Đánh giá tác dụng giải lo âu thực nghiệm và một số tác dụng hướng thần kinh khác của 1 tetrahydropalmatin

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ********** LÊ DOÃN TRÍ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU THỰC NGHIỆM VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG HƯỚNG THẦN KINH KHÁC CỦA l - TETRAHYDROPALMATIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ DOÃN TRÍ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU THỰC NGHIỆM VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG HƯỚNG THẦN KINH KHÁC CỦA l - TETRAHYDROPALMATIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn Hoàng Anh 2. Ths. Nguyễn Thu Hằng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Bằng tất cả sự chân thành và lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới TS. Nguyễn Hoàng Anh, Ths. Nguyễn Thu Hằng là những người thầy, người cô đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận. Em xin gửi lời cảm ơn tới TS. Nguyễn Quốc Huy, Bộ môn Thực vật, TS. Nguyễn Trần Linh, Bộ môn Bào chế, DS. Phạm Đức Vịnh, Bộ môn Dược lực, trường ĐH Dược Hà Nội đã có những góp ý và giúp đỡ em trong quá trình thực hiện đề tài. Em xin gửi lời cảm ơn tới anh Đinh Đại Độ, kỹ thuật viên tại bộ môn Dược lực trường ĐH Dược Hà Nội đã nhiệt tình giúp đỡ và trực tiếp thực hiện nhiều công việc xuyên suốt trong quá trình tiến hành đề tài. Nhân đây em cũng xin gửi lời cảm ơn tới: Các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên trong bộ môn Dược lực đã tạo mọi điều kiện, giúp đỡ để em có thể hoàn thành khóa luận một cách tốt nhất. Các thầy cô trong Ban giám hiệu nhà trường, các phòng ban, các bộ môn trường Đại học Dược Hà Nội đã tận tình dạy dỗ, giúp đỡ em trong quá trình học tập tại trường. Em cũng xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới những người thân trong gia đình, những người bạn đã luôn kịp thời động viên, ủng hộ em trong suốt quá trình học tập tại trường cũng như trong thời gian thực hiện khóa luận. Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 5 năm 2014 Sinh viên Lê Doãn Trí DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Lo âu và rối loạn lo âu 3 1.1.1. Lo âu 3 1.1.2. Tình hình dịch tễ 4 1.1.3. Phân loại 4 1.1.4. Sinh hóa thần kinh trong rối loạn lo âu 5 1.1.5. Điều trị rối loạn lo âu bằng các thuốc hóa dược 6 1.2. l – tetrahydropalmain và tác dụng dược lý tâm thần/thần kinh 8 1.2.1. Cấu trúc hóa học và tính chất lý hóa 8 1.2.1.1. Cấu trúc hóa học 8 1.2.1.2. Tính chất lý hóa 9 1.2.2. Nguồn gốc và chiết xuất 10 1.2.3.Các tác dụng dược lý hướng thần kinh và tâm thần của tetrahydropalmatin. 12 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1. Nguyên liệu 16 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2. Hóa chất, thiết bị 16 2.1.3. Động vật thí nghiệm 16 2.1.4 Chuẩn bị thuốc thử 17 2.2. Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1. Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 17 2.2.2. Nội dung nghiên cứu 17 2.2.3. Điều kiện tiến hành thí nghiệm 19 2.2.4. Liều lượng sử dụng trong nghiên cứu 19 2.2.5. Các mô hình dược lý thực nghiệm sử dụng trong nghiên cứu 20 2.2.5.1. Đánh giá tác dụng giải lo âu trên mô hình EPM 20 2.2.5.2. Đánh giá tác dụng giải lo âu trên mô hình ETM 21 2.2.5.3 Đánh giá ảnh hưởng trên vận động tự nhiên trên mô hình OFT 22 2.2.5.4. Ảnh hưởng trên thời gian ngủ do thiopental 23 2.2.5.5. Đánh giá tác dụng chống trầm cảm trên mô hình FST 23 2.3. Xử lý số liệu 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1. Đánh giá tác dụng giải lo âu của l – tetrahydropalmatin 26 3.1.1 Trên mô hình chữ thập nâng cao, EPM 26 3.1.1.1. Thăm dò liều có tác dụng giải lo âu của l - tetrahydropalmatin 26 3.1.1.2. Tác dụng giải lo âu của l – tetrahydropalmatin sử dụng liều đơn và liều lặp lại 5 ngày 27 3.1.2 Trên mô hình chữ T nâng cao, ETM 30 3.1.2.1. Sau khi sử dụng liều đơn l – tetrahydropalmatin 30 3.1.2.2. Sau khi sử dụng liều lặp lại 21 ngày l – tetrahydropalmatin 31 3.2.Ảnh hưởng trên hoạt động tự nhiên và khám phá của l-tetrahydropalmatin 32 3.2.1. Sau khi sử dụng liều đơn l –tetrahydropalmatin 33 3.2.2. Sau khi sử dụng liều lặp lại 5 ngày l – tetrahydropalmatin 34 3.3. Tác dụng an thần của l – tetrahydropalmatin 34 3.4. Tác dụng chống trầm cảm của l – tetrahydropalmatin 35 3.5. Bàn luận 36 3.5.1. Về tác dụng giải lo âu 37 3.5.2. Về ảnh hưởng trên hoạt động tự nhiên và khả năng khám phá 39 3.5.3. Về tác dụng an thần 41 3.5.4. Về tác dụng chống trầm cảm 41 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APA Hiệp hội tâm thần Hoa Kỳ (American Psychiatric Association) ASD Rối loạn stress cấp (Acute stress disorder) BZD Benzodiazepine CLO Clomipramin CREB Protein liên kết từng phần đáp ứng với AMP vòng (Cyclic- AMP response element-binding protein) DZP Diazepam DSM-IV-TR Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th Edition, Text Revision EPM Mô hình chữ thập nâng cao (Elevated plus maze) ERK Protein chuyển gốc phosphat điều hòa tín hiệu ngoại bào (Extracellular signal-regulated kinase) ETM Mô hình chữ T nâng cao (Elevated T maze) FST Mô hình bơi cưỡng bức (Forced swim test) GABA Gamma amino butyric acid GAD Rối loạn lo âu lan tỏa (Generalized anxiety disorder) ICD-10 International Classification of Diseases, Tenth Revision IMAO Monoamino oxidase inhibitors IR Tia hồng ngoại (Infrared) OCD Rối loạn ám ảnh – cưỡng chế (Obsessive – compulsive disorder) OFT Mô hình môi trường mở (Open field test) PD Rối loạn hoảng sợ (panic disorder) PTSD Rối loạn stress sau chấn thương (Post-traumatic stress disorder) RLLA Rối loạn lo âu SSRI Ức chế tái thu hồi chọn lọc serotonin (Serotonin selective reuptake inhibitors) TCAs Thuốc chống trầm cảm 3 vòng (Tricyclic antidepressants) THP Tetrahydropalmatin WHO Tổ chức Y tế thế giới (World health organization) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Kết quả định lượng THP (Nguyễn Tiến Vững) 10 1.2 Kết quả định lượng THP (Lã Đình Mỡi) 10 1.3 Kết quả định lượng THP (Nguyễn Quốc Huy) 11 3.1 Tác dụng của l – tetrahydropalmatin và diazepam trên thời gian lưu, số lần vào tay hở và tổng số lần lưu lại tay kín/tay hở trên mô hình EPM 26 3.2 Tác dụng của l - tetrahydropalmatin và clomipramin sử dụng liều đơn trên các chỉ tiêu đánh giá của mô hình ETM 31 3.3 Tác dụng của l - tetrahydropalmatin và clomipramin sử liều lặp lại 21 ngày trên các chỉ tiêu đánh giá của mô hình ETM 32 3.4 Tác dụng của l - tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều đơn trên các chỉ tiêu đánh giá của mô hình OFT 33 3.5 Tác dụng của l - tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều lặp lại 5 ngày trên các chỉ tiêu đánh giá của mô hình OFT 34 3.6 Ảnh hưởng của clomipramin, l – tetrahydropalmatin thông qua các chỉ tiêu đánh giá trên mô hình bơi cưỡng bức (FST) 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Sắc ký đồ của dịch chiết alcaloid toàn phần của 6 loài thuộc chi Stephania Lour. (UV 254 và 365 nm) 12 2.1 Mô hình chữ thập nâng cao 20 2.2 Dụng cụ chữ T nâng cao 21 2.3 Mô hình môi trường mở 22 2.4 Dụng cụ cho thí nghiệm bơi cưỡng bức 24 3.1 Tác dụng của l – tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều đơn trên thời lưu lại tay hở 27 3.2 Tác dụng của l – tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều đơn trên số lần vào tay hở và tổng số lần lưu lại tay kín, tay hở 28 3.3 Tác dụng của l – tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều lặp lại 5 ngày trên thời lưu lại tay hở 29 3.4 Tác dụng của l – tetrahydropalmatin và diazepam sử dụng liều lặp lại 5 ngày trên số lần vào tay hở và tổng số lần lưu lại tay kín, tay hở 29 3.5 Ảnh hưởng trên thời gian ngủ do thiopental của diazepam (DZP) và l – tetrahydropalmatin 35 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn lo âu (anxiety disorders) là sự lo sợ quá mức trước một tình huống xảy ra, có tính chất vô lý, lặp lại và kéo dài gây ảnh hưởng đến sự thích nghi với cuộc sống của người bệnh. Đây là một trong những rối loạn tâm lý có tính phổ biến cao, có xu hướng ngày càng gia tăng, thường kết hợp với nhiều rối loạn khác như mất ngủ, trầm cảm, rối loạn ăn uống, rối loạn hành vi [15] . Hiện nay, phương pháp điều trị rối loạn lo âu chủ yếu là phối hợp liệu pháp tâm lý với thuốc giải lo âu (anxiolytics). Các thuốc giải lo âu có nguồn gốc hóa dược chính được sử dụng là các dẫn chất của benzodiazepin, buspiron và các thuốc chống trầm cảm ức chế chọn lọc tái thu hồi serotonin hoặc chống trầm cảm 3 vòng [22]. Hạn chế lớn nhất của các thuốc có nguồn gốc hóa dược là tác dụng phụ, khả năng lệ thuộc thuốc và phản ứng cai thuốc xảy ra khi dừng điều trị. Thêm vào đó, giá thành cao của các thuốc này cũng là vấn đề cần quan tâm khi sử dụng thuốc hàng ngày trong một thời gian dài cho bệnh nhân. Vì vậy, sử dụng các thuốc và sản phẩm có nguồn gốc dược liệu hiện được coi là hướng tiếp cận bổ sung và thay thế cho các thuốc có nguồn gốc hóa dược trong