Nghiên cứu tác dụng điều trị của kem hameselaphin tại chỗ vết bỏng nông

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bỏng là chấn thương song hành với sự tồn tại và phát triển của xã hội loài người. Bỏng gây tử vong cao và đặc biệt để lại nhiều hậu quả nặng nề về chức năng, thẩm mỹ, tinh thần và kinh tế không chỉ với nạn nhân, gia đình mà với toàn xã hội. Tổn thương bỏng là nguồn gốc của tất cả các rối loạn bệnh lý xảy ra của bệnh bỏng [6]. Điều trị tổn thương bỏng có vai trò quan trọng. Việc che phủ sớm vết thương bỏng bằng thuốc đắp tại chỗ và các vật liệu sinh học thay thế da tạm thời có tác dụng giảm đau cho bệnh nhân, hạn chế nhiễm khuẩn vết thương, giảm sự mất máu, mất dịch thể qua vết bỏng, tạo thuận lợi cho quá trình biểu mô hoá liền vết thương bỏng nông. Trong những năm gần đây đã có nhiều thành tựu trong nghiên cứu về sinh học, hoá sinh học, mô tế bào của vết thương bỏng . Những tiến bộ này đã đem lại kết quả khả quan nh- nguyên bào sợi, tế bào sừng . Hiện nay, chóng ta đang sử dụng nhiều thuốc đắp tại chỗ có hiệu quả như Silver sulfadiasin, Flamazine, Hebermin, các vật liệu sử dụng công nghệ na nô như Acticoat, Nano Ag, Aquacel Ag, một số vật liệu sinh học như trung bì da lợn, da Õch, màng chitosan, Tuy nhiên, những vật liệu này giá thành cao, không phù hợp với thu nhập của đại đa số người Việt Nam và đã có biểu hiện kháng thuốc.Từ rất xưa con người đã biết đến việc điều trị tại chỗ tổn thương bỏng bằng thảo mộc. Hiện nay, tại Viện Bỏng Quốc gia thuốc nam đã và đang được ứng dụng điều trị nh- mì maduxin, kem berberin Cùng với trào lưu sử dụng thuốc y học cổ truyền nghành y dược thế giới nghiên cứu kết hợp kế thừa thành tựu của y học cổ truyền, sử dụng những cây 2 dược liệu sẵn có trong nước với công nghệ hiện đại, kết quả đã có nhiều bài thuốc dân tộc được đưa vào sử dụng điều trị bỏng, cho kết quả khả quan. Hameselaphin là một trong những thuốc y học cổ truyền đã được nghiên cứu cơ bản từ năm 1995 với tên gọi “selaphin”về thành phần, hoạt tính chính, tác dụng dược lý và thử nghiệm trên lâm sàng, cho kết quả tốt . Tuy nhiên còn có những nhược điểm cần được khắc phục nh- gây sót, se khô tạo màng [2]. Đến năm 2005 với tiến bộ của khoa học, công nghệ sản phẩm Hameselaphin đã có mặt trên thị trường với nhiều ưu điểm nh- công nghệ xản suất, tá dược phù hợp, bao bì đóng gói tiện dụng Chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu tác dụng điều trị của kem hameselaphin tại chỗ vết bỏng nông ” với các mục tiêu sau: 1. Đánh giá tác dụng kích thích liền vết thương bỏng nông của kem hameselaphin. 2. Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn tại chỗ của kem hameselaphin. 