Nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng của chitosan nano bạc

B Ộ Y T Ế TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ Lự NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIÈU TRỊ BỎNG CỦA CHITOSAN NANO BẠC KHOÁ LUẬN TÓT NGHIỆP Dược sĩ Người hướng dẫn; 1.ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế 2. ThS. Nguyễn Thu Hằng Nơi thực hiện : Bộ môn Dược lực rRƯONG ĐH DƯOc H-ĨÀ NỘI j T H U ' 'yịỆiM f ^ ã r n 2 0 I Số ĐKCB; HÀ NỘI-2011 LỜI CẢM OÍN Trước hết, với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm chân thành tới các cô giáo; ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế giảng viên bộ môn Dược lực trường Đại học Dược - Hà Nội ThS. Nguyễn Thu Hằng giảng viên bộ môn Dược lực trường Đại học Dược- Hà Nội Các cô là người đã tận tình hướng dẫn về mặt chuyên môn, bổ sung, đóng góp ý kiến giúp em hoàn thành khoá luận. Em xin gửi lời cảm on đến các thầy cô giáo và các anh chị kĩ thuật viên bộ môn Dược lực đã tạo điều kiện cho em hoàn thành khoá luận Em xin trân trọng cảm ơn ban Giám hiệu, phòng Đào tạo và các thầy cô giáo giảng viên trường Đại học Dược Hà Nội, đã trang bị cho em những kiến thức khoa học cần thiết để hoàn thành khoá luận, đồng thời là kiến thức làm người. Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, anh chị em đã luôn động viên tinh thần, bên cạnh, giúp đỡ em trong suốt quá trình làm khoá luận! ĐẶT VẤN ĐÈ 1 Chương 1. TỎNG QUAN 3 1.1. TỔNG QUAN VÈ BỎNG 3 1.1.1. Tình hình mắc bỏng hiện nay 3 1.1.2. Đặc điểm của vết thương bỏng 3 1.1.3. Nhiễm khuẩn vết bỏng 6 1.1.4. Các nhóm thuốc điều trị bỏng 7 1.2. TỔNG QUAN VÈ CHITOSAN NANO BẠC 9 1.2.1. về chitosan 9 1.2.2. Tác dụng kháng khuẩn của bạc và ứng dụng của bạc 13 1.2.3. về chitosan nano bạc 14 Chương 2. ĐỔI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚtJ 16 2.1. Nguyên liệu nghiên cứu 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 16 2.3. Đối tượng nghiên cứú 16 2.4. Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1. Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chitosan nano bạc in vitro 17 2.4.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc trên mô hình gây phù thực nghiệm bằng carrageenin 19 MỤC LỤC Trang 2.4.3. Nghiên cứu tác dụng điều trị tại chỗ của kem chitosan nano bạc 0,5% trên bỏng nhiệt thực nghiệm 2 0 2.5. Phương pháp xử lý số liệu 23 Chương 3. KÉT QUẢ NGHIÊN c ứ u 24 3.1. Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chitosan nano bạc trên in vitro 24 3.2.Tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc 25 3.3. Nghiên cứu tác dụng điều trị tại chỗ của kem chitosan nano bạc trên bỏng nhiệt thực nghiệm 26 3.3.1. Kết quả đánh giả đại thể 26 3.3.2. Xét nghiệm vỉ khuẩn và nấm tại bề mặt vết bỏng 30 3.3.3. Diễn biến cẩu trúc vi thể tại bết bỏng 32 Chương 4. BÀN LUẬN 34 4.1. Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chitosan nano bạc in vitro 34 4.2. Tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc 34 4.3. Tác dụng điều trị tại chỗ vết bỏng của kem chitosan nano bạc 35 4.4. Tác dụng của kem chitosan nano bạc lên quá trình liền vết thương bỏng 37 KẾT LUẬN 39 KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN ARNn, Csa IL- 8 NBS ChấtP VK VB APCCS 8* lecs : acid T - deoxyribonucleic ; acid Ribonucleic messenger : complement 5a : interleukin 8 : nguyên bào sợi ; chất dẫn truyền thần kinh, gây đau : vi khuẩn : vết bỏng : 4* Asia Pacific Chitin $ Chitosan Symposium,Yamaguchi, Japan, September 21-23, 2000 : s**" International Chitin $ Chitosan Conference, Yamaguchi, Japan, September 21-23, 2000 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1. Phân loại bỏng 4 Bảng 3.1. Đường kính vòng vô khuẩn của các mẫu đối với các loài VK (mm) 24 Bảng 3.2. Đưòng kính vòng vô khuẩn của các mẫu đối với các loài vi nấm 24 Bảng 3.3. Tác dụng chống viêm cấp của chitosan nano bạc 25 Bảng 3.4. Diễn biến đại thể tại vết bỏng 27 Bảng 3.5. Tỷ lệ thu hẹp diện tích VB so với diện tích ban đầu 30 Bảng 3.6. Tổng số lượng VK và tỷ lệ % các loài VK tại vết bỏng 30 Bảng 3.7. Số lượng VK/cm^ bề mặt VB ở các lô 31 Bảng 3.8. Cấu trúc vi thể trước khi dùng thuốc 31 Bảng 3.9. Cấu trúc vi thể sau 26 ngày dùng thuốc 31 Hình 1.1. Cấu trúc sinh lý của d a 4 Hình 1.2. Công thức cấu tạo của chitin 10 Hình 1.3. Công thức cấu tạo của chitosan 10 Hình 3.1. vết bỏng trước và sau 26 ngày bôi chitosan nano bạc 29 Hình 3.2. v ết bỏng trước và sau 26 ngày bôi tá dược 29 Hình 3.3. vết bỏng trước và sau 26 ngày bôi Sulfadiazin bạc 29 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang ĐẶT VẤN ĐÈ Bỏng là tai nạn thường gặp trong lao động sản xuất, trong sinh hoạt hàng ngày. Cùng với sự phát triển của khoa học công nghệ, nhiều dạng năng lượng đã được sử dụng, đây cũng là một trong những nguyên nhân khiến tai nạn bỏng tăng lên. Tỷ lệ bỏng chiếm khoảng 5-10% trong các chấn thương ngoại khoa [19], đứng hàng thứ 3 trong các chấn thương nói chung [3]. Bỏng có thể ảnh hưởng đến khả năng lao độns, thẩm mỹ, thậm chí gây tử vong nếu không được điều trị hợp lý. Trường hợp bỏng sâu, ở diện rộng thường có nhiều diễn biến bệnh lý và biến chứng nguy hiểm. Điều trị bỏng thường dài ngày, chi phí tốn kém. Thuốc dùng trong điều trị bỏng có nhiều loại. Những thuốc dùng theo đường uống là các dung dịch bù chất điện giải, kháng sinh trong trường hợp bị nhiễm khuẩn. Tuy nhiên, những năm gần đây, đã xuất hiện nhiều loại vi khuẩn (VK) gây nhiễm khuẩn vết bỏng (VB) kháng lại với các kháng sinh thông thường. Vì vậy việc dùng thuốc điều trị tại chỗ vết bỏng được khuyến khích để giảm tỷ lệ kháng thuốc của vi khuẩn [14]. Điều trị tại chỗ vết thương bỏng nhằm loại bỏ mô hoại tử, chống nhiễm khuẩn, tạo điều kiện thuận lợi để mô hạt phát triển và hoàn thành quá trình biểu mô hoá ở bỏng nông hoặc để ghép da phủ kín mô hạt ở bỏng sâu. Hiện nay thuốc bôi tại chỗ sử dụng trong điều trị bỏng ở nước ta giá thành còn tưong đối cao, đặc biệt các thuốc này còn một số nhược điểm như gây đau, xót, chỉ sử dụng được trong những trường hợp nhất định và hiệu lực điều trị không cao. Vì vậy, việc nghiên cứu tìm thuốc mới trong nước có nguồn nguyên liệu sẵn, giá rẻ, tác dụng điều trị tại chỗ vết thương bỏng ngày càng tốt là vấn đề cần quan tâm. Trong những năm gần đây, “công nghệ nano” là lĩnh vực công nghệ tiên tiến đã được áp dụng trên thế giới, bước đàu đem lại những ý nghĩa quan trọng. Đặc biệt, ứng dụng công nghệ nano vào y-dược đã mang đến nhiều hứa hẹn trong việc nâng cao hiệu quả chẩn đoán và điều trị bệnh. Trên cơ sở đó, Viện Hoá học Việt Nam đã sản xuất chitosan nano bạc. Để đánh giá tác dụng điều trị bệnh của chitosan nano bạc, trong khoá luận này chúng tôi đã tiến hành “Nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng của chitosan nano bạc” nhằm mục tiêu: 1. Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn, vi nấm của kem chitosan nano bạc ìn vitro. 2. Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc. 3. Đánh giá tác dụng điều trị tại chỗ của kem chitosan nano bạc trên bỏng nhiệt thực nghiệm. Chương 1. TỎNG QUAN 1.1. TỎNG QUAN VÈ BỎNG 1.1.1. Tình hình mắc bỏng hiện nay Bỏng là chấn thương thường gặp, có thể xảy ra với từng người đôi khi có thể xảy ra với nhiều người, ở Hoa kỳ, mỗi năm có khoảng 2 triệu người bị bỏng, ở Pháp khoảns: 200.000-300.000 và ở Anh con số này khoảng 140.000 người [20]. ở Việt Nam, bỏng chiếm từ 5%-10% các chấn thưoTig ngoại khoa. Trong nghiên cứu về tình hình bỏng ở Việt Nam trong 5 năm, 2005- 2009, của Nguyễn Viết Lượng và Lương Ngọc Khuê thực hiện tại Viện Bỏng Quốc gia cho thấy, hàng năm số bệnh nhân bỏng trung bình ở Việt Nam ước tính khoảng 791.000 người, chiếm gần 1% dân số nước ta. Trong đó trẻ em chiếm khoảng 54%. Tuy nhiên, trên thực tế số nạn nhân bỏng được điều trị tại các cơ sở y tế công lập từ tuyến huyện trở lên chỉ chiếm gần 50% số người bị bỏng [10]. 1.1.2. Đặc điểm của vết thương bỏng Bỏng có thể do nhiều loại tác nhân khác nhau như bỏng do sức nhiệt gồm hai loại, sức nhiệt khô (lửa, tia lửa điện, kim loại nóng chảy) và bỏng do sức nhiệt ướt (nước sôi, thức ăn nóng sôi, dầu mỡ sôi 180^c, hơi nước nóng 90-92®C), do hoá chất, do các tia vật lý (hồng ngoại, tử ngoại, rơnghen, tia phóng xạ như tia p, gama). Trong đó, bỏng da do nhiệt hay gặp nhất 84%-94% [18], [20]. Bỏng da do nhiệt khô thường gặp ở người lớn, bỏng da do nhiệt ướt thường gặp ở trẻ nhỏ hơn [1 0 ], 1.1.2.1. Mức độ bỏng Khi tế bào bị nóng do sức nhiệt sẽ xuất hiện các tổn thương, ở nhiệt độ 44”- 45®c sự sống của tế bị đe doạ. Nhiệt độ cao hơn sẽ gây tổn thương tế bào. Tuỳ thuộc vào nhiệt độ, thời gian tiếp xúc với tác nhân gây bỏng và diện tích tiếp xúc, tổn thương bỏng có thể chia thành hai nhóm chính là bỏng nông và bỏng sâu. Độ sâu bỏng cũng được phân làm 5 mức [19]. Cụ thể như sau: [...]... loại băng điều trị bỏng khác ^ Cơ chế kháng khuẩn của chỉtosan nano bạc Chitosan nano bạc được tạo nên từ chitosan và hạt bạc có kích thước nano Cơ chế kháng khuẩn của nano bạc; sự phát triển của công nghệ nano có thể tạo ra các ion bạc Ag"^, Ag*^ một dạng bạc tinh thể trong đó có dạng tinh thể nano Sản phẩm loại này, khi sử dụng sẽ giải phóng từ từ ion bạc ra vết thương, vết bỏng, duy trì tác dụng lâu... Silvadene) dạng kem 1% của hãng Marion (Mỹ) (SSD) Dung dịch diclofenac 2,5% (biệt dược Voltaren) do công ty Novartis Farmacéutica, s.A- Spain sản xuất 2.2 Nội dung nghiên cứu - Đảnh giá tác dụng