ĐỊnh tính, định lượng rutin trong cao đặc EZ và thăm dò tác dụng chống dị ứng

Sử dụng cao thuốc y học cổ truyền với tác dụng chống viêm, chỉ dương, chống dị ứng trong điều trị chứng bệnh này cho hiệu quả tốt và an toàn [26].. Ngoài sử dụng liệu pháp chống viêm tro

NGUYỄN THỊ THU HUYỀN

ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG RUTIN TRONG CAO ĐẶC EZ VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG CHỐNG DỊ ỨNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI-2014

NGUYỄN THỊ THU HUYỀN

ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG RUTIN TRONG CAO ĐẶC EZ VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG CHỐNG DỊ ỨNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn 1.PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển

2 BS Lê Thị Minh

Nơi thực hiện:

1 Bộ môn Dược Cổ Truyền

2 Bộ môn Dược lý, Trường đại học

Y Hà Nội

3 Viện kiểm nghiệm thuốc TW

HÀ NỘI-2014

Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển,

người thầy đã tận tính trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian hoàn thành khóa luận này

Đồng thời tôi cũng xin cảm ơn BS Lê Thị Minh, học viên Y dược học

cổ truyền giúp đỡ tôi trong quá trình làm khóa luận

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS Phạm Thị Vân Anh, Trưởng bộ môn Dược lý trường đại học Y Hà Nội, DS Lê Thị Duyên, khoa Mỹ Phẩm, Viện

kiểm nghiệm thuốc trung ương đã giúp đỡ tôi thực hiện các nghiên cứu trình bày trong khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên tại trường đại học Dược Hà Nội và bộ môn Dược lý, trường đại học Y Hà Nội

đã tạo mọi điều kiện giúp tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin gửi tới các thây cô và cán bộ trường đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành nhất vì đã dạy bảo tôi trong suốt năm năm học tập và nghiên cứu tại trường

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, người thân, bạn bè

đã luôn ở bên tôi cỗ vũ, động viên và là chỗ dựa tinh thần cho tôi trong thời gian học tập và thực hiện khóa luận

Hà Nội, Ngày 14 tháng 5 năm 2014

Sinh viên

Nguyễn Thị Thu Huyền

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3

1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH ECZEMA 3

1.1.1 Bệnh eczema theo quan điểm Tây y 3

1.1.2 Bệnh eczema theo quan điểm Đông y 10

1.2 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC EZ 14

1.2.1 Tổng quan về bài thuốc 14

1.2.2 Tóm tắt đặc điểm của các vị thuốc 16

1.2.2.1 Kim ngân đằng (Caulis cum folium Lonicerae) 16

1.2.2.2 Núc nác (Cortex Oroxyli) 18

1.2.2.3 Hòe hoa (Flos Styphnolobii japonici imaturi) 20

1.2.2.4 Thương nhĩ tử (Fructus Xanthii strumarii) 22

1.2.2.5 Đơn lá đỏ (Folium Excoecariae) 24

1.2.2.6 Hoàng bá (Cortex Phellodendri) 25

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27

2.1.NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 27

2.1.1.Nguyên liệu 27

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 27

2.2 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 28

2.2.1 Bào chế cao đặc EZ 28

2.2.2 Đính tính rutin trong cao đặc bằng phương pháp TLC 29

2.2.3 Định lượng rutin trong cao đặc bằng HPLC 29

2.2.4 Khảo sát tác dụng chống dị ứng của cao đặc EZ 30

2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu 32

3.1.1 Sắc 34

3.1.2 Chiết bằng ethanol 35

3.2 ĐỊNH TÍNH RUTIN BẰNG TLC 37

3.3 ĐỊNH LƯỢNG RUTIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 38

3.3.1 Xác định hàm ẩm cao đặc 38

3.3.2 Định lượng rutin bằng HPLC 39

3.3 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG DỊ ỨNG CỦA CAO ĐẶC EZ 43

3.3.1 Chuẩn bị chế phẩm 43

3.3.2 Khảo sát tác dụng chống dị ứng bằng phương pháp gây shock phản vệ 44

3.3.3 Khảo sát tác dụng chống dị ứng bằng phương pháp gây ngứa 47

3.3.4 Khảo sát tác dụng chống dị ứng bằng mô hình gây viêm cấp tính trên chân chuột nhắt trắng 51

3.4.BÀN LUẬN 56

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 64

TÀI LIỆU THAM KHẢO 66

PHỤ LỤC 74

AD Atopic dermatitis - viêm da cơ địa

CC Cao cồn

C 48/80 Compound 48/80

CN Cao nước

DĐVN Dược điển Việt Nam

ETC Thuốc bán theo đơn

Bảng 3.1: Kết quả xác định độ ẩm của cao cồn 39

Bảng 3.2: Kết quả xác định độ ẩm của cao nước 39

Bảng 3.3: Chế độ gradient dung môi định lượng rutin trong cao đặc EZ 41

Bảng 3.4: Kết quả kiểm tra tính thích hợp hệ thống sắc ký lỏng 42

Bảng 3.5: Kết quả định lượng rutin trong mẫu cao cồn và cao nước EZ 43

Bảng 3.6: Tác dụng của cao EZ trên mô hình gây shock phản vệ 46

Bảng 3.7: Tác dụng của cao EZ trên mô hình gây ngứa 49

Bảng 3.8: Tác dụng của cao EZ trên mô hình gây viêm cấp tính 54

Hình 1.1 Cơ chế dị ứng cuả bệnh eczema 4

Hình 1.2 Vị thuốc Kim ngân đằng 74

Hình 1.3 Vị thuốc Núc nác 74

Hình 1.4 Vị thuốc Hòe hoa 74

Hình 1.5 Vị thuốc Thương nhĩ tử 74

Hình 1.6 Vị thuốc Đơn lá đỏ 75

Hình 1.7 Vị thuốc Hoàng bá 75

Hình 3.1: Sơ đồ bào chế cao đặc EZ bằng phương pháp chiết nước 34

Hình 3.2: Sơ đồ bào chế cao đặc EZ bằng phương pháp chiết ethanol 36

Hình 3.3: Sắc ký đồ rutin, cao cồn, cao nước ở 366nm và 254nm 38

Hình 3.4: Sắc ký đồ của rutin chuẩn 42

Hình 3.5: Sắc ký đồ của 3 mẫu cao nước 75-76 Hình 3.6: Sắc ký đồ của 3 mẫu cao cồn 76

Hình 3.7: Biểu đồ thể hiện tác dụng ức chế shock phản vệ 46

Hình 3.8: Biều đồ thể hiện tác dụng ức chế ngứa trong 20 phút 50

Hình 3.9: Biểu đồ thể hiện tác dụng ức chế phù chân chuột 55

ĐẶT VẤN ĐỀ

Bệnh Eczema hay còn gọi là bệnh chàm là một bệnh da liễu thường gặp

Có nhiều giả thuyết về nguyên nhân gây bệnh, nhưng yếu tố cơ địa dị ứng đóng vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh [19] Là một bệnh da ngứa điển hình với đặc tính là hay tái phát, khó điều trị nên diễn biến dài, mang lại nhiều thống khổ cho người bệnh [3] Cùng với sự phát triển của kinh tế, xã hội và công nghiệp kèm theo là sự gia tăng tình trạng ô nhiễm môi trường làm cho tần suất và tỷ lệ xuất hiện bệnh ngày càng gia tăng

