,5kg

Hậu phác ngâm 3-6h trong nước lã, vớt ra cho vào nồi đồng, thêm tô diệp, gừng tươi, đỗ ngập nước Đun 8h, ủ trên nồi (lửa âm ï) 16h nữa, đổ ra, cạo vỏ

thô, thái phiến Lấy dịch đun còn lại tâm tiếp vào Hậu phác phiến, phơi khô

Làm nhiều lần cho hết dịch [17]

Trang 18

Phần 2 : THỰC NGHIỆM VÀ KÉT QUÁ

2.1 Nguyên liệu, phương tiện

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

- Vỏ thân của cây Hậu phác bac (Cortex Magnoliae officinalis), mua tit Trung

Quốc

- Các mẫu HPB:

+ HPB phiến (được coi là Hậu phác bắc sống) + HPB tâm gừng phơi âm can

+ HPB tâm gừng rồi vi sao + HPB chưng với gừng

- Tinh dau HPB trước và sau chế biến 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu

a) Thiết bị thí nghiệm

- Cân phân tích - Máy ảnh

- Bộ dụng cụ cất tỉnh dầu bằng cất kéo hơi nước

- Bộ dụng cụ định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với dung môi

- Kính hiển vi LABOMED

- Máy sắc kí khí GCMS- QP 2010 của SHIMADZU

- Dụng cụ phun thuốc thử hiện màu sắc kí

- Tủ sây Memmert (Đức) - Chảo gang, xoong nhôm

- Nồi hấp tiệt trùng

- Các dụng cụ đo lường đạt tiêu chuẩn kiểm định b) Dung mơi hóa chất

Trang 19

- Hóa chất và thuốc thử đạt tiêu chuân phân tích của DĐVN III

+ Nước cắt, cồn 96”, toluen, acid Formic, Ether dầu hỏa, Ethyl acetate

+ Acid Sulfuric dac, NaOH 0,1N, KOH 0,1N, NH; dac + Ban mỏng Silicagel GF254 tráng sẵn của Merck

- Dung môi hóa chất thử tác dụng kháng khuẩn:

+ 10 vi khuẩn kiểm định: 5 vi khuẩn Gram (-), 5 vi khuân Gram (+)

+ Benzathin penicillin G, Gentamycin - Dung môi hóa chất chạy sắc kí khí: n- hexan 2.2 Phương pháp thực nghiệm

2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc - Mô tả đặc điểm được liệu

- Nghiên cứu đặc điểm vi học: Làm vi phẫu cắt ngang, nhuộm kép vỏ thân HPB,

soi bột vỏ thân HPB theo các phương pháp ghi trong tài liệu [Š], [8] [19]

Sau đó khóa luận sẽ căn cứ theo các tiêu chuẩn của DĐVN III về mô tả đặc điểm vị thuốc, đặc điểm vi phẫu và đặc điểm bột để tiến hành khảo sát

2.2.2 Chế biến HPB theo một số phương pháp cỗ truyền [17]

- Chế HPBP: Từ HPB mua về, cạo bỏ lớp vỏ thô, làm mềm, thái phiến phơi khô - Tầm gừng rồi phơi âm can: Tỷ lệ khối lượng HPBP: gừng là 100:10 Đem gừng

cạo vỏ, giã nát, thêm nước vắt lấy dịch, tâm cho ngắm HPBP roi dem phơi âm

can

- Tâm gừng rồi vi sao: Tỷ lệ khối lượng HPBP: gừng là 100:5 Gừng tươi dem

cạo vỏ, giã nát, thêm nước vắt lấy dịch, tâm cho ngắm HPBP rồi đem sao nhỏ

lửa đến khi khô, có màu nâu hơi đỏ

- Chưng với gừng: Tỷ lệ khối lượng HPB: gừng là 100:20 Gừng tươi đem cạo

Trang 20

TH ằ«c-

cho mềm, thái phiến, sấy hoặc phơi đến khô, mặt ngồi có màu nâu đỏ, mặt

trong tím thẫm

2.2.3 Nghiên cứu về hóa học

2.2.3.1 Định tính

e_ Định tính các thành phân trong HPB trước và sau chế biến:

Tiến hành theo các phương pháp hóa học thường quy [4], [6], [11], [12]

e_ Định tính tỉnh dầu HPB trước và sau chế bằng SKLM:

+ Chuẩn bị dịch chấm sắc kí: Pha lỗng 10 lần theo tỉ lệ thể tích các mẫu tỉnh

dầu với Ether ethylic

+ Chất hấp phụ : Bản mỏng bằng nhôm tráng sẵn Silicagel GF254 của Merck

được hoạt hóa ở nhiệt độ I1 10°C/1h

+ Hệ dung môi khai triển: Hệ 1 : Ether dầu hỏa : Ethyl Acetat (8:2)

