Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương Nghiên cứu ảnh hưỏng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hoá học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc can khương
Trang 1
BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỌI
VŨ THANH BÌNH
NGHIEN CUU ANH HUONG CUA PHUONG PHAP CHE BIEN CO TRUYEN DEN THANH PHAN HOA
HOC VA TAC DUNG KHANG KHUAN CUA VI THUOC CAN KHUONG
KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC SĨ
Người hướng dẫn:
GS.TS Phạm Xuân Sinh Nơi thực hiện:
Bộ môn Dược học cô truyền
—
KEES Lf baes
HA NOI - 2010 a sale!”
Trang 2Lời cảm ơn
Với lịng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cám ơn chân thành
nhất tới:
GS.TS PHAM XUAN SINH
Người thầy hướng dẫn tận tâm, đã trực tiếp chỉ bảo tôi hồn thành khóa luận này
Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn:
PGS.TS CAO VĂN THU
Trưởng bộ môn Vĩnh sinh- Sinh học, Trường Đại học Dược Hà Nội
PGS.TS NGUYEN VIET THAN
Trưởng bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội
Đã giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình nghiên cứu,
làm việc tại cơ sở
Tôi cũng gửi lời cám ơn tới các thầy cô, các anh chị kĩ thuật viên bộ môn
Dược cô truyền, Dược liệu đã hết lòng chỉ bảo, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi
hồn thành khóa luận này
Cuối cùng tôi xin cảm ơn gia đình, bạn bè, những người luôn giúp đỡ ủng hộ tơi để có kết quả như ngày hôm nay
Vì sự hiểu biết và thời gian thực nghiệm có hạn nên khóa luận sẽ không
tránh khỏi những sai sót Tơi rất mong nhận được sự đóng góp của thầy cô,
bạn bè, đồng nghiệp đề khóa luận hồn thiện hơn
Xin chân thành cam on!
Hà Nội, tháng 5 năm 2010 Sinh viên
Trang 3MỤC LỤC
DAT VAN DE
Chương 1: Tổng quan
1.1 Vị thuốc Can khương
1.1.1 Dac điểm thực vật, phân bó, thu hái cây Gừng
1.1.2 Đặc điểm dược liệu
1.1.3 Đặc điểm bột Can khương 1.1.4 Đặc điểm vi phẫu
1.1.5 Thành phần hóa học
1.1.6 Tac dung sinh hoc
1.1.7 Công dụng và liều dùng
1.1.8 Một số phương thuốc chứa Can khương
1.2 Chế biến cỗ truyền và chế biến Can khương theo
phương pháp cô truyền
1.2.1 Mục đích của chế biến cỗ truyền
1.2.2 Các phương pháp chế biến cô truyền
1.2.3 Chế biến Can khương theo phương pháp cô truyền
Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
2.1 Nguyên liệu, phương tiện 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu
2.1.2 Phương tiện nghiên cứu
2.2 Phương pháp thực nghiệm
2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc
2.2.2 Chế biến Can khương theo một số phương pháp cỗ truyền
2.2.3 Nghiên cứu về hóa học
Trang 42.2.3.2 Định lượng tinh dầu
2.2.3.3 Sắc kí khối phổ tỉnh dầu
2.2.4 Xác định tro toàn phần
2.2.5 Thử tác dụng kháng khuẩn
Chương 3: Thực nghiệm, kết quả và bàn luận
3.1 Nghiên cứu tính đúng của vị thuốc 3.2 Chế biến cô truyền Can khương
3.3 Thành phần hóa học của CK trước và sau chế biến
3.3.1 Định tính
3.3.2 Định lượng tinh dau 3.3.3 Sắc kí khối phơ tinh dầu
3.4 Xác định độ tro toàn phần của 2 mẫu CKP và CKSC
3.5 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của 2 mẫu CKP và
CKSC
3.6 Bàn luận
KET LUAN VA KIÊN NGHỊ
1 Kết luận
2 Kiến nghị
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Trang 5SKLM CK CKP CKSV CKSC DDVN Gr(-) Gr(+) dd VSV GC MS
CHU THICH CHU VIET TAT Sắc kí lớp mỏng
Can khương Can khương phiến Can khương sao vàng Can khương sao cháy
Dược điển Việt Nam
Gram âm
Gram dương
Dung dịch
VỊ sinh vật
Trang 6DANH MUC BANG
Trang
Bang 3.1 Két qua ché bién Can khuong 21
Bảng 3.2 Kết quả định tính các nhóm chất trong 3 mẫu CK 27
Bảng 3.3 Kết quả SKLM của tỉnh dầu CK với hệ dung môi I 29
Bảng 3.4 Kết quả SKLM của tỉnh dầu CK với hệ dung môi 2 30
Bảng 3.5 Kết quả định lượng tỉnh dầu 3 mẫu CK 31
Bảng 3.6 Định lượng hàm ẩm bằng phương pháp cất với Toluen 31
Bảng 3.7 Kết qua sac ki khéi phé tinh dau CKP 33 Bảng 3.8 Kết qua sac ki khéi phé tinh dau CKSC 34
Bang 3.9 So sánh thành phần hóa học của 2 mẫu CKP và CKSC 35
Bảng 3.10 Kết quả độ tro toàn phần của 2 mẫu CKP va CKSC 36
Trang 7DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1 Cây Gừng
Hình 3.1 Can khương phiến
Hình 3.2 Vi phẫu thân rễ Can khương Hình 3.3 Đặc điểm bột Can khương
Hình 3.4 Các mẫu Can khương
Hình 3.5a, 3.5b, 3.5c Sắc kí đồ tỉnh dau 3
mẫu CK trên hệ dung mơi l
Hình 3.6a, 3.6b, 3.6c Sắc kí đồ tỉnh dầu 3
mẫu CK trên hệ dung mơi 2
Hình 3.7 Sắc kí đồ phân tích GC/MS mẫu
CKP
Hinh 3.8 Sắc kí đồ phân tích GC/MS mẫu
CKSC
Hình PL-I Vịng vơ khuẩn của Gen, CKP,
CKSC trên vi khuẩn Gr (+)
Trang 8DAT VAN DE
Đông dược đã có từ lâu đời, từ xa xưa con người đã biết sử dụng các loài cây cỏ với mục đích chữa bệnh Ngày nay Đơng dược ngày càng góp phần to lớn vào sự nghiệp chăm sóc sức khỏe nhân dân Nhân dân ta có nhiều kinh nghiệm trong việc sử dụng cây cỏ và chế biến cổ truyền để tăng tác dụng chữa bệnh, tuy nhiên cũng có những tác dụng mà chúng ta vẫn chưa có điều kiện đề hiểu biết hết Vì vậy cần tiền hành nghiên cứu về thành phần hóa học
