Nghiên cứu thành phần hóa học của cây bạch hoa xà

- Đặt vấn đề. - tổng quan - nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu. - Kết quả và bàn luận - Kết luận và kiến nghị.

Đặt vấn đề

Bỏng là một bệnh ngoại khoa khá quan trọng

Để điều trị bỏng các chế phẩm của sulfadiazin bạc có

nhiều u điểm đã đ ợc chứng minh trong lâm sàng.

Viêc cung ứng thuốc có khó khăn Các mục tiêu cụ thể của khóa luận :

3.ưNghiênưcứuưtácưdụngưkhángưkhuẩnưtrênưinưvitroưcóưsoưsánhưvớiưvớiưchếưphẩmưSilvirinư1%ư(ấnưĐộ).

2 Thuèc mì s¸t khuÈn ®iÒu trÞ vÕt báng t¹i chç

* Kem maduxin;* Mì cao vµng;* Damcream * ChÕ phÈm chøa ho¹t chÊt sulfadiazin b¹c nh :

Sivadene (Mü), Flammazin (Ph¸p), Silvirin (Ên §é), Slivin (Pakistan)…

3 chÕ phÈm thuèc mì cã ho¹t chÊt sulfadiazin b¹c.

O(2) N(2)

H×nh 1 : C«ng thøc ho¸ häc cña sulfadiazin b¹c

* sulfadiazin có tác dụng kìm khuẩn: do cạnh tranh ức chế với PABA.

* Ion bạc:

Ion bạc chuyển cầu nối giữa 2 nitơ thuộc 2 nhân

purin đối diện Do vậy đã làm mất khả năng

sinh sản phân đôi của vi khuẩn

Phối hợp: nhân pyrimidin sẽ dễ dàng làm vận chuyển ion bạc qua màng vi khuẩn.

* Cơ chế tác dụng khác với các hợp chất bạc khác, khác với sulfadiazin đơn độc.

3.2 Cơ chế tác dụng.

3.3 Tác dụng kháng khuẩn.

Bảng 1: Khả năng kháng khuẩn trên invitro của sulfadiazin bạc

Nồng độ sulfadiazin bạcHọ và loài

50 g/ml100 g/mlPs Aeruginosa130/130130/130

Klebsiella pneumoniae53/5454/54Escherichia coli63/6363/63S aureus100/101101/101S epidermidis51/5151/51Enterococus (nhóm D)52/5352/53

3.4 Hấp thu thuốc.

* Các nghiên cứu về hấp thu với Ag111 cho thấy hầu hết

thuốc tích tụ ở lớp biểu bì (có tác dụng tại chỗ)

Khoảng 10% l ợng sulfadiazin bôi tại chỗ đ ợc hấp thu

Để đo sulfadiazin và các chất chuyển hoá đặc hiệu cần

- Không gây rối loạn điện giải hay kiềm toan.- Không làm bẩn y phục hay vải trải gi ờng.

1 Vật liệu trang thiết bị

1.1 Vật liệu hoá chất.

- Bạc sulfadiazin đạt tiêu chuẩn USP 24

- Các tá d ợc cần thiết đạt tiêu chuẩn DĐVN III.- Các chất bảo quản, các chất chống ôxy hoá đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Các dung môi dùng cho SKLM, HPLC-pp.- Màng nhân tạo cellophan.

- Các hoá chất khác cần thiết.

Phần II

Vật liệu và ph ơng pháp nghiên cứu

1.2 Dụng cụ, trang thiết bị.

- Cân phân tích độ chính xác 0,1mg của Trung Quốc - Máy ly tâm của Nhật Bản

- Tủ điều nhiệt giữ đ ợc nhiệt độ ở 400C, Trung Quốc - Bản mỏng Silicagel 60 F254 ,VKN cung cấp.

- Đèn huỳnh quang soi ở b ớc sóng 254 nm.- Thạch Muller - Hinton.

- Các chủng vi khuẩn: S aureus, P aeruginosa, E coli.- Dụng cụ nghiên cứu khả năng giải phóng d ợc chất ra khỏi tá d ợc thuốc mỡ.