.Hệ 2: Toluen : Ethyl Acetat (93: 7)

+ Thuốc thử hiện mau: dd valinin 1% /còn + 2 ml acid H;SO;¿ đặc, say bản mỏng ở 110°C/ 5 phút để hiện màu

e_ Định tính flavonoid của HPB trước và sau chế bằng SKLM:

- Chuẩn bị dịch chấm sắc kí: Ngâm 5g dược liệu bằng 20ml cồn 80°, lọc lấy dịch, bốc hơi cách thủy lấy cắn, hòa tan cắn trong 20ml nước, sau đó lắc trong

bình gạn với Ethylacetat (3 lần x 10ml) gộp dịch chiết , bốc hơi lấy dịch đặc

(khoảng 2ml) đem chấm sắc kí

- Chất hấp phụ: Bản mỏng bằng nhôm tráng sẵn Silicagel GF254 của Merck

được hoạt hóa ở I10°C/ th

- Hệ dung môi khai trién: Toluen: Ethylacetat: Acid formic (5:4:1)

- Thuốc thử hiện màu: Hơi NH; đặc

2.2.3.2 Định lượng tinh dầu:

Trang 21

Bằng phương pháp cất kéo hơi nước, áp dụng đối với tinh đầu nhẹ hơn nước (Phụ lục 9.2 DDVN III)

Song song tiến hành định lượng hàm 4m bằng phương pháp cất với dung

môi (Phụ lục 9.6 DĐVN II): Cho khoảng 200ml Toluen và 2-3ml nước cất vào

bình cầu 500ml, cất đến khi thể tích nước thu được không đổi, cất tiếp khoảng

2h, để nguội khoảng 30 phút, đọc kết quả (V1) Lấy m(ø) dược liệu chứa khoảng 2-3ml nước, cho tiếp vào bình cùng vài viên đá bọt, đun nóng nhẹ 15 phút, đến

khi toluen sơi thì điều chỉnh nhiệt độ, sao cho tốc độ khoảng 2 giọt dịch/ 1 giây

Khi được nhiều nước, điều chỉnh nhiệt sao cho tốc độ 4 giọt dịch/ 1 giay Cat tiếp đến thể tích nước khơng đổi Cho 5-10ml toluen rita ống sinh hàn, để kéo hết nước xuống Cất thêm 5 phút nữa Tách bộ dụng cụ ra khỏi nguồn nhiệt, để nguội đến nhiệt độ phòng (rửa nước bằng toluen nếu cần) Đến khi nước va Toluen tách ra hoàn toàn, đọc kết quả (V2)

Mỗi mẫu tiến hành 3 lần, lấy kết quả trung bình - Hàm lượng tỉnh dau tính theo công thức:

X(%)= x 100

Trong đó : X: Hàm lượng tỉnh đầu trong được liệu (%)

V: Thê tích tinh dầu (ml)

m: Khối lượng dược liệu đem định lượng (g)

p: Lượng hơi nước (ø) có trong m(ø) dược liệu

Kết quả được tính theo phương pháp thống kê dé tinh ham lượng trung bình (X), độ lệch chuẩn (s), khoảng tin cậy (u), với độ tin cậy 95% [14]

- Hàm âm của dược liệu tính theo cơng thức:

V2-V1

a(%) = x 100

Trang 22

Trong đó: a: Độ âm của được liệu (%)

V2: Thẻ tích nước đo lần thứ hai (ml)

VI: Thể tích nước đo lần thứ nhất (ml)

m: Khối lượng dược liệu đem xác định hàm ẩm (g)

2.2.3.3 Sắc kí khí khối phố tỉnh dầu

Tiến hành với hai mẫu HPBP và HPBC, tại Phòng Phân tích, Viện Dược liệu, bằng máy sắc kí khí- khối phổ GCMS- QP 201(SHIMADZU)

2.2.4 Xác định độ tro toàn phần

Tiến hành với hai mẫu HPBP và HPBC theo phụ lục 7.6 (PL-129), phương pháp

1, DĐVN II Độ tro tồn phần được tính theo công thức:

m1

T(%) = — x 100

m2

Trong đó: T: Dé tro toàn phan của được liệu (%) m1: Khối lượng tro thu được (8)

m2: Khối lượng dược liệu đã làm khơ trong khơng khí (g) 2.2.5 Thứ tác dụng kháng khuẩn

Thực hiện trên 2 mẫu HPBP và HPBC Thử hoạt tính kháng khuẩn trên 10 vi

khuân: 5 chủng Gram (-) và 5 chủng Gram (+)

- Vikhuan Gram (-):

Escherichia coli ATCC 25922 (EC)

