Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae) Nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí ( radix polygalae)
Trang 1
BO Y TE
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
ĐÀO THỊ THUỲ
NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỚNG CỦA CHE BIEN CÓ TRUYEN DEN
THANH PHAN HOA HOC VA TAC DUNG KHANG KHUAN CUA VI THUOC VIEN CHi
( Radix Polygalae )
KHOÁ LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC SĨ KHÓA 2004 - 2009
Người hướng dẫn : GS TS Pham Xuan Sinh Nơi thực hiện : Bộ môn Dược học cỗ truyền
- Trường Đại học Dược Hà Nội
Thời gian thực hiện: 02/2009 — 05/2009 =
| k\, 242 $\
, | (TẾ VIÊN 2)
HÀ NỘI, THÁNG 5-2009 \ 24/2 - 9
Trang 2
LOI CAM ON
Trong suốt quá trình thực hiện đề tài, em đã nhận được sự giúp đỡ nhiệt
tình về cơ sở vật chất, kiến thức, tỉnh thần của Bộ môn Dược học cô truyền cũng
như các bộ môn khác trong Trường Đại học Dược Hà Nội Nhân dịp này cho
phép em được bảy tỏ lịng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới:
- GS.TS Phạm Xuân Sinh: là người thây trực tiếp hướng dẫn em hết
sức nhiệt tình, ln động viên và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành
dé tai
- PGS.TS Nguyễn Viết Thân: Trưởng bộ môn Dược liệu trường Đại
học Dược Hà Nội
- PGS TS Cao Văn Thu: Trưởng bộ môn Vị sinh — Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội
Đã tạo điều kiện thuận lợi và nhiệt tình giúp em trong quá trình làm đề tài
Các thầy cô, các cán bộ kĩ thuật viên của bộ môn Dược học cổ truyền và
các thầy cô trong trường Đại học Dược Hà Nội đã truyền đạt cho em những kiến thức quý báu làm hành trang trên bước đường sau này
Em xin chân thành cảm ơn gia đình và bạn bè luôn sát cánh bên em, động viên, giúp đỡ tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong quá trình học tập tại trường
Hà Nội, ngày 15 tháng 05 năm 2009
Sinh viên
Trang 3MUC LUC ĐT HE nu and anasagatnuanasasese 1 PHẨN 1 TÔNG QUẦN ca ke neociiiiooeooroeooooooo 2
1.1 Đặc điểm thực vật cây viễn chí -. -c«ccscss5 2
1.1.1 Tên khoa học A)Bìa9jhi4200000950/09/46034 “it
1.1.2 Hình thái thực vật, phân bố, thu hái
1.1.3 Đặc điểm dược liệu : `
X14 Đức điền VỀ da saeiauugbabiobisoaeaboNosbialsaobzosgkei 3
1.2 Thanh phần hoá học wed
1.3 Tác dụng dược lý ‘ 5
1.4 Chế biến, bào chế cổ truyền 6
1.4.1 Mục đích của chế biến thuốc cỗ truyền 96A06906964449//48649524466666696638 6 1.4.2 Các phương pháp chế biến cỗ truyền ộ 6
1.4.3 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến màu sắc và thành phần hoá học
+ £ của vị thuốc
1.4.4 Chế biến viễn chí 0 mưu@sxus
1.5 Cơng năng, chú trị ”Z77m5 9
1.6 Một số phương thuốc có viễn chí . . 5s se+sssxsecxeexeevse 10 PHAN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ - 5 «<< 12
2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm «««« 12
2.1.1 Nguyên liệu 12
Trang 4— m——— ee a el
2.2.2 Chế biến vị thuốc viễn chí ; 18 2.2.3 Nghiên cứu về thành phần hoá học 20
2.2.4 Kết quả nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí KG: UEP Sst canscannesumnnsnsniedsvisicinetncnomnaunsersnconenotneceninnssaionsiessonnonscensinnncdieieats 37
2.3 Gop phần xây dựng quy trình chế biến viễn chí 37
2.4 Bàn luận 39
XE TT TƯ Ê Na kkŸỶăằẰằ-iaasnaeeousde 41
Trang 5
CHU THICH CHU VIET TAT
CHU VIET TAT CHU THICH
DDVN Duge dién Viét Nam
d.d Dung dich Gr (+) Gram duong Gr (-) Gram am Pu Phản ứng STT Số thứ tự SKLM Sắc ký lớp mỏng ae: Thuốc thử S Viễn chí sống
S.V Vién chi sao vang
S.C Viễn chí sao cám
S.d Viễn chí sao đen
CCT Viễn chí chích cam thảo
Vd Vira du
YHCT Y hoc cé truyén
Trang 6
DANH MUC CAC BANG SO LIEU
STT TEN BANG TRANG
01 | Bang 1.1 Dac diém ctia mét sé phuong phap sao 7
02 | Bảng 2.2 Kết quả chế biến viễn chí 20
03 | Bảng 2.3 Kết quả định tính các nhóm chất trong rễ viễn chí 25-26
04 | Bảng 2.4 Kết quả SKLM của Saponin viễn chí với hệ dung
mdi | 28
05 | Bảng 2.5 Kết quả SKLM của Saponin viễn chí với hệ dung
môi 2 30
06 | Bảng 2.6 Kết quả hàm lượng Saponin toàn phần của viễn chi
sống và chế 35
07 | Bảng 2.7 Độ tro toàn phần của viễn chí S, Sv 36 08 | Bảng 2.8 Phần trăm các chất chiết được trong dược liệu bằng
MeOH 36
09 | Bảng 2.9 Kết quả thử tác dụng kháng khuẩn của viễn chí
sống và chế 37
Trang 7
DANH MỤC CÁC HÌNH STT TÊN HÌNH TRANG 01 Hình 1.1 Cây và rễ viễn chí 2
02 Hình 2.2 Vi phẫu rễ viễn chí cắt ngang 16
03 | Hình 2.3 Đặc điểm bột rễ viễn chí (Radix Polygalae) 17
04 Hình 2.4 Các mẫu viễn chí nghiên cứu 19
05 Hinh 2.5 (a, b) Sắc ký đồ của Saponin trên hệ dung mơi I 27 0ó Hình 2.6 (a, b) Sắc ký đồ của Saponin trên hệ dung mơi 2 29
07 Hình 2.7 Sơ đồ chiết xuất Saponin toàn phần 34 08 Hinh 2.8 Biéu đô biểu diễn hàm lượng Saponin trong các
Trang 8DAT VAN DE:
Nền Y học cổ truyền Việt Nam đã có lịch sử lâu đời và phong phú Từ xa
xưa, ông cha ta đã biết sử dụng các nguồn dược liệu đa dạng, phong phú từ cây
cỏ với các phương pháp bào chế và các dạng bào chế khác nhau nhằm phục vụ cho nhu cầu phòng và chữa bệnh
Theo lý luận của Y học cô truyền, qua chế biến, các vị thuốc sẽ bị thay đổi tinh, vị, dẫn đến thay đổi tác dụng, chế biến theo phương pháp khác nhau sẽ tạo