3 4 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Cấu tạo và chức năng sinh học của da Da là một màng mô dai, mềm dẻo che phủ toàn cơ thể người, một cơ quan có diện tích rộng nhất cơ thể (ở trẻ sơ sinh khoảng 0,25m 2 , ở người lớn khoảng 1,6 - 2,0 m 2 ). Da so với trọng lượng cơ thể chiếm 4-6%, nếu kể cả lớp mỡ dưới da thì chiếm 16-17,7%. Da có cấu trúc khá phức tạp, một khối tổng hợp có 3 lớp: biểu bì, trung bì, hạ bì kết hợp chặt chẽ với nhau thành các lớp mô bao phủ mang tính chun dãn (về các phía)- nhớt – tạo hình. Da có các lớp biểu mô, mô liên kết, các tuyến và gốc lông, thớ cơ, đầu tận các dây thần kinh, lưới mạch máu và bạch mạch. Mặc dù các lớp hoạt động như một khối thống nhất, nhưng mỗi lớp có những chức năng đặc trưng [20],[6],[22]. Vì thế, tiêu chuẩn để thiết kế vật liệu sinh học thay thế da điều trị vết thương, vết bỏng cần phải đáp ứng được một số chức năng: che phủ bảo vệ, tham gia liền vết thương 1.1.1. Lớp biểu bì (Epidermis) Lớp mỏng (dầy 0,07- 1,8 mm), nằm ngoài cùng được gọi là lớp biểu bì . Lớp này gồm chủ yếu là các tế bào biểu mô xếp dính chặt chẽ với nhau. Trong lớp biểu bì có 4 loại tế bào là: tế bào sừng (keratinocyte), tế bào sắc tố (melanocyte), tế bào Langerhans và tế bào Merkel, trong đó, tế bào sừng chiếm tỷ lệ chủ yếu. Lớp biểu bì gồm 6 lớp: lớp mầm, lớp tế bào gai, lớp tế bào có hạt keratohyalin, lớp tế bào trong suốt, lớp tế bào sừng, lớp vẩy sừng [6], [22]. - Lớp mầm (stratum germinatum): gồm các tế bào biểu mô to cao hình lục lăng hoặc hình trụ. Những tế bào sừng của lớp mầm hay lớp đáy (basal cell layer) là các tế bào mầm (stem cell) của lớp biểu bì, các tế bào này được 5 gắn xuống màng đáy bằng các phân tử kết dính gọi là fibronectin . Tế bào mầm có khả năng liên tục phân chia và di chuyển về phía bề mặt để thay thế các tế bào bề mặt đã mất . Quá trình tái sản sinh nhiều và nhanh diễn ra trong suốt đời sống của con người và nhờ đó lớp biểu bì luôn thay đổi mới. Đặc biệt, sau tổn thương, quá trình này diễn mạnh hơn để liền vết thương. Khi các tế bào trưởng thành và di chuyển lên bề mặt chúng tạo thành vảy sừng. Lớp vảy sừng là hàng rào rất hiệu quả chống lại những tác động có hại của môi trường, chống vi khuẩn xâm nhập, chống bay hơi nước quá mức [6]. Sù thay thế lớp biểu bì bằng quá trình tái tạo (regeneration) diễn ra trong 2-3 tuần. Những kích thích sinh học và các tín hiệu tại bề mặt vết thương là yếu tố cần thiết để điều chỉnh đáp ứng phân bào và định hướng phù hợp các tế bào biểu mô. Đa số các tín hiệu và kích thích sinh học từ các yÕu tố ở trung bì gồm : các protein chất nền mô liên kết và các yếu tố tăng trưởng do các tế bào ở trung bì tiết ra [6],[78]. - Lớp tế bào gai (stratum spinosium) gồm 7-15 tầng tế bào. Giữa các tế bào có cầu gai liên kết. Bào tương tế bào chứa các sợi keratin. Khi bỏng nông, các cầu gai bị đứt, lớp tế bào này tách rời nhau hình thành nốt phỏng. - Lớp tế bào có hạt keratohyalin (stratum granulosum): gồm các tế bào dẹt có chứa các chất vùi bào tương đó là keratohyalin. - Lớp tế bào trong suốt (stratum lucidum): có dạng hình đĩa trong và đặc. Nhân tế bào mất đi. Các tế bào trong suốt giữ cho da không bị thoát nước, bảo vệ các lớp tế bào bên dưới đối với các tác nhân cơ học. - Lớp tế bào sừng (stratum corneum): lớp ngoài cùng, bao gồm 15-20 tầng tế bào. Các tế bào này đã mất khả năng sống, hoàn toàn sừng hoá và dính chặt với lớp tế bào trong suốt tạo thành lớp bảo vệ ngoài cùng của da. - Lớp vẩy sừng (stratum disfunctivum): là lớp bên ngoài đã bị mòn, thành vẩy rụng đi [6],[22]. 