Các thuốc điều trị Tây y hiện nay chủ yếu điều trị triệu chứng Trong đó bao gồm các thuốc kháng histamine, nhưng cũng không cho kết quả như mong đợi Liệu pháp corticoid tuy có tác dụng nhất định nhưng sau khi dừng thuốc thường có hiện tượng tái phát nặng hơn và thường phát sinh nhiều tác dụng phụ Sử dụng cao thuốc y học cổ truyền với tác dụng chống viêm, chỉ dương, chống dị ứng trong điều trị chứng bệnh này cho hiệu quả tốt và an toàn [26] Bài thuốc EZ do PGS.TS Phùng Hòa Bình xây dựng là một trong

số những giải pháp điều trị Eczema bằng thảo dược có hiệu quả trên lâm sàng Tuy nhiên việc sử dụng thuốc thang thường bất tiện, hạn chế việc phát huy hiệu quả và tính phổ cập của bài thuốc, khó có thể đáp ứng đủ nhu cầu người bệnh Do vậy vấn đề nghiên cứu chuyển dạng bài thuốc đã được chúng tôi đặt

ra Cao đặc là một dạng chế phẩm trung gian thường được dùng trong nghiên cứu chuyển dạng bào chế hiện đại Vì vậy chúng tôi đã tiến hành bào chế cao đặc EZ và bước đầu thăm dò một số tác dụng dược lý

Cao đặc EZ đã được nghiên cứu và khảo sát các tác dụng kháng khuẩn, chống viêm cấp tính và mạn tính cho thấy có tác dụng tốt trên mô hình thực nghiệm [27] Ngoài sử dụng liệu pháp chống viêm trong điều trị Eczema còn chú trọng đến sử dụng các thuốc có tác dụng chống dị ứng [51], [52] Bài thuốc EZ cũng được thiết kế với cấu trúc như vậy Để tiếp tục chứng minh

khả năng sử dụng bài thuốc trong điều trị Eczema, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Tiếp tục nghiên cứu bài thuốc EZ và thăm dò tác dụng chống dị ứng” với mục tiêu sau:

1 Định tính, định lượng rutin trong cao đặc bằng sắc ký lớp mỏng và sắc ký lỏng hiệu năng cao

2 Thăm dò tác dụng chống dị ứng của cao đặc bài thuốc EZ

Eczema là bệnh da ngứa điển hình, mạn tính hay tái phát, điều trị còn khó khăn [3], [34],[62]

1.1.1.2 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh

Nhiều nghiên cứu gần đây cho thấy, đa số các tác giả cho rằng: Sự kết hợp của một cơ địa dị ứng với những tác nhân kích thích từ bên trong hay bên ngoài cơ thể là nguyên nhân chính gây ra bệnh Chính sự kết hợp đó đã gây ra nhiều biến đổi, gây hiện tượng viêm da Dưới đây là các yếu tố liên quan đến căn nguyên và sinh bệnh học của bệnh [3], [12] :

- Cơ địa dị ứng: Eczema có yếu tố di truyền Điều tra tiền sử những bệnh nhân Eczema thấy trong gia đình có người mắc Eczema hoặc bệnh dị ứng khác Các yếu tố khác trong cơ địa dễ bị dị ứng cũng đã được xác định có liên quan như: da khô, suy giảm miễn dịch (miễn dịch qua trung gian tế bào) [3], [12]

- Các tác nhân kích thích

+ Nguyên nhân nội sinh: rối loạn chức phận nội tạng, rối loạn thần kinh, rối loạn nội tiết có thể là nguyên nhân trực tiếp hay gián tiếp gây Eczema + Nguyên nhân ngoại sinh: các yếu tố lý học, hóa học, thực vật, sinh vật học đụng chạm vào da gây cảm ứng thành viêm da, Eczema (các chất này gọi

là dị nguyên) Ví dụ: ánh sáng, thuốc bôi không đúng chỉ dẫn, uống, tiêm, các hóa chất dùng trong công nghiệp, trong gia đình (cao su, kền, xi măng, sơn…)

Một số bệnh ngoài da gây ngứa (nấm, ghẻ) do chà xát, dùng thuốc bôi không đúng chỉ dẫn… có thể trở thành Eczema thứ phát [3], [12]

Yếu tố bên ngoài và cơ địa dị ứng kết hợp với nhau chặt chẽ, tạo nên cơ chế dị ứng là cơ sở chủ yếu trong phát sinh và phát triển Eczema [3], [19] Theo Halperm, Coombs phản ứng Eczema được xếp vào kiểu “ mẫn cảm

tế bào trì hoãn “ trong đó có vai trò của các tế bào lympho mang ký ức kháng nguyên [3], [12]

Hình 1.1 cơ chế dị ứng của bệnh eczema (type IV)

Các tế bào lympho T mẫn cảm làm chức năng của kháng thể dị ứng Sự kết hợp kháng nguyên với lympho T mẫn cảm ( bởi chính kháng nguyên đó trong lần đầu xâm nhập cơ thể), có sự tham gia của đại thực bào, giải phóng hàng loạt chất hóa học trung gian-lymphokin gây nên đáp ứng viêm da biểu hiện bằng đám màng đỏ, mụn nước, ngứa [18], [7]

1.1.1.3 Triệu chứng

- Vị trí bệnh: Có tính chất bất kỳ, vùng da nào cũng có thể bị Eczema, tuy nhiên hay bị ở vùng da hở, vùng da hay tiếp xúc với dị nguyên [3], [12], [22]

- Tổn thương cơ bản: Đám mảng đỏ da và mụn nước, mụn nước nhỏ bằng đầu tăm đầu kim, nông, tự vỡ, san sát nhau kín khắp bề mặt thương tổn, đùn hết lớp này đến lớp khác Mụn nước là tổn thương điển hình của bệnh eczema, Eczema phát triển qua 4 giai đoạn:

Giai đoạn đỏ da (GĐ cấp tính), Giai đoạn mụn nước (Giai đoạn chảy nước), Giai đoạn lên da non, đóng vảy da (GĐ bán cấp), Giai đoạn liken hóa, hằn cổ trâu (Eczema mạn tính)

Chia thành 4 giai đoạn của Eczema để hiểu tiến triển của một Eczema nhưng trên thực tế các giai đoạn không thực phân chia rõ rệt như vậy ma thường xen kẽ nhau, lồng vào nhau [3]

Ngứa là triệu chứng xuyên suốt, xuất hiện sớm nhất, tồn tại dai dẳng Người ta coi bệnh eczema là bệnh da ngứa điển hình [3]

- Tiến triển: mạn tính hay tái phát Nhiều đợt vượng bệnh, tạm xen kẽ các giai đoạn tạm đỡ [3]

- Xét nghiệm và chẩn đoán: Chưa có xét nghiệm đặc hiệu Thông thường chẩn đoán dựa trên tiền sử bệnh và khám tổn thương trên da [3]

1.1.1.4 Các thể lâm sàng

1.1.1.4.1 Eczema tiếp xúc (Contact Eczema)

- Cơ chế miễn dịch: thuộc type IV tăng mẫn cảm loại hình chậm có vai trò của lympho T [3]

- Dị nguyên: dị nguyên ngoại sinh gây eczema tiếp xúc: nikel, cao su, streptomycin, neomycin, xi măng, formaldehyd [3], [63]

- Tổn thương cơ bản: da đỏ xung huyết, có khi đỏ xung huyết mạnh, hơi

nề, trên bề mặt có mụn nước, có khi có bọng nước, cấp tính trợt ướt, chảy dịch, phù nề Có thể có hình thái mạn tính, khô, dầy cộm, có vẩy da Ngừng tiếp xúc dị nguyên bệnh thuyên giảm, tiếp xúc lại dị nguyên bệnh tái phát hoặc nặng hơn [3], [62], [64]

- Chẩn đoán: Test da với dị nguyên thường dương tính, nhưng không làm khi đang vượng bệnh hay đang điều trị corticoids [3]

1.1.1.4.2 Eczema thể địa, viêm da cơ địa (Atopic dermatitis-AD)

Dịch tễ học: AD là biểu hiện ngoài da của cơ địa Atopy (Atopic state, Atopic diathesis) Tỷ lệ bệnh nhân có yếu tố tiền sử gia đình bị bệnh dị ứng chiếm khoảng 70% Khoảng 10% trẻ em có biểu hiện của viêm da cơ địa [3], [12], [13], [45]