ra tác dụng khác nhau Nhờ đó, có thể lựa chọn các phương pháp chế biến thích
hợp đáp ứng được mục đích điều trị Do đó việc chế biến thuốc theo y học cỗ
truyền là việc làm hết sức quan trọng và cần được nghiên cứu để những kinh nghiệm đó được chứng minh một cách khoa học, đầy đủ
Viễn chí là vị thuốc được sử dụng khá phô biến trong y học cỗ truyền với tác dụng an thần, ích trí, trừ đờm, tiêu thũng
Trong khoá luận này, việc nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cỗ truyền đến vị thuốc Viễn chí nhằm mục đích trên
Để góp phần chứng minh cho tác dụng chữa bệnh, đồng thời góp phần vào việc xây dựng các quy trình chế biến thuốc cổ truyền Khoá luận đã tiến hành “nghiên cứu ảnh hưởng của chế biến cô truyền đến thành phần hoá học và tác
dụng kháng khuẩn của vị thuốc Viễn chi Radix Polygalae ` với các mục tiêu sau:
e©_ Xác định tính đúng của vị thuốc Viễn chí
e Nghiên cứu chế biến Viễn chí theo phương pháp cỗ truyền
e Sơ bộ nghiên cứu sự thay đổi thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của viễn chí trước và sau khi chế biến
Trang 9Phan 1:
TONG QUAN
1.1 Đặc điểm thực vật của cây viễn chí
L.1.L Tên khoa học
Tén khoa hoc: Polygala tenuifolia Willd hoac Polygala sibirica L
Họ viễn chí: Polygalaceae [3] [5] [11] [16] [18] [19]
Hình 1.1.: Cây và rễ viễn chí 1.1.2 Hình thái thực vật, phân bố, thu hải
- Viễn chí thuộc lồi cây nhỏ, sống đai Từ gốc mọc lên nhiều thân nhỏ Thân lồi viễn chí lá nhỏ nhắn cịn lồi Siberi thì có lơng tơ ngắn, lá mọc so le, không cuống Lồi viễn chí lá nhỏ phiến lả hẹp nhọn; còn loài Siberi phiến lá
rộng hơn, hình mác Cụm hoa chùm, đài khơng đêu cịn lại trên qua, 5 lá đài có
Trang 10déu, 8 nhi dinh lién thành một bó Bầu trên, hai ơ Quả nang , có cánh bên, hạt hình trứng, có lông, áo hạt chia ba thuỷ [3], [1 1] [1§], [25]
Lồi viễn chí lá nhỏ mọc ở đông Siberi, xung quanh hồ Baican, loài siberi có ở vùng Siberi và một số vùng khác như Ucraina, capca Ở Trung Quốc lồi Siberi có ở cả miền nam và bắc, loài viễn chí lá nhỏ có ở miền đông bắc và bắc
Ở Việt Nam, hiện có khoảng 20 lồi, trong đó 11 loài được dùng làm thuốc Tại
miền Bắc Việt Nam mới phát hiện ở Ninh Bình, Nam Định, Hà Nam, Hà Tây, Lạng Sơn, Cao Bằng, nhưng chưa xác định chắc chắn được loài, chưa được khai
thác, toàn bộ viễn chí hiện cịn phải nhập, do đó chúng ta nên chú ý tìm để khai
thac [3], [18], [16], [25]
- B6 phan ding: Ré sau khi thu hái phải loại bỏ tạp chất, rửa nhanh, ủ cho
mềm, cắt thành đoạn, phơi hay sấy khô, trước khi dùng cần được chế biến theo
yêu cầu sử dụng [18] [25]
1.1.3 Đặc điểm dược liệu
Rễ đã bỏ lõi gỗ hình ống hoặc từng mảnh, thường cong queo, dài 5 —
15cm, đường kính 0,3 - 0,8em, đầu rễ có khi cịn sót phần gốc thân, mặt ngoài màu xám hoặc xám tro, có những nếp nhăn hoặc đường nứt ngang, các vết nhăn
đọc nhỏ, vết rễ nhánh như núm nhỏ, mặt cắt ngang có lớp vỏ màu nâu nhạt, ruột
rong (da bỏ gỗ) Đối với rễ chưa bỏ lõi gỗ, khi cắt ngang thấy lớp gỗ trắng xám và có chỗ rách Lớp vỏ đễ tách khỏi gỗ, vị đắng hơi cay, kích thích khi nhắm [3], [5], [25]
1.1.4 Các đặc điểm vì học [3], [5j * Vị phẫu:
Rễ đã bỏ lõi gỗ: Lớp bần khoảng 10 hàng TB Tế bào mô mềm vỏ
Trang 11
mềm có những chỗ rách ngang TẾ bào libe nhỏ nhăn nheo, ở gần tầng phát sinh gỗ có nhiều chỗ rách nằm theo hướng xuyên tâm
* Soi bột: Bột màu nâu nhạt, soi kính hiển vi thấy: Mảnh bần màu vàng nâu nhạt Nhiều mảnh mô mềm tế bào dài hoặc hơi tròn chứa nhiều giọt dầu
đứng riêng lẻ Mảnh ống mạch , mạch vạch, đôi khi kèm theo sợi gỗ 1.2 Thành phần hoá học
Rễ của các loài viễn chí trên đều chứa Saponin Saponin của viễn chí
thuộc loại saponin triterpenoid nhóm Olean Phần aglyeon thường có 5 vòng và thường là dẫn chất của 3-8 hydroxy olean 12 - en, tức là Ø - amyrin [3], [11], [16], [17], [18], [19], [20] ) Ra Rs Ra Olean B - amyrin Rị¡ =R¿; = Rạ = R¿ = R; = CHạ
Từ rễ của loài Polygala tenuifolia đã phân lập được 7 Saponin, đó là
Onjisaponin A, B, C, D, E, F, G Trong viễn chí lá nhỏ cịn có chất kiềm hữu cơ
là tenuidin và một đường khử là Polygalitol (= 1,5 anhydrosorbitol) [3] [11]
[16], [17], [18], [19], [20], [21] [22] [24] [25] [27] Từ dịch chiết ether người
Trang 12
3, 7 — Tetramethoxyxanthon; 6 — hydroxy — 1, 2, 3, 7 — tetramethoyxanthon; 2, 3,
6, 7, 8 — pentamethoyxanthon; 3 — hydroxy — 2., 6, 7, 8 — tetramethoxyxanthon va dan chat 3, 4, 5 — trimethoxycinnamic acid [1], [3], [18], [19] [20] [23] [24]
[25]
Ngoài ra, cịn có một số chất khác như Tenuigenin A, B, onsicin, tenuifolin, preseneginin, prosenegenin, resin [3], [16], [18], [19], [24], [25], co tinh dau (chu yéu 1a methyl salicylat va valerianat), c6 acid salicylic, polygalid,
chất nhựa [17], [20]
1.3 Tác dụng được lý
- Tác dụng giảm ho: Trên mơ hình thực nghiệm gây ho cho chuột nhất
bằng cách phun xông NHỊ:, liều 0,75g/kg viễn chí cho uống dưới dạng cao, có tác
dụng giảm ho rõ rệt [3] [Š] [18], [2Š]
- Tác dụng trừ đờm: Thí nghiệm trên thỏ, viễn chí có tác dụng tăng dịch
tiết khí phế quản [3], [5], [1®] [24] [25]
- Tác dụng giảm đau: Viễn chí với liều 0,8g/kg có tác dụng giảm đau rõ rệt