Proteus mirabilis BV 108 (Pro) Shigella flexneri DT 112 (Shi)

Salmonella typhy DT 220 (Sal) Pseudomonas aeruginosa VM 201 (Pseu)

- Vi khuan Gram (+):

Trang 23

Staphylococcus aureus ATCC 1128 (Sta) Bacillus pumilus ATCC 10241 (Bp) Bacillus subtilis ATCC 6633 (Bs) Bacillus cereus ATCC 9946 (Be) Sarcina lutea ATCC 934] (Sar) + Môi trường thử nghiệm

- Môi trường canh thang nuôi cấy vi khuẩn kiểm định: NaCl 0,5% ;

Pepton 0,5% ; Cao thịt 0,3% ; Nước cat vd 100ml

- Môi trường thạch thudng: NaCl 0,5% ; Pepton 0,5% ; Thạch 1,6% ; Nước cất vả 100ml

+ Phương pháp thử: (Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán)

* Nguyên tắc: Mẫu thử (có chứa hoạt chất thử), được đặt lên lớp thạch

dinh dưỡng đã cấy VSV kiểm định, hoạt chất từ mẫu thử khuếch tán vào môi trường thạch sẽ ức chế sự phát triển của VSV kiểm định tạo thành vịng vơ

khuẩn

* Tiến hành:

- Các khoanh giấy lọc vô trùng và đã được sấy khô được tâm 3 lần với dd mẫu

thử, sau mỗi lần tâm các khoanh giấy lọc có chứa mẫu thử đều được sấy < 60°C đến khơ hết hồn tồn dung mơi

- Chuẩn bị môi trường và cấy vi sinh vật đã kiểm định: VSV kiểm định được cấy vào môi trường canh thang rồi nuôi cấy cho phát triển trong tủ ấm 37°C trong

18-24h đến nồng độ 10” tế bào/ml (kiểm tra bằng pha loãng và dẫy dịch chuẩn)

Môi trường thạch thường vô trùng (tiệt trùng ở 118°C/30 phút) được làm lạnh về 45-50°C và được cấy giống VSV kiểm định vào với tỉ lệ 2,5ml/ 100ml Lắc tròn

Trang 24

để VSV kiểm định phân tán đều trong môi trường thạch thường rồi đồ vào đĩa Petri vô trùng với thể tích 20ml/ đĩa và để cho thạch đông lại

- Đặt khoanh giấy lọc: Khoanh giấy lọc đã được tâm chất thử và xử lí như trên được đặt lên bề mặt môi trường thạch thường chứa VSV kiểm định theo sơ đồ:

So dé 2.1

Trong đó: K: Khoanh giấy tâm kháng sinh

I: Khoanh giấy tâm dịch HPBP; 2: Khoanh giấy tâm dịch HPBC

+ Sau khi cấy, ủ các đĩa Petri có mẫu thử được đặt như trên trong tủ ấm có nhiệt độ 37°C trong 18-24h, khi đủ thời gian lấy ra đọc kết quả, đo đường kính

vịng vơ khuẩn nêu có (Thước kẹp panmer đo độ chính xác 0,02mm)

- Đánh giá kết quả: Dựa trên đường kính vịng vô khuẩn và được đánh giá theo công thức:

5 _Xiz1 Di “ (=+(Di=P}?

n n—1

D: Đường kính trung bình vịng vơ khuẩn

Di: Đường kính vịng vơ khuân

S: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh

n: Số thí nghiệm làm song song

THUVIEN' Hà 246/0

~ Mg, %

Trang 25

2.3 Kết quả thực nghiệm và nhận xét

2.3.1 Nghiên cứu tính đúng của vị thuốc HPB -Mô tả đặc điểm dược liệu HPB

Dược liệu là vỏ thân HPB cuộn lại nhiều vịng kép, trơng như ống đồng đài khoảng 30-40cm, dày khoảng 0,2- 0,5cm, mat vỏ ngồi xù xì màu nâu xám,

mặt trong nhẫn hơn, màu nâu hơi tía, thể chất cứng khó bẻ, mặt bẻ sần sùi, lắm

tâm hạt, tầng ngoài màu nâu xám, tầng trong mâu nâu hơi tia đỏ, mùi thơm đặc

biệt, vị cay hoi dang (Hinh 2.1)

Hinh 2.1 Anh v6 thân Hậu Phác bắc

- M6 té dac diém vi phau HPB

Từ ngoài vào trong có lớp bần gồm những tế bào hình chữ nhật, xếp thành

hàng dài(1) Phía ngồi có các tế bào đá, phía trong cịn có các tế bào chứa dâu

(2) Sau đó là bó libe- gỗ (3) (Hình 2.2)