điều trị rối loạn lo âu [52]. l – tetrahydropalmatin (l – THP) là 1 alkaloid được tìm thấy ở nhiều loài thực vật khác nhau nhưng chủ yếu có trong các loài thuộc chi Corydalis (Yan Hu Suo) [46] và chi Stephania Lour. [21]. Tại Việt Nam, năm 1941, Bùi Đình Sang và Bonnet đã phát hiện và chiết xuất được l – THP đặt tên là rotundin, đưa Việt Nam thành nước đầu tiên chiết xuất được rotundin (1944: Nhật, 1957: Cộng hòa dân chủ Đức, 1960: Liên Xô, 1962: Trung Quốc,…). Theo Ngô Đại Quang (1999), tác dụng dược lý của l – THP được nghiên cứu từ thời Pháp thuộc và đã được áp dụng điều trị từ năm 1944 và trong suốt cuộc kháng chiến chống pháp đối với các trường hợp đau tim, mất ngủ, hen, đau bụng; trong đó, tác dụng rõ rệt nhất là tác dụng an thần, gây ngủ. l – THP có nguồn gốc từ tự nhiên nên có những ưu điểm nổi bật độc tính thấp, sự dung nạp thuốc tốt, mang lại giấc ngủ sinh lý, không gây mệt mỏi, nhức đầu như các thuốc có nguồn gốc hóa dược [14]. Gần đây các nhà nghiên cứu quan [...]... giá tác dụng giải lo âu thực nghiệm của l – tetrahydropalmatin 2 Đánh giá các tác dụng dược lý hướng thần kinh và tâm thần có liên quan khác tại mức liều thể hiện tác dụng giải lo âu của l – tetrahydropalmatin 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1. 1 Lo âu và rối lo n lo âu 1. 1 .1 Lo âu Lo âu (anxiety) là rối lo n cảm xúc đặc trưng bởi cảm giác lo sợ lan tỏa, khó chịu, mơ hồ kèm theo các triệu chứng thần kinh tự chủ... hơn và cũng có một số nghiên cứu được công bố về đánh giá và tìm kiếm mức liều thể hiện tác dụng giải lo âu của l – THP [39] [62] [63] Để góp phần nghiên cứu sâu hơn về tác dụng giải lo âu và các tác dụng dược lý tâm thần kinh có liên quan của l – THP, tạo cơ sở cho việc phát triển và ứng dụng thuốc trong điều trị các rối lo n bệnh lý liên quan , đề tài được thực hiện với 2 mục tiêu: 1 Đánh giá tác dụng. .. T3 để so sánh sự khác biệt giữa các lô Sự khác biệt được coi có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05 26 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3 .1 Đánh giá tác dụng giải lo âu của l – tetrahydropalmatin 3 .1. 1 Trên mô hình chữ thập nâng cao, EPM 3 .1. 1 .1 Thăm dò liều có tác dụng giải lo âu của l - tetrahydropalmatin Thí nghiệm thực hiện trên 7 mức liều của l – tetrahydropalmatin (từ 0,03 mg/kg đến 10 0 mg/kg) với mục... 0,50 ± 0, 31 9 ,10 ± 1, 85 3,80 ± 1, 37 12 ,60 ± 2,37 p = 0,043 p = 0, 218 1, 00 ± 0,38 8,50 ± 1, 20 p = 0,274 p = 0,965 2,33 ± 0,78 8,56 ± 1, 39 p = 0,035 p = 0,968 1, 14 ± 0,40 7,43 ± 1, 46 p = 0 ,16 1 p = 0,6 01 1,33 ± 0,44 8,67 ± 0,82 p = 0 ,13 3 p = 0,905 1, 56 ± 0,53 9,33 ± 1, 53 p = 0, 211 p = 0,905 1, 56 ± 0,44 9,44 ± 1, 31 p = 0,053 p = 0,720 1, 00 ± 0,39 3,40 ± 0, 91 p = 0,280 p = 0,029 tetrahydropalmatin; giá trị... mg/kg và 3 mg/kg để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo 3 .1. 