Nghiên cứu sơ bộ thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn invitro của vị thuốc bạch cập

Đặt vấn đề ãTổng quan ãNguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu ãKết quả và bàn luận ãKiến nghị

BỘ QUỐC PHÒNGHỌC VIỆN QUÂN Y

Khóa luận tốt nghiệp

NGHIÊN CỨU SƠ BỘ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG

KHUẨN INVITRO CỦA VỊ THUỐC BẠCH CẬP

Cán bộ hướng dẫn: TS Triệu Duy Điệt

Nội dung của khoá luận gồm 5 phần

•Đặt vấn đề•Tổng quan

•Nguyên vật liệu và phương

pháp nghiên cứu

•Kết quả và bàn luận•Kiến nghị

Đặt vấn đề

• Vị bạch cập (Rhizoma Bletillae) là thân rễ phơi hay sấy

khô của cây bạch cập Bletilla striata (Thunb) Reichb.f, họ Lan (Orchidaceae), được dùng để điều trị một số bệnh theo kinh nghiệm dân gian như chảy máu cam, nôn ra máu, đau mắt đỏ, mụn nhọt sưng tấy và bỏng lửa

• Một số tác giả đã nghiên cứu trong vị bạch cập có chất

nhầy (khoảng 55%), một ít tinh dầu và các hoạt chất khác chưa rõ Tuy nhiên, thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc này vẫn chưa có tài liệu nào đề cập một cách cụ thể.

Đặt vấn đề

cũng như các tác dụng sinh học nói chung và tác dụng kháng khuẩn nói riêng, nhằm phục vụ cho việc sử

dụng bạch cập trong công tác điều trị một cách khoa học hơn

• Chúng tôi tiến hành đề tài

“Nghiên cứu sơ bộ thành phần hoá học và tác dụng

– Xác định sơ bộ thành phần hoá học của vị thuốc

bạch cập.

Chương 1: Tổng quan1.1 Đặc điểm thực

vật cây bạch cập (Hình 1.1)

1.3 Thành phần hoá học

Bạch cập

Chất nhầy

Tinh dầu

FlavonoidPhytosterol

•Chủ trị: Thổ ra máu, máu cam, chữa tà khí

vào dạ dày, chứng huyết lỵ, nhiệt sang lâu khỏi.

Chương 2: Nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu

2.1 Nguyên vật liệu

(Rhizoma Bletillae).

• Dung môi và hoá chất tinh khiết.

• Trang thiết bị và dụng cụ: Tủ sấy, tủ hốt, máy soi

huỳnh quang, máy đo phổ tử ngoại Cintra 40 (Australia)

• Các chủng vi khuẩn:

2.2 Phương pháp nghiên cứu

liệu theo phương pháp của trường Đại học Dược khoa Rumani.

– Sơ bộ nhận dạng flavonoid bằng sắc kí lớp mỏng

và phổ tử ngoại.

phương pháp trương nở (Dược điển Pháp 1972).

– Định lượng chất nhầy theo phương pháp cân

(Dược điển Việt Nam 2002).

– Định tính các monosaccharid trong chất nhầy sau

thủy phân bằng sắc kí giấy.

2.2 Phương pháp nghiên cứu

•Phương pháp nghiên cứu tác dụng kháng

thạch lỗ.

– Xác định nồng độ tối thiểu ức chếvi khuẩn theo

phương pháp pha loãng.

2.3 Xử lý số liệu

Chương 3: Kết quả và bàn luận

3.1 Kết quả nghiên cứu thành phần hoá học

3.1.1 Định tính sơ bộ thành phần hoá học vị bạch cập

Chiết xuất (Hỡnh 3.1)

Bột bạch cập

Bột dược liệu đã bay hơi ether

Bột dược liệu đã bay hơi ethanol 900

Dịch chiết ether ethylic

Dịch chiết ethanol 900

Dịch chiết nước

Chiết bằng ethanol 900 trong dụng cụ Soxhlet liên tục trong 8 giờ

Chiết bằng ether ethylic trong dụng cụ Soxhlet liên tục trong 8 giờ

Chiết bằng dung dịch HCl 1%

Kết quả định tính (Bảng 3.1)

DC nước

DC cồnDC ether

Không có

Acid nitric đặc Protid

Không có

H2SO4 đậm đặ NaOH

Fehling A, BĐường khử

Không có

Với Na2CO3Acid hữu cơ

Không có

H2SO4 đậm đặc Caroten

Cặn có mùi thơm Tinh dầu

Không có

Với dd KOH 10% Antraquinon

Kết luận sơ bộ

Kết quả

Phản ứng định tínhTên nhóm chất

3.1.2 Định tính các hợp chất bằng sắc kí lớp mỏng

Định tính flavonoid:

•Chất thử: Dịch chiết cồn của bột bạch cập, thu

hồi cồn, hoà tan trong nước nóng và lọc Chiết bằng ethyl acetat, bốc hơi ethyl acetat, hoà tan cắn trong một ít cồn 90° được dịch chấm sắc kí.