Các yếu tố làm bệnh khởi phát và nặng lên:

+ Dị nguyên ngoại sinh: chất thải của rệp nhà, len dạ, ngoại độc tố S.aureus đóng vai trò siêu kháng nguyên kích thích hoạt hóa lympho T và đại thực bào…

+ Dị nguyên nội sinh: trong huyết thanh bệnh nhân có kháng thể IgE, kích thích IgE hoặc lympho T đáp ứng viêm, giảm chức năng hàng rào bảo vệ của da và giảm lớp ceramic trên bề mặt da làm cho da dễ bị mất nước gây khô

da [3], [63]

- Sinh bệnh học và miễn dịch học:

Nghiên cứu về gen học gần đây đã xác định được nhiều gen có liên quan tới AD: các gen nằm trên các NST 11q13, 5q31-33, 16p11.2-11.1…[50], [53] IgE tăng cao hơn cả hen suyễn và viêm mũi dị ứng ở 80% bệnh nhân AD

và càng cao nếu AD càng nặng Sự hình thành và tăng IgE (AD còn gọi là viêm da tăng IgE) là do phản ứng tăng mẫn cảm do giải phóng chất hoạt mạnh

từ tế bào Mastocytes hoặc Basophils [3], [12]

- Xét nghiệm: Trong AD, miễn dịch trung gian tế bào bị suy giảm dẫn đến giảm sút tính phản ứng trong test da chậm như Tuberculine, Candidine [3], [12]

- Tổn thương cơ bản: Là một bệnh kinh diễn hay tái phát nên các thương tổn lâm sàng chủ yếu là: Viêm da (rát đỏ kèm sẩn mụn nước), hằn cổ trâu, khô da, xây xước, nhiễm trùng thứ phát [3], [12], [50], [53]

1.1.1.4.4 Eczema thể đồng tiền

- Có ý kiến cho rằng Eczema thể đồng tiền là một dạng đặc biệt của Eczema vi khuẩn Hiện nay, Eczema thể đồng tiền là một phân thể của Eczema thể địa, nhưng IgE bình thường

- Tổn thương: là các đám tổn thương hình tròn, oval, như đồng xu, ban đầu là đám đỏ tiết dịch, có mụn nước, sẩn, hơi nề, sau có vảy tiết, vảy da, lichen hóa giới hạn rõ, thường khu trú ở thân mình, mặt duỗi của chi, trước xương chầy, mu bàn tay

- Lứa tuổi: thường gặp ở lứa tuổi trung niên, nhất là mùa thu đông

- Mô bệnh học có hiện tượng gai và xốp bào [3], [62]

1.1.1.4.5 Eczema da dầu, viêm da da dầu

- Lứa tuổi: thường gặp phần lớn ở người 20-50 tuổi, có thể gặp ở trẻ em (những tháng đầu), tuổi ấu thơ, niên thiếu Nam thường bị nhiều hơn, có thể địa di truyền “thể địa da dầu”

- Vị trí: vùng tuyến bã hoạt động mạnh như mặt, đầu, các nếp gấp

- Tổn thương: đám mảng đỏ, trên có vẩy, vẩy mỡ có khi có sẩn trên bề mặt, giới hạn tương đối rõ, khô, nhưng vi thể có hiện tượng xốp bào

- Mô bệnh học: da có á sừng, tăng gai, xốp bào, chân bì viêm không đặc hiệu [3], [62]

1.1.1.5 Điều trị

Eczema là phức hợp giữa phản ứng dị ứng và phản ứng viêm trong đó cơ chế dị ứng là cơ chế chủ yếu trong phát sinh và phát triển bệnh Do đó nguyên tắc cơ bản trong điều trị Eczema là chống dị ứng, giảm viêm và tránh bùng phát:

 Điều trị đặc hiệu

Nhằm loại trừ tác động của dị nguyên:

Tránh tiếp xúc với dị nguyên nếu phát hiện được

Liệu pháp miễn dịch với kháng nguyên cụ thể cũng cho thấy hiệu quả trong một số trường hợp Eczema Ngoài ra, miễn dịch dưới lưỡi và tiêm các kháng thể kháng IgE (kháng thể dòng đơn) cũng cho thấy hiệu quả điều trị trên bệnh nhân Eczema

Tránh tiếp xúc với các chất gây kích thích và dị ứng làm trầm trọng bệnh: vi khuẩn, len dạ, hóa chất, chế độ ăn tránh các thực phẩm làm trầm trọng bệnh như sữa bò, đậu phộng [50], [51], [52]

 Điều trị không đặc hiệu

Nhằm mục đích giảm ngứa, giảm viêm, tránh bùng phát bằng nhiều loại thuốc khác nhau:

Corticoid được sử dụng để điều trị triệu chứng Các chế phẩm điều trị tại chỗ giúp chống viêm, chống ngứa, co mạch, chống tăng sinh tế bào Corticoid đường uống được sử dụng khi các phương pháp khác thất bại với mục đích chống viêm, chống ngứa

Thuốc kháng histamin: nếu ngứa nặng thì kháng histamin đường uống giúp giảm ngứa, điều tiết dịch Các loại thuốc gây buồn ngủ có lợi nếu ngứa nhiều ban đêm Các chế phẩm bôi tại chỗ cũng có tác dụng giảm ngứa

Chromones: muối cromoglycate có tác dụng ổn định tế bào mast cũng có tác dụng với một số trường hợp Eczema

Tác nhân sinh học (protein tái tổ hợp) là các kháng thể hoặc protein dung hợp có tác dụng giảm viêm thông qua điều hòa số lượng, hoạt hóa và chức năng của các tế bào miễn dịch, cytokine và kháng thể liên quan như omalizumab , rituximab hoặc alefacept có thể dùng trong bệnh eczema nặng Hydrocortisone: các loại kem hay thuốc mỡ hydrocortisone OTC (eczema nhẹ), kem steroid ETC (eczema nặng) với tác dụng giảm viêm, giảm ngứa

Thuốc ức chế calici-neurin: Elidel, Protopic điều trị tại chỗ có tác dụng giảm viêm và điều hòa miễn dịch ngăn chăn bùng phát bệnh

Liệu pháp chiếu tia UV (UVB, UVA1 hoặc UVB + UVA): bệnh chàm rất nặng hoặc mạn tính với mục đích giảm hoạt hóa tế bào mast, chống ngứa, diệt khuẩn, ức chế tế bào Langerhans, điều hòa sản xuất các cytokine

Thuốc tác động vào hệ thống miễn dịch: Glucocorticosteroid, Cyclosporin A, Azathioprine, Alitretinoin, Interferon gamma, Methotrexat dùng khi các phương pháp khác thất bại [19], [50], [51], [52], [64], [65]

Chất dưỡng ẩm mạnh ETC: thay thế hàng rào của da như Epiceram, Mimyx

Ngoài những phương pháp điều trị trên cần kết hợp:

Thuốc kháng sinh: nếu bị nhiễm trùng da do vi khuẩn, nấm, gãi gây loét Trong trường hợp ngứa nặng có thể dùng các thuốc gây mê tại chỗ như: lidocaine

Bổ sung acid béo cần thiết: dầu cá, dầu hoa anh thảo, dầu cây lưu ly Một

số vitamin và khoáng chất như muối kẽm, vitamin E, D

Giảm stress: tập thể dục thường xuyên và dành thời gian để nghỉ ngơi

Xà phòng nhẹ và kem dưỡng ẩm, băng ướt: giúp tránh khô da làm giảm ngứa, gãi và tránh bệnh bùng phát, có thể cho một ít thuốc sát trùng (hypoclorite) vào trong nước tắm để sát trùng da với Eczema nặng [3], [19], [31], [50], [51], [52]

