Thăm dò hoạt tính androgen của cao thuốc testin trên chuột đực thực nghiệm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH THĂM DÒ HOẠT TÍNH ANDROGEN CỦA CAO THUỐC TESTIN TRÊN CHUỘT ĐỰC THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 2 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH THĂM DÒ HOẠT TÍNH ANDROGEN CỦA CAO THUỐC TESTIN TRÊN CHUỘT ĐỰC THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế. 2. TS. Dương Thị Ly Hương. Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện khóa luận này tôi luôn nhận được sự quan tâm, giúp đỡ, động viên rất nhiều từ thầy cô, gia đình và bạn bè. Để bày tỏ lòng biết ơn của mình, tôi xin chân thành cảm ơn: Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. Dương Thị Ly Hương, người đã tận tình dìu dắt và hướng dẫn tôi hoàn thành tốt khóa luận này. Với tình cảm chân thành, tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ths. Đỗ Thị Nguyệt Quế, PGS.TS Vũ Văn Điền, người đã luôn quan tâm, tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi có cơ hội để làm khóa luận này. Tôi xin gửi lời cảm ơn các thầy cô và các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược lực, bộ môn Dược cổ truyền đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi cũng xin gửi tới các thầy cô và cán bộ Trường đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì đã dìu dắt dạy bảo tôi trong suốt thời gian học tập tại trường. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân và bạn bè luôn ở bên cổ vũ, động viên, là chỗ dựa tinh thần cho tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu. Hà Nôi, ngày tháng năm 2013 Nguyễn Thị Thanh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Đại cương về sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dụcnam 3 1.1.1. Các hormon sinh dục nam (androgen) 3 1.1.2. Vai trò của androgen đối với cơ thể 4 1.2. Ảnh hưởng của suy giảm hormon sinh dục nam đối với sức khỏe nam giới. 5 1.3. Bệnh lý suy sinh dục nam 7 1.3.1. Khái niệm 7 1.3.2. Phân loại suy sinh dục nam 7 1.3.3. Triệu chứng của suy sinh dục nam 8 1.3.4. Điều trị suy sinh dục nam 10 1.3.5. Điều trị suy sinh dục nam bằng y học cổ truyền (YHCT) 11 1.4. Một số vị thuốc YHCT sử dụng trong nghiên cứu 13 1.4.1. Bá bệnh 13 1.4.2. Bạch tật lê 13 1.4.3. Câu kỷ tử 14 1.4.4. Cốt khí củ 15 1.4.5. Xà sàng tử 15 1.4.6. Ba kích 16 1.4.7. Đương quy 16 1.4.8. Hoàng kỳ 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1. Nguyên liệu 20 2.2. Đối tượng nghiên cứu 20 2.3. Phương pháp nghiên cứu 21 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1. Sự thay đổi trọng lượng chuột qua 10 ngày dùng thuốc 23 3.2.Tác dụng của các loại cao thuốc lên sự phát triển các cơ quan sinh dục phụ. 24 3.3. Tác dụng của thuốc lên nồng độ testosteron máu 29 3.4. Bàn luận 30 3.4.1. Mô hình nghiên cứu 30 3.4.2. Về bài thuốc 32 3.4.3. Về chỉ số nghiên cứu 34 3.4.4. Kết quả nghiên cứu 35 KẾT LUẬN 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ dầy đủ 1 XVĐM Xơ vữa động mạch 2 ĐTĐ Đái tháo đường 3 SSD Suy sinh dục 4 SHBG Sex hormon – binding globulin (dạng liên kết với glonulin) 5 FSH Follicle stimulating hormon 6 LH Luteinizing hormon 7 GnRH Gonadotropin releasing hormon DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Số trang Bảng 1 Tác dụng của các loại cao thuốc lên trọng lượng chuột trước và sau thí nghiệm. 23 Bảng 2 Bảng so sánh số liệu hiệu suất và liều có tác dụng của các loại cao. 34 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Số trang Hình 1 Sơ đồ nghiên cứu hoạt tính androgen trên chuột nhắt trắng. 