ở chuột nhat trắng, khi tiém acid acetic vào màng bụng [I8], [25]
- Tác dụng trên thời gian ngủ: Viễn chí có tác dụng hiệp đồng, kéo dài
giấc ngủ do thuốc ngủ barbituric ở chuột nhat trang [18], [24], [25]
- Tác dụng trên thần kinh trung ương: Viễn chí có tác dụng ức chế có mức
độ hệ thần kinh trung ương nhưng khơng thấy có tác dụng đối kháng với liều gây co giật do cafein gây nên ở chuột nhắt trăng [3] [18] [24] [25]
Trang 13
- Tác dụng kháng khuẩn: Cao mềm viễn chí có tác dụng kháng khuẩn, ức
chế sự phát triển của vi khuân Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis,
Streptococcus hemolyticus, Diplococcus pneumoniae [15], [18], [24], [25] - Tác dụng tán huyết: Dịch chiết 5% của rễ và bộ phận trên mặt đất của cây ra hoa có tác dụng tán huyết [15] [18], [24] [25]
.1.4 Chế biến cỗ truyền
1.4.1 Mục đích của chế biến thuốc cỗ truyền
Chế biến thuốc cỗ truyền nhằm các mục đích chính sau: Làm sạch vị
thuốc; làm thay đổi tính, vị của thuốc tạo ra tác dụng điều trị mới; giảm độc tính của thuốc; ơn định thành phần hố học, góp phần bảo quản thuốc được tốt; tăng
hiệu lực trị bệnh, thay đổi về mặt hoá học của vị thuốc dẫn đến thay đôi tác dụng
của vị thuốc; giảm tính bền vững cơ học, tăng khả năng giải phóng dược chất
LI] [2]: [6]:
1.4.2 Các phương pháp chế biến cỗ truyển [1] [6] [12] [L7]
Trong phần này chúng tôi chỉ giới thiệu hai phương pháp có liên quan đến đề tài nghiên cứu
1.4.2.L Phương pháp chích:
- Mục đích: + Tăng tác dụng trị bệnh
Ví dụ: Bán hạ chích dịch nước gừng để tăng tác dụng chống nôn
+ Phù hợp với màu sắc theo học thuyết ngũ hành, thay đổi tính vị
khuynh hướng tác dụng của thuốc
+ Thay đổi PH môi trường: PH ảnh hưởng đến độ tan của thành
phân hoá học trong thuốc, nhiều dịch phụ liệu có độ PH khác nhau, khi tâm vào vị thuốc sẽ làm thay đổi PH của thuốc
Trang 14
dung địch Một số phụ liệu thường dùng: Dịch cốt gừng, dịch rượu sa nhân, dịch nước cam thảo, nước vo gạo
1.4.2.2 Phương pháp sao
a, Sao trực tiếp: Là phương pháp sao mà thuốc được truyền nhiệt trực tiếp
qua dụng cụ sao Một số phương pháp: sao qua, sao vàng, sao vàng cháy cạnh, sao vàng hạ thổ, sao đen, sao cháy
b, Sao gián tiếp: Là phương pháp sao mà vị thuốc được truyền nhiệt qua
phụ liệu trung gian Một số phương pháp: sao cám, sao cát, sao cách hoạt thạch, văn cáp
Bang 1.1 Đặc điểm của một số phương pháp sao Đặc điểm của một số phương phap sao được tóm tắt ở bảng 1.1
Sao vàng Sao cách cám Sao đen (hắc Sao cháy (thán
(hoàng sao ) sao) sao)
Mục |- Tăng tácdụng |- Tăngtácdụng |- Tăng tác dụng | - Tăng tác dụng
đích | quy tỳ kiện tỳ, hoà vị | tiêu thực cầm máu - Tang tinh am |- Giảm tính khơ | - Giảm tính
ráo của thuốc mãnh liệt của vị thuốc
T” sao 100-140°C 100-150” 180-200”C 240°
Tin |-Dundungey |-Dundyngey |-ĐÐundụngcu |-Đun dụng cụ
hành '- Cho thuốcvào | sao nóng đến 60 ' sao đến khi nóng | sao đến khi đảo đều tay — 100°C mạnh khoảng nóng khoảng
- Mức lửa vừa |-Chocámvào | 160— 1§0C 180” cho thuốc
phải > đếnkhi | đảo nhanhđến | - Cho thuốc vào, | vào đảo đều đến
bề mặt vị thuốc | khi cám bóc khói | đảo chậm đều | khi vị thuốc có
Trang 15
có màu vàng trăng đên khi vị thuốc | màu đen, mùi (với vị thuốc có |- Cho thuốc vào | có màu đen, mùi | thơm cháy, lấy màu trắng)hoặc | — Sao tiếptục |thơmcháy > | ra để nguội
màu thay đổirõ | đến khi vị thuốc | lấy ra dé nguội rệt so với dược | chuyén sang mau
liệu sống, mùi vang— sang bd
thom —> lấyra, | cam
để nguội
Tiu |-Bêmặtngoài |- Vị thuốc màu | - Bề mặt vị thuốc | - Bê mặt vị thuốc chuẩn | có màu vàng vàng màu đen màu đen
- Bên trong vẫn | - Mùi thơm - Bên trongcó | - Bên trong màu
là màu của dược hơi vàng nâu hoặc đen
liệu sống
- Mùi thơm
- Khô giòn - Mùi thơm cháy
1.4.3 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến màu sắc và thành phần hoá học của vị thudc [6], [9
- Ở nhiệt độ dưới 100°C (tương đương phương pháp vi sao) vị thuốc
thường ngả màu vàng và thành phần hoá học của vị thuốc ít nhiều có thay đồi vẻ luong va chat
- Ở nhiệt độ dưới 180 — 240°C (tương đương phương pháp sao cháy): Vị thuốc thường có màu đen và có sự thay đổi nhiều về thành phần hoá học, do đó hàm lượng các chất có thể tăng lên hoặc giảm đi Đặc biệt là hàm lượng tỉnh dầu
Trang 161.4.4 Chế biến viễn chi
- Viễn chí bỏ lõi: Đem rễ rửa sạch khi còn hơi âm, rút bỏ lõi, cắt đoạn 3-5
cm, phơi khô
- chế viễn chí với cam thảo: Viễn chí 10kg
Cam thảo 0,5kg
Nấu cam thảo lấy nước, ngâm viễn chí vào nước cam thảo tới khi
trương nở, rút bỏ lõi Phơi hoặc sấy khơ Có thể cho viễn chí vào nước cam thảo
rồi đun tới khô mới bỏ lõi Phơi khô
- Viễn chí chích cam thảo: Viễn chí 10kg
Cam thảo Ikg
Sắc lấy nước cam thảo, tâm đều vào viễn chí, ủ 1h Dem sao vàng
- Viễn chí tẩm mật ong: Viễn chí (đã bỏlõi) 10kg
Mật ong Ikg
Dem viễn chí đã chế với cam thảo sao cho nóng lên rồi đỗ mật ong đã pha loãng vào đảo đều Tiếp tục sao đến khi có mầu vàng, sờ khơng dính tay là được
-Viễn chí sao cám: Trước tiên sao cám nóng già bốc khói trắng, đồ viễn
chí đã chế cam thảo vào, đảo đều, sao tới mầu vàng