1.1.2 Bệnh eczema theo quan điểm Đông y

1.1.2.1 Định nghĩa

Theo YHCT, eczema là một bệnh da liễu thường gặp với biểu hiện lâm sàng là các tổn thương da đa dạng, có xu hướng xuất tiết, phân bố đối xứng,

dễ tái phát và trở thành mạn tính hóa, cảm giác ngứa rất dữ dội

Bệnh này thuộc về phạm trù chứng “phong chẩn” của YHCT [5], [24], [69]

1.1.2.2 Nguyên nhân

Nguyên nhân do phong, nhiệt và thấp kết hợp ra bệnh, nhưng do phong

là chủ yếu, ở thể mạn tính thường do phong gây ra huyết táo rồi phối hợp với nhau mà gây ra bệnh [5]

Theo YHCT, bệnh này có thể do những nguyên nhân sau:

- Do ăn uống không điều độ, uống rượu, ăn cay hoặc tanh quá nhiều làm tổn thương đến tỳ vị Tỳ mất kiện vận sẽ làm cho thấp nhiệt nội sinh và ứ trệ, đồng thời ngoại cảm phải phong thấp nhiệt tà Nội ngoại tà tương tác với nhau rồi ứ trệ lại ở bì phu mà sinh ra bệnh

- Cũng có khi vì cơ thể hư nhược, tỳ bị thấp làm khốn, khiến cho phần

cơ nhục không được nuôi dưỡng rồi sinh bệnh

- Cũng có thể còn vì thấp nhiệt uất lâu ngày, làm hao tổn phần âm huyết, huyết hư táo rồi sinh phong, tạo nên chứng huyết hư phong táo, làm cho bì phu không được nuôi dưỡng mà thành bệnh

Bệnh nguyên của chàm tương đối phức tạp Có nhiều khả năng là do các nguyên nhân bên ngoài và bên trong tương tác với nhau gây nên Mối quan hệ nhân quả ở đây là tương đối phức tạp, ngoài ra các yếu tố ảnh hưởng cũng rất nhiều Những nguyên nhân này tương đối khó loại trừ, khiến cho bệnh có xu hướng tái phát và trở thành mạn tính [5], [26]

Giai đoạn Eczema bán cấp: Tổn thương da nhẹ hơn so với giai đoạn cấp tính và tổn thương chủ yếu là nốt sẩn, vẩy tiết và vẩy da là chính, chỉ có một ít mụn nước và loét [26]

Eczema mạn tính: Thường phát cục bộ tại một vị trí: mu tay, cẳng chân, nách, âm nang, âm hộ, có ranh giới rõ ràng, các triệu chứng viêm không rõ ràng Da vùng bị bệnh bị lichen hóa (dày và thô, nếp nhăn rất rõ), có lắng đọng sắc tố, trên mặt thường có vẩy da, vẩy máu do những vết gãi để lại Cũng có thể có một số ít các nốt sẩn và mụn nước khi gãi vỡ có xuất tiết Khi tổn thương xảy ra ở các khớp thì da dễ bị nứt toác ra hoặc dầy lên, gây đau

nhiều và ảnh hưởng đến hoạt động Lúc bình thường cảm giác ngứa không rõ ràng, nhưng trước khi ngủ hoặc thần kinh căng thẳng thường xuất hiện những cơn ngứa dữ dội [26]

Như vậy diễn biến thường gặp của Eczema là giai đoạn cấp tính, bán cấp diễn ra vài tuần thường hết, nhưng hay tái phát rồi dần trở thành chàm mạn tính Tuy nhiên cũng có trường hợp không tuân theo diễn biến này [26], [69]

1.1.2.4 Phân loại – Điều trị cụ thể

 Thể cấp tính

- Nguyên nhân: do phong phối hợp với nhiệt và thấp

- Triệu chứng: lúc đầu thấy da hơi đỏ, ngứa và sau một thời gian ngắn nổi cục, mụn nước, loét, chảy nước, đóng vẩy và khỏi Thể cấp tính chia làm hai thể nhỏ:

+ Thấp nhiệt: da hồng đỏ, nóng rát, có mụn nước, loet chảy nước vàng + Phong nhiệt: da hơi đỏ, có mụn nước, phát ra toàn thân, ngứa gãi chảy nước, ít loét

- Điều trị:

Thấp nhiệt:

Phương pháp chữa bệnh: thanh nhiệt hóa thấp, sử dụng các bài thuốc thanh nhiệt hóa thấp thang gia giảm, vị linh thang gia giảm, tiêu phong đạo xích thang, tán gỉ sắt ( ngâm rượu hai ngày, rửa sạch chỗ chàm bôi thuốc, cho kết quả tốt đối với chàm trẻ em )

Châm cứu: tùy vị trí cơ thể, chọn huyệt tại chỗ và lân cận Ví dụ: tay châm cứu huyệt khúc trì, hợp cốc: toàn thân châm cứu huyệt: hợp cốc (trừ phong), túc tam lý (trừ thấp), huyết hải (hoạt huyết)

Phong nhiệt:

Phương pháp chữa bệnh: sơ phong thanh nhiệt, trừ thấp; dùng các bài thuốc: tiêu phong tán, long đởm tả can thang gia giảm, tiêu phong đạo xích thang

Châm cứu: tùy vị trí cơ thể, chọn huyệt tại chỗ và lân cận Ví dụ: tay châm cứu huyệt khúc trì, hợp cốc: toàn thân châm cứu huyệt: hợp cốc (trừ phong), túc tam lý (trừ thấp), huyết hải (hoạt huyết) [5]

 Thể mạn tính

- Nguyên nhân: do phong và huyết táo gây nên bệnh

- Triệu chứng: da dày, thô, khô, ngứa, nổi cục có mụn nước hay gặp đầu mặt, cổ chân, cổ tay, khuỷu tay đầu gối

- Điều trị: khu phong, dưỡng huyết nhuận táo; thuốc bôi(hung hoàng,

cỏ càng tôm), thuốc rửa(lá vôi tươi, lá kinh giới), thuốc uống(tứ vật tiêu phong ẩm gia giảm, nhi diệu thang gia giảm) [5]

 Chàm bừu

- Nguyên nhân: do thấp nhiệt ở kinh can Có khi thể cấp và mạn

- Điều trị: thanh nhiệt trừ thấp ở kinh can; dùng bài thuốc: long đởm

tả can thang gia giảm; cấp tính dùng thuốc sắc, mạn tính dùng thuốc hoàn [5]

 Chàm ở trẻ em còn bú

- Nguyên nhân: do phong, thấp, nhiệt độc gây ra

- Triệu chứng: có hai thể khô và ướt

- Điều trị: sơ phong, lợi thấp, thanh nhiệt nêu ở trên nhưng với liều thấp hơn Nếu là loại chàm thể xuất tiết thì dùng bài trên bỏ Bạc hà thêm Sa tiền tử 8g, Thương truật 4g [5]

1.1.2.5 Các vị thuốc có thể sử dụng điều trị bệnh chàm

- Chữa ngứa (ngứa thường do phong gây ra nên dùng các vị thuốc trừ phong): địa phụ tử, bạch tiễn bì, thương nhĩ tử, băng phiến, bạc hà, kinh giới, ngưu bàng tử…

- Chữa đỏ, nóng rát (thường do nhiệt hay hỏa gây ra, dùng thuốc thanh nhiệt):

+ Nếu do nhiễm khuẩn thì dùng vị thuốc thanh nhiệt giải độc: kim ngân,

bồ công anh, sài đất, liên kiều…

+ Nếu do viêm nhiễm không sinh mủ thì dùng các thuốc thanh nhiệt tả hỏa: sinh địa, huyền sâm, địa cốt bì…; hoặc thanh nhiệt giải độc theo đường tiểu: tỳ giải, xa tiền, thổ phục linh, trạch tả

- Chữa phù nề, thẩm dịch chảy nước vàng (thường do thấp kết hợp nhiệt gây ra): dùng các thuốc thanh nhiệt táo thấp như hoàng bá, khổ sâm, hoàng liên… kết hợp với thuốc thanh nhiệt lợi thấp như sa tiền tử, hoạt thạch, nhân trần…