•Chiều cao chạy là 12,7 cm.

3.1.2 Định tính các hợp chất bằng sắc kí lớp mỏng

Định tính phytosterol:

cạn, hoà tan cắn bằng cồn 90°.

3.1.2 Định tính các hợp chất bằng sắc kí lớp mỏng

Định tính tinh dầu:

H2SO4 mới pha.

3.1.3 Tinh chế flavonoid (chất F1)

Bột bạch cập

Dịch chiết cồnCặn

Dịch chiết ethyl acetatCặn

Dịch chấm sắc kí

Chiết bằng ethanol trong dụng cụ Soxhlet đun liên tục trong 8 giờ

Tinh chế F1 bằng phương pháp sắc kí lớp chế hoá

•Nhận dạng F1 bằng sắc kí lớp mỏng:

Chạy sắc kí lớp mỏng với 3 hệ dung môi:

- Hệ 1: Ethyl acetat – acid formic – H2O (8:1:1).- Hệ 2: Benzen – pyridin – acid formic (36:9:5).

- Hệ 3: Cloroform – methanol – acid acetic(7:1:1).

•Phổ tử ngoại F1 (Hình 3.7)

Abs 211.8

277.5

3.1.4 Đánh giá sơ bộ chất nhầy trong vị bạch cập (Bảng 3.3)

Chỉ số nở: 11,40 ± 0,54 ml

57,0011,40

3.1.5 Định lượng chất nhầy trong bạch cập (Bảng 3.4)

275,14055,028

3.1.6 Phân tích chất nhầy trong bạch cập

• Chiết

xuất (Hình 3.8)

+ H2O

Đun cách thủy

+ CồnLọc

Bốc hơi cồn

Hoà tan trong H2SO4 2N

Định tính monosaccharid trong dịch thủy phân bằng sắc kí giấy:

•Chất hấp phụ: giấy Wathman số 1.

• Chất thử: dịch thủy phân chất nhầy.

(4:1:5, phần trên).

•Chiều cao chạy là 21,7 cm.

3.2 Kết quả nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn

- Bacillus subtilis

Đo đường kính vòng vô khuẩn (d)

3.2.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu vi khuẩn

•Tiến hành xác định MIC và MBC đối với 3 chủng:

- Bacillus subtilis

- Pseudomonas aeruginosa

Nhận xét

•Với Escherichia coli:

MBC = 1/8

•Với Bacillus subtilis:

•Với Pseudomonas aeruginosa:

Kết luận

1.Thành phần hoá học vị bạch cập:

trong vị bạch cập nghiên cứu có chất nhầy, tinh dầu, flavonoid, phytosterol và đường khử.

• Phổ tử ngoại của chất F1 cho 2 pick là 211,8 nm và 277,5 nm mang đặc trưng của nhóm flavonoid thuộc phân nhóm flavan

• Về chất nhầy trong bạch cập:

- Chỉ số nở: 11,40 ± 0,54 ml - Hàm lượng: 55,028 ± 0,064 %.

cập bằng sắc kí giấy cho 2 vết:

- 1 vết có Rf1 x 100 = 16 tương đương với glucose.

- 1 vết có Rf2 x 100 = 22.

2 Tác dụng kháng khuẩn của vị bạch cập:

- Tác dụng mạnh đối với Escherichia coli với MIC = 1/16, MBC = 1/8.

- Tác dụng trung bình đối với Bacillus subtilis.

- Tác dụng yếu đối với Pseudomonas aeruginosa.

- Không có tác dụng đối với Staphylococcus aureus.

Kiến nghị

hoá học của vị bạch cập.

riêng và các tác dụng sinh học nói chung cũng như những ứng dụng thực tế trong điều trị

bệnh của vị thuốc bạch cập.