của cây thuốc từ đó làm cơ sở để giải thích những tác dụng trong quá trình
điều trị
Can khương (Thân rễ Gừng khô) là vị thuốc rất quen thuộc được sử
dụng rộng rãi, chữa các chứng bệnh: Ăn khó tiêu, đau bụng do hàn, đầy hơi,
nôn ra máu Để góp phần giải thích tác dụng của Can Khương chúng tôi nghiên cứu đề tài: “ Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp chế biến cổ truyền đến thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của vị thuốc Can khương ” với những mục tiêu sau:
- - Xác định tính đúng của vi thuốc Can khương
- _ Tiến hành chế biến Can khương theo một số phương pháp cô truyền
Trang 9Chương 1: TÔNG QUAN
1.1.Vị thuốc Can khương (Rhizoma Zingiberis)
1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bó, thu hái cây Gừng Tén khoa hoe: Zingiber officinale Roscoe
Họ Gừng: Zingiberaceae
Hinh 1.1 Cay Girng
Cay thao, song nhiéu nam, cao 40 — 80cm Thân rễ nạc, mọc bò ngang,
phân nhiều nhánh Lá mọc so le thành hai dãy, hình mác thuôn, thắt lai ở gốc,
đầu lá nhọn, dài 15 — 20 cm, rộng 2 cm, khơng cuống, có bẹ nhẫn, lưỡi bẹ nhỏ
dạng màng, hai mặt nhẫn, mặt trên màu lục sẫm bóng, mặt dưới nhạt [7], [1 1],
[15] [18] [20]
Trang 10bắc hình trái xoan, màu lục nhạt, mép viền vàng Đài có 3 răng ngắn Tràng
có ống dài gấp đôi đài, 3 thùy bằng nhau, hẹp và nhọn 1 nhị, nhị lép khơng có
hoặc tạo thành thùy bên của cánh môi, cánh môi màu vàng, có vien tia ở mép,
dài 2 cm, rộng 1,Š cm, chia thành 3 thùy tròn, các thùy bên ngắn và hẹp hơn
bầu nhẫn Quả nang (rất ít gặp) [7] [L1], [15], [18], [20]
Toàn cây, nhất là thân rễ, có mùi thơm, vị cay nóng Mua hoa qua: Thang 5 — 8
Chi Zingiber Boehmer 6 chau Á có khoảng 45 lồi, trong đó Việt Nam co khoang 11 loai [7], [15],[20]
Gừng được trồng nhiều ở các nước trong vùng nhiệt đới và cận nhiệt
đới, từ Đông Á đến Đông Nam Á và Nam A Trung Quốc, Ân Độ, Nhật Bản
là những nước trồng nhiều gừng nhất thế giới [7], [11], [15], [18] [20] 1.1.2 Đặc điểm được liệu
Thân rễ Can khương (loại Gừng lâu năm càng tốt) có dạng ngón tay phang det, phan nhánh, có đốt rõ ràng; vỏ ngoài màu xám trắng hoặc xám vàng nhăn nheo Đỉnh có vết rễ và vết mầm, thể chất cứng giịn mặt cắt có
chất xơ Loại to, già, khô, củ chắc, vỏ sắc màu vàng nhạt, ít nhăn, sạch rễ con,
thịt trong vàng đậm là tót [9]
1.1.3 Đặc điểm bột Can khương
Mảnh mô mềm gồm những tế bào hình nhiều cạnh, rải rác có tế bào
chứa tỉnh đầu màu vàng nhạt Những hạt tinh bột hình trứng, có vân rõ Mảnh bần gồm các tế bào hình nhiều cạnh, màng hơi dày, màu vàng nhạt Sợi có
thành mỏng Mảnh mạch vạch, mạch vòng, mạch điểm [9]
1.1.4 Dac diém vi phau
Biéu bi gom một lớp tế bào nhỏ hình chữ nhật, xếp tương đối đều đặn
Trang 11những tế bào hình chữ nhật, xếp xuyên tâm và đồng tâm Mô mềm vỏ đạo
Phía trong lớp nội bì tạo thành vịng không liên tục, sát lớp nội bì là lớp trụ bì Các bó libe gỗ rải rác trong phần mô mềm vỏ và mô mềm ruột, tập trung
nhiều nhất ở sát lớp nội bì Mỗi bó hình trịn hay hình trứng có 1 đến 6 mạch gỗ ở giữa, libe chồng lên gỗ, rải rác có các mạch gỗ bị cắt dọc Những tế bào
tiết tỉnh dầu rải rác khắp mô mềm ruột và mô mềm vỏ [9]
1.1.5 Thành phần hóa học
Gừng chứa tinh đầu khoảng 2 — 3 % tinh dầu Thành phần chủ yêu của tinh dầu là các hợp chất hydrocarbon sesquiterpenic : B — Zingiberen ( 35 % ), ar - curcumenen ( 17 % ), B — farnesen (10 % ) và một lượng nhỏ các hợp chất alcol monoterpenic như geraniol, linalool, borneol [11], [15], [18], [20], [21],
[22]
(S)-Š-hydroxy- l-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-decanone ( gingerol) O
— HO
OCH;
(E)-1-(4-Hydroxy-3- methoxyphenyl)dec-4-en-3-one (shogarol)
| SQ HQ | A |
Trang 12Nhựa dầu gừng chứa 20 — 50 % tinh dau va 20 — 30 % các chất cay
Thành phần chủ yếu của nhóm chất cay là zingeron, shogaol và zingerol, trong đó zingerol chiếm tỉ lệ cao nhất Đó là chất lỏng màu vàng, tan trong
ethanol 50 %, ether, cloroform, benzen, tan vira trong ether dầu hỏa nóng
ngồi ra tinh dầu gừng còn chứa ơ — camphen, B — phelandren, eucalyptol va cac gingerol [11], [15], [18], [20], [21], [22] „CH; „CH; “CH, Camphen B — phelandren Eucalyptol 1.1.6 Tác dụng sinh học
Nước sắc thân rễ Can khương có tác dụng ức chế sự phát triển của các
vi khuan nhu: Staphylococcus aureus, Bacillus pumilus, Bacillus Subtilis, Bacillus cereus, Proteus mirabilis {1], [15], [20]
Trang 131.1.7 Công dụng và liều dùng [1], [9] [15] [18] [20] [22]
Tính vị: vị cay, tính nóng
Qui kinh: Vào kinh Tỳ, Vị, Tâm và Phé
Tác dụng: làm âm Tỳ và Vị, trừ hàn Phòng dương suy, làm âm phê và trừ
đàm thấp
Hàn thâm nhập tỳ và vi biêu hiện như đau lạnh ở thượng vị và bụng,