22 Hình 2 Tác dụng của cao thuốc chiết bằng nước lên sự thay đổi trọng lượng các cơ quan sinh dục phụ. 24 Hình 3 Tác dụng của cao thuốc chiết bằng cồn 40% lên sự thay đổi trọng lượng các cơ quan sinh dục phụ. 25 Hình 4 Tác dụng của cao thuốc chiết bằng cồn 70% lên sự thay đổi trọng lượng các cơ quan sinh dục phụ. 26 Hình 5 Tác dụng của TES lên sự thay đổi trọng lượng các cơ quan sinh dục phụ. 27 Hình 6 Tác dụng của testosteron và các loại cao thuốc lên nồng độ testosteron máu 28 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo ước tính của WHO có khoảng 80 triệu cặp vợ chồng vô sinh, khoảng 150 triệu nam suy sinh dục. Ở Việt Nam, tỷ lệ vô sinh là 7 – 10% [1], trong đó nguyên nhân vô sinh do nam giới chiếm 30%. Theo thống kê của bệnh viện Từ Dũ thì tỷ lệ này còn cao hơn, cứ 15.000 trường hợp vô sinh, trong đó do nam chiếm 10.000, tỷ lệ khoảng 65%. Trong điều kiện nền kinh tế đang phát triển như hiện nay, ô nhiễm môi trường gia tăng, áp lực công việc nhiều, sự suy giảm chức năng sinh sản, suy sinh dục ở nam giới càng có cơ hội gia tăng. Sự suy giảm chức năng sinh dục nam giới không chỉ ảnh hưởng đến sức khỏe, tinh thần của người nam giới mà còn ảnh hưởng đến sức lao động, cũng như hạnh phúc gia đình, phát triển nòi giống và thường gây hậu quả tiêu cực đối với đời sống xã hội, giảm chất lượng cuộc sống. Chính vì vậy Bộ Y tế trong những năm gần đây đã cho thành lập khoa nam khoa ở một số bệnh viện lớn ở Hà Nội và thành phố Hồ Chí Minh. Mặt khác thời kì mãn dục nam là thời kỳ rất nhạy cảm, nồng độ testosteron giảm, nguy cơ mắc các bệnh tim mạch, huyết áp, xơ vữa mạch, loãng xương, suy giảm trí nhớ tăng, nhất là trong điều kiện kinh tế phát triển, ăn uống thuận lợi hơn, ngược lại sân bãi cho vận động hạn chế. Vì vậy cũng cần có thuốc để điều hòa sự suy giảm nồng độ testosteron. Đã đến lúc chúng ta cần phải quan tâm đến vấn đề suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam và thời kì mãn dục nam để đảm bảo cho sự phát triển xã hội một cách bền vững. Để góp phần đáp ứng nhu cầu thuốc hỗ trợ điều trị suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam có chất lượng cho xã hội mà hiện nay đang còn thiếu, chúng tôi tiến hành đề tài: Thăm dò hoạt tính androgen của cao thuốc testin trên chuột đực nhắt thực nghiệm Với các mục tiêu: 1. Đánh giá ảnh hưởng của các dạng dịch chiết khác nhau của cao Thuốc Testin lên trọng lượng cơ quan sinh dục phụ của động vật thực nghiệm. 2 2. Đánh giá ảnh hưởng của liều lượng các dạng dịch chiết của cao thuốc Testin lên trọng lượng cơ quan sinh dục phụ của động vật thực nghiệm. 3. Đánh giá ảnh hưởng của cao thuốc Testin lên nồng độ testosteron máu. 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Đại cương về sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dụcnam. 1.1.1. Các hormon sinh dục nam (androgen). Các hormon sinh dục nam có tên chung là androgen, trong đó gồm: Testosteron, dihydrotestosteron (DHT), dehydroepiandosteron (DHEA), androstenedion và androstenediol, trong đó Testosteron là chất chính được biết nhiều nhất [1], [8]. Nguồn gốc sinh tổng hợp của Testosteron: trong cơ thể testosteron được bài tiết chủ yếu từ tế bào leydig của tinh hoàn (95%), ngoài ra một số cơ quan khác cũng tham gia bài tiết testosteron như vỏ thượng thận (4%), buồng trứng, nhau thai…ở nữ testosteron được tổng hợp và bài tiết từ hoàng thể và vỏ thượng thận. Các tế bào leydig tổng hợp testosteron từ cholesterol và acetyl- CoA, trong đó con đường tổng hợp từ cholesterol là chính [1],[8]. Vận chuyển và chuyển hóa của testosteron: Sau khi được bài tiết từ tinh hoàn, testosteron được đổ vào máu, trong đó 97% ở dạng liên kết với protein huyết tương, còn khoảng 3% ở dạng tự do. Dạng liên kết, thường liên kết với albumin ở mức độ lỏng lẻo là dạng có hoạt tính sinh học của testosteron và chiếm 60% tổng lượng testosteron toàn phần; dạng liên kết với globulin (sex hormon- binding globulin, viết tắt SHBG) ở mức độ chặt chẽ hơn, phần này chiếm 40% và không có hoạt tính sinh học. Lưu hành trong máu khoảng 30 phút đến 1 giờ hoặc hơn nữa, chúng sẽ được vận chuyển đến mô đích để phát huy tác dụng hoặc thoái hóa để đào thải ra ngoài. Tại mô đích testosteron chuyển hóa thành 2 dạng có tác dụng là Dihydrotestosteron và estradiol dưới tác dụng của 2 enzym tương ứng là 5alpha-resductase và aromatase, hai hormon này tác động lên hai loại receptor khác nhau tại các mô đích khác nhau để điều hòa hoạt động liên quan đến chức năng sinh sản, sinh dục nam. [...]