Nghiên cứu bài thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi về thực vật, hóa học và thăm dò tác dụng in vitro

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HÓA HỌC VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Hà nội - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HÓA HỌC VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Hoàng Tuấn Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội - 2013 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được rất nhiều sự hướng dẫn và giúp đỡ của thầy cô, gia đình và bạn bè. Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình đến TS. Nguyễn Thu Hằng và TS. Nguyễn Hoàng Tuấn hai thầy cô đã tận tình hướng dẫn và động viên tôi giúp tôi hoàn thành tốt khóa luận. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược liệu đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến các thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy bảo, dìu dắt tôi trong suốt những năm học vừa qua. Lời cảm ơn cuối cùng tôi xin gửi đến gia đình, bạn bè những người luôn quan tâm, động viên và là chỗ dựa tinh thần vững chắc cho tôi hoàn thành khóa luận này. Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2013 Sinh viên Phạm Thị Nhung MỤC LỤC Danh mục các kí hiệu, chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1. TỔNG QUAN Error! Bookmark not defined. 1.1. Bài thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chiError! Bookmark not defined. 1.2. Cây cau Error! Bookmark not defined. 1.3. Cây dừa Error! Bookmark not defined. 1.4. Cây chuối Error! Bookmark not defined. 1.5. Giới thiệu chung về quá trình đông máu và bệnh huyết khối tĩnh mạch chi Error! Bookmark not defined. Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark no 2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị Error! Bookmark not defined. 2.1.1. Nguyên liệu Error! Bookmark not defined. 2.1.2. Hóa chất, dụng cụ Error! Bookmark not defined. 2.1.3. Thiết bị nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 2.2. Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật Error! Bookmark not defined. 2.2.2. Nghiên cứu thành phần hóa học Error! Bookmark not defined. 2.2.3.Thăm dò ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên quá trình đông máu……………………………………………………………………19 2.2.4. Thăm dò ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên sự ngưng tập tiểu cầu Error! Bookmark not defined. 2.3. Phương pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 2.3.1. Xác định tên khoa học Error! Bookmark not defined. 2.3.2. Nghiên cứu đặc điểm vi học Error! Bookmark not defined. 2.3.3. Nghiên cứu về hóa học 20 2.3.4. Đánh giá ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên quá trình đông máu Error! Bookmark not defined. 2.3.5. Đánh giá ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên sự ngưng tập tiểu cầu 20 Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬNError! Bookmark not defi 3.1. Xác định tên khoa học và nghiên cứu đặc điểm vi học của mẫu nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 3.1.1. Cau Error! Bookmark not defined. 3.1.2. Dừa 27 3.1.3. Chuối 32 3.2. Nghiên cứu thành phần hóa học 38 3.3. Nghiên cứu ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên quá trình đông máu và trên sự ngưng tập tiểu cầu 45 3.4. Bàn luận 51 Chương 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 54 4.1. Kết luận 54 4.2. Đề xuất 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APTT Thời gian Cephlin – kaolin dd dung dịch GS. Giáo sư IC Nồng độ ức chế tổi thiểu INCIMEDI Nghiên cứu tầm soát huyết khối tĩnh mạch sâu chi dưới không triệu chứng NXB. Nhà xuất bản pp. page PT Thời gian Quick tr. Trang TT Thời gian thrombin DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số loài thuộc chi Musa ở Việt Nam Bảng 2: Các yếu tố đông máu. Bảng 3: Kết quả định tính các nhóm chất trong 3 dược liệu của bài thuốc bằng phản ứng hóa học Bảng 4: Kết quả định tính các nhóm chất của bài thuốc bằng phản ứng hóa học Bảng 5: Thành phần các mẫu trong quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng của bài thuốc trên quá trình đông máu Bảng 6: Kết quả đánh giá ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên các thời gian PT, APTT, TT Bảng 7: Thành phần các mẫu trong quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng của bài thuốc trên sự ngưng tập tiểu cầu Bảng 8: Kết quả đánh giá ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên sự ngưng tập tiểu cầu DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1. Sơ đồ quá trình đông máu với 2 con đường nội sinh và ngoại sinh Hình 1.1. Ảnh chụp cây cau tại thực địa Hình 1.2. Ảnh chụp các đặc điểm cây cau. Hình 1.3. Ảnh chụp dược liệu rễ cau Hình 1.4. Ảnh chụp vi phẫu rễ cau dưới kính hiển vi Hình 1.5. Ảnh chụp đặc điểm bột rễ cau dưới kính hiển vi Hình 2.1. Ảnh chụp cây dừa Hình 2.2. Ảnh chụp dược liệu rễ dừa Hình 2.3. Ảnh chụp vi phẫu rễ dừa duới kính hiển vi Hình 2.4. Ảnh chụp đặc điểm bột rễ dừa dưới kính hiển vi Hình 3.1. Ảnh chụp cây chuối tiêu tại thực địa Hình 3.2. Ảnh chụp các đặc điểm của cây chuối tiêu Hình 3.3. Ảnh chụp dược liệu rễ chuối tiêu Hình 3.4. Ảnh chụp vi phẫu rễ chuối tiêu dưới kính hiển vi Hình 3.5. Ảnh chụp đặc điểm bột rễ chuối tiêu dưới kính hiển vi 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Huyết khối tĩnh mạch là tắc nghẽn một hay nhiều đoạn tĩnh mạch nông hoặc sâu do cục máu đông cấu tạo bởi fibrin và huyết cầu. Huyết khối tĩnh mạch có thể gặp ở nhiều nơi nhưng hay gặp nhất là ở chi dưới [6]. Huyết khối ở chi dưới có thể theo máu đến phổi gây tắc động mạch phổi - gọi là thuyên tắc phổi, là một bệnh lý nặng nề, có thể dẫn đến tử vong đột ngột. 80% huyết khối tĩnh mạch sâu không có triệu chứng cho đến khi xảy ra biến chứng nghiêm trọng là thuyên tắc phổi. Nếu bệnh nhân không gặp biến chứng thuyên tắc phổi thì có đến 20-50% sau này bị hội chứng hậu huyết khối với biểu hiện loét, đau nhức và giới hạn vận động chi dưới [15]. Theo các thông tin được đưa ra trong '' Hưng dn chn đon, điu tr v d phng Thuyên tc - huyt khi tnh mch '' của Hội tim mạch Việt Nam năm 2011, ở Mỹ mỗi năm có khoảng 600.000 ca mới mắc thuyên tắc huyết khối tĩnh mạch và dự đoán có khoảng 180.000 trường hợp tử vong do biến chứng thuyên tắc phổi của bệnh huyết khối tĩnh mạch sâu [19], [35]. Nghiên cứu INCIMEDI là nghiên cứu tầm soát huyết khối tĩnh mạch sâu chi dưới không triệu chứng tại Việt Nam trên bệnh nhân nội khoa nhập viện bằng siêu âm Doppler do GS. Đặng Vạn Phước, GS. Phạm Gia Khải và GS. Nguyễn Lân Việt cùng cộng sự thực hiện tại các bệnh viện lớn ở phía Nam và Bắc cho thấy có 22% bệnh nhân được phát hiện có huyết khối tĩnh mạch sâu bằng siêu âm Doppler, mặc dù không có triệu chứng gì . Kết quả này đã chứng minh rằng tỷ lệ huyết khối tĩnh mạch sâu không hiếm gặp ở nước ta [15]. Thuốc thường được chỉ định để điều trị bệnh huyết khối tĩnh mạch chi là heparin và các thuốc chống đông đường uống, nhưng nhược điểm của các thuốc này là có thể gây tai biến chảy máu [4]. Một xu hướng khác điều trị huyết khối tĩnh mạch chi là sử dụng các thuốc từ dược liệu. Trong số các bài 2 thuốc dân gian chữa bệnh huyết khối tĩnh mạch chi thì bài thuốc gồm rễ cau, rễ dừa, rễ chuối đã được nhân dân ở Hưng Yên sử dụng cho hiệu quả tương đối tốt. Ở nước ta, cây cau, cây dừa, cây chuối được trồng phổ biến ở nhiều nơi, được sử dụng rộng rãi trong đời sống và trong y học. Với mong muốn kế thừa và tiếp tục phát huy bài thuốc dân gian ở Hưng Yên, chúng tôi tiến hành đề tài “ Nghiên cứu bài thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi về thực vật, hóa học và thăm dò tác dụng in vitro.” với các mục tiêu sau: 1- Nghiên cứu đặc điểm thực vật và đặc điểm vi học của 3 dược liệu trong bài thuốc. 2- Định tính thành phần hóa học của 3 dược liệu và của bài thuốc. 3- Thăm dò một số tác dụng in vitro của bài thuốc. [...]