nôn và ỉa chảy: Dùng Can khương phối hợp Ngô thù du và Bán hạ
Ty, Vi yêu và hàn biêu hiện như đây và chứng thượng vị và vùng bụng,
buôn nôn, nôn, phân lỏng, kém ăn, mệt mỏi và mạch yêu, suy: Dùng Can
khương phối hợp Bạch truật, Phục linh trong bài Lý Trung Hoàn
Dương suy biêu hiện như ra mồ hôi lạnh, các đầu chỉ lạnh, ra mồ hôi trộm, mạch chậm và yếu: Dùng Can khương Phối hợp Phụ tử trong bài Tứ
Nghịch Thang
Phế có đờm dạng hàn, biểu hiện như nghiến răng, hen, ho có đờm trong
hoặc nhiều và cảm giác lạnh ở lưng phía trên: Dùng Can khương Phối hợp Ma hoàng, Tế tân và Bán hạ trong bài Tiêu Thanh Long Thang
Liều dùng: 3-10 ø
Kiêng ky: Thận trọng khi dùng Can khương cho thai phụ [1], [9], [15], [18],
[20], [22]
Trang 14Can khương 9g Cam thảo 62g Ngũ vị tử 62g Phuc linh l2¢g Té tan 62 Céng nang: On phé hóa ẩm
Chủ trị: Âm lạnh chứa bên trong, ho nhiều đờm sắc trắng trong loãng,
ngực và vùng cơ hồnh khó chịu, rêu lưỡi trắng trơn, mạch huyền hoạt
[19]
e Tiểu thanh long thang
Can khương 4g Thược dược 6g
Tế tân 4g Ma hoàng 12g
Chích thảo 4g Quế chỉ 4g
Bán hạ 12g Ngũ vị tử 2g
Công năng: Giải biểu trừ âm, giảm ho bình suyễn
Chu tri: Phong han khách biéu, thuy am dong trong co thể, sốt ớn rét,
không ra mồ hôi, ho suyễn, đờm nhiều mà loãng, hoặc đàm âm ho suyễn,
than thé dau dan, đầu mặt chân tay đau phù [19]
e Ôn tỳ thang Can khương 6g Phụ tử ( chế ) 9ø Đại hoàng 12g Nhân sâm 6g Cam thao 6g
Cơng năng: Ơn bồ tỳ đương, công trục lạnh tích
Trang 15e Tam vat bi cap hoan
Can khuong 40 g
Ba đậu 40 g
Đại hoàng 40 g
Công năng: Tống khứ hàn tích
Chủ trị: Thực hàn tích lạnh, đau như kim đâm, thở gấp miệng không mở
được, đại tiện bất thông, rêu lưỡi trăng trơn đục nhờn, mạch tram khan
[19]
e Tứ nghịch thang
Can khương 12g
Cam thảo lóg
Phụ tử 20g
Công năng: Hồi dương cứu nghịch
Chủ trị: Tứ chỉ quyết nghịch, sợ lạnh, nôn mửa, đau bụng khơng đi ngồi, tinh thần suy nhược, mồ hôi nhiều, đi tả nhiều dẫn tới vong dương [19] 1.2 Chế biến cỗ truyền và chế biến Can khương theo phương pháp cô
truyền [16]
1.2.1 Mục đích của chế biến cô truyền
Chế biến cô truyền nhằm các mục đích sau :
+ Làm sạch vị thuốc
+ Tăng hiệu lực điều trị bệnh
+ Làm thay đối tính vị của thuốc từ đó tạo ra tác dụng điều trị mới
+ Giảm độc tính của thuốc, giảm tác dụng không mong muốn
+ Ôn định thành phần hóa học, góp phần bảo quản thuốc tốt
Trang 16+ Giảm tính bền vững cơ học, tăng khả năng giải phóng dược chất do đó
làm tăng hiệu lực thuốc trực tiếp hay gián tiếp qua các phụ liệu trung gian với
mức nhiệt độ khác nhau [1], [2] [16]
1.2.2 Các phương pháp chế biến cỗ truyền
Trong khóa luận này chỉ trình bày các phương pháp có liên quan đến đề tài
1.2.2.1 Phương pháp hỏa chế
Là phương pháp sử dụng sự tác động của nhiệt độ trực tiếp hay gián
tiếp (qua phụ liệu trung gian) ở các mức nhiệt khác nhau
Mục đích: Tăng tính ấm giảm tính hàn của vi thuốc
e Sao
- Sao trực tiếp : Là phương pháp sao mà lửa được truyền trực tiếp qua dụng Cụ Sao
+ VỊ sao (sao qua) : Nhiệt độ sao khoảng 50-80°C, có màu sắc dược liệu ít thay đổi so với dược liệu trước khi chế, mục đích đề làm khô dược liệu, diệt nắm mốc sâu mọt, làm cho vị thuốc trở nên thơm, gop phan ồn định hoạt chất
có trong vị thuốc
+ Sao vàng : Nhiệt độ sao khoảng 100-140 °C, mau sac được liệu thường
vàng, bên trong có màu của dược liệu sống Mục đích tăng tác dụng quy tỳ, tăng mùi thơm của vị thuốc
+ Ngồi ra cịn có sao vàng hạ thổ, sao vàng xém cạnh, sao đen, sao cháy -_ Sao gián tiếp: Là phương pháp sao mà lửa được truyền gián tiếp qua
phụ liệu trung gian Các phụ liệu trung gian hay dùng là: cám, cát, gạo,
hoạt thạch, văn cát .[1], [2], [10], [13], [16]
Trang 1710
1.2.2.2 Phương pháp thủy chế
Là phương pháp chế biến sử dụng các tác động của nước hoặc dịch phụ liệu ở những mức độ nhiệt khác nhau trong những điều kiện nhiệt độ tự nhiên
nhằm đáp ứng các mục đích khác nhau
+U: Dùng nước hay dịch phụ liệu tâm vào vị thuốc vài giờ đến vài ngày, đến khi đạt yêu cầu kĩ thuật riêng Với mục đích: Tăng tác dụng trị bệnh nhờ
tác dụng hiệp đồng giữa thuốc với phụ liệu, giảm độc tính, giảm tác dụng phụ
hay thay đổi tác dụng theo chiều hướng có lợi cho mục đích điều trị, làm mềm
vị thuốc thuận lợi cho việc phân chia thuốc
Ngoài ra cịn có các phương pháp thủy chế khác là ngâm, tây, rửa, thủy phi .[1], [2], [10], [13] [16]
1.2.3.3 Phương pháp thủy hỏa chế kết hợp
Là phương pháp chế biến phối hợp nước — lửa, sử dụng sự tác động của
nước ở nhiệt độ cao hơn bình thường a) Chích:
Là phương pháp tâm vào vị thuốc một hay nhiều loại dịch phụ liệu, ủ
đến khi thấm đều thì sao hoặc nướng Tùy vào mục đích điều trị mà sử dụng các dịch phụ liệu khác nhau
- Chích mật:
- Chích muối: .[1], [2] [10] [13] [16]
b) Chưng:
Dun cach thuy vi thuốc với nước hay dịch phụ liệu Mục đích là để