... Hình 1: Sơ đồ nghiên cứu hoạt tính androgen trên chuột nhắt trắng 23 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Sự thay đổi trọng lượng chuột qua 10 ngày dùng thuốc Sự thay đổi trọng lượng cơ thể chuột cho biết ảnh hưởng của thuốc đến tình trạng sức khỏe chung của chuột Vì thế, trong tất cả các lô chúng tôi đều kiểm tra cân nặng chuột ở thời điểm ban đầu trước khi cho uống thuốc (P1) và 24 giờ sau... Lô 7: uống cao Testin chiết bằng cồn 40% với liều 25,44g/kg  Lô 8: uống cao Testin chiết bằng cồn 40% với liều 38,16g/kg  Lô 9: uống cao Testin chiết bằng cồn 40% với liều 50,88g/kg  Lô 10: uống cao Testin chiết bằng cồn 70% với liều 12,72g/kg  Lô 11: uống cao Testin chiết bằng cồn 70% với liều 25,44g/kg  Lô 12: uống cao Testin chiết bằng cồn 70% với liều 38,16g/kg  Lô 13: uống cao Testin chiết... nghiên cứu, mỗi lô 10 chuột lần lượt được dùng thuốc như sau:  Lô 1: uống nước muối sinh lý, với thể tích 10ml/kg thể trọng  Lô 2: uống cao Testin chiết bằng nước với liều 12,72g/kg  Lô 3: uống cao Testin chiết bằng nước với liều 25,44g/kg  Lô 4: uống cao Testin chiết bằng nước với liều 38,16g/kg  Lô 5: uống cao Testin chiết bằng nước với liều 50,88g/kg  Lô 6: uống cao Testin chiết bằng cồn 40%... dụng của các loại cao thuốc lên sự phát triển các cơ quan sinh dục phụ Sau khi giết chuột, các cơ quan sinh dục phụ ( tinh hoàn, túi tinh, tuyến cowper và cơ nâng hậu môn) được bóc tách, loại bỏ phần mỡ, rồi đem cân So sánh giữa nhóm dùng thuốc và nhóm chứng về tỉ số giữa trọng lượng các cơ quan trên trọng lượng cơ thể Sự tăng trọng lượng các cơ quan này thể hiện hoạt tính androgen của các loại cao thuốc. .. chung và số 17 lượng tế bào lympho T hoạt động; làm phục hồi khả năng tạo hoa hồng của tế bào lympho T bị ức chế bởi theophylin; làm tăng họat tính thực bào của đại thực bào trên thực nghiệm [16] - Tác dụng trên tử cung Tinh dầu có tác dụng ức chế sự co bóp tử cung Thành phần tan trong nước và trong ethanol có tác dụng kích thích sự co bóp tử cung Tăng sinh tử cung: Chuột nhắt được nuôi với chế độ ăn... Các vị thuốc mua tại nhà thuốc HARPHACO số 59 phố Lãn Ông – Hà Nội, được kiểm tra đạt tiêu chuẩn dược điển Việt Nam IV mới đưa vào điều chế cao, sau đó cao đã được xây dựng tiêu chuẩn cơ sở Dùng cao này để thử hoạt tính androgen 2.2 Hóa chất và dung môi - Thuốc tiêm testosteron 25mg (biệt dược TESMON), được sản xuất bởi Tai Yu chemical & pharmaceutical Co., Ltd 2.3 Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt đực. .. chứng - Cao cồn 70% (liều 12,76g/kg) làm tăng trọng lượng cơ nâng hậu môn và tuyến cowper một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng Từ kết quả trọng lượng các cơ quan sinh dục phụ của các lô, để có thể khẳng định thêm tác dụng của các loại cao trên hoạt tính androgen, chúng tôi tiến hành định lượng thêm nồng độ testosteron máu của các lô: lô chứng (NaCl 0,9%), lô cao cồn 40% (liều 25,44g/kg), lô cao. .. môn và túi tinh của cao chiết bằng cồn 40% thể hiện ở hình sau: Hình 3.3: Tác dụng của cao thuốc chiết bằng cồn 40% lên sự thay đổi khối lượng tinh hoàn và cơ nâng hậu môn 27 Hình 3.4: Tác dụng của cao thuốc chiết bằng cồn 40% lên sự thay đổi khối lượng tuyến cowper và túi tinh ( : P < 0.05 so với lô dùng nước muối sinh lý) Nhận xét: Kết quả ở hình trên cho thấy: - Ở mức liều 25,44g/kg chuột, khối lượng... cùng (P10) Bảng3.1: Tác dụng của các cao thuốc lên trọng lượng chuột trước và sau TN Số Lô Thuốc uống Trọng lượng chuột lượng (n) (gam) pt-s P1 P10 (X±SD) (X±SD) 1 Nước muối 10 19,05 ± 0,50 25,83 ± 0,85 2 Cao nước (12,72g/kg) 10 18,20 ± 0,36 26,72 ± 0,74 . THĂM DÒ HOẠT TÍNH ANDROGEN CỦA CAO THUỐC TESTIN TRÊN CHUỘT ĐỰC THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế. 2. TS. Dương Thị Ly Hương. Nơi thực. BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH THĂM DÒ HOẠT TÍNH ANDROGEN CỦA CAO THUỐC TESTIN TRÊN CHUỘT ĐỰC THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013. testin trên chuột đực nhắt thực nghiệm Với các mục tiêu: 1. Đánh giá ảnh hưởng của các dạng dịch chiết khác nhau của cao Thuốc Testin lên trọng lượng cơ quan sinh dục phụ của động vật thực nghiệm.