Trang 26

—— —= "` a —=——i- HH = = Hình 2.2 Ảnh vi phẫu vỏ thân HPB

1 Lớp bằn 2 Hàng tế bào dé, 3 các tế bào chứa tình dầu 4 Bó libe- kết tầng - _ Mô tá đặc điểm bột HPB

Bột HPB có màu nâu vàng, mùi thơm hac, vi dang, hoi cay Soi trén kinh

hiển vi thấy: Có rất nhiều sợi có vách day (1), té bào đá tập trung thành từng đám

(2), tế bào chứa tinh đầu màu nâu vàng (3), tinh bột (4), mảnh mô mẻm chứa tế

bào chứa tỉnh dầu màu nâu vàng (5) tỉnh thể Canxi oxalat hình khối hoặc đa

Trang 27

5

Hình 2.3 Ảnh đặc điểm bột HPB L Sợi; 2 Tế bào đá: 3 Tế bào chứa dấu; 4 Tinh bột; 5 Mô mềm; 6 Tỉnh thé calci oxalat

Nhân xét: Qua phần mô tả về đặc điểm vị thuốc HPB, đặc điểm vi phẫu và bột dược liệu thấy rằng vị thuốc HPB mà khóa luận này nghiên cứu.được mua từ Trung Quốc giống với vị HPB mà DĐVN III mơ tả, có tén khoa hoc 1a Cortex

Magnoliae officinalis

2.3.2 Chế biến cỗ truyền HPB

- Chế HPBP: Lấy 1200g HPB sống đem cạo bỏ lớp vỏ thô, ngâm mêm trong nước ấm 15 phút, thái phiến, phơi khô Dược liệu có màu nâu xám thơm hắc - Tâm gừng phơi âm can: HPBP 400g

Gừng tươi 40g

Gừng tươi cạo sạch vỏ, giã nát, thêm nước lã, vắt lầy dich, ủ với HPBP trong 30

phút, đem phơi âm can đến khi khơ Dược liệu có màu nâu xám, thơm mùi gừng

Trang 28

- Tâm gừng rồi visao: HPBP 400g

Gưng tươi 20g

Gừng tươi cạo sạch vỏ, giã nát, thêm nước lã, vắt lây địch, ủ với HPBP trong 30

phút, đem sao nhỏ lửa đến khi được liệu có màu nâu hơi đỏ, mùi gừng

- Chưng với gừng: HPB 300g Gừng tươi 60g

Gừng tươi cạo sạch vỏ, giã nát, thêm nước lã, vắt lấy dịch, ủ với HPB trong 30 phút, đem chưng mềm thái phiến, sấy 50°C đến khi khơ Dược liệu có mặt ngoài màu nâu đỏ, mặt trong tím thẫm thơm mùi gừng

Kết quả trình bày ở hình 2.4 và bảng 2 I

3 4

Hình 2.4 Ảnh các mẫu dược liệu Hậu phác bắc 1 HPBP; 2 HPBAC; 3 HPBV; 4 HPBC

Trang 29

Bảng 2.1 Kết quả chế biến HPB ; Khối lượn

- | Ẳ@ | (e) | Màusắc mùivj | Seukhichế | Hiệu suất

Mẫu 6 Š : biến (ø) (%)

HPBP 1200 0 | Nâu xám, thơm hắc 1176 98 HPBAC 400 40 Nau xam, có mùi 371 90.78

gừng

Nâu xám, hơi nâu

KẾ: 400 20 đỏ, có mùi gừng “He 91,93

Mặt ngoài

HEĐE | 400 | oo | BES MnO | lags tím tham, có mùi 93,30

gừng

ˆ ‘ A +A z - A A ‘ ^ c `* * ‘

Nhân xét: Qua 4 cách chê biên, có 4 sản phâm chê có màu sắc, mùi vị khác nhau Trong đó đáng lưu ý về hiệu suất chế biến Trong 3 mẫu chế gừng thì

HPBC có hiệu suất cao nhất (93,30%) 2.3.3 Về hóa học

2.3.3.1 Định tính

e© Định tính các hợp chất hữu cơ có trong HPB trước và sau chế bằng

các phản ứng hóa học

Tiến hành song song trên 4 mẫu HPB trước và sau chế biến, cụ thé: Dinh tinh Alcaloid

Cho khoảng 10g được liệu vào bình nón dung tích 100ml, thắm âm bằng dd

Trang 30

NH,OH đậm đặc Sau đó ngâm lạnh với 50ml chloroform trong 24h Lay dich

chiét chloroform cho vao bình gan, thém khoang 5 ml dd H,SO, IN, lắc kĩ, gạn

lấy dịch chiết acid để làm các phản ứng với các thuốc thử chung của alkaloid

- Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff, thấy xuất hiện tủa đỏ cam Phản ứng dương tính

- Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer, thấy

xuất hiện tủa màu vàng Phản ứng dương tính

- Cho Iml địch chiết vào ống nghiệm thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat,

thấy kết tủa màu nâu Phản ứng dương tính

Định tính anthranoid

Lấy khoảng 2g bột dược liệu cho vào ống nghiệm, thêm 10ml dd H;SO;

IN Đun sôi trực tiếp I0 phút Đề nguội, lọc Cho dịch lọc vào bình gạn dung

tích 100ml Thêm khoảng 10ml chloroform vào, lắc nhẹ Gạn bỏ lớp nước, lấy lớp chloroform làm phản ứng Bontraeger Cho 1ml dịch chiết chloroform vào

ống nghiệm nhỏ, thêm Iml dd NHẠOH 10%, Lắc đều, khơng thấy lớp nước có

màu hồng Tiếp tục cho từng giọt NaOH 10% vào, lắc nhẹ, không thấy lớp nước

có màu hơng Phản ứng âm tính

Định tính acid hữu cơ

Cho khoảng Ig bột dược liệu vào ống nghiệm, thêm nước cất, đun sôi trực

tiếp trong vài phút, để nguội, lọc Thêm vào dịch lọc một ít bột Natri Carbonat, khơng thấy có bọt khí CO; Phản ứng âm tính

Dinh tinh courmarin

Lay 5ø bột được liệu, chiết nóng bằng 30ml cồn 90°, loc lay dich loc trong dé

làm các phản ứng định tính:

- _ Phản ứng mở và đóng vịng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm mỗi

Trang 31

ống Iml dịch chiết Thêm vào ống thứ nhất 0,5ml dd NaOH 10%, ống thứ 2 đề

nguyên Ðun cách thủy cả 2 ống nghiệm đến sôi, để nguội rồi quan sát: + Ông 1: Có tủa đục màu vàng nâu

+ Ống 2: Trong

Thêm cả 2 ống nghiệm mỗi ống Iml nước cất Lắc đều, quan sát:

+ Ong 1: Trong + Ông 2: Có tủa đục

Thêm vào ống 1 vài giọt acid lại trở nên đục như ống 2 Phản ứng dương tính

- _ Soi huỳnh quang:Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc, nhỏ tiếp lên đó dd NaOH 5%, sấy nhẹ Che 1/2 vết bằng đồng xu, soi dưới đèn tử ngoại (À = 366nm) trong vài phút, sau đó bỏ đồng xu ra thấy phần không bị che phát quang

xanh lơ mạnh phần bị che Tiếp tục chiếu thì phan bị che lại sáng dần lên

Phản ứng dương tính - Phản ứng diazo hóa:

Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd NaOH 10% Ðun sôi

cách thủy vài phút Lấy ra để nguội rồi cho thêm vào đó 2-3 giọt thuốc thử diazo,

thấy xuất hiện màu hồng Phản ứng dương tính

Dinh tinh flavonoid

Lấy khoảng 5g bột được liệu cho vào bình nón, thêm cồn 909, đun sôi cách

thủy trong vài phút Lọc nóng, dùng dịch lọc để làm các phản ứng định tính:

- Phản ứng Cyanidin: Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm ít bột Mg kim loại và vài giọt HCI đặc rồi đun cách thủy, khoảng vài phút sau xuất hiện màu đỏ

cam Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dd FeCl; 5%: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài

Trang 32

giọt dd FeCl; 5%, xuat hiện tủa màu xanh rêu Phản ứng dương tính

- Phản ứng với NHạ: Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc, để khô rồi hơ lên

miệng lọ ammoniac đặc, thấy màu vàng đậm hơn lên Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dd NaOH: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài giọt dd

NaOH 10%, thấy xuất hiện tủa màu nâu sẫm Phản ứng dương tính

Định tinh tannin

Cho khoảng 1g bét duge liéu vao éng nghiém, thém 10ml nước cất, đun

sôi trực tiếp vài phút Lọc qua giấy lọc gấp nếp Lấy dịch lọc làm các phản ứng - Phản ứng với dd Chì acetat: Cho 1ml dịch lọc vào ống nghiệm thêm vài giọt dd

Pb(CH;COO); 10%, thấy xuất hiện tủa bông trắng Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dd FeC];: Cho vào ống nghiệm lmil dịch lọc, thêm vài giọt dd

FeCl; 5%, xuất hiện tủa màu xanh rêu Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dd gelatin 1%: Cho 1ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd gelatin 1%, thấy xuất hiện tủa bông trắng Phản ứng dương tính

Dinh tinh saponin

Cho 5g bột dược liệu vào bình nón 100ml, chiết bằng 30ml cồn 70°, lọc qua giấy lọc gấp nếp Dùng dịch lọc để làm phản ứng:

- Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho vài giọt dịch chiết cồn vào ống nghiệm có 5ml nước, lắc mạnh trong 1 phút, có cột bọt nhưng sau đó mất ngay

Phản ứng âm tính Dinh tinh glycosid tim

Cho vào bình nón dung tích 100ml khoảng 10g bột dược liệu, thêm 100ml cồn 25°, ngâm 24h Gạn lấy dịch chiết Loại tap bang dd chi acetate 30% du Loc bỏ tủa, dịch lọc cho vào bình gạn và lắc kĩ 3 lần với chloroform mỗi lần 20ml

Trang 33

Gạn lấy dịch chloroform cho vào cốc thủy tỉnh Bốc hơi cách thủy đến khô Căn được hòa tan bằng cồn 909, dùng dịch chiết cồn làm các phản ứng định tính sau: - Phản ứng Legal: Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd Natri Nitroprusiat 1% và vài giọt dd NaOH 10%, lắc, không thấy xuất hiện màu

hồng Phản ứng âm tính

- Phản ứng Baljet: Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 0,5ml thuốc thử

Baljet (1 phan dd acid picric 1% và 9 phần dd NaOH 10%) thấy xuất hiện màu

vàng chanh Phản ứng dương tính

- Phản ứng Lieberman: Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, cô cách thủy, cô

cách thủy đến khô Hòa tan cắn bằng Iml anhydride acetic Dat nghiéng thanh

ống nghiệm 45°, cho thêm đồng lượng acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm

dé dich trong ống nghiệm được chưa chia thành 2 lớp Giữa 2 lớp không thấy xuất hiện vịng tím đỏ Phản ứng âm tính

- Phản ứng Keller kiliani: Cho 1ml địch chiết vào ống nghiệm, cô cách thủy đến

khơ Hịa tan cắn bằng 1ml cồn 90° Thêm vài giọt dd FeCl ; 5% trong acid acetic Lac déu, để nghiêng ống nghiệm 45° thêm từ từ đồng lượng H;SO¿ đặc

theo thành ống để dịch trong ống nghiệm được chia thành 2 lớp Giữa 2 lớp

không thấy có vịng tím đỏ Phản ứng âm tính Định tính acid amin

Cho 2g bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 10ml nước cất đun sơi 5

phút Lọc nóng, lấy 2ml dịch lọc cho vao 1 ống nghiệm, thêm 3 giọt TT

Ninhydrin 3%, đun cách thủy sôi 10 phút, không thấy dịch chiết trong ống

nghiệm có màu tím Phản ứng âm tính Định tính chất béo, caroten

Cho 2g bột được liệu cho vào bình nón có nút mài, đỗ ngập Ether dầu hỏa

Trang 34

ngâm qua đêm Lọc lay dịch lọc dé làm phản ứng

- Định tính chất béo: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên mảnh giấy lọc, sau khi bay hơi tự nhiên, không đề lại vết mờ Kết quả âm tính

- Định tính caroten: Cô 5ml dịch chiết tới cắn Thêm 1-2 giọt HạSO; đặc thấy

xuất hiện màu nâu đen Phản ứng âm tính Định tính Phytosterol

Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết Ether dầu hỏa ở trên, bốc hơi dung môi đến khô Thêm vào ống nghiệm 1ml acid anhydride acetic, lắc kĩ, để nghiêng ống nghiệm 45° rồi thêm 1ml H;SO¿ đặc theo thành ống nghiệm Quan sát thấy giữa 2 lớp chất lỏng có vịng nâu đỏ Phản ứng dương tính

Định tính đường khi

Cho vào ống nghiệm 2 ml địch chiết nước, thêm vào đó 0,5 ml TT Feling A

và 0,5ml TT Feling B Đun cách thủy vài phút thấy xuất hiện tủa đỏ gạch

Phản ứng dương tính Tỉnh dâu

Cất tinh dầu vỏ thân HPB bằng phương pháp cất kéo hơi nước, áp dụng với

tinh dầu nhẹ hơn nước theo DĐVN III Các mẫu đều cho tỉnh dầu trong suốt,

sánh, mùi thơm hắc, HPBP và HPBAC có màu vàng đậm, HPBV và HPBC có

màu vàng nhạt hơn

Kết quả định tính các chất trong 4 mẫu được tóm tắt theo bảng 2.2

Trang 35

Bảng 2.2 Kết quả định tính các nhóm chất trong 4 mẫu HPB

STT Tên Phản ứng Kết Kết luận nhóm chất quả

1 Alcaloid Thc thir DRagendoff +++

Thuốc thử Mayer +++ | Khong Thuốc thử Bouchardat +++

2 Anthranoid | Phản ứn Borntrager - Không

3 Courmarin Phản ứng mở, đóng vòng lacton | +++ Soi huỳnh quang ++ |Cà Phản ứng Diazo hóa ++

+ Flavonoid Phản ứng Cyanidin +++ Phản ứng với FeCl: 5% +t

Phan tng véi hoi NH; +++ |C6 Phản ứng với NaOH +++ 5 Tanin Phản ứng với Chì acetate +