chuyền hóa thuốc trong điều kiện nhiệt độ cao khoảng 100 °C hoặc làm giảm
tác dụng bat lợi của vị thuốc
Trang 1811
1.2.3 Chế biến Can Khương theo phương pháp cỗ truyền
- Gừng tươi đem sấy khô thái phiến hoặc Gừng tươi rửa sạch để ráo nước rồi
thái thành phiến mỏng đem phơi khô
- Sao vàng: Đem Can khương sao đến khi dược liệu có màu vàng bên ngồi, bên trong có màu được liệu sống, thì đồ ra tãi mỏng cho nguội [1 6]
- Sao cháy: Đem Can khương cho vào chảo được đun nóng già, đảo thật đều tới khi toàn bộ mặt ngồi của phiến có mâu đen, bên trong có mâu nâu Đỗ
ra, tai mỏng đề tránh bị cháy [16]
- Sao với đất: Lấy đất mịn, sao nóng già đỗ Can khương phiến vào, sao đến
khi phông lên là được Sàng bỏ đất [16]
- Sao với cám: Cho cám gạo vào sao nóng già đến khi bốc khói, đỗ Can khương vào, sao đến khi có màu vàng nhạt, sàng bỏ cám đi là được
- Can khuong tam mat: Dem mat ong đun đến khi sủi bọt và có màu vàng đậm, đỗ Can khương phiến vào, tiếp tục sao đến khi có màu vàng, sờ khơng dính tay là được Đến giai đoạn này có thể phun ít nước, rồi lại sao tiếp, đến khi có màu vàng đậm [ 1ó]
Trang 19Chương 2 : ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Nguyên liệu, phương tiện 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu
- Thân rễ Can khuong (Rhizoma Zingiberis) - Các mẫu Can khương chế biến:
+ Can khương phiến + Can khương sao vàng + Can khương sao cháy
- Tinh dầu Can khương trước và sau chế 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu
2.1.2.1 Thiết bị thí nghiệm
- Cân phân tích
- Bộ dụng cụ cất tỉnh dầu nhẹ hơn nước bằng cất kéo hơi nước
- Bộ dụng cụ định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với dung môi
- Máy ảnh Canon
- Kính hiển vi LABOMED
- May sac ki khi GCMS — QP 2010 cua SHIMADZU
- Dụng cụ phun thuốc thử hiện màu sắc kí
- Tủ sây Memmert
- Chảo gang, xoong nhôm
- Nồi hấp tiệt trùng
- Các dụng cụ đo lường đạt tiêu chuẩn kiểm định
2.1.2.2 Dung mơi và hóa chất
- Hóa chất và thuốc thử đạt tiêu chuẩn phân tích của DĐVN IV
+ Nuéc cat, Ethanol 96 %, Toluen, Ether dầu hỏa, Ethyl acetat + Acid Sulfuric đặc, NaOH 0,1N, KOH 0,1N, NH, đặc
Trang 2013
- Dung mơi hóa chất thử tác dụng kháng khuẩn:
+ 10 vi khẩn kiểm định: 5 vi khẩn Gram (-), 5 vi khuẩn Gram (+)
+ Gentamycin
- Dung mơi hóa chất chạy sắc kí khí: n - hexan 2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Xác định tính đúng của vị thuốc
- Mô tả đặc điểm dược liệu
- Nghiên cứu đặc điểm vi học: Làm vi phẫu cắt ngang thân rễ củ Gừng, nhuộm kép rồi soi, soi bột thân rễ Can khương theo các phương pháp ghi trong tai liéu [5], [8], [17]
Căn cứ theo tiêu chuẩn của DĐVN IV về mô tả đặc điểm vị thuốc, đặc điểm vi phẫu và đặc điểm bột đề khảo sát
2.2.2 Chế biến Can Khương theo một số phương pháp cỗ truyền
Có nhiều phương pháp chế biến Can khương như sao vàng, sao cháy, chế với muối ăn, tâm mật Nhưng trong khóa luận này chỉ chọn các phương pháp đơn giản nhất đó là: Sao vàng, sao cháy, là những phương pháp được
ứng dụng ở thực tế nhiều nhất
2.2.3.Nghiên cứu về hóa học 2.2.3.1.Định tính
e Định tính các thành phần trong gừng trước và sau chế biến tiến hành
theo các phương pháp hóa học thường quy [4], [6], [12]
e©_ Định tính tỉnh dầu gừng trước và sau chế bằng phương pháp SKLM:
+ Chuẩn bị dịch chấm sac ki: Tinh dau Can khuong trước và sau chế biến
được làm khan bằng Natri Sulfat khan
+ Chất hấp phụ: Bản mỏng bằng nhôm tráng sẵn silicagel GF 254 của Merck
được hoạt hóa ở I 10 °C/ lh
Trang 2114
Hệ I : ether dầu hỏa : ethyl acetat = ( 95 : 5 ) Hệ 2 : n-hexan : ethyl acetat = (85 : 15 )
+ Hiện màu :- Soi dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 365 nm
- Thuốc thử : Phun dd Valinin 2 %/ ethanol 96 %/ H;SO¿
2.2.3.2 Định lượng tỉnh dầu:
Bằng phương pháp cất kéo hơi nước, áp dụng đối với tỉnh dầu nhẹ hơn nước (Phụ lục 12.7 DĐVN IV) [9] Khối lượng mỗi mẫu định lượng là 20 g, làm 3 lần, lấy kết quả trung bình
Song song tiễn hành định lượng hàm âm bằng phương pháp cất với
dung môi (Phụ lục 12.13 DĐVN TV) [9]: Cho khoảng 200ml Toluen và 2 — 3
mÌ nước cất vào bình cầu 500ml, cất đến khi thể tích nước thu được không
đối, cất tiếp khoảng 2h, để nguội khoảng 30 phút, đọc kết quả (,) Lấy m (g)
được liệu chứa khoảng 2 — 3 ml nước, cho tiếp vào bình cùng vài viên đá bọt,
đun nóng nhẹ 15 phút, đến khi Toluen sơi thì điều chỉnh nhiệt độ, sao cho tốc độ khoảng 2 giọt dịch/1 giây Khi được nhiều nước, điều chỉnh nhiệt sao cho tốc độ 4 giọt dịch / 1 giây Cất tiếp cho đến khi thể tích nước khơng đôi Cho
5 — 10 ml Toluen rửa ống sinh hàn, để kéo hết nước xuống Cất thêm 5 phút
nữa Tách toàn bộ dụng cụ ra khỏi nguồn nhiệt, để nguội đến nhiệt độ phòng
Đến khi nước và Toluen tách hoàn toàn, đọc kết quả (, ) Mỗi mẫu tiến hành 3 lần, lấy kết quả trung bình
Hàm lượng tỉnh dầu tính theo cơng thức:
X(%) = — 10!
X: Hàm lượng tỉnh dầu trong dược liệu (%)
V: Thẻ tích tinh dau (ml)
m: Khối lượng dược liệu đem định lượng (ø)
Trang 2215
Kết quả được tính theo phương pháp thống kê đề tính hàm lượng trung
bình ( X ), độ lệch chuẩn (s), khoảng tin cậy (u), với độ tin cậy 95 % [14]
Hàm ẩm của dược liệu tính theo công thức:
= 471 x10
m
p: Độ âm của được liệu (%)
V,: Thể tích nước đo lần thứ nhất (ml) ,: Thể tích nước đo lần 2 (ml)
m: Khối lượng dược liệu đem xác định hàm am (g)
2.2.3.3 Sắc kí khí khối phố tinh dầu
Tiến hành với hai mẫu tỉnh dầu Can khương phiến và Can khương chế
2.2.4 Xác định tro toàn phần
Tiến hành với hai mẫu Can Khương phiến và Can Khương chế theo phụ lục 9.8, phương pháp 1, DĐVN IV Độ tro toàn phần được tính theo cơng thức:
T(%) = " x 100
my
Trong do: T: Độ tro toàn phần của được liệu (%) m,: Khối lượng tro thu được (g)
m,: khối lượng dược liệu đã làm khô trong không khí (g)
2.2.5 Thử tác dụng kháng khuẩn
Thực hiện trên hai mẫu Can Khương phiến và Can Khương sao cháy
Thử hoạt tính trên 10 vi khuẩn: 5 chủng Gram (-) và 5 chủng Gram (+) - Vi khuẩn Gram (-):
Shigella flexneri DT 112 (Shi)
Salmonella typhi DT 220 ( Sal)
Trang 2316
Escherichia coli ATCC 25992 Proteus mirabilis BV 108
- Vi khuan Gram (+):
Staphylococcus aureus ATCC 1128 Bacillus pumilus ATCC 1024]
Bacillus subtilis ATCC 6633 Bacillus cereus ATCC 9946 Sarcina lutea ATCC 9341
(EC) ( Pro) ( Sta ) (Bp ) (Bs ) (Be ) ( Sar )
- Phuong pháp thử: (Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán)
- Đánh giá kết quả: Dựa trên đường kính vịng vơ khuẩn và được đánh giá theo công thức: _ »P, p= 1 S H H > (p, -D} i=] n-l
D: Đường kính trung bình vịng vô khuẩn (mm)
D,: Đường kính vịng vơ khuẩn (mm)
Trang 2417
Chương 3: THỰC NGHIỆM, KÉT QUÁ VÀ BÀN LUẬN
3.1 Nghiên cứu tính đúng của vị thuốc
- Mô tả đặc điểm dược liệu Can Khương:
Can khương là những phiến dài 3-5 cm, dày 3-5 mm, mặt ngoài có màu hơi vàng, nhắm có vị cay, thơm mùi gừng (Hình 3.1)
Hình 3.1: Can khương
- Mô tả đặc điểm vỉ phẫu can khương:
Vi phẫu thân rễ Gừng bao gồm: (1) Biểu bì là một lớp tế bào hình chữ nhật,
nhỏ xếp tương đối đều đặn (2) Mô mềm vỏ là 5 - 6 lớp tế bào hơi đẹp, vách tâm chất gỗ, nằm dưới biểu bì (3) Mơ mềm tủy là những tế bào hình trịn, to hơn tế bào mô mềm vỏ (4) Trụ bì gồm 1 lớp tế bào kích thước khơng đều, có xu hướng bị ép đẹp bởi các bó libe gỗ nằm gần đó, vịng nội bì và trụ bì gần
như liên tục (5) Bó libe gỗ tập trung thành 1 vòng sát trụ bì và rải rác khắp
mô mềm vỏ và mô mềm ruột, mỗi bó có 1-6 mạch gỗ, lib công lo gỗ (6)
Tế bào tiết chứa tỉnh dầu màu vàng tươi rất nhiều trong mô mềm vỏ và mô
là \
t
mềm ruộ te (
Trang 2518 I- Biểu bì 2- Mô mềm vỏ 3- Mô mẻm ruột 4- Nội bì 5- Bó libe - gỗ Tế bào tiết
Hình 3.2: Vi phẫu thân rỄ Can khương - _ Mô tả đặc điểm bột Can Khương
Bột thân rễ màu nâu vàng, mùi thơm, vị cay Gồm có các thành phần sau:
mảnh bần màu vàng nâu, gồm nhiều tế bào vách hơi dày Mảnh mô mềm (1)
gồm những tế bào hình đa giác, rải rác có chứa tế bào tiết tỉnh dầu (2) màu
vàng nhạt hoặc tỉnh bột (3) Tỉnh bột hình trứng, có vân rõ Sợi có vách mỏng,
Trang 2619
4 5
1 Mảnh mô mềm 4 Mạch vạch
2 Tế bào chứa tinh dầu 5 Mạch vòng
3 Tế bào chứa tinh bột
Hình 3.3: Đặc điểm bột Can khương
Nhận xét: Qua phần mô tả về đặc điểm vị thuốc Can khương, đặc điểm vi phẫu và bột dược liệu, thấy rằng vị thuốc Can khương mà khóa luận nghiên
cứu giống với Vị thuốc Can khương mà DĐVN IV mô tả có tên khoa học là Rhizoma Zingiberis
3.2 Chế biến cỗ truyền Can khương
Trang 2720
- Sao cháy: Đem khoảng 1000 g Can khương cho vào chảo được đun nóng
già, đảo thật đều tới khi toàn bộ mặt ngồi của phiến có mâu đen, có mùi cháy, bên trong có mâu nâu Đổ ra, tãi mỏng đề tránh bị cháy
Kết quả sau khi chế biến được trình bày ở hình 3.4
3
Hình 3.4: Các mẫu Can khương chế
Trang 2821
Bang 3.1: Hiệu suất chế biến Can khương
Mẫu Can khương | Màu sắc, mùi | Khôi lượng | Hiệu suat
(g) vi saukhiché | (%) bién (g) CKSV 1000 Mau vang, 822,43 82,24 mui thom CKSC 1000 Mau den, có 799.07 79,91 mui chay
Nhận xét: Can khương chế biến là những phiến mỏng có kích thước từ 3 — 5 cm, day 3 — 5 mm, mặt ngồi phiến có màu hơi vàng ( CKSV ), màu đen (
CKSC ), nhắm có vị cay, thơm mùi gừng CKSV có hiệu suất 82,24 %, CKSC
có hiệu suất 79,90 %
3.3 Thành phần hóa học của Can khương trước và sau chế biến 3.3.1 Định tính