6 Chức năng của lớp biểu bì: ngăn chặn, bảo vệ không cho vi khuẩn, các bức xạ cực tím xâm nhập vào sâu trong da; ngăn chặn không để da khô, cân bằng dịch; thụ cảm thần kinh, giao tiếp xã hội 1.1.2. Líp trung bì (Dermis) Líp trung bì dầy 0,7- 7mm, tuỳ vị trí trên cơ thể, chiều dầy lớp trung bì thường lớn hơn chiều dầy lớp biểu bì 15- 40 lần. Trung bì là một lớp xơ rất chắc được cấu tạo về mô học bởi chất nền mô liên kết, các tế bào mô liên kết, sợi collagen và sợi chun, các tuyến ống và nang lông, cơ dựng lông, mạch máu, thần kinh. Về tế bào, đặc trưng của trung bì là nguyên bào sợi (Fibroblasts), được coi là “tế bào chủ” (master cell) của trung bì. Trung bì gồm 2 lớp: lớp nông còn gọi lớp nhú (papillary region) và lớp sâu hay lớp lưới (reticular region). Vùng tiếp giáp giữa trung bì và biẻu bì có màng nền hay màng đáy (basement membrane) [6], [22]. Lớp nhú là một lớp mỏng nằm ngay sát dưới màng đáy và lớp tế bào mầm của màng đáy hình thành nhiều gai nhú gồ lên hình làn sóng. Trong mỗi nhú có cuộn mao mạch và vi thể Meissner là đầu cùng thần kinh xúc giác. Tại lớp nhú, tập trung nhiều nguyên bào sợi (NBS), các tế bào này tăng trưởng nhanh, có hoạt tính chuyển hoá cao và tổng hợp ra nhiều protein kết dính quan trọng để gắn tế bào biểu mô vào màng đáy, giúp các tế bào biểu mô di chuyển và tái tạo. Giữa các lớp biểu bì và lớp nhú có sự trao đổi về cytokine, các yếu tố tăng trưởng qua thụ cảm xuyên màng (transmembrane receptors). Lớp nhú trung bì được ví như một nhà máy lớn cung cấp các protein chỉ huy sự tái tạo các tế bào biểu mô [6], [20]. Lớp lưới dầy 4-5 mm, có Ýt các yếu tố tế bào và mạch hơn so với lớp nhú. Lớp lưới chứa các bó sợi liên kết gồm các sợi collagen, sợi chun. Màng đáy hay màng nền (basement membrane) là cấu trúc mô liên kết nằm ở đường gờ, dưới tế bào mầm của biểu bì, diện trên của nhú trung bì. 7 Nếu màng đáy bị tổn thương sẽ hình thành nốt phỏng ở phần đó. Khi bị bỏng trung bì và bỏng sâu, sau khi da đã phục hồi, trong một thời gian dài mới hình thành lại được màng đáy, nên khi bị các chấn thương cơ học phần sẹo da này dễ bị ảnh hưởng. Màng đáy còn là màng lọc ngăn sự thoát ra các phân tử có trọng lượng phân tử trên 40 KDa nhưng vẫn để các tế bào langerhans, tế bào Merkel, lympho bào, tế bào hắc sắc tố qua được [6], [22]. Các thành phần của mô liên kết trung bì: Mô liên kết trung bì gồm ba loại sợi chính là: sợi collagen, sợi vàng (reticulin) và sợi chun (elastin), và các chất nền mô liên kết (ground substance). Các thành phần