Phan tmg voi FeCl; 5% ++ |CO Phản ứng với dd gelatin +

6 Glycosid tim | Phan tng Legal -

Phan tng Baljet + Không Phản ứng Liebermann -

Phản ứng Keller- Kiliam -

7 | Tinh dâu Cât kéo băng hơi nước +++ |Có

§ Saponin Hiện tượng tạo bọt - Khong 9 Chat béo Quan sát vét mé trén giay lọc - Không

10 | Caroten Phản ứng với H;SO¿ đặc - Không II | Acidhữucơ | Phản ứng với bột Na;CO; ˆ Không

12 |Phytosterol | Phản ứng Liebermann ++- |

13 |Đườngkhử | Phánứng với thuốc thửFehlng | +++ | Có 14 |Acidamin | Thuốc thử Ninhydrin 3% - | Không

Ghi chú: +++ Phản ứng dương tínhrâtrõ — + Phản ứng dương tính

++ Phản ứng dương tính rõ - Phản ứng âm tính

Nhân xét: Bảng 2.2 cho thấy trong 4 mẫu HPB đều có 7 nhóm chất: Tinh dau, Alcaloid, Courmarin, Flavonoid, Tannin, Phytosterol, đường khử

Trang 36

¢ Sắc kí lớp móng tỉnh dầu 4 mẫu HPB:

Mẫu thử, chất hấp phụ, dung môi khai triển, thuốc thử hiện màu tiến hành

như đã trình bày ở mục 2.2.3 l

Kết quả được trình bày ở hình 2.5a 2.5b, 2.5c, 2.5d; bảng 2.3 (hệ dung môi

1) và hình 2.óa, hình 2.ób, hình 2.óc, hình 2.6d; bảng 2.4 (hệ dung môi 2)

+ Hệ dung môi I: Ether dầu hỏa- Ethyl acetat [8:2]:

12 1 2 12 Hinh 2.5a Hinh 2.56 Hinh 4:3€

Sac ki dé tinh dau 4 mau HPB trén hệ dung mdi 1

Trang 37

“=—

_

Bảng 2.3 Kết quả SKLM của tỉnh dâu HPB với hệ dưng môi l

HPBP HPBAC HPBV HPBC STT |Rf100|Mâu |Rf100 |Mâu |Rf.100 Mau | Rf100 | Mâu Vết sắc sắc slic sắc

1 |37§ |Cam |37§ |Cam |37§ Cam |37§ |Cam 2 |462 |Tim |462 |Tm |462 Tim |455 | Tim

xanh xanh xanh xanh 3 |524 |Nâu [51,0 Nâu |524 |Nau |510 | Nau

do đỏ đỏ đỏ 4 l552 |Đỏ |544 |Đỏ 544 Đỏ 544 |Đỏ

tía tía tía tía 5 |62,9 |Tim |62,2 |Tim |ó22 (Tím |62,2 | Tím

xanh xanh xanh xanh 6 |8lI |Hong|81,1 |Hơng | 81,1 | Hong | 81,1 | Hong

tim tim tim tim

+ Hé dung m6i 2: Toluen — Ethyl acetate [93:7]:

1 2 12 12 1 2 3A

Hinh 2.6a ; Hinh Ze 6b - Hình 2 Ốc Hình 2.6d

Sắc kí đồ tỉnh dâu 4 máu HPB trên hệ dung môi 2

Ghichú: Hình 26a: 1: HPBP: 2: HPBAC Hình 2.6b: 1: HPBP: 2: HPBV Hình 2.6c: 1: HPBP; 2: HPBC

Hình 2.6d: 1: HPBP; 2: HPBAC:; 3: HPBV: 4: HPBC

Trang 38

Bảng 2.4 Kết quả SKLM của tỉnh dầu HPB trên hệ dung môi 2 HPBP HPBAC HPBV HPBC

STT | Rf.100 | Mau Rf100 |Mẫu |Rfl00|Mâu | Rf100 | Mâu Vết sắc sắc sắc sắc

1 |282 |Hông |27.7 Hong |277 |Hông |277 | Hong

nhạt nhạt nhạt nhạt

2 32,5 Tim 32,5 Tim 32:5 Tim 325 | Tim

xanh xanh xanh xanh

3 41,1 Nau do | 41,1 Nau 41,1 Nau 41,1 Nau

do do do

4 454 Dotia | 44,8 D6 tia | 44,8 Đỏ tia | 44,8 | Đỏ tía 5 522 | Tim 515 Tim 51,5 Tim 52,2 | Tim