- Viễn chí sao đen hoặc sao cháy: Lấy viễn chí đã chế cam thảo, sao đến khi toàn bộ bên ngoài bị đen hoặc sao đen hơi cháy, bên trong hơi nâu
1.5 Cơng năng, chủ trị
Tính vị: vị đắng, cay, tính 4m [6], [18], [24], [25]
Trang 17
Công năng, chủ trị: An thần ích trí: Dùng trong các trường hợp tâm thần
bat an, mắt ngủ hay quên, thường biểu hiện chóng mặt, tinh thần bất thường, có thê phối hợp với táo nhân [6], [17], [18], [24], [25]
Khai khiếu, làm sáng tai mắt, tăng cường trí lực, dùng trong bệnh
tai bị ù, mắt mờ
Hoá đờm, chỉ ho, táo uất: dùng khi ho mà nhiều đờm, đờm đặc, khó thở, có thể phối hợp với cát cánh, đào nhân, uất kim
Liều dùng: § - 12g
Kiêng ky: Khi kinh tâm có thực hoả khơng nên dùng, không dùng cho phụ
nữ có thai, những người băng kinh, băng huyết Bảo quản: Đề nơi khô [5]
1.6 Một số phương thuốc có viễn chí
- Viễn chí ẩm: Chích thảo 20g Nhục quế 40g
Nhân sâm 40g Hoang ky 40g
Hắc táo nhân 40g Phục thần 40g
Đương quy 40g Viễn chí 40g
Cơng dụng: Trị tâm lao, hư hàn, hay giật mình kinh sợ
- Viễn chí hồn I: Bạchlinh 40g Phục thần 40g
Nhân sâm 40g Viễn chí 40g
Thạch xương bồ 40g Long xi 40g
Chu sa 20g
Tán bột, làm hoàn, dùng chu sa bọc ngoài Ngày uống 12 — 16g với nước
nóng, lúc đói, buổi sáng uống với rượu
Công dụng: Ngủ không yên giấc, than chi bat an, tâm thận không
đủ, di hoạt tinh
Trang 18
- Viễn chí hồn II: Bach tatlé 30g Viễnchí 30g
Phuc than 20g Mạn kinh tử 20g
Thuyền thoái 40g Tế tân 30g
Hồ phách 20g Xa tiền tử 30g
Sinh địa 20g Nhân sâm 20g
Toàn yết Š con Thục địa 20g
Lô hội 20g Xuyên khung 20g
Sunguýtử 20g
Tán bột làm hoàn Ngày uống 12 — 16g với nước cơm, lúc đói Cơng dụng: Trị mắt mờ
- Viễn chí tán : Chích thảo 20g Đương quy 30g
Linh dương giác 30g Phòng phong 30g
Quế tâm 30g Toantaonhén 30g
Độc hoạt 30g Phục thần 30g
Mạch mơn 40g Viễn chí 40g
Tang ký sinh 30g Tán bột, mỗi lần dùng 20g, sắc uống ấm
Công dụng: Trị sau khi sinh bị trúng phong, tâm thần hoảng hốt,
nằm ngủ không yên
- Viễn chi thang: Chich thao 4g Phuc linh 6g
Nhân sâm 4g Viễn chi 4g
Thược dược 4g Mạch môn 4g
Đương quy 4g Quế tâm 4g
Thêm gừng 3 lát, táo 4 quả, sắc uống ấm
Công dụng: Trị sinh xong tỉm hồi hộp, lo sợ, nói sảng
Trang 19
PHAN 2
THUC NGHIEM VA KET QUA
2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm 2.1.1 Nguyên liệu
- Nguyên liệu nghiên cứu là rễ phơi hay sấy khô của cây viễn chí (#adix
Polygaiae) nhập từ Trung Quốc, mua tại Viện y học cô truyền Quân đội
- Các mẫu viễn chí: sống, Sao cám, sao vàng, sao đen, chích cam thảo
- Các mẫu viễn chí đem thử tác dụng kháng khuẩn:
Mẫu I: Cao lỏng 1:1, Viễn chí sao cám chiết bằng côn Mẫu 2: Cao lỏng 2:1, Viễn chí sóng chiết bằng nước Mẫu 3: Cao lỏng 2:1, Viễn chí sao cám chiết bằng nước
2.1.2 Phương tiện
2.1.2.1 Thiết bị
- Máy do d6 am: Precisa XM 120; SWISS made - May cat quay Buchi R-200
- Tu say Memmert, may anh
- Can phan tich
- Kinh hién vi LABOMED
- Máy đo tử ngoại UV ( 254, 365nm )
- Thước kẹp Panmer, máy ảnh
- Các dụng cụ thuỷ tỉnh: Bộ dụng cụ Soxhlet, cốc có mỏ, ống nghiệm
2.1.2.2 Hoá chất
- Hoá chất và thuốc thử đạt tiêu chuẩn phân tích của DĐVN III: Methanol,
Aceton, n-Butanol, Ether dầu hoa, Diethyl ether, cồn tuyệt đối, Cloroform,
Toluen, Ethylacetat, Acid formic, Silicgen GF254 trang san ctia Merck
Trang 20
-Dung môi hoá chất đề thử tác dụng kháng khuẩn:
+ 10 vi khuẩn kiểm định: 5 vi khuẩn Gr (-), 5 vi khuẩn Gr (+)
+ Kháng sinh
2.1.3 Phương pháp thực nghiệm
2.1.3.1 Xác định tính đúng của vị thuốc [3], [5], [25]
Khoá luận sẽ căn cứ vào các tiêu chuẩn của DĐVN HI, về mô tả đặc
điểm vị thuốc, đặc điểm vi phẫu và vi học bột để tiến hành xác định vị thuốc
2.1.3.2 Chế biến vị thuốc viễn chí theo một số phương pháp cỗ truyền [12],
[17
- Chế với cam thảo: Ngâm viễn chí vào nước cam thảo, bỏ lõi phơi khô-> tiếp tục chế bằng cách sao vàng, sao cám, sao đen
- Chích với cam thảo: Lấy viễn chí đã bỏ lõi tâm với dịch cam thảo 1h,
sau đó đem sao vàng
2.1.3.3 Nghiên cứu thành phan hod hoc q&, Định tính một số nhóm chất frong viên chi
- Định tính một số nhóm chất trong các mẫu viễn chí trước và sau khi chế
biến bằng các phản ứng hoá học sử dụng thuốc thử đặc trưng của mỗi nhóm chất
B3] [5] [8] [15]:
- Định tính Saponin bằng SKLM đối với viễn chí và sau chế biến, với bản
mỏng Silicagen GFss¿ Merck tráng sẵn [3], [8], [15] Khai triển trên hai hệ dung
môi: Hệ |: Toluen : ethyl acetat: a.Formid (Š:2: 1) Hé 2: Cyclohexan : ethyl acetat (4:6)
b, Xác định chi số bọt [3] [8] [15]
Chỉ số bọt ( CSB ) được tính theo công thức ;
Trang 21
csp = KO" an (1)
Trong đó: V: Thể tích dịch chiết đem xác định chỉ số bọt (ml)
a: Khối lượng được liệu (g)
n: Số thứ tự của ống nghiệm có cột bọt cao l em
k: Hệ số pha loãng dịch chiết
œ, Xác định chỉ số phá huyết [3], [8], [15]
Chỉ số phá huyết ( CSPH ) được tính theo cơng thức :
CSPH = —2- (2)
cu
Trong đó: €: Nông độ dung dịch được liệu (3%)
X: Số ml dịch chiết được liệu cho vào ống nghiệm mà ở đó xảy ra hiện tượng phá huyết đầu tiên và hoàn toan
d, Xác định tro toàn phân [5J
Tiến hành theo Phụ lục 9.3, trang PL-142, DĐVN III
Tính % tro toàn phần theo dược liệu đã làm khô trong không khí tính theo cơng
thức : T(%)= “L.100 (3)
mộ