- Chữa da khô nứt nẻ, dày (thường do huyết táo gây ra): dùng các thuốc dưỡng huyết nhuận táo như đan sâm, tạo giác thích, đào nhân…

Các vị thuốc kết hợp với nhau thành các bài thuốc rồi chế biến thành các dạng thuốc phù hợp: thuốc bột (diệt khuẩn, chống viêm, chống ngứa), thuốc nước (băng rửa vết thương có tác dụng tiêu viêm trừ mủ), thuốc ngâm rượu (tiêu độc, chống ngứa), thuốc mỡ, thuốc dầu, thuốc cao, thuốc xông [5], [26], [69]

1.2 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC EZ

1.2.1 Tổng quan về bài thuốc

 Công thức bài thuốc

Kim ngân đằng 20g Thương nhĩ tử 7g

Núc nác 15g Đơn lá đỏ 5g

Hòe hoa 10g Hoàng bá 3g

- Độc tính cấp

Cao sắc nước ở liều ≤ 30g cao/ kg TT chuột, chuột trong các lô thử không thấy có hiện tượng gì đặc biệt, trong vòng 72 giờ không thấy xuất hiện chuột chết Với liều ≥ 35g cao/ kg TT chuột, xuất hiện các hiện tượng bất thường (giảm vận động, ăn uống ít, một số chuột bị tiêu chảy….) và xuất hiện chuột chết trong vòng 72h LD50= 257,05 (272,96-225,23) g dược liệu/kg Cao sắc cồn ở liều ≤ 33g cao/ kg TT chuột, chuột không thấy có hiện tượng gì đặc biệt và trong vòng 72 giờ không thấy xuất hiện chuột chết sau khi uống thuốc thử Với liều ≥ 40g cao/ kg TT chuột, chuột thấy có các hiện tượng bất thường (giảm vận động, ăn uống ít, một số chuột bị tiêu chảy) và xuất hiện chuột chết trong vòng 72 giờ Cao chiết ethanol có độc tính thấp hơn cao sắc nước LD50= 420,32 (455,68-349,60) g dược liệu/kg

Cao sắc nước và cao chiết ethanol đều có độc tính cấp nhất định trên chuột nhắt trắng nhưng đều có độ an toàn cao (chỉ số trị liệu cao sắc nước: 17,88 và cao sắc cồn: 29,25) [27]

- Tác dụng chống viêm

Tác dụng chống viêm cấp: cả cao sắc nước và cao sắc cồn đều có tác dụng chống viêm cấp, nhưng tác dụng chống viêm cấp của cao sắc cồn tốt hơn cao sắc nước và có phụ thuộc vào liều Tuy nhiên, tác dụng chống viêm cấp của cao sắc nước không nhận thấy sự phụ thuộc liều [27]

Tác dụng chống viêm mạn: cả cao chiết ethanol (liều14,37g dược liệu/

kg TT) và cao sắc nước đều có tác dụng chống viêm mạn tính trên mô hình gây viêm mạn u hạt ở chuột nhắt trắng Tác dụng này tương đương với prednisolon liều 10mg/kg [27]

 Công năng: lương huyết chỉ huyết, thanh nhiệt giải độc, trừ phong giáng thấp

 Chủ trị: phong nhiệt, thấp nhiệt, ban chẩn, mề đay, mụn nhọt

 Kiêng kỵ: người tì vị hư hàn, ỉa chảy lâu ngày, phụ nữ có thai không sử dụng

 Cách dùng: liều dùng 1 thang/ 1 ngày, sắc uống

1.2.2 Tóm tắt đặc điểm của các vị thuốc

1.2.2.1 Kim ngân đằng (Caulis cum folium Lonicerae)

- Cành và lá phơi hay sấy khô của cây Kim ngân (Lonicera japonica Thunb), họ Kim ngân (Caprifoliaceae) [8], [16]

- Thành phần hóa học: Flavonoid (luteolin, luteolin-7-rhamnose), saponin ( aglycon là acid oleanolic hoặc hederagenin), acid clorogenic Thân chứa 3 đồng phân acid isoclorogenic a, b, c [16]

- Tác dụng dược lý:

Tác dụng ngăn chặn choáng phản vệ: năm 1996, báo cáo của Đỗ Tất Lợi

và cs đã chứng minh rằng nước sắc kim ngân có khả năng ngăn chặn choáng phản vệ trên chuột lang: Số lượng tế bào hạt (mastocytes) ở mạng treo ruột ít thay đổi nhưng lượng histamin ở phổi chuột lang bị choáng phản vệ cao gấp rưỡi so với chuột lang bình thường hay đã uống kim ngân đằng trước khi gây choáng phản vệ [8], [29]

Tác dụng chống dị ứng: Dịch chiết ethanol của kim ngân có tác dụng đối với bệnh hen suyễn dị ứng trên mô hình thực nghiệm gây ra bởi lòng trắng trứng Dịch chiết có thể rất hiệu quả đối với các bệnh hen suyễn và viêm liên quan [37] Dịch chiết nước của kim ngân có tác dụng ức chế hoạt hóa tế bào mast do trypsin (ức chế ERK_Extracellular signal-regulated kinase và ức chế hoạt động của trypsin) [42]

Tác dụng chống viêm: dịch chiết nước của kim ngân ở liều 50, 100, 200mg/kg có tác dụng ức chế phù do trypsin gây ra thông qua ức chế thụ thể proteinase-activated receptor 2 (PAR2) [55] Polyphenol chiết xuất từ kim ngân có tác dụng chống viêm thông qua ức chế COX-2, iNOS, Cytokine như IL-1β, IL-6, TNF-α bằng cách ức chế NF-κB và p38 MAPK [48]

Tác dụng kháng khuẩn: nước sắc lá kim ngân với nồng độ 20-1,2% ức chế trực khuẩn Shiga, với nồng độ 20-5% ức chế trực khuẩn cận thương hàn, nồng độ 100% có tác dụng đối với tụ cầu khuẩn [29] Dịch chiết lá kim ngân đằng có tác dụng ức chế S aureus, E coli nhờ thành phần acid 3,5-dio-caffeoyl-quinic, 4,5-dio-caffeoylquinic acid [61]

Tác dụng khác: Kim ngân đằng có tác dụng tăng cường chuyển hóa chất béo [29]

Độc tính: chuột nhắt trắng, sau khi được cho uống nước sắc kim ngân liên tục trong 7 ngày với liều gấp 150 lần liều điều trị cho người, vẫn sống bình thường, giải phẫu các bộ phận không có gì thay đổi đặc biệt Nghiên cứu

được thực hiện trên dịch chiết ethanol cũng không xác định được LD50 [16], [29]

- Tính vị, quy kinh: kim ngân đằng có vị ngọt, hơi đắng, tính mát, không độc, quy vào 4 kinh tâm, phế, vị và tỳ [8]

- Công năng: Thanh nhiệt, giải độc, sát trùng [8], [29]

- Chủ trị: chữa mụn nhọt, mày đay, mẩn ngứa, ban sởi, tả, lỵ, ho do phế nhiệt, thấp khớp, viêm mũi dị ứng và các bệnh dị ứng khác [8], [16], [29]

- Liều dùng: 10-30g dưới dạng thuốc sắc, hãm, cao, rượu thuốc hoặc hoàn tán [8], [29]

- Kiêng kỵ: những người tỳ vị hư hàn không thực nhiệt, hoặc mồ hôi ra nhiều không nên dùng Những người uống bị ỉa lỏng chỉ cần giảm liều hoặc ngừng uống là hết [8], [29]

- Tác dụng dược lý:

Tác dụng chống choáng phản vệ: vỏ núc nác làm giảm độ thấm của mạch máu và flavonoid chiết từ vỏ núc nác có tác dụng chống choáng phản vệ gây bằng lòng trắng trứng trên thỏ và chuột lang, không có tác dụng bảo vệ đối với choáng gây bằng histamine [16], [29]