xanh xanh xanh xanh

6 |583 |Hong | 58,3 Hong | 58,3 | Hong | 583 | Hong

nhat nhat nhat nhat

7 64.4 Lơ nhạt | 64.4 Lơ 644 l|Lơ 644 |Lơ

nhạt nhạt nhạt § 70.5 Cam 70.5 Cam | 69,9 Cam | 70,5 Cam

nhat nhat nhat nhat

9 76,6 | Tím 76.0 Tím 76,0 | Tím 76,0 | Tím

xanh xanh xanh xanh

Nhân xét: Qua SKLM trên hai hệ dung môi khác nhau, các hợp chất tỉnh dầu ở

các mẫu trước và sau chế biến hầu như không thay đổi Với hệ dung môi 1, cho

khoảng 6 vét, với hệ dung môi 2 cho khoảng 9 vết Cả 2 hệ đều cho các vết với Rf và màu sắc tương tự nhau

« Sắc kí lớp mỏng flavonoid

Mẫu thử, chất hấp phụ, dung môi khai triển, thuốc thử hiện màu tiến hành như đã trình bày ở mục 2.2.3

Kết quả được trình bày ở hình 2.7 và bảng 2.5

Trang 39

7s © £ 1234 Hình 2.7 Sắc ki do flavonoid 4 mau HPB Chú thích: 1: HPBP 2:HPBAC 3:HPBV 4: HPBC Bang 2.5 Kết qua SKLM flavonoid ctia 4 mau HPB STT HPBP HPBAC HPBV HPBC vét 'Rfl100| ĐĐ |Rfl100| ĐĐ | Rf£100| DD | R100) DBD 1 16,5 |+ 16,5 |+ 16.5 |+ 16,5 |+ 2 213 |+ 220 |+ 22.0 |+ 220 |+ 3 25.2 |+ 25.2 |+ 252 |+ 252 |+ 4 29.9 |++ 307 |++ 307 |++ 307 |++ 5 394 |++ 394 |++ 39.4 |++ 38.6 | ++ 6 433 |+ 44] |+ 441 |+ 433 |+ 7 488 |/+++ |48§ [++ 1504 [H+ |504 |+>++ 8 55,1 [+++ [55,1 [+++ [55,1 [+++ [53,5 | +++ 9 61.4 +4 61.4 ++ 61.4 ++ 60.6 at 10 73,2 ++ 724 ++ 73,2 ++ 71.6 ++ 44t ee, LEE

Nhân xét: Từ kết quả SKLM nói trên, ta thây các hợp chất flavonoid ở các mẫu

trước và sau chế biến hầu như không thay đổi Cả 4 mẫu đều cho khoảng 10 vết với Rf và màu sắc tương tự nhau

Trang 40

2.3.3.2 Định lượng tinh dầu

Cân chính xác khoảng 80g bột thô của 4 mẫu HPB vào bình cầu 500ml, thêm vào 200ml nước cắt, lắp ống hứng tinh dầu và sinh hàn ngược, đun sôi đến

khi thể tích tỉnh dầu không đổi, để nguội Đọc thẻ tích tinh dầu thu được

Song song xác định hàm âm 4 mẫu HPB bằng phương pháp cất dung môi Kết quả thu được theo bảng 2.6 và bảng 2.7

Bảng 2.6 Kết quả định lượng tỉnh dẫu của 4 mẫu HPB

Mẫu HPBP HPBAC HPBV HPBC XM) |1 1,40 1,26 1,17 S 0,0434 0,031 0,038 0,031 ụ (%) 1,33£0,0644 | 1,40+0,0459 | 1,26+0,0566 | 1,17+0,0459

Bảng 2.7 Định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với toluen

Mẫu HPBP HPBAC HPBV HPBC

Hàm âm

fate 12,36 14,24 11,12 11,63

Nhân xét:

Từ kết quả ở bảng 2.6 ta thấy, sau khi chế biến, hàm lượng tỉnh dầu ở các

mẫu đã thay đơi Mẫu HPBAC có nhiều tinh dầu nhất Mẫu HPBV thấp hơn mẫu HPBP Mẫu HPBC có hàm lượng thấp nhất

2.3.3.3 Sắc kí khí khối phố tinh dầu: Tiến hành trên 2 mẫu HPBP và HPBC

+ Chuẩn bị dd thử: Hòa tan 2ul tỉnh dầu trong Iml n-hexan (Merck), lắc kĩ được

dd có nơng độ 0.2%

+ Điều kiện chạy sắc kí khí khối phổ:

-Cột sắc kí DB- 5MS, khí mang: He

Ngày đăng: 02/09/2015, 07:30

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w