Trong đó: mị¡: Khối lượng tro (g) mạ: Khối lượng dược liệu (g)
T: Dé tro (%)
e, Xác định các chất chiết được trong dược liệu ( bằng phương pháp chiết nóng ) [5]
Tiến hành theo phụ lục 7.6, trang PL-192, DĐVN II
D (%) =2 “4.100 (4)
mp
Trang 22
Trong đó: —_m,: Khdi lugng can (g)
mp: Khối lượng dược liệu (g)
D : Là chất chiết được trong MeOH, tính theo %
8, Định lượng Saponin toàn phân bằng phương pháp cân: [3], [8], [14], [15]
Hàm lượng Saponin toàn phần định lượng bằng phương pháp cân được
tính theo công thức:
B.10"
ALY see ==——=—
mie) A(100—C) (5)
Trongđó: A: Khối lượng dược liệu (g)
B: Khối lượng cắn Saponin (g)
C: Ham am (%)
2.1.3.4 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc viễn chí sống, chế Trong khoá luận này chỉ tiến hành nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của 3
mẫu đã giới thiệu ở phần nguyên liệu (phần 2.1.1)
a, Giống vi sinh vật kiểm định do bộ môn Vi sinh — Sinh học , trường Đại học
Dược Hà Nội cung cấp:
- Vi khuẩn Gr (-): 5 chủng ( Phụ lục 2)
- Vi khuẩn Gr (+): 5 chủng ( Phụ lục 2) b Môi trường thử nghiệm:
- Môi trường canh thang nuôi cấy vi khuẩn kiểm định
- Môi trường thạch thường
c Phương pháp thử (Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuếch
tán) ( Phụ lục 2)
- Đánh giá kết quả: Dựa trên đường kính vịng vô khuẩn và được đánh giá theo
công thức:
Trang 23
` D SD, -Đ
D==L— s=1'“——— n n-l
D: Đường kính trung bình vịng vơ khn
D,: Đường kính vịng vơ khuân
x: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh n: Số thí nghiệm làm song song
2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét
2.2.1 Nghiên cứu tính đúng của dược liệu viễn chí
- Đặc điểm dược liệu viễn chí: Rễ đã bỏ lõi gỗ hình ống hoặc từng mảnh,
cong queo, dai 5 — 12 cm, dudng kinh 0,3 - 0,6 cm, mặt ngoài màu xám, có
những nếp nhăn, có vết nhãn dọc nhỏ có vết rễ nhánh Mặt cắt ngang có lớp vỏ
màu nâu nhạt, ruột rỗng (đã bỏ gỗ ) vị đẳng, hơi cay kích thích khi nhắm -Đặc điểm vi phẫu:
Ré đã bỏ lõi gỗ: Lớp ban khoảng 10 hàng tế bào Mơ mềm vỏ có những chỗ rách
- ngang Tế bảo libe nhỏ nhăn nheo ở gắn tầng
phát sinh gỗ có những chỗ rách nằm theo
hướng xuyên tâm
Chú thích: I- Lớp bằn 2- Mơ mêm vỏ 3- Libe
Hình 2.2 Vi phẫu rễ viễn chí cắt ngang
Trang 24
2.2.2 Chế biến vị thuốc viễn chí
Tiến hành chế biến vị thuốc viễn chí theo các phương pháp đã được mô tả
ở mục 2.1.3.2, được 4 mẫu: Viễn chí sao vàng, viễn chí sao cám, viễn chí sao
đen, viễn chí chích cam thảo Xem hình 2.5 và bảng 2.2 - Chế viễn chí với cam thảo: Viễn chí §00g
Cam thảo 40g
Nấu cam thảo lấy nước, ngâm viễn chí vào nước cam thảo đến khi trương
nở, rút bỏ lõi Sau đó phơi hoặc sấy khô —› Hiệu suất đạt: ae 100 = 91,25%
Lấy sản phâm chế với cam thảo tiến hành chế tiếp theo 3 cách sau đây:
- Sao vàng: Lấy 200g viễn chí đã chế cam thảo, đun chảo nóng già cho
thuốc vào đảo đều đến khi mặt ngoài phiến có màu vàng, bên trong có màu của viễn chí sống
- Sao cám: Lấy 280g viễn chí chế Trước tiên sao cám nóng già bốc khói
trắng, đồ thuốc vào, đảo đều, sao tới màu vàng
- Sao đen: Lấy 250g viễn chí chế, đun chảo nóng già, cho thuốc vào đảo
chậm đến khi bên ngoài vị thuốc có màu đen, mùi thơm, lấy ra dé nguội
- Chích cam thảo: Viễn chí 100g
Cam thảo 10g
Sắc lấy nước cam thảo, tâm đều vào viễn chi đã rút lõi, ủ một giờ đem sao
vàng
Trang 25
4 5
Hình 2.4.: Các mẫu viễn chí nghiên cứu
Chú thích: I- Viễn chí sao vàng 4- Viễn chí chích cam thảo 2- Viễn chí sao cảm 5~ Viễn chí sống
Trang 26
Bảng 2.2.: Kết quả chế biến Viễn chí
Phương pháp 5 Viễn chí chế Khối lượng sau 7
E Viên chí : số Hiệu
chế biến Viễn cam thảo | Màusắc | chế biến (- loại A
song (g) suat (%)
chi (g) vụn)
Sao vàng 200 Vàng đậm 150 75
Sao cám 280 Xám 260 92
Sao đen 250 Den 170 68
Chich cam thao 100 Vang 79 79
* Nhận xét: Qua các cách chế biến trên thu được bốn mẫu có màu sắc, hiệu suất khác nhau Trong đó hiệu suất mẫu sao cám cao nhất ( 92% ) và hiệu suất mẫu sao đen thấp nhất ( 68% )
2.2.3 Nghiên cứu về thành phần hoá học
2.2.3.1 Định tính các nhóm chất bằng phản ứng học
Phản ứng định tính được tiễn hành đồng thời với 5 mẫu mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần
a, Dinh tính Saponin:
* Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho vào ống nghiệm 0.,1g bột dược liệu,
thêm 5ml nước cất lắc mạnh trong 5 phút Để yên và quan sát thấy xuất hiện cột
Trang 27
bot bén vitng sau 30 phit Lap lai 3 lan cho két qua tuong tu > Két qua: Phan
img duong tinh
* Phản ứng trong ống nghiệm: Mẫu nghiên cứu: 10g Viễn chí được chiết với EtOH 95% được dịch chiết cồn ( DCC ) Dịch chiết này được sử dụng trong
các phản ứng định tính
+ Phản ứng sơ bộ phân biệt Saponin Steroid và Saponin triterpenoid: Chuẩn bị 2 ống nghiệm như nhau:
- Ong | gồm: 5ml dung địch NaOH 0,IN ( PH = 13 ) + 5 giọt DCC - Ông 2 gồm: 5ml dung dịch HCI 0.1N ( PH = I ) + 5 giot DCC
Lắc mạnh cả hai ống trong 1 phút Quan sát thấy: 2 ống có cột bọt ngang
bằng nhau-› Sơ bộ xác định trong dịch chiết cồn viễn chí có Saponin
triterpenoid
+ Phản ứng Rosenthaler: Cho vào ng nghệm 3ml DCC, bốc hơi cách thuỷ