e Phan ứng hóa học
Tiến hành song song 3 mẫu Can Khương trước và sau chế biến, cụ thể:
3.3.1.1 Dinh tinh alcaloid:
Cho khoảng 10 g Can khuong vao binh nén dung tich 100 ml, tham âm
bang dung dich NH, OH dam đặc Sau đó ngâm lạnh với 50 ml chloroform
trong 24h Lấy dịch chiết chloroform cho vào bình gạn, thêm khoảng 5 ml
dung dịch H;SO¿ 1N, lắc kĩ, gạn lấy dịch chiết acid để làm các phản ứng với
thuốc thử chung alcaloid
- Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 - 3 giọt thuốc thử
Trang 29- Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer,
không thấy xuất hiện kết tủa vàng Phản ứng âm tính
- Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 - 3 giọt thuốc thử
Bouchardat, không thấy kết tủa màu nâu Phản ứng âm tính
3.3.1.2 Định tính anthranoid
Lấy khoảng 2 g bột Can khương cho vào ống nghiệm, thêm 10 ml dung
dich H,SO, IN Dun s6i tru tiép 10 phút Đề nguội, lọc Cho dịch lọc vào
bình gạn dung tích 100ml Thêm khoảng 10 ml chloroform vào, lắc nhẹ Gạn bó lớp nước lấy lớp chloroform làm phản ứng Borntraeger Cho Iml dich chiét chloroform vào ống nghiệm nhỏ, thêm 1ml dung dich NH, OH 10 % vào, lắc nhẹ, không thấy lớp nước có màu hồng Phản ứng âm tính
3.3.1.3 Dinh tinh Saponin:
2 g mau thtr dun s6i trong 20 mÌ nước trong 30 phút Lấy 10 ml dich lọc lắc mạnh trong ống nghiệm 20 ml trong 10 phút, để yên 1 phút Trong ống
nghiệm có cột bọt bên ( Phản ứng dương tính)
Sơ bộ kết luận dược liệu có thê chứa saponin
Phan biét saponin steroid va saponin triterpen:
10 g mau thử chiết bằng Ethanol 90 % Dịch chiết được cho vào 2 ống nghiệm to có kích thước bằng nhau, cho vào ống thứ nhất 5ml NaOH 0,I1N
(pH=13), ống thứ hai 5 ml HCI 0,1N (pH=I) Thêm vào mỗi ống 1 ml dịch
chiết, lắc trong 10 phút Kết quả: hai ống có cột bọt cao bằng nhau Như vậy
sơ bộ kết luận dược liệu có thể chứa saponin triterpen
3.3.1.4 Dinh tinh glycosid tim:
Cho vào bình nón dung tích 100 ml khoảng 10 g bột Can khương ,
thêm 100 ml Ethanol 25 %, ngâm 24h Gạn lấy dịch chiết Loại tạp bằng chì acetat 30 % dư Lọc bỏ tủa, dịch lọc cho vào bình gạn và lắc kĩ 3 lần
Trang 3023
thủy tỉnh Bốc hơi cách thủy đến khơ Cắn được hịa tan bằng Ethanol 90
%„ dùng dịch chiết cồn làm các phản ứng định tính sau
- Phan img Legal: Cho Iml dich chiét vao ống nghiệm, thêm vài giọt dung dich Natri Nitroprusiat | % và nhỏ vài giọt dung dịch NaOH
10 %, lắc, thấy xuất hiện màu đỏ thẫm Phản ứng dương tính
- Phản ứng Baljet: Cho 1ml dịch chiết vào ông nghiệm, thêm 0,5 ml thuốc thử Baljet ( 1 phần acid pieric 1 % và 9 phần dung dịch NaOH
10 % ) thấy xuất hiện màu vàng chanh Phản ứng dương tính
- Phan img Liebermann: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, cô cách thủy đến khổ Hòa tan căn bằng 1 ml anhydrite acetic Dat nghiéng thành ống nghiệm 45°, cho thêm lượng acid sulfrie đặc ( TT ) theo
thành ống đề dịch trong ống nghiệm được chia tay thành 2 lớp Giữa 2 lớp có xuất hiện vịng tím đỏ Phản ứng dương tính
- Phản ứng Keller kiliani: Cho 1ml dịch chiết vào ông nghiệm, cô cách thủy đến khơ Hịa tan cắn bằng Iml Ethanol 90 % Thêm vài giọt dung dịch FeCl, 5 % trong acid acetic Lắc đều, để nghiêng ống
nghiệm 45°, thêm từ từ đồng lượng H;SO; đặc theo thành ống để dịch
trong ống được chia thành 2 lớp Giữa 2 lớp có xuất hiện vịng đỏ tím Phản ứng dương tính
3.3.1.5 Dinh tinh acid amin:
Cho 2 g bột Can khuong vào ông nghiệm to, thêm 10 ml nước cất đun sôi 5 phút Lọc nóng, lấy 2ml dịch lọc cho vào 1 ống nghiệm, thêm 3 giọt
thuốc thử Ninhydrin 3 % đun cách thủy sôi 10 phút, không thấy dịch chiết trong ông nghiệm có màu tím Phản ứng âm tính
3.3.1.6 Định tính chất béo, caroten
Trang 3124
-_ Định tính chất béo: Nhỏ I1 giọt dịch chiết lên mảnh giấy lọc, sau khi
bay hơi tự nhiên, thay dé lai vết mờ trên giấy lọc Kết quả dương tính
-_ Định tính caroten: Cô 5ml dịch chiết tới cắn Thêm 1-2 giọt H;ạSO¿
đặc không thấy xuất hiện màu xanh Phản ứng âm tính
3.3.1.7 Định tính tanin
Cho khoảng 1 g bột Can khương vào ống nghiệm, thêm 10 ml nước cất, đun sôi trực tiếp vài phút Lọc qua giấy lọc gấp nếp Lấy dịch lọc làm phản
ứng
-_ Phản ứng với dd Chì acetat: Cho 1 ml dịch lọc vào ống nghiệm thêm vài giọt dd Pb (CH,COO), 10 %, thấy xuất hiện tủa bông trắng Phản
ứng dương tính
- _ Phản ứng với dd FeCl,: Cho vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd FeCl,
5% không thấy xuất hiện tủa màu xanh rêu Phản ứng âm tính