- Máy sắc ký lỏng cao áp hiệu năng cao Shimadzu.- Các dụng cụ cần thiết khác trong phòng thí nghiệm.

2 Ph ¬ng ph¸p nghiªn cøu.2.1 §Þnh tÝnh ho¹t chÊt

2.3 Các b ớc nghiên cứu mô hình kem Silver sulfa 1%.

Loạibớt CT có độ giải phóng kém

Hình 4: Các b ớc nghiên cứu mô hình kem Sliver sulfa 1%

* Nghiªn cøu t×m chÊt chèng «xy ho¸

Ion b¹c trong c«ng thøc ho¹t chÊt rÊt dÔ bÞ «xy ho¸

-Nghiªn cøu víi 4 chÊt chèng «xy ho¸ sau:

Natri sulfit ,natri bisulfit,natri metasulfit,hydro quinon.- Hµm l îng : 0,05%; 0,10% vµ 0,15%

Hình 5: Sơ đồ quy trình bào chế kem Silver sulfa 1%

Chuẩn bị d ợc chấtChuẩn bị tá d ợc

Kiểm nghiệm thành phẩm

2.3.2.ư(Bướcư2):ưNghiênưcứuưsơưbộưđộưbềnưvững.-ưưưĐiều kiện 1:

Ly tâm thuốc mỡ mới bào chế trong vòng 5 phút với tốc độ 600v/phút ở nhiệt độ 20  10C Quan sát sự phân lớp của thuốc mỡ.

- Điều kiện2:

Đặt thuốc mỡ ở 40  10C trong vòng 1 ngày đêm Quan sát sự thay đổi của thuốc mỡ.

-Lựa chọn ba công thức bền vững nhất nghiên cứu

độ giải phóng hoạt chất

*Khuếch tán thuốc qua màng:- Ngăn trên : 3g thuốc mỡ

- Môi tr ờng khuếch tán : 25ml dung dịch NH4OH 2,5%

- Thời gian t1, t2, t3, t4 đã định sẵn.

* Định tính hoạt chất giải phóng: SKLM(DĐVN I)để

xác định đã có hoạt chất giải phóng và xác định t1.*Định l ợng nồng độ : ph ơng pháp HPLC.

- Với mỗi CT, ở 1 thời điểm t, khuếch tán 5 mẫu để tính l ợng hoạt chất giải phóng qua màng bằng ph ơng

-ưưXâyưdựngưđườngưchuẩn: bằng ph ơng pháp bình

ph ơng tối thiểu.ư

+ Pha động là một hệ dung môi A: B = 28 : 72 với

Dung môi A là hỗn hợp : Acetolnitrile có H3PO4 (1/900).

Dung môi B là hỗn hợp : N ớc cất có H3PO4 (1/900).

+ Thể tích mẫu tiêm 50 l.+ Tốc độ dòng 1ml/phút.

+ Cột: RP18, Sopam (250 x 4,6mm,5m).+ Đo ở b ớc sóng 266nm.

Sử dụng ph ơng pháp khuếch tán trên gel thạch:

Thạch Muller - Hinton đổ đĩa đ ờng kính 9cm, đục 2 lỗ đối xứng có đ ờng kính 1cm, 1 lỗ cho Silver sulfa 1%

(công thức có độ giải phóng hoạt chất tốt nhất tìm đ ợc ở b ớc 3), lỗ còn lại cho thuốc đối chứng Silvirin 1% Sử

dụng 3 đĩa thạch cho 3 chủng vi khuẩn S aureus; P

aeruginosa; E coli (theo quy định của DĐVN)

1 KÕt qu¶ x©y dùng c«ng thøc bµo chÕ.

X©y dùng c«ng thøc:

CT 1:

Sulfadiazin b¹c 1,0gAcid stearic 24,0gTriethanolamin 1,0g

CT 2

Sulfadiazin b¹c1,0g Sorbitan stearat1,4gPolysorbat 80 0,6gAlol cetostearic 6,5gTriglycorides 11,0gGlycrol 0,4gChÊt b¶o qu¶n 0,5gN íc tinh khiÕt v® 100ml