đến gần khơ Nhỏ § giọt TT Vanilin 1% trong HCl Dun nong thay cé mau tim
xuất hiện— Kết quả: Phản ứng đương tính Trong dịch chiết viễn chí có Saponin
triterpenoid
+ Phản ứng Lieberman — Burchardt: Cho vào ống nghiệm 5ml DCC, bốc hơi cách thuỷ đến cắn, hồ nóng vào Iml anhydrid acetic, cho thêm một giọt HạSO¿ đậm đặc Thấy xuất hiện mầu đỏ nâu— Kết quả: Phản ứng dương tính
Nhân xét: các mẫu Viễn chí trước và sau khi chế đều chứa saponin triterpenoid
b, Dinh tinh Flavonoid
* Phản ứng Cyanidin: Cho vào ống nghiệm 2ml DCC, thêm một ít Mg kim loại Nhỏ từ từ vài giọt acid HCI đặc, lắc nhẹ, đun cách thuỷ Quan sát:
Dung dịch chuyển sang mâu đỏ thầm— Kết quả: Phản ứng dương tinh
Trang 28
* Phản ứng FeCl;: Cho vào ống nghiệm Iml DCC, thêm vài giọt dung dịch FeCl; 5% Quan sát: Dung dịch chuyền sang mầu xanh đen—› Kết quả: Phản
ứng dương tính
* Phản ứng với NH: Nhỏ một vài giọt DCC lên giấy lọc, hơ khô rồi đề lên miệng lọ NH: đặc Quan sát: mầu vàng tăng lên—> Kết quả: Phản ứng dương
tính
.Nhân xét: Các mẫu trước và sau khi chế đều có Flavonoid c, Dinh tinh tanin
* Phản ứng với dung dịch gelatin 1%: Cho Iml dịch chiết nước vào ống nghiệm, thêm vài giọt dung dịch gelatin 1% Quan sát: Không thấy kết tủa bông
trắng—> Kết quả: Phản ứng âm tính
* Phản ứng với d.d Cu(CH;COO); 10%: Cho 1ml dịch chiết nước vào ống
nghiệm, thêm vài giọt dung dịch Cu(CHạCOO); Quan sát: Không thấy xuất hiện kết tủa bông trắng—> Kết quả: Phản ứng âm tính
Nhân xét: Không thấy tanin trong cả 5 mẫu
d, Định tính alealoid: Lấy khoảng 3g bột Viễn chí cho vào bình nón dung tích
50ml, thêm 10ml d.d H;SO, 1N, đun đến sôi, để nguội Lọc vào một bình gạn, kiềm hố dịch lọc bằng d.d NH; đặc, sau đó lắc với Cloroform 2 — 3 lần, mỗi lần 5ml, gạn lấy lớp dung môi hữu cơ rồi cho bốc hơi cách thuỷ tới khô, thu được
can alcaloid base Hoa tan can alkaloid base bing 2 — 3 ml d.d HCl IN, chia
dịch chiết này vào 3 ống nghiệm
- Ong 1: Cho I —2 giọt thuốc thử Mayer, quan sát không thấy kết tủa mau
trắng hoặc vàng
- Ong 2: Cho 1 - 2 giọt thuốc thử Bouchardat, quan sát: Không kết tủa
Trang 29
- Ông 3: Cho | — 2 giot thudc thir Dragendorff, quan sat: khéng thay xuat
hiện kết tủa đỏ cam
Nhân xét: Khơng có alealoid ở cả 5 mẫu thử
e, Dinh tinh coumarin:
* Phan tmg mo dong vòng lacton:
- Cho vào hai ống nghiệm mỗi ống Iml DCC:
Ông 1: Thêm 0,5ml d.d NaOH 10% Ong 2: Đề nguyên
- Đun cả hai ống nghiệm đến sơi, để nguội: Ĩng 1: Khơng phản ứng Ơng 2: Trong
- Thêm vào cả hai ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cắt, lắc đều Quan sát: Ong 1: Duc
Ong 2: Trong — Két qua: Phan tng âm tính
Nhận xét: Khơng có coumarin trong 5 mẫu
g, Dinh tính anthranoid
* Phản ứng Borntraeger: Cho vào ống nghiệm lg bột viễn chí, thêm 5ml d.d H;SO; 25% Đun nhẹ khoảng 5 phút, để nguội, lọc Lắc với 10ml
Chloroform, gạn lấy lớp chloroform ra một ống nghiệm khác rồi thêm một ít d.d
NaOH 10%, lắc nhẹ Quan sát: Không thấy lớp nước mâu đỏ sim—> Kết quả: Phản ứng âm tính
*# Phản ứng vi thăng hoa: Cho 2g bột viễn chí vào một nắp nhôm, đậy một
phiến kính lên nắp nhơm ( trên tắm kính đặt một miếng bông tâm nước lạnh )
Dun nắp nhôm trên ngọn lửa đèn cồn khoảng 5 phút Lấy phiến kính soi dưới
Trang 30
kính hiển vi Quan sát: Không thấy xuất hiện nhũng tỉnh thể hình kim của anthranoid— Kết quả: Phản ứng âm tính
Nhân xét: Khơng có anthranoid trong 5 mẫu
h, Định tính chất béo
Cho vào ống nghiệm 5ml dịch chiết ether dầu hoả, bốc hơi cách thuỷ đến
khi còn khoảng Iml, nhỏ một giọt lên giấy lọc, để khô Quan sát: Có vết mờ trên
giấy lọc—› Kết quả: Phản ứng dương tính
Nhân xét: Có chất béo trong 5 mẫu
i, Dinh tinh Sterol
Cho Iml dichchiét ether dau hoa vao ống nghiệm, cô cách thuỷ tới cắn,
nhỏ từ từ theo thành ống nghiệm 1ml anhydrid acetic, lắc kỹ, thêm tiếp H;SO; đậm đặc Quan sát: mặt phân cách có mầu nâu đỏ.—> Kết quả: Phản ứng âm tính
Nhận xét: Có Sterol trong 5 mẫu
k, Định tính đường khử: Phản ứng với thuốc thử Felling
Cho vào ống nghiệm 2ml DCC, thêm 0,5ml TT Fehling A + 0,5ml TT
Fehling B Đun cách thuỷ trong 5 phút Quan sát: thấy xuất hiện kết tủa màu đỏ gạch.—> Kết quả: Phản ứng âm tính
Nhân xét: Có đường khử trong 5 mẫu
t Dinh tinh acid amin
Cho vào ống nghiệm 2ml dich chiét nude, thém 2 — 3 giot TT Ninhydrin
5%, đun cách thuỷ trong 10 phút Quan sat: Thay xuat hién mau tim > Két qua: Phản ứng dương tính
Nhận xét: Có acid amin trong 5 mẫu
my Định tính glycosid tim
Trang 31
Chuan bi dich chiét: Can khoang 5g vién chi, cho vao binh nén 250ml 6
nút mài, thêm 50ml nước, ngâm 24 giờ Gạn, lọc dịch chiết vào cốc thuỷ tỉnh Loại tạp bằng d.d chì acetat dư Lọc, cho dung dịch vào bình gạn nhỏ, lắc với
20ml CHCI; (3 lan ) Gép dich chiét CHCl, chia vào 3 ống nghiệm nhỏ, bốc hơi
cách thuỷ tới khô Cắn thu được tiễn hành các phản ứng định tính:
* Phản ứng Baljet: Chuẩn bị TT Baljet: Cho vào ống nghiệm Iml d.d acid picriel% và 9ml d.d NaOH 10%, lắc đều Cho vào ống nghiệm chứa căn cần định tinh 0,5m! EtOH 90°, lac déu cho can tan hết, nhỏ từng giọt TT Baljet mới pha Quan sát: Không thấy xuất hiện mầu đỏ cam.—› Kết quả: Phản ứng âm tính
* Phan img Keller — Kiliani: Cho vào ống nghiệm chứa cắn cần định tinh