... khoa huyết học bệnh viện Bạch Mai - Máy đo độ ngưng tập tiểu cầu Chronolog (Mỹ) tại khoa huyết học bệnh viện Bạch Mai 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu về thực vật Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu và đặc điểm bột của rễ cau, rễ dừa, rễ chuối trong bài thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Định tính 3 dược liệu và bài thuốc bằng phản ứng hóa học 2.2.3 Thăm dò ảnh... vùng Nam Mỹ, Caribe, Đông Nam Á và Nam Phi [16],[41] 1.4.2 Về hóa học Dịch chi t ethanol của rễ chuối M paradisiaca L có chứa glycosid, steroid, flavonoid, saponin, đường khử và tanin [20] 1.4.3 Tác dụng sinh học 1.4.3.1 .Tác dụng kháng nấm, kháng khuẩn Nghiên cứu thử nghiệm tác dụng kháng khuẩn của dịch chi t ethanol của rễ chuối M paradisica L cho thấy phổ ức chế rộng, tác dụng cả vi khuẩn gram dương... dò ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên quá trình đông máu 2.2.4 Thăm dò ảnh hưởng in vitro của bài thuốc trên sự ngưng tập tiểu cầu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Xác định tên khoa học - Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu, đối chi u với các đặc điểm được mô tả trong các tài liệu [12], [16], [41] để xác định tên khoa học 2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm vi học - Mô tả đặc điểm vi học của 3 dược... tĩnh mạch chi Mục tiêu điều trị là cải thiện các triệu chứng viêm như sưng, nóng, đỏ, đau, tránh sự lan rộng của huyết khối, tránh nhiễm khuẩn, tránh tái phát [4] Các nhóm thuốc thường dùng trong điều trị huyết khối tĩnh mạch chi : - Các thuốc chống đông để làm loãng máu khiến máu khó đông, ngăn ngừa hình thành huyết khối và tăng trưởng của huyết khối đã có Heparin và các thuốc chống đông đường uống (thuốc. .. các phân đoạn dịch chi t Ether dầu hỏa và Ethyl acetat của rễ cau trồng tại huyện Phong Điền, thành phố Cần Thơ [13], [14] 1.2.3 Tác dụng sinh học Nghiên cứu về tác dụng chống oxi hóa của dịch chi t methanol rễ cau, sử dụng chất chuẩn đối chi u là trolox có IC50=10,14385 µg Kết quả cho thấy dịch chi t methanol rễ cau có tác dụng chống oxi hóa với IC50=21.1417 µg, 5 khả năng chống oxi hóa tương ứng với... đọng, huyết lưu chậm, dễ gây huyết khối do các tế bào máu gần nhau nên dễ kết dính, tiểu cầu và bạch cầu sát vào thành mạch, tình trạng thiếu oxy làm tổn thương tế bào nội mô dính tế bào vào vách mạch và giải phóng các chất tạo huyết khối [3] Nguyên nhân gây ứ máu: Chèn ép tĩnh mạch, suy thành tĩnh mạch, suy tim bất động quá lâu, cản trở dòng máu về tim, v.v….[3] 17 1.5.2.2 Điều trị bệnh huyết khối tĩnh. .. làm thuốc trừ giun sán, chữa bệnh về máu, bệnh đường sinh dục [20], [39] 1.5 Giới thiệu chung về quá trình đông máu và bệnh huyết khối tĩnh mạch chi 1.5.1 Quá trình đông máu Đông máu là một quá trình trong đó một số máu từ thể lỏng biến thành thể đặc (cục đông) do sự chuyển fibrinogen, một protein hòa tan của huyết tương thành các sợi fibrin, không hòa tan dưới tác dụng của thrombin Các sợi fibrin kết... thuộc nhất là từ Thanh Hóa trở vào Các tỉnh Bình Định, Phú Yên, Khánh Hòa, Bến Tre, Đồng Tháp, Kiên Giang, Long An …là những tỉnh có diện tích trồng dừa lớn [12], [16] 1.3.2 Về hóa học Dịch chi t nước rễ dừa có chứa flavonoid, glycosid, carbohydrat, tanin và saponin [27] 1.3.3 Tác dụng sinh học 1.3.3.1 .Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm 7 Thử tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của dịch chi t dichloromethan... bất thường về cấu trúc phân tử fibrinogen, có mặt các chất ức chế thrombin (heparin) hoặc chất ức chế trùng phân fibrin [7] 1.5.2 Bệnh huyết khối tĩnh mạch chi 1.5.2.1 Cơ chế bệnh sinh Có 3 yếu tố gây nên huyết khối tĩnh mạch: - Tổn thương nội mô : 16 Đây là yếu tố quyết định Bình thường các tế bào nội mô chứa nhiều chất tiêu tơ huyết và được che phủ bởi một chất có đặc tính không thấm ướt và điện tích... 25, 50, và 100 (mg / kg trọng lượng cơ thể) làm tăng cường các hoạt động phụ thuộc vào testosteron của tinh hoàn, kích thích sự hoạt động bình thường của tinh hoàn và tác động trên cả hai thuộc tính androgenic và đồng hóa ở động vật thí nghiệm so với chứng (p < 0,05) [39] 12 1.4.3.5 Tác dụng chống rối loạn chuyển hóa NH3 trên chuột Nghiên cứu về tác dụng chống rối loạn chuyển hóa NH3 của dịch chi t . TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HÓA HỌC VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HÓA HỌC VÀ THĂM DÒ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP. huyết khối tĩnh mạch chi về thực vật, hóa học và thăm dò tác dụng in vitro. ” với các mục tiêu sau: 1- Nghiên cứu đặc điểm thực vật và đặc điểm vi học của 3 dược liệu trong bài thuốc. 2- Định