- Phan tmg voi dd gelatin 1 % : Cho 1ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd gelatin 1 %, không thấy xuất hiện tủa bông trắng
Phản ứng âm tính
3.3.1.8 Dinh tinh phytosterol
Cho vào ống nghiệm I ml dich chiét Ether dầu hỏa ở trên, bốc hơi dung
môi đến khô Thêm vào ống nghiệm Iml anhydrite acetic, lắc kĩ, để nghiêng
ống nghiệm 45° rồi thém Iml H,SO, dac theo thanh ống nghiệm Quan sát thấy giữa 2 lớp chất lỏng có vịng nâu đỏ Phản ứng dương tính
3.3.1.9 Định tính acid hữu cơ
Cho khoảng 1 g bột Can khương vào ống nghiệm, thêm nước cất, đun
SÔI trực tiếp trong vài phút, để nguội, lọc Thêm vào dịch lọc I1 ít bột Natri
Carbonat, khơng thấy có bọt khí CO, Phản ứng âm tính
Trang 32Lấy 5 g bột Can khương, chiết nóng bằng 30 ml Ethanol 90 %, lọc lấy
dịch lọc trong đề làm các phản ứng định tính
- Phản ứng mở vịng và đóng vịng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm mỗi
ống 1 ml dịch chiết Thêm vào ống thứ nhất 0,5 ml dd NaOH 10 %,
ống thứ 2 để nguyên Đun nóng cách thủy cả 2 ống nghiệm đến sôi, đê nguội rồi quan sát:
+ Ơng 1: Có tủa đục màu vàng nâu + Ống 2 : Trong
Thêm cả 2 ống Iml nước cất Lắc đều, quan sát:
+ Ông 1: Trong
+ Ông 2: Có tủa đục
Thêm vào ống 1 vài giọt acid lại trở nên đục như ống 2 Phản ứng dương tính
-_ Soi huỳnh quang: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc, hơ cho khô, sau đó nhỏ 1 giọt NaOH 5 %, sấy nhẹ Soi dưới ánh sáng tử ngoại, quan sát thấy có màu hơng Phản ứng âm tính
- Phản ứng Diazo hóa: Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 ml
dd NaOH 10 % Dun séi cach thủy vài phút Lấy ra đề nguội rồi thêm
vài giọt thuốc thử Diazo Không thấy có màu đỏ gạch Phản ứng âm tính
3.3.1.11 Định tính đường khử
Cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết nước, thêm vào 0,5 ml thuốc thử
Feling A và 0,5 ml thuốc thử Feling B Đun cách thủy vài phút thấy xuất hiện
tủa đỏ gạch Phản ứng dương tính 3.3.1.12 Dinh tinh flavonoid
Trang 3326
- Phản ứng Cyanidin: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm ít bột Mg
kim loại và vài giọt HC] đặc rồi đun cách thủy, khoảng vài phút sau xuất hiện
màu đồ cam Phản ứng dương tính
- Phan tmg voi dung dich FeCl, 5 %: Cho vao ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài giọt dd FeCl, 5 %, xuất hiện tủa màu xanh rêu Phản ứng dương
tính
- Phản ứng với NH,: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên giấy lọc, để khô rồi hơ lên
miệng lọ NH, đặc, thấy màu vàng đậm hơn lên Phản ứng dương tính
- Phản ứng với dd NaOH: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài giọt dd NaOH 10 %, thấy xuất hiện tủa màu nâu Phản ứng dương tính
3.3.1.13 Tinh dau
Cắt tỉnh dầu Can Khương bằng phương pháp cất kéo hơi nước, áp dụng với tỉnh dầu nhẹ hơn nước theo DĐVN IV Các mẫu đều cho tinh dau trong suốt, sánh mùi thơm, mẫu tỉnh dầu của Can Khương phiến có màu vàng nhạt, mâu tinh dâu của Can Khương sao vàng và sao cháy có màu vàng đậm hơn
Trang 3427
Bảng 3.2: Kết quả định tính các nhóm chất trong 3 mẫu CK
STT | Tên nhóm Phản ứng Kết quả | Kết luận
chất
l Alcaloid Thuốc thử Dragendoff - Khong
Thuốc thử Mayer -
Thuốc thử Bouchardat ˆ
2 Anthranoid | Phản ứng Borntraeger - Khong
3 Saponin Hién tugng tao bot ++ Co Phản ứng tạo bọt phân biệt +
saponin steroid va saponin
triterpen
4 Glycosis tim | Phan tmg Legal +4 Có
Phản ứng Baljet ++
Phan tng Liebermann r+
Phan tng Keller- Kiliani +++
5 | Tinh dâu Cat kéo bang hoi nuéc ti Có
6 Tanin Phản ứng với Chì acetat +++ Có
Phản ứng với FeCl, 5% +
Phản ứng với dd gelatin 2
7 Coumarin Phản ứng mở, đóng vịng + Khơng
lacton :
Soi huỳnh quang -
Phản ứng Diazo hóa ˆ
8 | Chất béo Vết mờ trên giây + Có
9 Caroten Phản ứng với H, SO, đặc - Không
10 | Acid httuco | Phản ứng với bột Na, CO, - Không
II |Phytosterol | Phan tng Liebermann +++ Có
I2 | Đường khử | Phản ứng với thuốc thử +++ Có
Fehling
I3 |Acidamin | Thuốc thử Ninhydrin 3 % ˆ Không
I4 | Flavonoid Phản ứng với Cyanidin + Có
Phản ứng với FeC], 5 % +
Phản ứng với hơi NH, +++
pete
Phản ứng với NaOH
Trang 3528
Ghi chú: +++ Phản ứng dương tính rất rõ + Phản ứng đương tính
++_ Phản ứng dương tính rõ - Phản ứng âm tính
Nhận xét: Bảng 3.2 cho thấy trong Can khương có 8 nhóm chất: Tinh dầu,
Flavonoid, Tanin, chất béo, Phytosterol, Glycosid tim, Saponin, Đường khử,