0,5ml EtOH 90” Lắc đều cho cắn tan hết Thêm vài giot d.d FeCl; 5% pha trong acid acetic, lắc đều, thêm đồng lượng H;SO; đặc theo thành ống nghiệm Quan sát: Ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng không thấy xuất hiện vịng tím đỏ.— Kết quả: Phản ứng âm tính
Nhận xét: Khơng có glycosid tim trong 5 mẫu
Kết quả được thể hiện ở bảng 2.3
Bảng 2.3 Kết quả định tính các nhóm chất trong rễ viễn chí
STT | Nhóm chất | Phản ứng định tính Kết quả Nhận xét
Quan sát hiện tượng tạo bọt + + +
“Hân ng sự Bộ hin Biệt ng ơng me Có Saponin
01 Saponin | §.triterpenoid va S.Steroid NaOH ïle:petisig
Phản ứng Rosenthaler + +
Phản ứng Liberman- Burchad [+ + +
Phản ứng Cvyanidin + +
02 | Flavonoid | Phản ứng với dd FeCl; 5% *# + *# Có Flavonoid
Phan tng véi hoi NH; + + +
Trang 32
Phan tg voi dd gelatin 1%
02 | ‘Tanin | phan ding voi dd dling acetat 10% | - kdiksdútluid
Phản ứng với TT Mayer : Kheuecd
04 | Alcaloid | Phản ứng với TT Bouchardat 4 = ni :
Phan ứng với TT Dragendorff -
; ea kưŠt ; - Khơng có
05 |Coumarinn | Phản ứng mở đóng vịng lacton š0ff2GfSð1d
06 | Đường khử | Phản ứng với TT Fehling A,B + Có đường khử
:x | Phản ứng Borntranger - Khơng có
07 | Anthranoid’ | phan ứng vi thăng hoa anthranoid
08 | Acid hitu co | Phan ứng với Na,CO; + Có acid hữu cơ
09 | Chấtbéo | Để lại vết mờ trên giấy lọc ~ Có chất béo
I0 | Acidamin | Phản ứng với TT Ninhydrin + Có acid amin Phản ứng với anhydrid acetic + Có Sterol
11 Sterol H;SO, đặc +
12 | Glycosid Phan ứng Baljet - Không có
tim Phản ứng Keller - Kiliani - glycosid tim
Chú thích: Pư rất rõ: (+++)
Pu ro: (++) Pư âm tính: (-)
Nhận xét: Qua bảng 2.3 thấy trong các mẫu viễn chí trước và sau khi chế
đều chứa: Saponin triterpenoid, flavonoid, acid amin, đường khử, acid hữu cơ, chất béo, sterol
2.2.3.2 Dinh tính Saponin bằng sắc kí lóp mỏng
* Chuẩn bị dịch chấm sắc kí: Cắn Saponin toàn phần thu được ở phần định
lượng ( phần 2.2.3.5 ) được hoà tan trong EtOH và được thuỷ phân trong H;SO,
10% Dun cach thuy trong 8 gid, thém nước, lắc đều, lọc Lấy dịch lọc lắc với CHCI; Gạn lớp CHC];, bốc hơi được dịch đậm đặc để chấm sắc kí [8], [14]
Tiến hành SKLM các sản phẩm của viễn chí sống, chế trên các hệ dung
môi l và 2:
Trang 33
- Bản móng Silicagen GF;s¿ hãng Merck được hoạt hoá ở 110°C
trong | gid
- Soi đèn tử ngoại & budc song 365 nm
- Thuốc thử hiện màu: Vanilin 1% trong H;SO; đặc, sau khi phun
thuốc thử, sấy 110”C trong 10 phút
- Kết quả được trình bày ở hình 2.5a, 2.5b, 2.6a, 2.6b, bang 2.4, 2.5
+ Hệ dung môi |: (Toluen : Ethylacetat : acid formie= § :2: ] )
t
| —_——-a
Hình 2.5 a Hinh 2.5 b
Hình 2.5.: Sắc kí đồ của Saponin trên hệ dung mơi I
Chú thích: Hình 2.5 (a,b) từ trái sang phải lần lượt :S (Sống), S.C (sao
cám) S.đ (sao đen), S.V (sao vàng), C.CT (chích cam thảo)
Hinh 2.5 a: Quan sat 6 UV 365 nm
Hình 2.5 b: Hiện màu bằng thuốc thử Vanilin 1% trong H;SO¿
Trang 34
Séng(S) Sao cam (S.C ) Sao đen ( S Ð ) Sao vàng ( S.V ) Chích cam thao (C.C.T)
STT
vết | Rflo0 | Rfl00 | Màu | Rfl00 | Rfl00 | Màu | Rf100 | Rfico | Mau | Rf100 | Rf100 | Màu | REto0 | REl00 | Mau UV365 |Hiện | vết UV365 | Hiện | vết UV365 |Hiện | vết | UV365 | Hiện | vết UV36S | Hiện | vết
màu mau mau mau mau
Xanh Xanh Xanh Xanh Xanh 1 16,1 | 12,3 nhat 16,1 | 12,3 23 | hes 16,1 123 23 | nhạt 16,1 | 123 nhat 16,1 12,3 nhat
Xanh Xanh Xanh Xanh Xanh 2 18,5 | 14,8 im 18, § 14, § diet 185 | 148 8 4, hee 18, 85 | 148 4, set 18,5 | 14,8 shat
Xanh Xanh Xanh Xanh Xanh
3 22,2 | 185 | io | 222 | 185 | tyyạ | 222 | 185 | soy | 222 | 135 [mg | 222 | 18S | io, 4 25,9 | 259 | Tím | 259 | 259 | Tím | 259 | 259 | Tim | 25,9 | 259 | Tím | 25,9 | 25,9 | Tim 5 296 | 296 | Tím | 296 | 296 | Tim | 29.6 | 296 | Tim | 29,6 | 296 | Tím | 29,6 | 296 | Tim 6 35,8 | 33,3 | Tim | 35.8 | 33,3 | Tim | 35,8 | 333 | Tim | 35,8 | 33,3 | Tim | 35,8 | 33,3 | Tim 7 432 | 35,8 | Cam | 43,2 | 35.8 | Cam | 432 | 35,8 | Cam | 432 | 35,8 | Cam | 43,2 | 35,8 | Cam 8 494 | 383 | Tim | 494 | 383 | Tím | 494 | 383 | Tim | 49,4 | 383 | Tim | 55,5 | 383 | Tim 9 617 | 407 | Cam | 61,7 | 407 | Cam | 617 | 407 | Cam | 593 | 407 | Cam | 493 | 407 | Cam Xanh Xanh Xanh Xanh Xanh
Trang 35+ Hệ dung môi 2: ( Cyclohexan: Ethylacetat = 4:6 )
Hình 2.6a: Hình 2.6b:
Hình 2.6.: Sắc kí đồ của Saponin trên hệ dung mơi 2
Chú thích:
Hinh 2.6(ab): Từ trái sang phải lần lượt: S(sống), S.C(sao cam), S.đ(sao đen), S.V(sao vàng) C.CT(chích cam thảo)
Hình 2.6a: Quan sát ở UV 365 nm
Hình 2.6b: Sau khi phun thuốc thử Vanilin 1% trong H;SO; sây L10°C trong 10 phút
Trang 360E
Sống ( § ) Sao cảm ( S.C ) Sao đen ( S Ð) Sao vàng ( §.V ) Chích cam thảo (C.C.T) STT
vết Rf.100 Rfl00 | Màu Rf.10ð Rf100 | Mau RE100 Rf100 Mau Rf100 Rf100 | Màu Rf.I00 Rfl00 | Máu
UV365 | Hiện | vất UV346s | Hiện | vết UV36s |Hiện | vét | UV365 | Hiện | vết UV36§ | Hiện | vết
mau mau mau mau mau
1 | 23s | 123 | %] ans | 123 | MM] ass | sae | XP] ons | sae | MY] 33 | ras | Xãnh lo lo lo lo lo
2 39,5 | 16,0 | Tim | 395 | 160 | Tim | 39,5 | 19.8 | Cam | 284 | 198 | Cam | 28.4 | 19,8 | Cam Xanh Xanh Xanh 3 494 | 29,6 | Xanh la cây 494 | 29/6 Xanh lả cây 506 | 296 lá 3 395 | 34,6 lá 39S | 34,6 lá