Tác dụng chống viêm: có tác dụng ức chế giai đoạn cấp tính của phản ứng viêm, tác dụng này thể hiện mạnh hơn ở động vật đã được gây mẫn cảm, tác dụng chống viêm còn tồn tại sau khi cắt bỏ tuyến thượng thận [16], [29] Trong chống viêm mạn, núc nác liều 15g/kg/ngày ức chế u hạt 20,2%, núc nác liều 20g/kg/ngày ức chế u hạt 21,5%, núc nác liều 25g/kg/ngày ức chế u hạt 31,3%, khi kết hợp với α-chymotrypsin tác dụng chống viêm cấp và mạn đều tăng cao [11] Dịch chiết dichloromethane vỏ thân và rễ núc nác cũng cho thấy có tác dụng chống viêm [44]

Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm: Dịch chiết dicloromethan vỏ thân và

rễ núc nác ức chế các chủng vi khuẩn Gr (+) (B.subtilis, S.aureus), Gr (+) (E.coli, P.aeruginosa) và nấm (C.albicans) [44]

Tác dụng khác: Vỏ núc nác có tác dụng ức chế co thắt gây bởi acetylcholin và histamin trên hồi tràng cô lập chuột lang [16]

Độc tính cấp: Rất thấp, LD50 đối với chuột nhắt trắng là 23ml dịch chiết

- Chủ trị: chữa các chứng bệnh vàng da, dị ứng mẫn ngứa, viêm họng, ho khan tiếng, đau dạ dày, lỵ, viêm đường tiết niệu, đái buốt ra máu, trẻ con ban, sởi [8], [16], [29]

- Liều dùng: 6-15g dưới dạng thuốc sắc hoặc cao lỏng Dùng ngoài lượng vừa đủ [8], [29]

- Kiêng kỵ: người hư hàn, đau bụng, đầy bụng, tiêu chảy không nên dùng núc nác [8], [29]

1.2.2.3 Hòe hoa (Flos Styphnolobii japonici imaturi)

- Nụ hoa phơi hay sấy nhẹ đến khô của cây Hòe (Styphnolobium japonicum(L.) Schott, Syn Sophora japonica L.), họ Đậu (Fabaceae) [8]

- Thành phần hóa học: thành phần chính là rutin C27H30O16 (từ 6-30%), ngoài ra nụ hòe có chứa betulin, sophoradiol, sophorin A, sophorin B, sophorin C và sophorose [4], [16], [28]

- Tác dụng dược lý:

Tác dụng chống dị ứng: Trên thỏ, rutin tiêm tĩnh mạch có thể phòng ngừa viêm da dị ứng và hiện tượng Arthus trên động được gây mẫn cảm Quercetin ức chế mạnh giải phóng histamine từ basophil do kháng nguyên Chất Genistein-4’-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosid (GRG) có tác dụng trong điều trị bệnh viêm dị ứng do Compound gây ra thông qua hoạt hóa tế bào mast [16], [28], [54]

Tác dụng chống shock phản vệ: Chất GRG có tác dụng cải thiện tình trạng shock phản vệ do Compound 48/80 gây ra và nhiều công trình nghiên cứu cũng đã chứng mình hòe hoa có tác dụng ngăn chặn phản ứng phản vệ [28], [54]

Tác dụng chống viêm: rutin và quercetin có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột do albumin, histamine, serotonin gây nên, cũng như sưng khớp khuỷu do men hyaluronidase tạo nên Trên chó gây viêm tắc tĩnh mạch thực

nghiệm bằng tiêm dầu thông, dùng rutin có tác dụng thúc đẩy quá trình hồi phục [16], [28]

Tác dụng tăng cường sức đề kháng, giảm tính thẩm thấu của mao mạch: rutin và quercetin đều có tác dụng tăng cường sức đề kháng, giảm tính thẩm thấu của mao mạch và hồi phục tính đàn hồi của mao mạch đã bị tổn thương [16], [28]

Tác dụng hạ huyết áp, hạ cholesterol máu: dịch chiết từ nụ hòe tiêm tĩnh mạch vẫn làm giảm huyết áp của chó đã gây mê; quercetin có tác dụng hạ cholesterol máu trên chuột cống trắng được gây tăng cholesterol máu, đồng thời có tác dụng điều trị và phòng ngừa bệnh xơ vữa động mạch thực nghiệm [16], [28]

Tác dụng khác: tác dụng bảo vệ cơ thể chống chiếu xạ; tác dụng cầm máu; tác dụng chống kết tập tiểu cầu; trên tim ếch cô lập quercetin thể hiện tác dụng cường tim; ngoài ra nụ hòe còn có tác dụng làm giảm lượng tiêu hao oxy của cơ tim; rutin có tác dụng bảo vệ gan; quercetin có tác dụng làm giảm trương lực cơ, giảm co thắt co thắt cơ trơn của quercetin lớn hơn nhiều rutin [16], [28]

Tác dụng gây đột biến: rutin và quercetin có tác dụng gây đột biến khi tiến hành thí nghiệm với Salmonella typhimuricum TA 1535, TA100, TA

1537 và TA 1538, nhưng đã được nghiên cứu không gây ung thư [16], [28]

- Tính vị, quy kinh: vị đắng, tính mát, quy vào 2 kinh can và đại tràng [8], [28]

- Công năng: Thanh nhiệt lương huyết, chỉ huyết, thanh can tả hỏa, bình can hạ áp, thanh phế, chống viêm [8], [28]

- Chủ trị: dùng làm thuốc cầm máu trong các trường hợp chảy máu như trĩ ra máu, thổ huyết, máu cam, phụ nữ băng huyết, tiểu tiện ra máu, ruột chảy máu, xuất huyết cấp tính do viêm thận, xuất huyết ở phổi, trường phong tiện

huyết, băng lậu, trĩ; can hỏa thượng viêm, đau đầu, chóng mặt, mắt đỏ, dễ cáu gắt [8], [16], [28]

- Liều dùng:6-12g (20g) sắc nước uống hoặc hãm như chè [8], [16], [28]

- Kiêng kỵ: người thuộc chứng hư hàn, ỉa chảy, phụ nữ có thai không dùng, phụ nữ sau sinh, thương hàn [28]

1.2.2.4 Thương nhĩ tử (Fructus Xanthii strumarii)

- Quả già đã phơi hay sấy khô của cây Ké đầu ngựa (Xanthium strumarium L., Syn Xanthium japonicum Widder, X sibiricum Patrin ex Widder), họ Cúc (Asteraceae) [8], [28]

- Thành phần hóa học: có khoảng 30-35% chất béo, 1,27% xanthostrumarin, 3,3% nhựa và vitamin C, glucose, 7,2%fructose, 4,9% sucrose, acid hữu cơ (acid oleic, linoleic, palmaitic, stearic…), kali nitrat, phosphatid, sitosterol, strumarosid, nhóm sesqui-terpen lacton (xanthinin, xanthumin, xanthatin, xanthol, isoxanthol), atractyloside, carboxy atractyloside dạng muối Quả còn chứa tetrahydroxyflavon và stigmasterol Toàn cây chứa nhiều iod Định lượng 1g quả chứa 220-230 µg [4], [17], [28]

co giật trên chuột lang; tiêm tĩnh mạch histamin gây hạ áp và thí nghiệm histamin gây co thắt hồi tràng cô lập của động vật [16], [28] Chất

caffeoylxanthiazoloside phân lập từ quả có tác dụng chống dị ứng trên mô hình gây viêm mũi dị ứng và phản ứng sốc phản vệ [49]

Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm: Chất chiết xanthinin và xanthium có tác dụng kháng khuẩn mạnh đối với các vi khuẩn Gram (-) và các nấm Cao chiết ethylic có tác dụng kháng khuẩn, cao nước không có tác dụng này [16], [28]