trong đó có những nhóm chất chưa được tài liệu thamn khảo nào nhắc đến nhu: Flavonoid, Glycosid tim, Saponin
e Sắc kí lớp mỏng tỉnh dầu
Tiến hành với 3 mẫu Can Khương : CKP, CKSV, CKSC như mục 2.2.3
- Chấm riêng biệt lên bản mỏng, mỗi mẫu 2 ul tỉnh dầu Can khương trước và sau chế, sau khi khai triển với hệ dung môi ( mục 2.2.3.1 ), lấy ra dé khơ bản sắc kí ở nhiệt độ phòng rồi soi đưới đèn tử ngoại bước sóng 365 nm Sau đó
phun dung dịch hiện màu, để khô bản mỏng rồi đặt vào tủ sấy có nhiệt độ
khoảng 70 °C khoảng vài phút Quan sát các vết xuất hiện và tính gid tri Rf
Trang 3629
+ Hệ dung môi 1: Ether dầu hỏa — Ethylacetat = (95 : 5)
Hình 3.5a 1: CKP 1 3 Hinh 3.5b 2: CKSV l Hình 3.5c 3:CKSC 2
Bảng 3.3: Kết quả SKLM của tỉnh dau Can Khương với hệ dung môi I
STT vêt CKP CKSV CKSC
Rfl00 |Mâusắc |Rf100 |Mâusặắc |Rf.100 | Mau sac
1 29,5 Xám 29,5 Xám 29,5 Xám
2 36,8 Đỏ 36,8 Đỏ 36,8 Đỏ
3 46,3 Xanh la _ | 46,3 Xanh la_ | 46,3 Xanh la
cay cay cay
4 526 Vàng 526 Vàng 526 Vàng
5 558 Cam 558 Cam 55,8 Cam
6 61.1 Xanh 61.1 Xanh 61.1 Xanh
7 70,5 Xanh tim | 70,5 Xanh tim | 70,5 Xanh tim 8 89,5 Dotim | 89,5 Dotim | 89,5 Đỏ tím
Trang 3730
+ Hệ dung môi 2 : n-Hexan : Etyl acetat = (85 : 15)
l x 3 1 3 1 2
Hinh 3.6a Hinh 3.6b Hinh 3.6c
Bảng 3.4: Kết quả SKLM của tỉnh dầu Gừng trên hệ dung môi 2
STT vết CKP CKSV CKSC
Rf100 |Mausac |Rfl100|Mâusắăc |Rf100 | Mẫu sắc 1 33,1 Hong 331 | Hong 33,1 | Hong 2 42,3 Xam 42,3 | Xam 42.3 | Xam 3 45.4 Đỏ tím 45.4 |Đỏtím 45.4 | Đỏtím
4 50.8 Đỏ 508 |Đỏ 50.8 | Do
5 57,7 Vang 577 | Vàng 577 | Vàng
chanh chanh chanh
6 64,6 Hồng 64,6 | Hồng 64,6 | Hồng
7 71,5 Cam 71,5 |Cam 71,5 | Cam
8 79,2 Xanh 79,2 | Xanh 79,2 |Xanh 9 88,5 Đỏ tím 88,5 | Dotim 88,5 | Dotim
Trang 38Nhận xét: Qua SKLM trên hai hệ dung môi khác nhau, các hợp chất trong tỉnh dầu ở các mẫu trước và sau chế hầu như khơng có sự thay đổi Với hệ dung môi 1, cho khoảng 8 vết, với hệ dung môi 2 cho khoảng 9 vết Cả 2 hệ dung môi đều cho các vết với Rf và màu sắc tương tự nhau
3.3.2 Định lượng tỉnh dầu
Cân chính xác khoảng 20 gam dược liệu của 3 mẫu Can khương trước và sau chế cho vào bình cầu có thể tích 500 ml, thêm vào 200 ml nước cắt, lắp
ống hứng tỉnh dầu và sinh hàn ngược, tiến hành định lượng đến khi thê tích
tinh dầu khơng đổi, để nguội Đọc thể tích tỉnh dầu thu được Mỗi mẫu tiến hành định lượng 3 lần, rôi lấy kết quả trung bình
Song song xác định hàm ẩm của 3 mẫu Can khương bằng phương pháp cất dung môi theo mục 2.2.3.2
Kết quả thu được theo bảng 3.5 và 3.6
Bảng 3.5 Kết quả định lượng tỉnh dầu của 3 mẫu CK
Mẫu CKP CKSV CKSC X() 1,67 1,47 1,10 S 0.042 0.038 0,035 u(%) 1,67+ 0,058 1,47+ 0,046 1,10+ 0.042
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 3.5 ta thấy, sau khi chế biến, hàm lượng tỉnh
dầu trong các mẫu có sự thay đổi Mẫu CKP có hàm lượng tinh dầu lớn nhất,
sau đó là mẫu CKSV, và ít nhất là mẫu CKSC
Bảng 3.6 Định lượng hàm am bằng phương pháp cất với Toluen
Trang 3932
Nhận xét: Hàm âm của CKP là 11,20 %, của CKSV 9,17 %, của CKSC là
9,07 % đều đạt tiêu chuẩn của DĐVN IV ( không quá 13 %)
3.3.3 Sắc kí khí khối phổ tỉnh dầu :
Tiến hành trên 2 mẫu CKP và CKSC
+ Chuẩn bị dịch thử: Hòa tan 2ul tỉnh dầu trong 1ml n-hexan, lắc kĩ được dd có nồng độ 0,2 %
+ Điều kiện chạy sắc kí khí khối phỏ:
- _ Cột sắc kí HP — SMS, khí mang: He - Tỉ lệ M/Z từ 40— 450
- Nhiệt độ Detetor: 230 °C, chương trình nhiệt độ: 60 — 260 °C, tốc độ
tang 8 °C/ phút
- Thé tich tiém mau: Il
Két qua dugc trinh bay 6 hinh 3.7, hinh 3.8, bang 3.7, bang 3.8, bang 3.9
Abundance
Trang 4033
Bảng 3.7 Kết quả sắc kí khí khối phổ tỉnh dầu CKP
STT CKP Tên chất Hàm lượng (%) l Eucalyptol 7,11 2 Linalool 2,85 3 Borneol 7,54 4 a — Terpineol 4.68 5 a — Terpinolene 2,85 6 Citral 6,10 7 oa — Curcumen 8,50 8 B — Bisabolene 4,52 9 a — Zingiberen 2,92 10 œ — Costol 2,43 11 Camphen 4.14 12 Elemol Mi 13 Elemene 0.46 14 Himachalene 1,94 15 Lepidozen 1,94 16 B — Eudesmol 3,12 17 3-methyl-2-(1’,1°,5’-trimetyl-5’- 2,44
hexenyl!)-2-cyclopropenyl methyl ketone
18 Fanersol 1,71
19 y — Dodecanlactone 17,99
20 B — sesquiphellandren 0,74
21 Cac chat khac 12.81
Nhận xét: Qua sac ki khi khoi pho (GC/MS), tinh dau CKP xác định được 20
chất Những chất có hàm lượng lớn: y - Dodecanlactone (17,99 %), Borneol
(7,54 %), a - Curcumen (8,50 %), B — Bisabolene (4,52 %), Elemol (3,21
%) , cac thanh phan cé ham lượng nhỏ là: Elemene (0,46 %), B —