khác gồm: laminin, fibronectin, vitronectin, tenastin. Sợi collagen là thành phần cấu tạo chính của trung bì, tạo nên khung cấu trúc của da. Collagen chiếm 75% trọng lượng khô của da bao gồm: 80- 90% collagen típ I, 8-12% collagen típ III, 5% collagen típ V. Sợi chun có màu vàng nhạt, không tan trong các dung môi thông dụng, chống được với axit và kiềm. Sợi chun chiếm 0,6-2,1% trọng lượng khô của da. Các sợi chun giãn có nhiều nhánh ngang, rất dẻo, có khả năng điều chỉnh thích nghi với các biến đổi hình thể mà vẫn duy trì trọn vẹn cấu tróc da. Chất nền mô liên kết trung bì (Dermal matrix, ground substance): gồm các thành phần cấu tạo định hình và cả các thành phần hình dây sợi. Các phân tử của chất nền mô liên kết là hai chất proteoglycans (PGs) và glycosaminoglycans (GAG), chiếm 0,2% trọng lượng khô của trung bì. Ngoài ra, chất nền mô liên kết còn có: - Fibronectin là chất glycoprotein hình dây sợi không hoà tan, do tế bào biểu mô, các tế bào trung mô (mesenchymal cell) chủ yếu là NBS tổng hợp ra. Fibronectin bọc phủ các bó sợi collagen và màng lưới sợi chun, gắn các tế bào 8 với các thụ cảm integrin và chất nền mô liên kết. Đây là protein kết dính đóng vai trò quan trọng hàng đầu trong liền vết thương. - Laminin là chất gắn tế bào với chất nền mô liên kết ở các màng nền - Vitronectin là chất gắn phủ các sợi chun giãn (trừ sợi oxytalan) - Tenastin là chất gắn phủ quanh cơ trơn của các mạch máu, cơ dựng lông, các tuyến mồ hôi, lớp lá dưới biểu bì [6], [22]. Các tế bào ở trung bì: NBS, TB sợi (fibrocyte), đại thực bào (ĐTB), dưỡng bào (mast cell). Các TB này thường trú tại trung bì, tập trung với tỷ trọng cao ở vùng nhú, ở quanh các mạch máu của đám rối mạch máu dưới lớp nhú. ở lớp lưới trung bì, khe giữa các bó sợi tạo keo, còn thấy các TB lympho, TB quanh mao mạch (pericyte), TB quanh tĩnh mạch (veil cell) và TB Schwann bao quanh các sợi thần kinh. Trong số các TB ở trung bì, NBS chiếm thành phần chủ yếu. NBS là tế bào có vai trò quan trọng nhất, do nó sản xuất chủ yếu các thành phần ở trung bì, đồng thời tham gia điều tiết quá trình liền vết thương. Vì thế, NBS là tế bào được quan tâm nghiên cứu nhiều và có nhiều ứng dụng trong liền vết thương. Chức năng của trung bì: lớp trung bì có vai trò nuôi dưỡng và định hướng quá trình tăng sinh, biệt hoá ở lớp biểu bì. Các thành phần mô liên kết trung bì đảm bảo tính đàn hồi, mềm dẻo, phục hồi hình thể sau các cử động, phục hồi lại cấu trúc mô khi da bị tổn thương. Các tế bào ở lớp trung bì sản xuất lượng lớn các yếu tố tăng trưởng và cytokines tham gia đáp ứng miễn dịch và liền vết thương. Ngoài ra, líp trung bì còn có các chức năng: điều chỉnh thân nhiệt, bài tiết đào thải chất bã, chất độc, nhận cảm nóng, lạnh, áp lực [22]. 