Tác dụng chống viêm: Thành phần β-sitosterol-β-D-glucosid có tác dụng chống viêm và là thành phần của những chế phẩm điều hòa hoạt động nội tiết Dịch chiết n-butanol có tác dụng chống viêm trên mô hình viêm tai [16], [28], [36]

Tác dụng khác: Thương nhĩ tử chứa nhiều vitamin C có tác dụng làm mát, dịu viêm, làm mềm niêm mạc Thương nhĩ tử có tác dụng làm giảm cường độ co bóp tim, giảm thân nhiệt, lợi tiểu Hoạt chất xanthium có tác dụng ức chế thần kinh trung ương Cao thương nhĩ tử chế thành viên chữa bướu cổ, kết quả đạt trên 80% khỏi bệnh (theo tổng cục lâm nghiệp Việt Nam, 1969-1970) [16], [28]

Độc tính: Atractyloside, carboxy atractyloside có tác dụng hạ đường huyết rất mạnh [16], đặc biệt gây tổn thương gan cấp tính [56]

- Tính vị , quy kinh: có vị ngọt nhạt, hơi đắng, tính ấm, quy vào kinh phế, thận, tỳ [16], [20]

- Công năng: Trừ phong thấp, tiêu độc sát khuẩn, tán phong thông khiếu, chỉ huyết, tán kết [8], [20], [28]

- Chủ trị: chữa phong hàn đau đầu, tay chân co rút, phong tê thấp, đau khớp, mũi chảy nước hôi, mày đay, lở ngứa, tràng nhạc, mụn nhọt, làm ra mồ hôi Còn dùng chữa đau răng, đau họng, bướu cổ, nấm tóc, hắc lào, lỵ [8], [16]

- Liều dùng: 6-12g dạng thuốc sắc, viên hoặc cao [8], [20]

- Kiêng kỵ: không phải phong nhiệt không dùng Trường hợp huyết hư không nên dùng Uống quá liều dễ bị ngộ độc, cần theo dõi Khi sử dụng cần kiêng thịt ngựa, thịt lợn [8], [20], [28]

1.2.2.5 Đơn lá đỏ (Folium Excoecariae)

- Lá phơi hay sấy khô của cây Đơn lá đỏ (Excoecaria cochinchinensis Lour., Syn Excoecaria bicolor Hass., Excoecaria orientalis Pax Et Hofm., Antidesma bicolor Hassk), họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) [8], [16]

- Thành phần hóa học: flavonoid 1,5%, saponin, coumarin, anthranoid, tanin, đường khử Sơ bộ xác định flavonoid có 6 chất trong đó một chất thuộc nhóm flavonol [16], [28]

- Tác dụng dược lý:

Tác dụng chống viêm, chống dị ứng: Đơn lá đỏ có tác dụng chống viêm, chống dị ứng tốt (Nguyễn Danh Mâu, 1980) Dịch chiết đơn lá đỏ có tác dụng giảm phù từ giờ thứ 4, 5 Dịch chiết flavonoid toàn phần giảm 85,8%, lô uống dịch sắc giảm 90,3% phản ứng dị ứng [1]

Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm: Đơn lá đỏ có tác dụng kháng các vi khuẩn B cereus, B pulmilus, S lutea, B subtilis tùy dạng chiết xuất Dịch chiết flavonoid kháng vi khuẩn Gr (+) tốt nhất Dịch chiết saponin có kháng nấm C Albicans [2]

Tác dụng khác: Dịch chiết đơn lá đỏ có tác dụng chống oxy hóa, giảm co thắt cơ trơn trên hồi tràng chuột lang cô lập Có tác dụng ức chế sự phát triển của khối u thực nghiệm gây ra bởi benzo-α-pyren và dầu ba đậu trên chuột thí nghiệm [1]

Độc tính: Có tác giả cho rằng nhựa cây độc đối với cá [27] Theo Nguyễn Thái An và cs., thử nghiệm trên chuột nhắt, ở liều 100g/kg TT - tức

là liều cao gấp 300 lần liều thường dùng ở người (10-20g/người), chuột giảm

hoạt động nhưng khi kích thích vẫn hoạt động bình thường Do vậy không tính được LD50 [2]

- Tính vị, quy kinh: vị cay, hơi đắng, có tiểu độc Quy kinh can, thận [28]

- Công năng: Thanh nhiệt giải độc, khu phong trừ thấp, lợi tiểu, chỉ thống, thông kinh hoạt lạc [8], [28]

- Chủ trị: chữa mẩn ngứa, mụn nhọt, tiêu chảy lâu ngày không khỏi, lỵ, đái ra máu Ở Trung Quốc dùng chữa sởi, quai bị, viêm amidan, đau thắt ngực, đau thận, đau cơ [8], [28]

- Liều dùng: 10-20g sắc uống (15-20g lá tươi sao vàng sắc uống) [8], [15], [28]

- Kiêng kỵ: người hay chảy máu Thuộc chứng hư hàn không dùng [16], [28]

1.2.2.6 Hoàng bá (Cortex Phellodendri)

- Vỏ thân và vỏ cành, cạo bỏ lớp bần, phơi hay sấy khô của cây Hoàng

bá (Phellodendron chinense Schneid hoặc Phellodendron amurense Rupr.),

họ Cam (Rutaceae) [8]

- Thành phần hóa học: chủ yếu là alcaloid như 1,6% berberin C20H19

O-5N, một ít palmatin C21H23O5N, phellodendrin, magnoflorin, candicin, jatrorrhizin, các chất có tinh thể không chứa nito như: obakunon C26H30O7, obakulacton C26H30O8, chất béo, hợp chất sterolic, phenolic, chất dính, chất nhựa [6], [16], [28]

- Tác dụng dược lý:

Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, kháng trùng roi: Dịch chiết ethanol

có tác dụng kháng với nhiều loại vi khuẩn Gram (+) và Gram (-) (Staphyllococus, lỵ, thổ tả, Salmonella) nhưng yếu hơn hoàng liên Dịch chiết

và nước sắc hoàng bá thí nghiệm trên ống kính có tác dụng ức chế nấm gây

bệnh ngoài da Nước sắt 100% có tác dụng ức chế roi trùng âm đạo nhưng không mạnh [16], [21]

Tác dụng chống viêm: Nghiên cứu chỉ ra dịch chiết ethanol của hoàng bá

có tác dụng chống viêm tiềm năng do làm giảm mức độ phù tai ở chuột gây viêm tai bằng 12-O-tetradecanoylphorbol-acetate (TPA) [60]

Tác dụng khác: Hoàng bá tiêm tĩnh mạch hoặc tiêm phúc mạc có tác dụng hạ huyết áp rõ rệt trên động vật gây mê Phellodendrin có tác dụng ức chế thần kinh trung ương, gây liệt cơ kiểu curare nhưng yếu, obaculacton có tác dụng hạ đường huyết Ngoài ra hoàng bá có tác dụng bảo vệ tiểu cầu, chống tiêu chảy Hoàng bá có tác dụng bảo vệ thần kinh nhờ khả năng ức chế quá trình chết theo chương trình (apoptosis) [28], [59]

Độc tính cấp: trên chuột trắng tiêm phúc mạc: LD50=2,7g/kg [16], [28]

- Tính vị, quy kinh: vị đắng, tính hàn, quy vào kinh thận, tỳ và bàng quang [8], [20]

- Công năng: tả tướng hỏa, trừ nhiệt thấp, thanh nhiệt táo thấp, tư âm giáng hỏa, giải độc tiêu viêm [8], [20], [28]

- Chủ trị: chữa nhiệt lỵ, tiêu chảy, hoàng đản, đái đục, di mộng tinh, đái

ra máu, trĩ, xích bạch đới, cốt chưng lao nhiệt, mắt sưng đỏ, loét miệng lưỡi, viêm âm đạo, sưng tinh hoàn, đái đường Trong y học hiện đại chữa viêm màng não, lỵ trực tràng, viêm phổi, lao phổi, viêm âm đạo do trùng roi, viêm tai giữa có mủ, viêm xoang hàm mạn tính [8], [20], [28]