cay cay cây
4 580 | 469 | Tím | 5§0 | 46/9 | Tím | 580 | 469 | Tim | 50,6 | 407 | Tim | 506 | 506 | Tim 5 753 | 50,6 | Vàng | 75,3 | 50,6 | Vang | 753 | 506 | Vàng | 58 469 | Vàng | 393 | 469 | Vang 6 81,5 | 56,8 | Tím | 926 | 568 | Tim | 92.6 | 56.8 | Tim | 75,3 | 506 | Tim | 75,3 | 506 | Tim 7 926 | 67,9 | Vang 67,9 | Vang 82,7 81,5
8 728 | Tím 72,8 | Tim 72,8 | Tim | 92,6 | 72,8 | Tim | 92.6 | 72,8 | Tim
Trang 37
- Nhân xét: Với hệ dung môi 1, mẫu sống và mẫu sao cám đều có 11 vết, Rf
và màu sắc tương tự; riêng sao vàng, sao đen, chích cam thảo mất một vết màu
vàng có RÍ=61,7, chỉ cịn 10 vết Với hệ dung môi 2, mẫu sống và sao cám có 8
vết, Rf và màu sắc tương tự, riêng mẫu sao đen, sao vàng, chích cam thảo mắt
một vết màu vàng có Rf=67,9 chỉ còn 7 vết so với mẫu sống Như vậy, qua chế biến theo phương pháp cô truyền các hợp chất Saponin hầu như không thay đổi
2.2.3.3 Xác định chỉ số bọt:
Tiến hành đồng thời với 5 mẫu như sau: Cân Ig viễn chí cho vào bình
nón 250ml đã chứa sẵn 100ml nước sôi, giữ sôi nhẹ 30 phút, lọc vào bình định mức 100ml, để nguội, thêm nước đến vạch Lấy 10ml dịch chiết pha thành 100ml để xác định chỉ số bọt Lấy 10 ống nghiệm giống nhau ( 16 x 1,6cm ) đánh số theo thứ tự từ 1 đến 10, rồi cho vào các ống nghiệm đó lần lượt 1,2.3 10ml nước sắc, thêm nước cất vào mỗi ống cho đủ 10ml Bịt miệng các
ống nghiệm lắc theo chiều dọc trong 15 giây, để yên 15 phút và đo chiều cao của
các cột bọt -> Kết quả: Ong c6 cét bot cao | em: Mẫu sống Và sao vàng: 6, sao
cám và sao đen: 5, chích cam thảo: 3
Chỉ số bọt tính theo công thức ( 1) ở mục 2.1.3.3b Chỉ số bọt của Saponin
trong viễn chí sóng và sao vàng là:
10x100
x
CSB = 10x = 1666
Chỉ số bọt của Saponin trong viễn chí sao cám và sao đen là:
10x100
CSB = 10x = 2000
Chỉ số bọt của Saponin trong mẫu chích cam thảo là:
10x100 Ix3 CSB= 10x = 3333
Trang 38Nhận xét: Chỉ số bọt của Saponin trong mẫu chích cam thảo là cao nhất
(3333), cịn trong mẫu sóng và sao vàng là thấp nhất (1666)
2.2.3.4 Xác định chỉ số phá huyết:
Trong khoá luận này chỉ tiến hành nghiên cứu hai mẫu: Mẫu sống và một
mẫu chế đại diện là mẫu sao đen
Chuẩn bị: - Dung dịch đệm: Sử dụng nước muối sinh lý 0,9%
- Pha dung dịch máu treo thỏ: Lấy 4,5ml máu thỏ trộn với 0,5ml d.d
3,65% Natri Citrat rồi thêm 220ml dung dịch đệm
- Pha dung dịch dược liệu 1%: Nguyên liệu da ray qua ray 0,5 mm, cân chính xác 0,5g cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml dung dịch đệm rồi
đặt lên nồi cách thuỷ ( 95 — 98° ) trong 30 phút Lọc vào bình định mức 50ml rồi
bổ sung dung dịch đệm đến vạch
- Pha dung địch dược liệu 0,5%: Lấy chính xác 25.0ml d.d viễn chí 1% cho vào bình định mức 50,0ml, thêm dung dịch đệm đến vạch
Lấy 20 ống nghiệm có dung tích 5ml, đánh số thứ tự từ I đến 20 và cho vào mỗi ống lần lượt các loại dung dịch theo bảng sau:
STT | Dung dịch đệm Dung dịch viễn chí Dung dịch máu treo thỏ
Trang 3912 0,40 0,60 13 | 035 | i065 | 14 0,30 — 0/70 ES 15 — 0,25 0,75 16 020 [| £4080 — 17 0,15 0,85 1 a “18 0,10 0,90 is | oo —2 0,95 20 0,00 1,00 I
Lắc nhẹ ngay và sau 15 phút lại lắc Dé yén 24 giờ đọc kết quả
Két qua: - Ở mẫu sống: Hiện tượng phá huyết xảy ra đầu tiên và hoàn
toàn ở ông số 6 Mẫu sao đen là ống sé 8
Chỉ số phá huyết được tính theo công thức (2 ) ở mục 2.1.3.3c: Chỉ số phá huyết của Saponin trong viễn chí sống:
2x100
0,5x0,3 CSPH = = 1333
Chỉ số phá huyết của Saponin trong viễn chi sao đen:
2x100 0,5x0,4
CSPH = = 1000
Nhận xét: Chỉ số phá huyết của Saponin ở mẫu sống (1333) cao hơn mẫu sao đen (1000) Như vậy, CSPH của mẫu sao đen nhỏ hơn so với mẫu sống là 25%
2.2.3.5 Định lượng Saponin toàn phân [3], [S] [14], [15]
Tiến hành với 5 mẫu: S, S.V, S.C, S.đ, S.CT
* Chiết xuất Saponin toàn phần: Cân chính xác 10g bột viễn chí cho vào
dụng cụ Soxhlet Loại chất béo bằng ether dầu hoả trong 10giờ Bay hết ether,
chiết Saponin bằng MeOH : H;ạO (4 : 1) đến khi dịch chiết khơng cịn phản ứng với TT Vanilin 1% trong HạSO¿ Thu hồi MeOH dưới áp suất giảm được cắn 1
Can 1 được hoà tan bằng 20ml nước cất, lắc với n-butanol 5 lần, mỗi lần 10ml,
Trang 40
dịch chiết n-BuOH đem cất thu hồi dưới áp suất giảm được cắn 2 Hoà cắn 2 với 10ml MeOH, thêm hỗn hợp aceton — ether (4 : 1) với tỉ lệ gấp 2 - 3 lần thể tích của dung dịch cồn, xuất hiện tủa Lọc lấy tủa, sấy khô đến khối lượng không đổi
ở 80°C Cân Lặp lại thí nghiệm 3 lần, hàm lượng Saponin toàn phần trong dược
liệu là giá trị trung bình của 3 lần định lượng Qúa trình chiết xuất được trình bày
theo sơ đơ ở hình 2.7
Kết quả được thể hiện ở bảng 2.6 và hình 2.8
| Bột viễn chí | : Cén 80° (Soxhlet) | Dịch chiết / cồn | + Cô | Căn | —————— Dịch chiết / nước
[*—— - TT Ether dầu hoả | Dịch chiết nước đã loại chất béo |
| cin : |
| Cắn 10% / nước |
——— n-butanol Saponin / n-butanol
Thu héi n-butanol 4 Cô
| Cắn Saponin |
: Cén 80°
| Saponin / cồn
ys Aceton : ether (4:1), loc
| TUA SAPONIN TOAN PHAN |
Thu hồi cồn Nước cất *, £ Nước cât
Hình 2.7.: Sơ đồ chiết xuất Saponin toàn phẩn