CT 3:

Sulfadiazin b¹c1,0gAlcol cetostearic8,0gGlycerin monostearat 0,4gVaselin 6,0gParaffin 0,5gTween 60 0,6g

CT 4:

Sulfadiazin b¹c 1,0gAlcol stearylic 15,0gS¸p ong 8,0gTween 80 3,8gSpan 80 1,2g

Sorbitol 8,0gChÊt b¶o qu¶n 0,2gN íc tinh khiÕtv® 100ml

CT 5:

Sulfadiazin b¹c 1,0gAlcol cetylic 3,0gDÇu paraffin20,0gGlycerol stearat 2,9gPolysorbat 80 3,1gGlycol propylen 7,0g

Lùa chän chÊt chèng oxy ho¸.

Thêi ®iÓmHµm l îng

2 Kết quả nghiên cứu sơ bộ độ bền vững.

3 Kết quả đo giải phóng hoạt chất

3.1 Kết quả định tính hoạt chất giải phóng qua màng:

3.2.1 Kếtưquảưxâyưdựngưđườngưchuẩn.- Sắc ký đồ dung môi của cốt tá d ợc.

- Các đ ờng chuẩn:

+ Chuẩn 1: nồng độ hoạt chất 2,12g/ml.+ Chuẩn 2: nồng độ hoạt chất 5,30g/ml.+ Chuẩn 3: nồng độ hoạt chất 10,60g/ml.Kết quả đ ợc ph ơng trình tuyến tính

y = 5,9118.e - 0,06.x + 0.Hệ số t ơng quan r = 0,999833 1.

Cho thấy có sự t ơng quan khá chặt chẽ giữa diện tích pic và nồng độ.

*Kếtưquảưtínhưnồngưđộưdượcưchấtưgiảiưphóngưquaưmàng:

Bảng 5: Nồng độ d ợc chất giải phóng qua màng theo

thời gian của CT3(nư=ư5;SDư=ư0,0018)

*Tính tỷ lệ% d ợc chất giải phóng qua màng:

Công thức tính tỷ lệ% d ợc chất giải phóng qua màng:

250

B¶ng 6: Tû lÖ % ho¹t chÊt ® îc gi¶i phãng qua mµng cña c¸c CT theo thêi gian

CT2CT3CT5

B¶ng­7:­Tû­lÖ­%­ho¹t­chÊt­®­îc­gi¶i­phãng­qua­mµng­cña­Silvirin­1%­­theo­thêi­gian(n = 5;SD = 0,0018)

t1 3,4606288193,0022,502

t2 3,3586576934,8314,026

t3 3,44810487325,0174,182

t4 3,44413289067,5446,287

Nồng độ giải phóng quamàng (x%)

CT3Silvirin 1%

Tỷ lệ nồng độ giảiphóng qua màngCT3 / Silvirin 1%

5 KÕt qu¶ ®o kh¸ng khuÈn trªn invitro.

§ êng kÝnh vïng øc chÕ (mm)Vi khuÈn

Kết luận

- Đã xây dựng đ ợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn định bền vững trong điều kiện bình th ờng vì đã ổn định trong điều kiện khắc nghiệt.

- Khả năng giải phóng hoạt chất qua màng của CT3 và Silvirin 1% là t ơng đ ơng nhau Nh vậy kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá d ợc không cản trở khả năng giải phóng hoạt chất của kem

- Khả năng kháng khuẩn của CT3 là t ơng đ ơng với

Kiến nghị.

Tiếp tục nghiên cứu các tính chất khác của kem Silver sulfa 1%:

* Nghiên cứu độ ổn định lâu dài.

* Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất và kháng khuẩn trên invivo.

* Nghiên cứu độc tính cấp và tr ờng diễn.* Nghiên cứu hiệu lực điều trị của kem.

Xin chân thành cảm ơn các quý vị đại biểu

các thầy cô giáo

và toàn thể các bạn sinh viên!