1.2 Tác dụng giải lo âu của l – tetrahydropalmatin sử dụng liều đơn và liều lặp lại 5 ngày Trên các mức liều đã lựa chọn của l- tetrahydropalmatin (từ 0 ,1 mg/kg đến 3 mg/kg) thực hiện đánh giá tác dụng giải lo âu khi sử dụng liều đơn và liều lặp lặp lại 5 ngày trên mô hình EPM - Sử dụng liều đơn: Kết quả thu được trên thời gian lưu tại tay hở; số. .. 0,03mg/kg l -THP 0,1mg/kg l -THP 0,3kg/mg l -THP 1mg/kg l -THP 3mg/kg l -THP 10 mg/kg l -THP 10 0mg/kg Ghi chú DZP: 10 Thời gian lưu tại tay hở (giây) 2,20 ± 1, 14 46,50 ± 15 ,11 10 p = 0, 019 23,37 ± 16 ,59 8 p = 0 ,12 2 40 ,11 ± 13 ,32 9 p = 0, 017 29,86 ± 11 ,19 7 p = 0,033 32,56 ± 14 ,09 9 p = 0,035 18 ,00 ± 7,25 9 p = 0 ,13 3 24,56 ± 7,55 9 p = 0, 010 57,20 ± 28,70 10 p = 0,075 diazepam; l - THP: l – Tổng số lần lưu lại... cảm giác-vận động và trong thể lưới thân vỏ não có những biến động rõ Sự tăng thành phần sóng chậm delta và giảm thành phần sóng nhanh beta chứng tỏ rằng l-THP có tác dụng tăng cường ức chế tế bào thần kinh ở vỏ bán cầu đại não và thể lưới thân não [18 ] Về tác dụng giải lo âu, nghiên cứu của Leung và cộng sự cho thấy ở liều thấp (0,5 – 10 mg/kg), THP có tác dụng giải lo âu rõ rệt, tác dụng an thần và. .. mg/kg, rotundin sulfat cũng thể hiện tác dụng chống co giật gây ra bởi corazol và thể hiện tác dụng giảm đau ở mức liều 30 mg/kg [19 ] Ứng dụng trong điều trị, l – tetrahydropalmatin từ lâu đã được sử dụng để điều trị một số rối lo n bệnh lý tâm thần và thần kinh Tại Trung Quốc, hiệu quả của l – 15 THP như một thuốc giảm đau không opioid, một hoạt chất an thần /giải lo âu, hỗ trợ điều trị cai nghiện dẫn... dược lý hướng thần kinh và tâm thần của tetrahydropalmatin Ở mức độ phân tử, tetrahydropalmatin (THP), một alcaloid được tìm thấy ở hầu hết các lo i thuộc chi Stephania, có ái lực gắn cao với receptor α1A và α2Aadrenergic, receptor D1, D2 và D3 của dopamin, receptor 5-HT1A, 5-HT1D, 5-HT4 và 5-HT7 của serotonin [42] [43] Qua đó, làm cạn kiệt các cấp độ dẫn truyền thần kinh của noradrenalin, dopamin và serotonin... hình OFT Đợt 3: Thí nghiệm trên chuột cống, đánh giá tác dụng giải lo âu toàn thể và tác dụng chống hoảng sợ của l- tetrahydropalmatin trên mô hình ETM; đánh giá tác dụng chống trầm cảm của l – tetrahydropalmatin trên mô hình FST, thí nghiệm được thực hiện theo sơ đồ sau: 19 5- 7 ngày Bắt đầu thích nghi 21 ngày 4 ngày cho uống thuốc liên tục Kết thúc tiếp tục uống thuốc điều kiện thí nghiệm Uống liều . 1. Đánh giá tác dụng giải lo âu thực nghiệm của l – tetrahydropalmatin 2. Đánh giá các tác dụng dược lý hướng thần kinh và tâm thần có liên quan khác tại mức liều thể hiện tác dụng giải lo âu. NỘI LÊ DOÃN TRÍ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢI LO ÂU THỰC NGHIỆM VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG HƯỚNG THẦN KINH KHÁC CỦA l - TETRAHYDROPALMATIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn. hơn và cũng có một số nghiên cứu được công bố về đánh giá và tìm kiếm mức liều thể hiện tác dụng giải lo âu của l – THP [39] [62] [63]. Để góp phần nghiên cứu sâu hơn về tác dụng giải lo âu và