1.1.3. Lớp hạ bì (hypodermis, subcutis): Là lớp mô liên kết – mì (adipose connective tissue). Các phần phụ của biểu bì như gốc lông, tuyến mồ hôi nằm cả ở hạ bì. Mạng lưới mạch- thần 9 kinh của da cũng xuất phát từ hạ bì Tại lớp hạ bì có một mạng lưới mạch máu và bạch mạch phong phú. Các nhánh mạch đi từ lưới mạch ở hạ bì lên trung bì [6], [22]. 10 1.2. Quá trình liền vết thương bỏng Tùy thuộc vào diện tích, độ sâu của vết bỏng, sức đề kháng của cơ thể, vết bỏng cơ bản cũng tiến triển theo giai đoạn sau [69]: 1. Viêm (inflammation) 2. Giai đoạn tăng sinh (proliferation) gồm: tăng sinh các tế bào bao gồm cả biểu mô hoá, tạo mô liên kết, co kéo vết thương 3. Giai đoạn trưởng thành (muturation) Các giai đoạn này kế tiếp, đan xen và ảnh hưởng lẫn nhau [20], [22], [70], [66]. Theo Jorge de la Torre (2006), quá trình liền vết thương có thể sơ đồ hoá như sau [66]: Sơ đồ 1.1: Các giai đoạn của quá trình liền vết thương. Gồm 3 giai đoạn: viêm, tăng sinh, trưởng thành (tái sửa chữa mô). Jorge de la Torre (2006), “Wound Healing, Chronic Wound”, eMedicine 1.% of Maximum Response: tỷ lệ % đáp ứng lớn nhất 2. Time (days): ngày liền vết thương 3. Inflammation: giai đoạn viêm 5. Maturation: giai đoạn trưởng thành 6. Wound contraction: co vết thương 7. Collagen accumulation: tích tụ [...]... vi n nm 2005 cụng ty dc vt t y t Qung Bỡnh ng dng quy trỡnh sn xut thuc hin i t tiờu chun GMP sn xut kem Hameselaphin vi mc ớch lu hnh thuc rng rói trờn th trng ỏp ng nhu cu thuc iu tr bng trờn cỏc c s y t cng nh c s dng rng rói trong nhõn dõn s cp cu ngay sau bỏng Cụng thc bo ch 20 000gam kem Hameselaphin - Lỏ sn ti 30.000g - Thõn cõy Lõn t uyn 4000g - Lỏ dip cỏ 4000g - Ton cõy bch hoa x 4000g... aureus (28,3%) [3] Theo Nguyn Quc nh (2000), ti vt thng bng cỏc loi vi khun chim u th khỏc nhau theo thi gian k t khi b bng, thi gian bỏng 1 2 ngy thng gp cu khun gram dng (S aureus 37,95% S.epidermidis 13,33% P aeruginosa 6,29%) Nhng t l ny thay i thi im 5-6 ngy sau bỏng : (S aureus 36,67% S.epidermidis 5,13% P.aeruginosa 33,85%) [20] Trng Thu Hin v Nguyn Quang ụng (2007) thy loi vi khun gõy ụ... ch (03): 1000g ht phỏ c ch thu c 100g cao c cho vo bỡnh thu tinh kớn * Quỏ trỡnh to kem: - Thc hin phi hp cao hn hp 01, cao phỏ c ch 03, cao cn dip cỏ 02, lanolin thc hiờn xong nh hoỏ Thờm tng lng nh hn hp du sn, sỏp ong, Vaselin ó c un sụi lc ỏnh u Cui cựng ỏnh cho ti khi ng nht, kim nghim thnh phm, úng tuýp 20g Kem mu nõu sm, th ng nht, cú mựi thm nh,[1],[2],[11],[18],[26],[38], 32 Chng 2 I TNG... Gia, thi gian t 09/2008 n 06/2009 * Tiờu chun lựa chn bnh nhõn nghiờn cu: - Bnh nhõn bng ngi ln (tui 17 - 60 ).Bnh nhõn bng nhi (tui t 8 thỏng 16 tui) - Tin hnh nghiờn cu trờn vt bỏng nhit II va III , khụng nghiờn cu trờn vt bỏng do in, do hoỏ cht , vựng bng sõu, IV, V - Bnh nhõn t nguyn tham gia nghiờn cu 33 * Tiờu chun loi tr: - Bnh nhõn ang trong trng thỏi nng nh sc bng, cú bng hụ hp, tiờu hoỏ kốm... bch cu a nhõn trung tớnh (BCNTT), TB, NBS xõm nhp vt thng [22], [52], [57], [70], [53] Giai on viờm bao gm: to cc mỏu ụng v tng tớnh thm thnh mch cho cỏc t bo mỏu v cỏc protein ch cht ca quỏ trỡnh lin vết thng nh, fibronectin v fibrin vo mụ Cc mỏu ụng cựng vi cỏc protein ny to thnh giỏ tm thi cỏc t bo xõm nhp vt thng Dũng mỏu tng lờn, s xuyờn mch xy ra, BCNTT tp trung ti vt thng trong vũng vi phỳt... ) cú kt qu tt, nhng giỏ thnh cũn cao v cú mt s tỏc dng khụng mong mun [22], [84], [87] 1.4.1.3 Nhúm thuc nh hng tt ti quỏ trỡnh tỏi to vt bng Thng dựng cỏc thuc m nh thuc m rau mỏ, thuc m cú oxyd km, kem ngh, m cao vng [22], mt ong [11], sa ong chỳa[12] Mt s thuc tỏc dng sinh hc lm tng kh nng lnh so nh Biafin, Hebermin [22], thuc Chitosan [36], [37] Cỏc tỏc gi nh Bratruc V.D., Kamaev M.Ph, Vikhriev... phn ng kớch thớch ban hoc d ng - Cho chut thc nghim ung cao Selaphin di ngy khụng gõy tỏc dng ph, khụng nh hng ti t chc ni tng ca chut * Kt qu nghiờn cu tỏc dng c ch vi khun - Cao hn hp Selaphin cú tỏc dụng trờn cỏc loi vi khun t cu vng trc khun m xanh, E coli v tp khun gõy m khỏc Vũng vụ khun ca cao thuc trờn 3 loi vi khun th hin rt rừ rt 1 Staphylococcus aureus 16 mm 2 Pseudomonas aeruginosa 13 mm... t mộp vt thng Quỏ trỡnh biu mụ hoỏ din ra cú th nhanh trong 5-10 ngy tn thng trung bỡ hoc vi thỏng tu thuc: kớch thc vựng tn khuyt, vic cung cp nng lng, s lng cỏc t bo mm cũn sng sau bng, v mụi trng vết thng [66], [74], [83], [98] Quỏ trỡnh biu mụ hoỏ s din ra thun li nu duy trỡ ẩm phự hp trờn b mt vt thng Cỏc loi vt liu thay th da tng hp sinh hc khi p lờn vt thng duy trỡ ẩm sinh lý b mt s giỳp... lin vt thng Cú th s hoỏ s tng tỏc ca cỏc t bo trong cỏc giai on ca quỏ trỡnh lin vt thng nh sau: Tổn th-ơng da Tân tạo mạch Tiểu cầu hoạt hoá Tế bào biểu bì Đại thực bào BC đa nhân trung tính Co kéo vết th-ơng Nguyên bào sợi Sản xuất collagen Tăng sinh Tổng hợp protein chất nền mô liên kết S 1.2: Tng tỏc gia cỏc loi t bo trong quỏ trỡnh lin vt thng 17 (Cornelia Mauch (1998), Cytokines and wound healing,... chim 50-70% [18] Bouchac C.(1996) khng nh vic theo dừi v kim soỏt u n mụi trng bnh vin ó lm gim t l nhim khun bng * Din bin qun th vi khun trờn vt thng bng: Theo Carsin H (1994) i vi bng la nhng gi u, vết bng cũn vụ khun, s xõm nhp ca vi khun bt u gi th 6 sau bng Nu cy khun ngay sau khi gõy bng thc nghim thỡ 100% khụng thy vi khun mc, sau 12 giờ: 61,7 % õm tớnh, sau1 ngy : 36% õm tớnh, sau 3 ngy ch . trị của kem hameselaphin tại chỗ vết bỏng nông ” với các mục tiêu sau: 1. Đánh giá tác dụng kích thích liền vết thương bỏng nông của kem hameselaphin. 2. Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn tại. Thuốc điều trị tại chỗ vết bỏng mới 1. 4.1. Các nhóm thuốc điều trị tổn thương bỏng Điều trị tại chỗ nhằm mục đích loại bỏ nhanh mô hoại tử, dự phòng các biến chứng nhiễm khuẩn tại chỗ, không. (phối hợp với kháng sinh) dùng tại chỗ vết bỏng có tác dụng chống viêm, thúc đẩy quá trình lành sẹo. Thuốc điều trị tại chỗ có corticoid được chỉ định khi vết bỏng có mô hạt xơ hoá, tăng sinh