ức chế vi khuẩn, vi nấm in vitro của kem chitosan nano bạc - Đảnh giá tác dụng chổng viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc - Đảnh giá tác dụng điều trị tại chỗ của kem chitosan nano bạc trên bỏng nhiệt thực nghiêm... vết bỏng bên trái được điều trị bằng kem chitosan nano bạc 0,5% Các vết bỏng bên phải của thỏ lô I được điều trị bằng tá dược kem chitosan nano bạc 0,5%, các vết bỏng bên phải của lô II được điều trị bằng thuốc Sulfadiazin bạc 1% Theo dõi diễn biến quá trình liền vết thương bỏng ở thỏ, kết quả như sau: 3.3.1 Kết quả đánh giá đại thể ’4 Diễn biến đại thể tại vết bỏng Ngay sau khi gây bỏng, vết bỏng. .. ở các lô tiêm dưới da dung dịch chitosan nano bạc 0 , 1 %; 0,3% và 0,5% đều không khác biệt so với lô chứng trắng (tiêm dung môi pha thuốc) (p> 0,05) Như vậy ở các nồng độ 0,1%; 0,3% và 0,5% dung dịch chitosan nano bạc đều không có tác dụng chống viêm cấp 3.3 Nghiên cứu tác dụng điều trị tại chỗ của kem chitosan nano bạc trên bỏng nhiệt thực nghiệm 16 thỏ sau khi gây bỏng được chia thành 2 lô, mỗi lô... nồng độ ion Ag"^ 1.2.3.2 Tính chất của chitosan nano bạc Ngoài những tính chất chung của vật liệu nano như tính dẫn điện, tính chất từ, hoạt tính xúc tác [13] Chitosan nano bạc còn có tính kháng khuẩn mạnh [4] Hơn nữa chitosan nano bạc còn có khả năng phân huỷ sinh học, do bị phân huỷ trong tự nhiên dưới tác động của vi sinh vật [28], điều này có ý nghĩa trong việc điều trị như không gây kích ứng da khi... nuôi trong điều kiện đầy đủ thức ăn và nước uống tại phòng thí nghiệm bộ môn Dược lực 5 ngày trước khi nghiên cứu và trong suốt thời gian nghiên cứu 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chỉtosan nano bạc in vitro Các thí nghiệm đánh giá tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm in vitro được thực hiện tại bộ môn Vi sinh- trưòng Đại học Dược Hà Nội Tác dụng kháng... gây viêm Nghiên cứu được tiến hành tại bộ môn Dược lực trưòng Đại học Dược Hà Nội 2.4.3 Nghiên cứu tác dụng điều trị tại chỗ của kem chỉtosan nano bạc 0,5% trên bỏng nhiệt thực nghiệm a Phương pháp gầy bỏng nhiệt thực nghiệm Thỏ được cạo sạch lông ở hai bên sống lưng Gây bỏng cho thỏ theo phương pháp của Pocidalo JJ (1955) và Hladovec J (1961), đã được áp dụng trong công trình nghiên cứu của Nguyễn Thị... liệu nghiên cứu được xử lý thống kê bằng phần mềm excel 2003 Sử dụng kiểm định T-test để so sánh giá trị trung bình giữa các lô Sự khác biệt có ý nghĩa khi p . Nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng của chitosan nano bạc nhằm mục tiêu: 1. Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn, vi nấm của kem chitosan nano bạc ìn vitro. 2. Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của. QUẢ NGHIÊN c ứ u 24 3.1. Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chitosan nano bạc trên in vitro 24 3.2 .Tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc 25 3.3. Nghiên cứu tác dụng điều. bỏng 32 Chương 4. BÀN LUẬN 34 4.1. Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của kem chitosan nano bạc in vitro 34 4.2. Tác dụng chống viêm cấp của dung dịch chitosan nano bạc 34 4.3. Tác dụng điều trị