- Liều dùng: 4,5-9g thuốc sắc hoặc hoàn tán [8], [20], [28]

- Kiêng kỵ: Tỳ hư vị yếu, đại tiện lỏng, ăn uống không tiêu không dùng [8], [28]

CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 Nguyên liệu

Các vị thuốc Kim ngân đằng, Núc nác, Hòe hoa, Thương nhĩ tử, Đơn lá

đỏ, Hoàng bá đã được chế biến do Phòng chẩn trị Phùng Gia Đườngsố 4 ngõ

99 Trung Kính Hà Nội cung cấp và đạt tiêu chuẩn DĐ Việt Nam IV

Cao đặc bài thuốc EZ bào chế bằng phương pháp sắc nước và chiết bằng ethanol 70% Dịch chiết được cô dưới áp suất giảm thu được cao có độ ẩm nhỏ hơn 20%

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu

2.1.2.1 Trang thiết bị

- Các dụng cụ đo lường đạt tiêu chuẩn kiểm định: ống đong, cốc có mỏ, bình định mức

- Cân kỹ thuật Precisa-XB320C

- Cân phân tích Sartorius-TE214S

- Máy xay dược liệu

- Nồi sắc thuốc Hàn Quốc

- Phù kế Plethysmometer No7250 của hãng Ugo-Basile (Italy)

- Thước đo điện tử, độ chính xác 20 mcm

- Cao đặc EZ chiết ethanol 70% và chiết nước

- Compound 48/80 lọ 100mg của hãng Sigma Aldrich- Singapore

- Methylprednisolon (Medrol®): viên nén 4 mg của hãng Pfizer, Mỹ

- Ketotifen (Ketosan®): viên nén 1 mg của hãng Hasan-Dermapharm, liên doanh Việt Nam – Đức

- Rutin chuẩn hàm lượng 87,12% do Viện kiểm nghiệm thuốc TW cung cấp

- Methanol, acid acetic băng dùng cho HPLC của hãng Merck

2.2 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM

2.2.1 Bào chế cao đặc EZ

Cao đặc bài thuốc EZ được bào chế bằng hai phương pháp: sắc nước và chiết bằng ethanol 70%

2.2.1.1 Sắc

Các dược liệu được rửa sạch, sấy khô ở 60ºC đạt tiêu chuẩn DĐVN IV, trộn đều các dược liệu và chiết xuất bằng phương pháp sắc với nước Cô dịch chiết thu được dưới áp suất giảm đến thể chất quy định

2.2.1.2 Chiết bằng ethanol

Các dược liệu được rửa sạch, sấy khô ở 60ºC đạt tiêu chuẩn DĐVN IV, chiết xuất riêng từng dược liệu bằng phương pháp chiết ethanol Cô dịch chiết của từng dược liệu thu được đến cao lỏng 1: 1, sau đó trộn đều các cao lỏng rồi cô dưới áp suất giảm đến thể chất quy định

2.2.2 Đính tính rutin trong cao đặc bằng phương pháp TLC

Đối chiếu dung dịch rutin chuẩn với dịch chiết bài thuốc bằng TLC: Triển khai trên một số hệ dung môi, chọn hệ có vết rõ, dễ nhận biết được rutin trong cao đặc bài thuốc để ghi lại kết quả

2.2.3 Định lượng rutin trong cao đặc bằng HPLC

Xác định hàm ẩm trong cao chiết ethanol 70% và cao chiết nước theo phương pháp mất khối lượng do làm khô (DĐVN IV)

Tham khảo các phương pháp định lượng rutin bằng HPLC

Dựa vào công thức cấu tạo và tính chất lý hóa của rutin cũng như điều kiện thực nghiệm ở nước ta hiện nay để xây dựng quy trình kỹ thuật định lượng rutin bằng phương pháp HPLC

Bằng thực nghiệm nghiên cứu các điều kiện tiến hành để xây dựng phương pháp tiến hành:

- Khảo sát điều kiện sắc ký: chọn cột, pha động, bước sóng, thể tích tiêm mẫu, tốc độ dòng thích hợp để định lượng

- Xây dựng phương pháp định lượng

2.2.4 Khảo sát tác dụng chống dị ứng của cao đặc EZ

2.2.4.1 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng trên mô hình gây shock phản vệ trên chuột nhắt trắng

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, thuần chủng, cả hai giống, khỏe mạnh, nặng 25  2 g

Phương pháp: nghiên cứu theo phương pháp thực nghiệm trên mô hình gây shock phản vệ bằng Compound 48/80

Tác nhân gây shock phản vệ là Compound 48/80 Compound 48/80 được tiêm vào màng bụng của chuột nhắt trắng sau 2 giờ uống thuốc Quan sát tỷ lệ chuột chết ở các lô trong 1 giờ

Chỉ tiêu quan sát: số chuột chết

Chỉ tiêu đánh giá: Tỷ lệ phần trăm chuột chết trong 1 giờ sau khi tiêm Compound 48/80

X(%) = B 100

Trong đó:

X(%): tỷ lệ chuột chết [33], [38], [41], [47]

B là số chuột chết của từng lô sau 1 giờ

A là tổng số chuột nghiên cứu của từng lô

2.2.4.2 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng trên mô hình gây ngứa trên chuột nhắt trắng

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, thuần chủng, cả hai giống, khỏe mạnh, nặng 25  2 g

Phương pháp: sử dụng Copound 48/80 liều 4mg/kg để gây tình trạng dị ứng biểu hiện bằng triệu chứng ngứa trên da chuột Gây ngứa bằng cách tiêm dung dịch Compound 48/80 dưới da cổ Theo dõi phản xạ gãi trên toàn bộ cơ

thể (tại các thời điểm 0-5, 5-10, 10-15, 15-20 phút) Các lô chuột được đánh giá bằng toàn bộ các nghiên cứu viên tham gia để tránh sai số

Chỉ tiêu quan sát: số lần phản xạ gãi trên toàn bộ cơ thể chuột

Chỉ tiêu đánh giá: Số lần gãi trung bình giữa các lô ở từng thời điểm và tổng số lần gãi trung bình trong 20 phút được so sánh giữa các lô để đánh giá tác dụng chống dị ứng

2.2.4.3 Nghiên cứu tác dụng chống dị ứng bằng mô hình gây viêm cấp tính trên chân chuột

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, thuần chủng, cả hai giống, khỏe mạnh, nặng 25  2 g

Phương pháp: Sử dụng Compound 48/80 để gây tình trạng dị ứng trên da gan bàn chân chuột, đánh giá mức độ dị ứng thông qua chiều dày và sự gia tăng thể tích chân chuột Gây mô hình bằng cách tiêm dưới da gan bàn chân dung dịch Compound 48/80 0,4% Đo độ dày và thể tích bàn chân trước và sau khi tiêm ( 30 phút và 1 giờ) Tính kết quả trung bình và so sánh

Chỉ tiêu quan sát:

- Chiều dày chân bên phải

- Thay đổi thể tích chân chuột

Chỉ tiêu đánh giá: Độ gia tăng thể tích và chiều dày chân chuột ở 2 thời điểm 30, 60 phút so với ban đầu So sánh giá trị trung bình về mức độ gia tăng thể tích và chiều dày giữa các lô để đánh giá tác dụng chống dị ứng Tính kết quả theo công thức của Fontaine

+ Độ gia tăng thể tích chân của từng chuột:

Trong đó: Vt: Thể tích chân chuột sau khi gây dị ứng

Vo: Thể tích chân chuột trước khi gây dị ứng

+ Tác dụng chống dị ứng của thuốc được đánh giá bằng khả năng ức chế gia tăng thể tích chân chuột (I%):

Xác định giá trị trung bình, độ lệch chuẩn và khoảng tin cậy theo công thức:

Giá trị trung bình:

Độ lệch chuẩn: